子宮內(nèi)膜癌患者外周血紅細(xì)胞膜脂肪酸組分變化及其與發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系

李杰萍，鄒建平，江絮萍，謝榕

1 武警福建省總隊(duì)醫(yī)院檢驗(yàn)與病理科，福州 350003；2 福建省腫瘤醫(yī)院婦科腫瘤外科；3 武警福建省總隊(duì)醫(yī)院婦產(chǎn)科

子宮內(nèi)膜癌（EC）是常見的女性生殖系統(tǒng)腫瘤，近年來我國(guó)EC發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，且具有年輕化趨勢(shì)。EC 的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，本質(zhì)是細(xì)胞異常增殖，是癌基因突變、抑癌基因失活、mTOR 和Notch 信號(hào)通路異常的綜合結(jié)果［1］。細(xì)胞膜中的脂肪酸根據(jù)其飽和程度分為飽和脂肪酸、多不飽和脂肪酸和單不飽和脂肪酸三大類，脂肪酸及其代謝產(chǎn)物的改變尤其是多不飽和脂肪酸的改變，可直接影響細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)、功能、細(xì)胞氧化狀態(tài)以及信號(hào)通路，從而改變細(xì)胞特性，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［2-3］。研究表明，紅細(xì)胞膜脂肪酸組分在多種腫瘤中發(fā)生改變，并與腫瘤發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)具有一定的相關(guān)性，如乳腺癌［4-5］、肝癌［6］、直腸癌［7］等。但是，目前關(guān)于紅細(xì)胞膜脂肪酸與EC 發(fā)病的關(guān)系鮮見報(bào)道。2016 年9 月—2018年1 月，本研究觀察了EC 患者外周血紅細(xì)胞膜脂肪酸的組分變化，并探討其與EC發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 納入標(biāo)準(zhǔn)：①首次診斷為EC，并經(jīng)病理檢查確診；②未接受過放化療及激素治療等；③在當(dāng)?shù)鼐幼≈辽?0 年；④漢族。排除合并其他腫瘤、重要臟器功能不全及哮喘等慢性疾病者。選擇同期武警福建省總隊(duì)醫(yī)院及福建省腫瘤醫(yī)院收治并符合上述標(biāo)準(zhǔn)的EC 患者91 例為EC 組，年齡33～72 歲。選擇同期我院體檢健康的漢族女性志愿者203 例為對(duì)照組，年齡39～72 歲。兩組年齡具有可比性（P＞0.05）。本研究通過醫(yī)院倫理委員會(huì)審核，受試者均簽署知情同意書。

1.2 外周血紅細(xì)胞膜脂肪酸組分分析 采用氣相色譜—質(zhì)譜分析法。兩組入組后、采血前一晚低脂飲食，采血當(dāng)日早上禁食。采集外周血5 mL 于EDTA 抗凝管中，1 500 r/min 離心10 min，分離紅細(xì)胞，加入體積比為1∶ 1的生理鹽水，洗滌兩次。取紅細(xì)胞與十七烷酸正己烷內(nèi)標(biāo)液各50 μL，加入使用2， 6-二叔丁基-4-甲基苯酚乙醇溶液進(jìn)行抗氧化處理的反應(yīng)管中，加入鹽酸/甲醇1 mL，混勻后置90 ℃烘箱反應(yīng)3 h。冷卻后加入正己烷萃取脂肪酸甲酯產(chǎn)物2 mL，混勻離心，上層轉(zhuǎn)移至新試管，氮?dú)獯蹈奢腿∫?。加入正己烷溶液脂肪酸甲酯化產(chǎn)物400 μL，混勻后轉(zhuǎn)移至樣品瓶中，上QP2010Ultra氣相色譜—質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)。色譜分析條件：不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣體積1 μL；柱流量0.78 mL/min，進(jìn)樣口溫度230 ℃，接口溫度250 ℃；起始柱溫50 ℃，保持1 min，然后以25 ℃/min 的速率升溫到175 ℃，4 ℃/min 的速率升溫到223 ℃，保持8 min。質(zhì)譜分析條件：離子源溫度220 ℃，溶劑延遲時(shí)間10 min，掃描模式全掃描和選擇離子掃描，全掃描范圍 60 ～ 450 m/z，選擇相應(yīng)的離子掃描模式。將樣品色譜圖中各峰保留時(shí)間與脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間進(jìn)行比較，確定樣品色譜圖中各峰的性質(zhì)，采用面積歸一化法計(jì)算各脂肪酸的百分比。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料采用S-W 正態(tài)性檢驗(yàn)，呈正態(tài)分布以表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；非正態(tài)分布以M（P25，P75）表示，兩組間比較采用秩和檢驗(yàn)。以對(duì)照組脂肪酸占比的中位數(shù)為參照，以脂肪酸占比的二分類變量為自變量，以EC發(fā)生為因變量，同時(shí)將人群的年齡、攝入總能量以及攝入總脂肪進(jìn)行調(diào)整，采用二分類Logistic 回歸分析各脂肪酸組分變化對(duì)EC 發(fā)生的影響。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組外周血紅細(xì)胞膜脂肪酸占比比較 EC組和對(duì)照組外周血紅細(xì)胞膜脂肪酸占比由高到低均為總飽和脂肪酸、總多不飽和脂肪酸和總單不飽和脂肪酸。EC組外周血紅細(xì)胞膜總飽和脂肪酸、總單不飽和脂肪酸和總多不飽和脂肪酸占比分別為57.73%（56.13%， 60.49%）、13.49%（11.65%， 14.92%）、28.66%（26.39%， 30.30%），對(duì)照組分別為56.90%（55.71%， 58.20%）、14.18%（13.49%， 14.81%）、28.86%（27.78%， 30.08%）；EC組外周血紅細(xì)胞膜總飽和脂肪酸占比高于對(duì)照組，總單不飽和脂肪酸占比低于對(duì)照組（P均＜0.05），兩組總多不飽和脂肪酸占比比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。兩組外周血紅細(xì)胞膜各飽和脂肪酸、各單不飽和脂肪酸、各ω-6多不飽和脂肪酸、各ω-3 多不飽和脂肪酸占比比較見表1 ～ 5。

表2 兩組外周血紅細(xì)胞膜各單不飽和脂肪酸占比比較［%，M（P25，P75）］

表3 兩組外周血紅細(xì)胞膜各ω-6多不飽和脂肪酸占比比較［%，M（P25，P75）］

表4 兩組外周血紅細(xì)胞膜各ω-3多不飽和脂肪酸占比比較［%，M（P25，P75）］

表5 兩組外周血紅細(xì)胞膜ω-6與ω-3相關(guān)指標(biāo)比值比較［M（P25，P75）］

2.2 外周血紅細(xì)胞膜脂肪酸占比對(duì)EC發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的影響 見表6。

表6 外周血紅細(xì)胞膜脂肪酸占比影響EC發(fā)生的二分類Logistic回歸分析結(jié)果

3 討論

腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)出異常的脂類合成與代謝，細(xì)胞中脂質(zhì)生物合成增加和攝取增多與腫瘤的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［3，8］。細(xì)胞膜中脂肪酸的構(gòu)成代表機(jī)體組織中脂類物質(zhì)膳食與合成代謝的平衡。外周血紅細(xì)胞膜中脂肪酸的組分受膳食影響較小，且血液樣本容易獲得，因此紅細(xì)胞膜脂肪酸譜是研究脂肪酸與腫瘤關(guān)系的一種較好選擇。

飽和脂肪酸是導(dǎo)致血膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇升高的主要原因，可增加冠心病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)；肉豆蔻酸C14：0、棕櫚酸C16：0 以及硬脂酸C18：0 等可影響腸道菌群，通過炎癥通路與肥胖密切相關(guān)［9］。研究表明，肥胖是EC 發(fā)生的主要潛在原因［10］，總脂肪和飽和脂肪酸的攝入增加會(huì)升高EC的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，多攝入單不飽和脂肪酸也與EC 發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)［11］。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，紅細(xì)胞膜中總飽和脂肪酸占比升高會(huì)增加EC的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，但總單不飽和脂肪酸占比與EC的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)沒有明顯的相關(guān)性，這可能是由于研究人群的種族差異和膳食差異所致，也可能與樣本量有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，飽和脂肪酸中的肉豆蔻酸C14：0、山俞酸C22：0、木焦油酸C24：0 占比升高會(huì)增加EC 的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，但花生酸C20：0占比降低會(huì)增加EC 的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，提示各種飽和脂肪酸在EC發(fā)生發(fā)展中的作用需要進(jìn)一步研究。

單不飽和脂肪酸在機(jī)體內(nèi)具有特殊的生理功能，能降低血液中的血糖和膽固醇，調(diào)節(jié)血脂代謝，棕櫚油酸C16：1n7 和油酸C18：1n9 還與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［12］。研究顯示，棕櫚油酸C16：1n7 具有有絲分裂活性，能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖［13］。成像質(zhì)譜顯微鏡觀察結(jié)果顯示，在EC 組織中C16：1n7和油酸C18：1n9出現(xiàn)富集，棕櫚油酸C16：1n7可以通過mTOR 信號(hào)通路促使EC 細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移［14］。本研究結(jié)果表明，外周血紅細(xì)胞膜棕櫚油酸C16：1n7 占比升高會(huì)增加EC 的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，結(jié)果與以往研究一致。本研究還提示，神經(jīng)酸C24：1n9 占比升高會(huì)增加EC的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。有研究顯示，口腔癌患者紅細(xì)胞膜油酸C18：1n9占比升高［15］。但本研究結(jié)果表明，EC 患者外周血紅細(xì)胞膜油酸C18：1n9 占比低于對(duì)照組，且其占比降低與EC 發(fā)生有關(guān)；提示油酸C18：1n9在不同腫瘤中表現(xiàn)出不同的作用。

多不飽和脂肪酸作為一類獨(dú)特的生物活性物質(zhì)，對(duì)機(jī)體生理功能具有重要的影響，也是構(gòu)成細(xì)胞膜磷脂的重要組成部分，在機(jī)體內(nèi)具有穩(wěn)定細(xì)胞膜、調(diào)控基因表達(dá)、維持細(xì)胞因子和脂蛋白平衡等作用。在紅細(xì)胞膜中，ω-3 多不飽和脂肪酸主要包括ALA、EPA 和DHA，ω-6 多不飽和脂肪酸主要包括LA 和AA。LA 代謝產(chǎn)生炎癥物質(zhì)，可能參與誘導(dǎo)腫瘤的發(fā)生發(fā)展，但也有研究表明，LA 的過氧化產(chǎn)物能抑制結(jié)腸癌的發(fā)生［16-18］。GLA 和ALA 能通過抑制β-catenin 信號(hào)通路，參與抑制胃癌細(xì)胞和肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)［19-20］。研究顯示，高攝取植物來源的ALA、GLA 與EC 發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系［21］。本研究結(jié)果顯示，EC 患者外周血紅細(xì)胞膜LA、ALA 占比降低，并且與EC 的發(fā)病有關(guān)，但GLA 占比與EC 發(fā)病無關(guān)。這些結(jié)果的差異可能與不同脂肪酸在不同腫瘤的作用有所不同有關(guān)，需要進(jìn)一步研究。

細(xì)胞膜中最主要的ω-6 多不飽和脂肪酸是AA，其代謝產(chǎn)物具有強(qiáng)炎癥作用，而主要的ω-3 多不飽和脂肪酸EPA、DHA 代謝產(chǎn)物具有低炎癥作用或強(qiáng)抗炎作用［16］。ω-6/ω-3 升高會(huì)導(dǎo)致其代謝產(chǎn)物引起炎癥反應(yīng)，以及直接參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展［16，22］。體外實(shí)驗(yàn)表明，DHA 可以通過抑制COX2基因表達(dá)，降低PGE2生物合成，從而降低Akt磷酸化和Cyclin D1表達(dá)，進(jìn)而抑制EC 細(xì)胞增殖［23］。采用低ω-6/ω-3 膳食喂養(yǎng)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，ω-3 多不飽和脂肪酸（主要是EPA、DHA）可以通過抑制mTORC1/2 和Akt 信號(hào)通路抑制EC 細(xì)胞生長(zhǎng)［24］。但是最近的臨床研究顯示，膳食攝入ω-3 多不飽和脂肪酸與EC 的發(fā)生沒有明顯相關(guān)性［25］。本研究結(jié)果也表明，雖然EC組外周血紅細(xì)胞膜AA/DHA高于對(duì)照組，但是兩組AA/EPA、AA/（EPA+DHA）等差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與EC的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)也沒有明顯的相關(guān)性。

綜上所述，EC患者紅細(xì)胞膜總飽和脂肪酸及其中的肉豆蔻酸C14：0、山俞酸C22：0、木焦油酸C24：0，單不飽和脂肪酸中的棕櫚油酸C16：1n7、神經(jīng)酸C24：1n9，多不飽和脂肪酸中的GLA 占比均升高；飽和脂肪酸中的花生酸C20：0、單不飽和脂肪酸中的棕油酸C18：1n9 及多不飽和脂肪酸中的LA、ALA 占比均降低；上述脂肪酸組分改變與EC 的發(fā)病有關(guān)。因此，EC患者外周血紅細(xì)胞膜中脂肪酸組分發(fā)生一定的變化，這些改變代表機(jī)體脂肪酸代謝的改變，可能與EC的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。但是，紅細(xì)胞膜脂肪酸組分變化是否可以用于EC 的早期診斷仍需大樣本研究。