• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    中壓制備色譜法分離黑果枸杞中2 個矮牽牛素花色苷及其對胰脂肪酶的抑制活性

    2023-12-14 12:45:04張淥淘魏佳儀閆亞美曹有龍
    食品科學(xué) 2023年22期
    關(guān)鍵詞:矮牽牛黑果脂肪酶

    米 佳,張淥淘,祿 璐,魏佳儀,金 波,羅 青,閆亞美,曹有龍

    (寧夏農(nóng)林科學(xué)院枸杞科學(xué)研究所/國家枸杞工程技術(shù)研究中心,寧夏 銀川 750002)

    黑果枸杞(Lycium ruthenicumMurr.),屬茄科(Solanceae)枸杞屬(LyciumL.),是近年來發(fā)現(xiàn)的多年生,抗旱、耐鹽野生枸杞資源,主要分布于我國西北地區(qū),在歐洲和中亞地區(qū)也有少量分布[1]。黑果枸杞富含花色苷類化合物,其花色苷含量占干果質(zhì)量的1.5%~3.2%,遠高于其他果蔬,是藍莓花色苷含量的1.7 倍[2]?;ㄉ帐腔ㄇ嗨卦谧匀粻顟B(tài)下與各種單糖或雙糖結(jié)合在一起形成的糖苷類化合物[3],黑果枸杞中富含不同于其他果蔬的花色苷,主要為芳香酸?;陌珷颗K鼗ㄉ占捌渫之悩?gòu)體,有十余種[4],其中含量最高的為矮牽牛素-3-O-蕓香糖(反式-對香豆?;?-5-O-葡萄糖苷,其分子質(zhì)量較大,結(jié)構(gòu)同時具有矮牽牛素母核、芳香酸?;?、蕓香糖和葡萄糖糖苷化的特征,在食源性材料中較為少見[5-7],研究發(fā)現(xiàn)黑果枸杞花色苷具有抗氧化、抗炎癥、提高免疫、降血脂、抗腫瘤、改善記憶力[8-14]等多種功效。

    胰脂肪酶是水解膳食中脂質(zhì)的酶,抑制其活性能夠降低人體對脂質(zhì)的吸收,從而改善肥胖[15-16]。前期研究發(fā)現(xiàn)黑果枸杞花色苷提取物可與胰脂肪酶通過氫鍵和范德華力相結(jié)合,進而抑制胰脂肪酶的活性[17],且單體矮牽牛素-3-O-蕓香糖(反式-對香豆?;?-5-O-葡萄糖苷的活性高于粗提物[18],是較好的胰脂肪酶活性抑制劑。研究還表明,不同的花色苷單體可能存在活性差異,黑果枸杞花色苷的抗氧化能力與其結(jié)構(gòu)中A、B環(huán)上的羥基基團數(shù)目、?;潭?、糖配基種類有關(guān)聯(lián)[19-20],黑果枸杞花色苷具有抑制胰脂肪酶活性的作用,但黑果枸杞中存在不同的矮牽牛素花色苷對胰脂肪酶抑制活性尚未進行研究。因此有必要從黑果枸杞中分離制備獲得不同的矮牽牛素花色苷單體,并比較其對其胰脂肪酶的抑制作用。

    采用大孔樹脂、凝膠樹脂純化黑果枸杞主要花色苷的研究已有不少報道,但多采用柱體積較小的常壓柱,制備量小[21-22],杜霞[23]采用flash C18柱(80 g,25~35 μm,100 ?)聯(lián)合中壓快速分離系統(tǒng)制備黑果枸杞花色苷,獲得了純度為60.0%的矮牽牛素-3-蕓香糖苷(對香豆酰)-5-葡萄糖苷,但目前對于同時制備2 個較高純度黑果枸杞矮牽牛素花色苷的方法鮮見報道。大孔樹脂、凝膠樹脂等與中壓制備色譜聯(lián)合用于純化多酚類物質(zhì)具有快速、高效的效果,能從復(fù)雜的樣品中富集到微量化合物[24-25]。本研究在對8 種大孔樹脂對黑果枸杞花色苷的分離效果進行篩選后,選擇最適于黑果枸杞花色苷分離純化的大孔樹脂,與中壓制備色譜聯(lián)用分離純化黑果枸杞花色苷,并用LH-20凝膠樹脂進一步純化黑果枸杞花色苷,獲得純度較高的2 個黑果枸杞花色苷單體,采用超高效液相色譜(ultra-high performance liquid chromatography,UPLC)技術(shù)分析其相對純度,超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)和核磁共振氫譜(1H nuclear magnetic resonance,1H NMR)技術(shù)對其結(jié)構(gòu)進行鑒定,旨在為黑果枸杞花色苷的功效研究和開發(fā)利用提供基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    黑果枸杞為市售;AB-8、XAD-7、HPD100、ADS-7、D101、NKA-9、DA201、D4020大孔樹脂 北京索萊寶科技有限公司;Sephadex LH-20樹脂 美國GE公司;乙醇(食品級)、乙酸(色譜純)國藥集團化學(xué)試劑有限公司;甲醇(色譜純)美國ACS公司;氘代甲醇、氘代三氟乙酸 上海柏飛化工科技有限公司;其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

    1.2 儀器與設(shè)備

    中壓制備色譜儀系統(tǒng)(C620 Control System,C605 Pump Module,C640 UV Photometer,C660 Fraction Collector)、R-300旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 瑞士Büchi公司;TU1810紫外-可見分光光度計 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;DC-1006低溫恒溫槽 上海菁海儀器有限公司;QYC 200恒溫搖床 上海福馬實驗設(shè)備有限公司;1260高效制備液相色譜儀、C18色譜柱(4.6 mm×100 mm,1.8 μm)、ZORBAX SB-C18色譜柱(25 mm×250 mm,5 μm)美國安捷倫科技有限公司;H-class UPLC系統(tǒng)(ACQUITY PDA/ePDA檢測器)美國沃特世科技有限公司;Q-Exactive HF液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀 美國賽默飛世爾科技有限公司;A-VANCE NEO 400 MHz NMR儀 德國布魯克科技有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 黑果枸杞花色苷的提取

    黑果枸杞去除壞果、果柄等雜質(zhì),粉碎后過40 目篩,用4‰的鹽酸-無水乙醇溶液按料液比1∶30(g/mL)提取。在常溫條件下提取30 min,濾液過0.45 μm濾膜,濾渣繼續(xù)用相同方法提取2 次,合并濾液,45 ℃減壓濃縮,凍干后得到花色苷粗提物。

    1.3.2 花色苷含量的測定

    參考文獻方法[24],用pH值示差法進行測定。

    式中:A為吸光度;C為花色苷質(zhì)量濃度/(mg/mL);M為矢車菊-3-O-葡萄糖苷的分子質(zhì)量(449.2 g/mol);n為稀釋倍數(shù);ε為消光系數(shù)(29 600 L/(mol·cm))。

    1.3.3 大孔樹脂分離純化黑果枸杞花色苷

    1.3.3.1 靜態(tài)實驗篩選樹脂

    靜態(tài)吸附實驗:準(zhǔn)確稱取經(jīng)過預(yù)處理后的8 種大孔樹脂各6.000 g置于100 mL具塞三角瓶中,精密加入黑果枸杞花色苷粗提液50.00 mL,25 ℃、100 r/min振蕩24 h,在530 nm波長處測定剩余溶液的吸光度A1。按式(3)、(4)計算靜態(tài)吸附量、吸附率。

    靜態(tài)解吸實驗:向已吸附飽和的10 種樹脂分別精密加入50 mL 70%乙醇+0.4%鹽酸溶液,25 ℃、100 r/min振蕩24 h。在530 nm波長處測定解吸液吸光度。按式(3)~(5)計算吸附量、吸附率和解吸率:

    式中:qe為花色苷吸附量/(mg/g);A和D分別為吸附率/%和解吸率/%;C0和C1分別為吸附前和吸附后花色苷質(zhì)量濃度/(mg/mL);A0和A1為吸附前和吸附后花色苷在530 nm波長處吸光度;A2為解吸后530 nm波長處吸光度;m為樹脂的質(zhì)量/g。

    1.3.3.2 大孔樹脂靜態(tài)吸附-解吸動力學(xué)測定

    將初步篩選出的3 種樹脂,進行花色苷靜態(tài)吸附和解吸的動力學(xué)實驗,方法同1.3.3.1節(jié),在吸附和解吸過程中,每隔30 min取0.5 mL,在530 nm波長處測定吸光度,直到吸附和解吸平衡。分別以吸附率和解吸率為縱坐標(biāo),時間為橫坐標(biāo),繪制吸附解吸動力學(xué)曲線,確定純化花色苷最佳的大孔樹脂。

    1.3.3.3 D101樹脂靜態(tài)吸附解吸條件優(yōu)化

    D101大孔樹脂對不同質(zhì)量濃度枸杞花色苷的吸附效果:在室溫(25 ℃)下的恒溫振蕩器中,向裝有1.000 g D101大孔吸附樹脂的150 mL具塞三角瓶中分別加入不同質(zhì)量濃度(0.010、0.018、0.036、0.051、0.100、0.137、0.153、0.180、0.200 mg/mL)的花色苷提取液50.00 mL,100 r/min振蕩吸附4.5 h,測定濾液中剩余花色苷質(zhì)量濃度,計算吸附量,確定最佳進樣質(zhì)量濃度。

    花色苷溶液pH值對吸附效果的影響:用0.01 mol/L鹽酸將70%乙醇溶液調(diào)至不同pH值(1.0、2.0、3.0、4.0、5.0),并分別配制質(zhì)量濃度為0.179 mg/mL花色苷溶液,各取50 mL裝入150 mL三角瓶中,各三角瓶中分別裝入處理后的大孔樹脂1.000 g,置于恒溫振蕩器中,以100 r/min吸附4.5 h。分別測定吸附前后的吸光度,計算大孔樹脂的吸附率。

    乙醇體積分?jǐn)?shù)對D101樹脂靜態(tài)解吸效果的影響:準(zhǔn)確稱取已吸附飽和的大孔樹脂1.000 g裝入三角瓶中,分別加入50 mL體積分?jǐn)?shù)50%、60%、70%、80%、90%的酸性乙醇溶液(pH 3.0),放于恒溫振蕩器中25 ℃、100 r/min解吸4.5 h,分別測定解吸前后花色苷的吸光度,計算解吸率。

    1.3.3.4 D101大孔樹脂分離純化黑果枸杞花色苷

    在Ф8 cm×100 cm的層析柱中,采用濕法灌柱,平衡后,將pH 3、0.180 mg/mL的花色苷粗提液以2.0 mL/min流速上樣,吸附,吸附平衡后,用蒸餾水洗去表面雜質(zhì),準(zhǔn)備洗脫。

    洗脫流速對動態(tài)解吸率的影響:選取不同流速(15、20、25、30 mL/min)70%乙醇溶液進行洗脫,收集流出液并測定不同體積流出液中花色苷質(zhì)量濃度,計算花色苷的回收率。

    純化后花色苷得率按式(6)進行計算:

    式中:m1為純化后花色苷質(zhì)量/mg;m0為花色苷上樣量/g。

    1.3.4 Sephedex LH-20分離純化黑果枸杞花色苷

    將D101大孔樹脂純化后的花色苷溶液繼續(xù)采用Sephadex LH-20聯(lián)合中壓制備色譜(Ф36 mm×460 mm)分離,柱壓為0.1 bar,花色苷溶液質(zhì)量濃度為2.0 mg/mL,上樣量為10 mL,然后用體積分?jǐn)?shù)為30%的酸性乙醇溶液洗脫,流速2.5 mL/min,每10 mL收集一管,合并相同組分,濃縮和凍干后,得到黑果枸杞花色苷P1、P2。

    1.3.5 高效制備液相色譜分離純化黑果枸杞花色苷

    用去離子水溶解適量花色苷單體,過0.45 μm微孔濾膜,即為分析用液。流動相A為15%甲醇-乙腈,流動相B為1%甲酸-0.1%三氟乙酸溶液。流速18 mL/min,柱溫25 ℃,檢測波長280 nm,進樣體積500 μL。梯度洗脫條件:0~11 min,15%~30% A、85%~70% B;11~15 min,30%~15% A、70%~85% B;15~18 min,15% A、85% B。按峰分別收集P1、P2純化組分,用于結(jié)構(gòu)鑒定。

    1.3.6 UPLC法檢測花色苷

    用去離子水溶解適量花色苷單體,過0.45 μm微孔濾膜,即為分析用液。UPLC分析條件:流動相A為0.1%的甲酸水溶液;B為0.1%甲酸-乙腈溶液。洗脫梯度為:0~2 min,95% A、5% B;2~12 min,95%~75% A、5%~25% B;12~14 min,75%~50% A、25%~50% B;14~21 min,50%~20% A、50%~80% B;21~22 min,20% A、80% B;22~24 min,20%~95% A、80%~5% B;流速1.0 mL/min,柱溫30 ℃,進樣體積10 μL,檢測波長280 nm。

    1.3.7 黑果枸杞花色苷P1、P2的結(jié)構(gòu)鑒定

    質(zhì)譜條件:離子源為電噴霧電離源,掃描模式為正離子模式,加熱器溫度325 ℃,鞘氣流速45 arb,輔助氣(N2)流速15 arb,吹掃氣流速1 arb,電噴霧電壓3.5 kV,毛細管溫度330 ℃,透鏡電壓為55%,掃描模式為一級全掃描(Full Scan,m/z100~1 500)與數(shù)據(jù)依賴性二級質(zhì)譜掃描(dd-MS2,TopN=5),分辨率為120 000(一級質(zhì)譜)&60 000(二級質(zhì)譜),碰撞模式為高能量碰撞解離。

    NMR條件:用氘代甲醇與氘代三氟乙酸(9∶1,V/V)混合溶液溶解花色苷單體,進行1H NMR分析,操作溫度為300 K。

    1.3.8 不同純度黑果枸杞花色苷對胰脂肪酶活性的抑制效果

    參考文獻[17]方法研究黑果枸杞花色苷粗提物、D101大孔樹脂純化的黑果枸杞花色苷和黑果枸杞花色苷P1、P2對胰脂肪酶的抑制作用。

    1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

    2 結(jié)果與分析

    2.1 大孔樹脂-中壓制備色譜法純化黑果枸杞花色苷

    2.1.1 大孔樹脂的初篩

    不同大孔樹脂對黑果枸杞花色苷的靜態(tài)吸附和解吸能力見表1??梢钥闯觯罂讟渲瑢诠坭交ㄉ瘴骄哂幸欢ǖ倪x擇性,靜態(tài)吸附率最好的是AB-8,靜態(tài)吸附能力高達99.038%,這是因為兩物質(zhì)的極性越相似則范德華力越大更容易結(jié)合,AB-8型大孔樹脂是弱極性,因此與弱極性的花色苷更易結(jié)合[26]。但其解吸率較低,僅為79.806%。這是由于吸附能力較強的大孔樹脂在一定條件下,洗脫較困難,造成解吸能力下降。其次,吸附能力較好的是D101和D4020,吸附率分別為98.144%和98.076%。解吸率最好的樹脂是ADS-7,解吸率為95.161%,但該樹脂的吸附率較低,再之解吸率較好的是D101、D4020樹脂,解吸率分別為91.947%和89.768%。綜合考慮,選擇吸附和解吸效果均較好的D101和D4020大孔樹脂進行進一步的篩選。

    表1 不同大孔樹脂靜態(tài)吸附與解吸能力對比Table 1 Comparison of adsorption and desorption capacity of different macroporous resins

    2.1.2 大孔樹脂靜態(tài)吸附-解吸動力學(xué)

    如圖1a所示,兩種樹脂對黑果枸杞花色苷的吸附均為快速增長平穩(wěn)型。兩種樹脂對花色苷的0~90 min內(nèi)吸附率增加較為迅速。隨著時間的延長,兩種樹脂對花色苷的吸附率逐漸平衡,且在390 min后逐漸平衡,平衡時,兩種樹脂的吸附率分別為96.19%和95.60%,D101樹脂的吸附率相對較好。

    圖1 大孔樹脂的靜態(tài)吸附(a)和解吸(b)動力學(xué)曲線Fig.1 Adsorption (a) and desorption (b) kinetic curves of macroporous resins

    從圖1b可以看出,在0~30 min內(nèi),D101和D4020兩種樹脂解吸率均為快速增長,在60 min后逐漸達到平衡,D101樹脂在180 min達到平衡,平衡時解吸率為91.34%。D4020樹脂在120 min基本達到平衡,平衡時解吸率為89.11%,所以D101樹脂解吸率較好。因此,確定D101樹脂為純化黑果枸杞花色苷的最佳樹脂。

    2.1.3 D101大孔樹脂的靜態(tài)吸附及解吸條件優(yōu)化

    如圖2a所示,D101樹脂對黑果枸杞花色苷的吸附能力隨著花色苷粗提液質(zhì)量濃度的增大而增大,并在花色苷粗提物質(zhì)量濃度達到0.18 mg/mL時,基本達到飽和,這一結(jié)果為后續(xù)大孔樹脂-中壓制備色譜分離純化花色苷提供合適的進樣質(zhì)量濃度。

    圖2 D101大孔樹脂的靜態(tài)吸附及解吸條件優(yōu)化Fig.2 Optimization of static adsorption and desorption conditions of macroporous resin D101

    由圖2b可見,在pH 1~3之間,D101大孔樹脂對黑果枸杞花色苷的吸附率隨著pH值的升高逐漸上升,當(dāng)花色苷溶液的pH值為3時,吸附率最高,并且顯著地高于其他pH值時,當(dāng)pH繼續(xù)升高至5時,花色苷的吸附率迅速下降,因此選擇pH值為3的花色苷溶液進行上樣。

    由圖2c可見,隨著洗脫液體積分?jǐn)?shù)的增大,花色苷的解吸率先升高后降低,洗脫液乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%時,花色苷的解吸率最高,解吸效果最好。因此確定洗脫液為70%乙醇溶液。

    由圖2d可見,隨著洗脫流速的增大,花色苷回收率增大,當(dāng)洗脫流速為25 mL/min時,回收率最高為92.64%,繼續(xù)增大流速,回收率開始降低。因此選擇最佳洗脫流速為25 mL/min。

    綜上,選擇D101大孔樹脂-中壓制備色譜分離純化黑果枸杞花色苷的工藝條件為:首先將pH 3、0.18 mg/mL的花色苷溶液在室溫下進行上樣,用70%乙醇溶液、流速25 mL/min進行洗脫,此時,花色苷得率為72.71%,所得純化的花色苷命名為S1。

    2.2 凝膠樹脂中壓制備色譜純化黑果枸杞花色苷

    將經(jīng)過大孔樹脂純化后的花色苷溶液繼續(xù)采用Sephadex LH-20聯(lián)合中壓制備色譜進行純化,按峰收集組分,濃縮和凍干后,得到黑果枸杞花色苷組分P1和P2,得率分別為19.53%、45.34%。用UPLC在280 nm條件下檢測,如圖3所示,采用峰面積歸一化法計算相對含量,經(jīng)大孔樹脂純化后,組分P1、P2的相對含量分別為18.22%和30.77%,經(jīng)Sephadex LH-20純化后,P1、P2的相對含量分別為84.16%和81.48%,純度分別提高了3.62 倍和1.65 倍。

    圖3 D101大孔樹脂純化(a)和Sephadex LH-20純化黑果枸杞花色苷P1(b)、P2(c)的UPLC圖Fig.3 UPLC chromatograms of anthocyanin fractions from L.ruthenicum Murr.purified with resin D101 (a) and Sephadex LH-20 (b and c)

    2.3 花色苷結(jié)構(gòu)鑒定

    黑果枸杞花色苷質(zhì)譜見圖4?;ㄉ誔1,紫色粉末,[M+H]+m/z1 095.32,并且含有離子碎片m/z933.26表明失去了一分子的葡萄糖(m/z162),m/z771.21表明失去了一分子的葡萄糖(m/z162),m/z479.11表明失去了一分子的香豆酸(m/z146)和一分子的蕓香糖(m/z308),m/z317.06(M-308-146-162)表明P2有一個矮牽牛素配基(m/z317),1H NMR數(shù)據(jù)如表2所示,參考文獻[27-29],推測所獲得的黑果枸杞花色苷P1為矮牽牛素-3-O-蕓香糖(反式-對香豆?;?-葡萄糖苷-5-O-葡萄糖苷,其化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖5 P1所示。

    圖4 黑果枸杞花色苷的一級和二級質(zhì)譜圖Fig.4 Primary and secondary mass spectra of L.ruthenicum Murr.anthocyanins

    圖5 花色苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)及其原子編號Fig.5 Chemical structures and atom number of anthocyanins

    表2 花色苷的1H NMR(400 MHz)數(shù)據(jù)Table 2 1H NMR (400 MHz) data of the isolated anthocyanins

    花色苷P2,紫色粉末,[M+H]+m/z933.26,并且樣品含有離子碎片m/z771.21表明失去了一分子葡萄糖(m/z162),m/z479.11表明失去了一分子的香豆酸(m/z146)和一分子的蕓香糖(m/z308),m/z317.06(M-308-146-162)表明P2有一個矮牽牛素配基(m/z317)。1H NMR數(shù)據(jù)如表2所示,參考文獻[19,29-30],推測所獲得的黑果枸杞花色苷P2為矮牽牛素-3-O-蕓香糖(反式-對香豆?;?-5-O-葡萄糖苷,其化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖5 P2所示。

    2.4 不同純度黑果枸杞花色苷對胰脂肪酶的抑制效果

    如圖6所示,隨著黑果枸杞花色苷粗提物質(zhì)量濃度的增大,對胰脂肪酶的抑制率也不斷增大,當(dāng)質(zhì)量濃度為5 mg/mL時,對胰脂肪酶的抑制率為85.3%,大孔樹脂純化后的花色苷和P1、P2在質(zhì)量濃度為0.1~0.5 mg/mL時,隨著質(zhì)量濃度增大對胰脂肪酶抑制作用不斷增大,兩種純化后的花色苷在質(zhì)量濃度小于0.2 mg/mL時,抑制作用差異不顯著,但質(zhì)量濃度大于0.3 mg/mL時,經(jīng)LH-20凝膠樹脂純化的花色苷對胰脂肪酶的抑制率顯著高于D101大孔樹脂純化后的花色苷。

    圖6 黑果枸杞花色苷粗提物(a)和純化物(b)對胰脂肪酶的抑制效果Fig.6 Inhibitory effect of crude extract (a) and purified (b)anthocyanins from L.ruthenicum Murr.against pancreatic lipase

    表3 不同純度的黑果枸杞花色苷對胰脂肪酶的IC50 Table 3 IC50 of anthocyanins of different purities fromL.ruthenicum Murr.against pancreatic lipase

    由表3可見,S1和P1、P2對胰脂肪酶的半抑制濃度(IC50)分別為粗提物的34.7%、17.7%和15.9%,說明純度較高的黑果枸杞花色苷對胰脂肪酶抑制率效果更好。P1和P2的胰脂肪酶抑制活性相當(dāng)。P1和P2的IC50值分別為0.250 mg/mL和0.224 mg/mL,已報道從紫娟茶中分離的飛燕草素-3-O-β-D-(6-(E)-對香豆酸)吡喃半乳糖苷和矢車菊素-3-O-β-D-(6-(E)-對香豆酸)吡喃半乳糖苷抑制胰脂肪酶的IC50值分別為0.55 mg/mL和2.47 mg/mL[31],矢車菊素-3-O-葡萄糖苷抑制胰脂肪酶的IC50值為0.02 mg/mL[32]??梢姀暮诠坭街蟹蛛x得到的矮牽牛素花色苷具有較好的胰脂肪酶抑制作用。

    3 結(jié)論

    用中壓制備色譜與D101大孔樹脂、Sephadex LH-20凝膠樹脂聯(lián)用,同時分離純化出2 個較高純度的黑果枸杞花色苷,方法便捷、成本低。大孔樹脂-中壓制備色譜分離純化黑果枸杞花色苷的最佳工藝條件為進樣液pH 3、花色苷粗提物質(zhì)量濃度0.18 mg/mL、洗脫劑為70%乙醇溶液、流速25 mL/min,花色苷得率為72.71%。繼續(xù)采用Sephadex LH-20純化后,P1和P2的得率分別為19.53%、45.34%,相對含量分別為84.16%、81.48%,經(jīng)鑒定,P1和P2分別為矮牽牛素-3-O-蕓香糖(反式-對香豆?;?-葡萄糖苷-5-O-葡萄糖苷和矮牽牛素-3-O-蕓香糖(反式-對香豆?;?-5-O-葡萄糖苷,P1和P2均具有較好的胰脂肪酶抑制活性,且顯著大于大孔樹脂純化的花色苷。該研究為黑果枸杞花色苷的規(guī)模化生產(chǎn)提供技術(shù)參考,同時為黑果枸杞花色苷的功效研究及高附加值產(chǎn)品的生產(chǎn)提供良好基礎(chǔ)。

    猜你喜歡
    矮牽牛黑果脂肪酶
    44個矮牽牛品種在北京不同地區(qū)的適應(yīng)性研究
    北京園林(2021年1期)2022-01-19 03:25:56
    我眼中的矮牽牛
    花園中重要的裝飾植物
    ——矮牽牛
    花卉(2020年15期)2020-08-11 09:22:24
    核桃黑果病的發(fā)生與防治
    河北果樹(2020年1期)2020-02-09 12:31:26
    黑果枸杞化學(xué)成分研究
    黑果枸杞在遼西地區(qū)的栽培技術(shù)
    黑果菝葜根莖化學(xué)成分的研究
    中成藥(2017年3期)2017-05-17 06:09:00
    矮牽牛栽培管理技術(shù)
    脂肪酶Novozyme435手性拆分(R,S)-扁桃酸
    脂肪酶N435對PBSA與PBSH的酶催化降解和分子模擬
    中國塑料(2016年7期)2016-04-16 05:25:53
    三级国产精品欧美在线观看| 一级a做视频免费观看| 一级毛片电影观看| 五月天丁香电影| 婷婷色av中文字幕| 91成人精品电影| 亚洲人成网站在线观看播放| 午夜激情久久久久久久| 一区二区三区免费毛片| 晚上一个人看的免费电影| 男人添女人高潮全过程视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 精品人妻熟女av久视频| 99久久精品一区二区三区| 熟女电影av网| 久久久久视频综合| 国产老妇伦熟女老妇高清| 在线观看人妻少妇| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 美女国产视频在线观看| 美女内射精品一级片tv| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 岛国毛片在线播放| 99热国产这里只有精品6| 天美传媒精品一区二区| 国产一级毛片在线| 亚洲性久久影院| 亚洲真实伦在线观看| 夫妻午夜视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 日韩一区二区视频免费看| 久久人妻熟女aⅴ| 极品人妻少妇av视频| av在线播放精品| 亚洲精品456在线播放app| 中国美白少妇内射xxxbb| 久久久久久久久久久久大奶| 国产精品欧美亚洲77777| 精品一区二区三区视频在线| 日韩欧美一区视频在线观看 | 国产乱来视频区| 99久国产av精品国产电影| 精品亚洲成国产av| 欧美xxⅹ黑人| 亚洲内射少妇av| 久久久久精品性色| 国产精品国产av在线观看| 22中文网久久字幕| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 多毛熟女@视频| av女优亚洲男人天堂| 中文字幕久久专区| 国产黄色免费在线视频| 日本爱情动作片www.在线观看| 日本黄色片子视频| 一个人看视频在线观看www免费| 亚洲真实伦在线观看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国产伦理片在线播放av一区| 免费观看a级毛片全部| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 国产伦理片在线播放av一区| 26uuu在线亚洲综合色| 日日爽夜夜爽网站| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲av日韩在线播放| 大片电影免费在线观看免费| 99热全是精品| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 最新的欧美精品一区二区| av一本久久久久| 一级黄片播放器| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 最新中文字幕久久久久| 大片免费播放器 马上看| 久久久久久久久久久丰满| 国产男女超爽视频在线观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产成人a∨麻豆精品| 欧美成人午夜免费资源| 亚洲电影在线观看av| 丰满人妻一区二区三区视频av| 人妻人人澡人人爽人人| 少妇被粗大的猛进出69影院 | a级片在线免费高清观看视频| 免费人妻精品一区二区三区视频| 中文字幕av电影在线播放| 亚洲人成网站在线播| 亚洲av二区三区四区| 美女国产视频在线观看| 狂野欧美激情性bbbbbb| 国产探花极品一区二区| 最黄视频免费看| 国产成人a∨麻豆精品| 十八禁高潮呻吟视频 | 麻豆乱淫一区二区| 精品酒店卫生间| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 插阴视频在线观看视频| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 99re6热这里在线精品视频| 亚洲熟女精品中文字幕| 日日摸夜夜添夜夜爱| 自线自在国产av| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲av成人精品一二三区| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 亚洲欧美精品自产自拍| 18禁在线播放成人免费| 久久久久久久久久久丰满| 欧美三级亚洲精品| 国产精品女同一区二区软件| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 欧美三级亚洲精品| 亚洲情色 制服丝袜| 香蕉精品网在线| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 久久久久久伊人网av| 国产精品嫩草影院av在线观看| 一级毛片aaaaaa免费看小| 91久久精品电影网| 在线观看美女被高潮喷水网站| 久久国内精品自在自线图片| 久久精品国产亚洲av天美| 99久久综合免费| av黄色大香蕉| 男人舔奶头视频| 综合色丁香网| 亚洲精品一区蜜桃| 午夜日本视频在线| 精品卡一卡二卡四卡免费| 丝袜喷水一区| 街头女战士在线观看网站| 91在线精品国自产拍蜜月| 人妻系列 视频| 免费看光身美女| 色婷婷av一区二区三区视频| 久久久久国产精品人妻一区二区| 国产在线免费精品| av免费在线看不卡| 狂野欧美激情性bbbbbb| 久久久久久久久久人人人人人人| 黑人猛操日本美女一级片| 妹子高潮喷水视频| 日本黄大片高清| 成人影院久久| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产亚洲5aaaaa淫片| 久久韩国三级中文字幕| 日韩欧美一区视频在线观看 | av黄色大香蕉| 2022亚洲国产成人精品| 大片免费播放器 马上看| 成人综合一区亚洲| 国产一区二区在线观看日韩| 丝袜脚勾引网站| 久久久久久久久久成人| 日韩大片免费观看网站| 少妇 在线观看| 国产一区二区三区综合在线观看 | 欧美bdsm另类| 在线 av 中文字幕| 国产欧美亚洲国产| 欧美国产精品一级二级三级 | 亚洲精品乱久久久久久| 一级av片app| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 9色porny在线观看| 成人美女网站在线观看视频| freevideosex欧美| 高清欧美精品videossex| 国产在线男女| 一级毛片 在线播放| 国产美女午夜福利| 亚洲成人av在线免费| 久久久国产一区二区| 色视频www国产| 99精国产麻豆久久婷婷| 亚洲国产精品一区三区| 成人美女网站在线观看视频| 视频区图区小说| 男人爽女人下面视频在线观看| 午夜福利,免费看| 精品国产一区二区久久| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲无线观看免费| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 99热这里只有是精品在线观看| 性高湖久久久久久久久免费观看| 大片电影免费在线观看免费| 十八禁高潮呻吟视频 | 99热这里只有精品一区| 三级国产精品欧美在线观看| 美女内射精品一级片tv| 在线精品无人区一区二区三| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲经典国产精华液单| 精品久久国产蜜桃| 又爽又黄a免费视频| 国产黄色免费在线视频| 日韩亚洲欧美综合| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 久久久久久伊人网av| 免费观看无遮挡的男女| 欧美成人精品欧美一级黄| 亚洲久久久国产精品| freevideosex欧美| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 国产成人免费无遮挡视频| 日韩一区二区三区影片| 人人妻人人看人人澡| 中文天堂在线官网| 一本色道久久久久久精品综合| 免费观看的影片在线观看| 亚洲av在线观看美女高潮| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 男人添女人高潮全过程视频| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 99久久精品热视频| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 高清毛片免费看| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 亚州av有码| 国产精品伦人一区二区| 在线观看av片永久免费下载| av不卡在线播放| 亚洲,欧美,日韩| 亚州av有码| 91精品国产九色| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 一区二区三区免费毛片| 久久久久国产网址| 欧美性感艳星| 另类亚洲欧美激情| 大码成人一级视频| 香蕉精品网在线| 国产免费福利视频在线观看| 男女边吃奶边做爰视频| 午夜91福利影院| 日本与韩国留学比较| 免费观看性生交大片5| 国产精品蜜桃在线观看| 国产在线视频一区二区| 精品一区二区免费观看| 性色avwww在线观看| 在线观看人妻少妇| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 黑人高潮一二区| 亚洲四区av| 美女中出高潮动态图| 国产极品天堂在线| 久久99热这里只频精品6学生| av黄色大香蕉| 蜜臀久久99精品久久宅男| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产午夜精品一二区理论片| 日韩精品有码人妻一区| 国产精品嫩草影院av在线观看| 亚洲av成人精品一区久久| 成人亚洲欧美一区二区av| 成人国产麻豆网| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 三上悠亚av全集在线观看 | 有码 亚洲区| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 另类亚洲欧美激情| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 亚洲成人一二三区av| 亚洲av二区三区四区| 亚洲内射少妇av| 性色av一级| www.av在线官网国产| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 美女中出高潮动态图| 免费观看av网站的网址| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲,一卡二卡三卡| 久久久久久久国产电影| 久久久久国产网址| 亚洲av.av天堂| 成年人午夜在线观看视频| 欧美变态另类bdsm刘玥| 蜜臀久久99精品久久宅男| av国产精品久久久久影院| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| www.av在线官网国产| 日韩制服骚丝袜av| 能在线免费看毛片的网站| 日本欧美视频一区| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 观看美女的网站| 日韩视频在线欧美| www.色视频.com| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 亚洲精品日韩av片在线观看| 亚洲av综合色区一区| 男人舔奶头视频| 在线 av 中文字幕| 国产免费一级a男人的天堂| 午夜老司机福利剧场| 免费大片黄手机在线观看| 久久影院123| a级一级毛片免费在线观看| 日韩大片免费观看网站| 久久久国产欧美日韩av| 国产伦精品一区二区三区视频9| 国产亚洲一区二区精品| 国产精品偷伦视频观看了| 曰老女人黄片| 天天操日日干夜夜撸| 亚洲欧美清纯卡通| 免费观看av网站的网址| 大香蕉97超碰在线| 日本免费在线观看一区| 毛片一级片免费看久久久久| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产高清有码在线观看视频| 国产欧美亚洲国产| 卡戴珊不雅视频在线播放| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 在线观看av片永久免费下载| 最近的中文字幕免费完整| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 精品卡一卡二卡四卡免费| 黄色一级大片看看| 91精品伊人久久大香线蕉| 不卡视频在线观看欧美| av国产精品久久久久影院| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 青春草视频在线免费观看| 97超视频在线观看视频| 精品久久久噜噜| av免费在线看不卡| 久久久久久久亚洲中文字幕| 99久久中文字幕三级久久日本| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 成人黄色视频免费在线看| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 一级,二级,三级黄色视频| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产精品一区www在线观看| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 2021少妇久久久久久久久久久| 黄色日韩在线| 能在线免费看毛片的网站| 夫妻性生交免费视频一级片| 久久午夜福利片| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 91久久精品国产一区二区成人| 欧美激情国产日韩精品一区| 黄色怎么调成土黄色| 国产成人一区二区在线| 久久精品久久精品一区二区三区| 国产在线免费精品| 久久午夜福利片| 国产高清不卡午夜福利| 高清欧美精品videossex| 日本免费在线观看一区| 成年人午夜在线观看视频| 寂寞人妻少妇视频99o| 男人和女人高潮做爰伦理| av.在线天堂| 国产精品久久久久成人av| 国产精品.久久久| 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产成人精品福利久久| av卡一久久| 久久久久国产网址| videossex国产| 色网站视频免费| 亚洲va在线va天堂va国产| 精品国产露脸久久av麻豆| 亚洲欧美清纯卡通| 交换朋友夫妻互换小说| 国产成人aa在线观看| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 亚洲人与动物交配视频| 国产黄频视频在线观看| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 99久久综合免费| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产亚洲精品久久久com| 免费av不卡在线播放| 免费观看无遮挡的男女| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 高清不卡的av网站| 伦理电影大哥的女人| 亚洲色图综合在线观看| 免费大片黄手机在线观看| 啦啦啦中文免费视频观看日本| www.av在线官网国产| 久久6这里有精品| 国产一区二区三区综合在线观看 | 99热国产这里只有精品6| 午夜精品国产一区二区电影| 精品国产一区二区久久| tube8黄色片| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 精品一区二区三卡| 男女国产视频网站| 高清视频免费观看一区二区| 亚洲色图综合在线观看| h日本视频在线播放| 六月丁香七月| 免费观看av网站的网址| 亚洲国产精品成人久久小说| 久久免费观看电影| 韩国高清视频一区二区三区| av播播在线观看一区| 妹子高潮喷水视频| 最新中文字幕久久久久| 新久久久久国产一级毛片| 日本vs欧美在线观看视频 | 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 国产色婷婷99| 97在线视频观看| 国产精品人妻久久久久久| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 另类亚洲欧美激情| 亚洲情色 制服丝袜| 日本黄色日本黄色录像| 91久久精品国产一区二区成人| 亚洲av二区三区四区| 丰满少妇做爰视频| 日本黄大片高清| 丝袜脚勾引网站| 亚洲精品自拍成人| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 日本av免费视频播放| 久热久热在线精品观看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 新久久久久国产一级毛片| 久久久久视频综合| 午夜视频国产福利| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产黄片美女视频| 久久国内精品自在自线图片| 国产永久视频网站| 超碰97精品在线观看| 99热国产这里只有精品6| 丝瓜视频免费看黄片| 国产亚洲欧美精品永久| 免费黄色在线免费观看| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产精品欧美亚洲77777| 精品亚洲成a人片在线观看| 99精国产麻豆久久婷婷| 在线观看三级黄色| 国产爽快片一区二区三区| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 精品久久久久久电影网| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 777米奇影视久久| 亚洲人成网站在线播| 亚洲真实伦在线观看| 国产淫片久久久久久久久| 亚洲av二区三区四区| 在线观看美女被高潮喷水网站| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 免费人成在线观看视频色| 男女国产视频网站| 成年人免费黄色播放视频 | 中国美白少妇内射xxxbb| 日日爽夜夜爽网站| 国产成人精品久久久久久| 国产黄色视频一区二区在线观看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 亚洲精品久久午夜乱码| 在线天堂最新版资源| 51国产日韩欧美| 欧美日韩视频精品一区| 新久久久久国产一级毛片| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 亚洲国产日韩一区二区| 春色校园在线视频观看| 国产亚洲5aaaaa淫片| 亚洲不卡免费看| 一边亲一边摸免费视频| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲精品国产av成人精品| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 久久久久久人妻| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 熟女av电影| 亚洲成人手机| a级毛片在线看网站| 亚洲av不卡在线观看| 一级毛片 在线播放| 久久久欧美国产精品| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲精品456在线播放app| 色吧在线观看| 尾随美女入室| 丰满少妇做爰视频| 日日啪夜夜撸| 久久精品国产a三级三级三级| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 性色avwww在线观看| 亚洲精品自拍成人| 久久精品国产a三级三级三级| 有码 亚洲区| 国产欧美亚洲国产| 麻豆成人午夜福利视频| 看非洲黑人一级黄片| 亚洲三级黄色毛片| 日本爱情动作片www.在线观看| 欧美三级亚洲精品| 婷婷色av中文字幕| 在线观看三级黄色| 亚洲国产日韩一区二区| 老司机亚洲免费影院| 亚洲欧美精品专区久久| 乱人伦中国视频| 国国产精品蜜臀av免费| 亚洲av二区三区四区| 国产黄色视频一区二区在线观看| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 两个人免费观看高清视频 | 午夜福利网站1000一区二区三区| 香蕉精品网在线| 午夜激情久久久久久久| 国产在线免费精品| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产极品粉嫩免费观看在线 | 成年人免费黄色播放视频 | 插逼视频在线观看| 麻豆乱淫一区二区| 成人国产av品久久久| 国产av精品麻豆| 久久人人爽人人片av| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲精品视频女| 久久久久久久久久久丰满| 日韩强制内射视频| 在线天堂最新版资源| 啦啦啦啦在线视频资源| 各种免费的搞黄视频| 亚洲久久久国产精品| 老司机亚洲免费影院| 最黄视频免费看| 久久这里有精品视频免费| 毛片一级片免费看久久久久| 国产黄色免费在线视频| 精品亚洲成国产av| 观看美女的网站| 国产免费一级a男人的天堂| 亚洲国产成人一精品久久久| 色哟哟·www| 大香蕉久久网| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲怡红院男人天堂| 赤兔流量卡办理| 能在线免费看毛片的网站| av播播在线观看一区| 免费少妇av软件| 国产黄片视频在线免费观看| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 自线自在国产av| 国产高清国产精品国产三级| 欧美区成人在线视频| 久久精品久久久久久久性| 亚洲国产欧美在线一区| 看免费成人av毛片| 国产美女午夜福利| 国产成人免费观看mmmm| 99re6热这里在线精品视频| 亚洲国产色片| 国产一区二区在线观看av| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产亚洲精品久久久com| 最黄视频免费看| 亚洲人成网站在线观看播放| 最近手机中文字幕大全| 一区二区三区精品91| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲,一卡二卡三卡| 男女边摸边吃奶| 国产色爽女视频免费观看| 91在线精品国自产拍蜜月| 男女啪啪激烈高潮av片| 老女人水多毛片| 国产av国产精品国产| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产色爽女视频免费观看| 久久6这里有精品| 日日啪夜夜撸| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 久久99热这里只频精品6学生| 中文天堂在线官网| 极品少妇高潮喷水抽搐| 久久99热这里只频精品6学生| 一级,二级,三级黄色视频| 丝袜喷水一区| 91久久精品国产一区二区成人| 国产精品国产三级专区第一集| 精品久久久噜噜| 嫩草影院入口| 在线看a的网站| 韩国高清视频一区二区三区| 国产免费福利视频在线观看| 亚洲自偷自拍三级| 午夜视频国产福利| 18禁在线播放成人免费| av福利片在线观看| 下体分泌物呈黄色| 日本色播在线视频|