微柱凝膠抗球蛋白法、凝聚胺法與固相凝集法檢測在臨床輸血中的應(yīng)用價值

鄧志蘭，梁愛芬

（東莞康華醫(yī)院輸血科，廣東 東莞 523000）

輸血指的是血液經(jīng)靜注方式輸入到患者體內(nèi)的治療方式，主要包含紅細胞輸注、血漿輸注及血小板輸注等，能補充血容量，提升攜氧能力和血漿蛋白，改善循環(huán)和凝血功能[1]。對于各類危重疾病患者，輸血治療屬于臨床比較常用的一類急救治療技術(shù)，但不同血型抗原和抗體之間的匹配性能直接影響患者治療，因此，輸血前對患者開展血型鑒定和抗體測定是確保其輸血安全的關(guān)鍵措施，也是防止輸血后不良反應(yīng)的基礎(chǔ)條件[2]。人類的血型復(fù)雜多樣，紅細胞中的血型抗原類型較多，但通常的血型測定只是檢測ABO 及Rh 血型系統(tǒng)中D 抗原，對血小板抗體等不能開展有效測定[3]。目前臨床常見免疫抗體篩查技術(shù)包含微柱凝膠抗球蛋白法（MGCT）、凝聚胺法及固相凝集法等。據(jù)有關(guān)研究顯示[4-6]，MGCT、凝聚胺法及固相凝集法這三種方法均有著操作簡單、迅速、重復(fù)性佳、敏感度及特異度高等優(yōu)點，但有關(guān)三種方法在輸血中的應(yīng)用價值研究較少?；诖耍狙芯繉⒐滔嗄ㄓ糜谘“蹇贵w測定，將MGCT 及凝聚胺法用于交叉配血試驗，分析3 種方法在臨床輸血中的應(yīng)用價值，旨在為臨床選擇輸血期間有關(guān)檢測監(jiān)測方法提供參考依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料選取2022 年9 月至12 月在東莞康華醫(yī)院進行輸血治療的2 071 例患者。其中，男性1 189 例，女性882 例；年齡12～70 歲，平均年齡（40.35±8.62）歲。本研究經(jīng)東莞康華醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，同時患者已簽署知情同意書。納入標(biāo)準(zhǔn)：均符合輸血治療的指征。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在輸血有關(guān)禁忌證者；②血液系統(tǒng)疾病者；③存在認知障礙、重度心理或精神疾病者。

1.2 測定方法

1.2.1 血小板抗體測定 血小板輸注無效的106 例患者進行譜細胞法檢測血小板抗體，并以此結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)。固相凝集法測定其血小板抗體，具體操作步驟如下：收集空腹?fàn)顟B(tài)的血液樣本3 mL 放入抗凝試管內(nèi)，以3 000 r/min開展5 min 離心處理，后選擇上清液待測，對于未能及時測定的標(biāo)本需放在-20 ℃環(huán)境中。將血小板抗體有關(guān)篩檢細胞放在反應(yīng)孔的底部位置（選擇離心固定方法），將受血者的血清加入同時放入血小板抗體（上海血液生物醫(yī)藥有限公司，批號：蘇械注準(zhǔn)20192400533），開展離心處理，后對檢測結(jié)果進行評定。結(jié)果評定：陽性結(jié)果是紅細胞平鋪于反應(yīng)孔的底部表面或者紅細胞僅結(jié)合至部分孔底；陰性結(jié)果是紅細胞于反應(yīng)孔底部的中央位置產(chǎn)生紅細胞聚集。對于血小板抗體陽性者，需要進一步開展譜細胞檢測并以譜細胞檢測結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.2 交叉配血方法 ①MGCT。選擇按照規(guī)定保存好的Coombs 配血卡，先放入專用的離心機（長沙湘智離心機儀器有限公司，型號：TD5B）內(nèi)開展15 min 離心處理，后進行編號，在主側(cè)中加入25 μL 的受血者血清，50 μL 供血者0.8%～1.0%的紅細胞懸液，在次側(cè)中加入受血者0.8%～1.0%的紅細胞懸液及供血者血清50 μL，放入到37 ℃的孵育箱內(nèi)15 min，以1 000 r/min 離心2 min、以1 500 r/min 離心3 min，后經(jīng)肉眼方法觀察最終結(jié)果。將主側(cè)管與次側(cè)管紅細胞均勻沉到孔底評定成陰性，懸浮在微柱凝膠表面即為陽性。②凝聚胺法。于主側(cè)管加進受血者的血清2 滴及供血者的紅細胞懸液1 滴，在次側(cè)管加進獻血者的血清2 滴及受血者的紅細胞懸液1 滴。在各管內(nèi)依次加進低離子介質(zhì)液0.65 mL，充分混勻，在室溫內(nèi)進行1 min 靜置。各管中依次加進凝聚胺液2 滴，充分混勻，以3 500 r/min 進行10 s 離心處理，將上清液棄去，輕輕搖動試管，注意觀察是否存在凝集，若不存在凝集，則需重新開展操作。最后加入懸浮液2 滴加入管底，輕輕搖動，觀察試管內(nèi)凝集有無散開，若散開則代表配血結(jié)果相合，相反則代表配血結(jié)果不合。

1.3 觀察指標(biāo)①觀察固相凝集法和譜細胞檢測在血小板抗體測定中的陽性符合率，陽性符合率=固相凝集法檢測顯示為血小板抗體陽性的例數(shù)/譜細胞法檢測顯示為血小板抗體陽性的例數(shù)×100%；②通過MGCT 及凝聚胺法開展配血，觀察兩種方法交叉配血試驗不合的檢出情況，并提出相應(yīng)的解決方法。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析經(jīng)SPSS 23.0 統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料以[例(%)]表示，行χ2檢驗；計量資料以()代表，行t檢驗。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血小板抗體檢測結(jié)果血小板輸注無效的106 例患者通過譜細胞法測定血小板抗體顯示陽性30 例，陰性76例；固相凝集法結(jié)果顯示陽性29 例，陰性77 例，陽性符合率為96.67%（29/30）。

2.2 MGCT 和凝聚胺法的配血情況和解決措施2 017例受血者開展交叉配血試驗顯示64 例存在交叉配血試驗不合的情況，包含溶血性貧血13 例，受血者存在不規(guī)則抗體18 例，冷抗體陽性9 例，供血者存在不規(guī)則抗體5 例，A 亞型生成抗-A13 例，藥物抗體4 例，非特異性凝集4 例，脂血4 例，高纖維蛋白原4 例；MGCT 顯示58 例存在交叉配血試驗不合的情況，符合率為90.63%，包含溶血性貧血11 例（84.62%），受血者存在不規(guī)則抗體16 例（88.89%），冷抗體陽性8 例（88.89%），供血者存在不規(guī)則抗體4 例（80.00%），A 亞型生成抗-A13例（100.00%），藥物抗體4 例（100.00%），非特異性凝集4 例（100.00%），脂血4 例（100.00%），高纖維蛋白原4 例（100.00%）；凝聚胺法顯示50 例存在交叉配血試驗不合的情況，符合率為78.13%，包含溶血性貧血9例（69.23%），受血者存在不規(guī)則抗體15 例（83.33%），冷抗體陽性7 例（77.78%），供血者存在不規(guī)則抗體4 例（80.00%），A 亞型生成抗-A12 例（66.67%），藥物抗體4例（100.00%），非特異性凝集2 例（50.00%），脂血4 例（100.00%），高纖維蛋白原3 例（75.00%），見表1。

表1 MGCT 和凝聚胺法的配血情況和解決措施

3 討論

輸血治療屬于臨床一類重要的搶救與治療措施，正常人血量在體重中占比為7%～8%。人體的失血量≤10%時，機體內(nèi)的血液系統(tǒng)能自我恢復(fù)，當(dāng)機體的失血量＞20%時，機體的代償功能無法維持在正常血壓水平，會引起機體內(nèi)部的血液循環(huán)障礙，這時就須開展輸血治療[7-8]。輸血期間的安全性始終是臨床關(guān)注的一個熱點話題，主要目的是避免給受血者輸注不匹配的血液，進而導(dǎo)致嚴(yán)重輸血反應(yīng)[9]。

多數(shù)正?；颊吣苡^察到抗血小板抗體，血小板抗體測定多針對的是免疫性血小板減少紫癜者，對于免疫性血小板減少紫癜具備一定診斷價值，且血小板測定能防止非溶血性發(fā)熱有關(guān)輸血不良反應(yīng)[10]。固相凝集法屬于血小板抗體一項常見檢測技術(shù)，血小板懸液通過離心洗滌后能于微孔板反應(yīng)孔的底部表面產(chǎn)生血小板單層，加入適當(dāng)?shù)难簶颖具M行孵育，當(dāng)血液內(nèi)包含血小板抗體時，能和血小板單層相結(jié)合，評定呈陽性[11]。本次研究發(fā)現(xiàn)：血小板輸注無效的106 例患者通過譜細胞法測定血小板抗體顯示陽性30 例，陰性76 例；固相凝集法結(jié)果顯示陽性29 例，陰性77 例，陽性符合率為96.67%，提示固相凝集法在測定血小板抗體中的診斷準(zhǔn)確度較高。但需注意的是，固相凝集法的操作步驟比較復(fù)雜，指示細胞有效期短，通過肉眼評定結(jié)果存在局限性[12]。MGCT 及凝聚胺法屬于交叉配血試驗期間的兩種常用方法，其中MGC 是經(jīng)生物血凝膠過濾技術(shù)，于充滿凝膠微株腔內(nèi)，已經(jīng)包含抗人球抗體，后加進紅細胞及血清。若血清內(nèi)包含該紅細胞的特異抗體，則會產(chǎn)生紅細胞有關(guān)免疫復(fù)合物，在離心力的作用下，這種復(fù)合物不會經(jīng)過凝膠間隙浮在凝膠表面或者懸浮在凝膠中；若血清內(nèi)不存在特異抗體，則無法產(chǎn)生紅細胞有關(guān)免疫復(fù)合物，在離心力作用下，分散紅細胞能經(jīng)凝膠間隙沉到微株腔的尖底部[13]。凝聚胺法的配血原理為通過低離子溶液使離子強度下降，加快分子運動，使紅細胞的靜電斥力減弱，紅細胞間距縮短，加快紅細胞抗原與血清內(nèi)抗體結(jié)合產(chǎn)生非特異凝集，若附加假凝集清除液后非特異凝集散開，但抗原抗體反應(yīng)生成的特異性凝集依舊存在[14]。因此，能檢測到完全或不完全抗體。有研究認為[15]，MGCT 較凝聚胺法的靈敏度更高，且結(jié)構(gòu)更加準(zhǔn)確；血清操作較為標(biāo)準(zhǔn)化，結(jié)果平穩(wěn)，重復(fù)性佳，易掌握，對操作經(jīng)驗要求不高；自動化程度較高，標(biāo)本使用量較少，能減少操作污染。本次研究發(fā)現(xiàn)：2017 例受血者開展交叉配血試驗顯示64 例存在交叉配血試驗不合的情況，MGCT 顯示58 例存在交叉配血試驗不合的情況，符合率為90.63%；凝聚胺法顯示50 例存在交叉配血試驗不合的情況，符合率為78.13%。考慮原因是凝聚胺法在檢測期間會受到冷凝集及非特異性抗體影響，但MGCT 不會受到這些因素干擾，因此，檢測結(jié)果更為準(zhǔn)確，符合率更高。但MGCT 成本高，耗時較長，應(yīng)用到臨床有局限性。若具備條件，能將上述兩種方法聯(lián)合使用，給臨床提供出可靠度更高的診斷依據(jù)。

綜上所述，固相凝集法應(yīng)用到臨床輸血期間血小板抗體檢測中和譜細胞檢測的符合率較高，MGCT 用于交叉配血試驗較凝聚胺法效果更為理想，能更好檢出交叉配血試驗不合的情況，值得推廣應(yīng)用到臨床。但本次研究依舊存在不足的地方，如樣本均來自一家醫(yī)院，且未對各種檢查方式的準(zhǔn)確度、敏感度和特異度等指標(biāo)進行分析，獲得的結(jié)果存在局限性，這些均需在日后研究中加以補充和完善，更進一步論證上述結(jié)論，指導(dǎo)臨床實踐。