2018—2022 年四川省達(dá)州市獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測能力比對分析

李清竹，徐倚天，劉俐君，趙小波，楊 青，張 蕾，黎丁箕，李 成

（達(dá)州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川達(dá)州 635000）

為科學(xué)評估達(dá)州市獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測水平，達(dá)州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心（以下簡稱市疫控中心）于2018—2022 年期間組織轄區(qū)內(nèi)7個(gè)縣級獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室開展獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測能力比對工作。本文通過對比對結(jié)果分析，提出針對性整改措施，以期進(jìn)一步提高全市獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測水平，增強(qiáng)達(dá)州市動(dòng)物疫病監(jiān)測預(yù)警能力。

1 材料與方法

1.1 比對范圍

達(dá)州市內(nèi)轄區(qū)7 個(gè)縣級獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室，其中5個(gè)實(shí)驗(yàn)室已通過省級考核或延展考核驗(yàn)收。

1.2 比對項(xiàng)目、檢測方法、試劑來源和執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)

2018—2022 年，每年比對3～5 個(gè)檢測項(xiàng)目，共比對項(xiàng)目17 個(gè)。比對項(xiàng)目包括禽流感、口蹄疫、布魯氏菌病、非洲豬瘟的病原學(xué)或血清學(xué)檢測（詳情見表1）。涉及5 種檢測方法：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、血凝與血凝抑制試驗(yàn)（HA-HI）、熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（熒光PCR）、布魯氏菌試管凝集試驗(yàn)（SAT）、以及布魯氏菌虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBT）。

表1 2018—2022 年檢測能力比對項(xiàng)目

1.3 比對樣品和試劑

比對樣品由市疫控中心自制或試劑廠家生產(chǎn)，經(jīng)市疫控中心反復(fù)驗(yàn)證、編號(hào)、分裝，標(biāo)定樣品參考值后發(fā)放，各參考值的樣品數(shù)量不一致。每個(gè)比對項(xiàng)目設(shè)置4～6 個(gè)盲樣，各樣品外觀無差異，樣品量相同。除2022 年非洲豬瘟病毒核酸檢測、禽流感H5/H7 亞型核酸檢測2 個(gè)項(xiàng)目以外，其余比對項(xiàng)目試劑均由市疫控中心統(tǒng)一購置。

1.4 比對樣品發(fā)放方式

比對樣品由市疫控中心統(tǒng)一發(fā)放，縣級獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室派專人在限定日期內(nèi)到市疫控中心實(shí)驗(yàn)室領(lǐng)取，放入裝有冰袋的保溫箱中保存，并在12h內(nèi)送達(dá)各自實(shí)驗(yàn)室后按具體要求存放。

1.5 評判標(biāo)準(zhǔn)

1.5.1 禽流感H5、H7 亞型抗體檢測

陰、陽性對照成立，檢測結(jié)果與參考值相同或者±1 個(gè)滴度，判定為結(jié)果正確。

1.5.2 O 型口蹄疫抗體檢測

陰、陽性對照成立，陽性樣品、若弱陽性樣品檢測結(jié)果為“陽性”，陰性樣品的結(jié)果為“陰性”，判定為結(jié)果正確。

1.5.3 非洲豬瘟病毒核酸、禽流感H5/H7 亞型核酸檢測

陰、陽性對照成立，陽性樣品、若弱陽性樣品的檢測結(jié)果為“陽性”，陰性樣品的結(jié)果為“陰性”，判定為結(jié)果正確。

1.5.4 布魯氏菌抗體檢測

使用試管凝集試驗(yàn)，虎紅平板試驗(yàn)進(jìn)行檢測：陰、陽性對照成立，若陽性樣品的檢測結(jié)果為“陽性”，陰性樣品的結(jié)果為“陰性”，判定為結(jié)果正確。

1.6 比對結(jié)果報(bào)告

縣級實(shí)驗(yàn)室每年在規(guī)定時(shí)間內(nèi)獨(dú)立完成各項(xiàng)目檢測，及時(shí)向市疫控中心上報(bào)檢測結(jié)果，同時(shí)報(bào)送檢測報(bào)告及原始記錄。

2 結(jié)果分析

2.1 總體比對結(jié)果

2018—2022 年，7 個(gè)縣級獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室共檢測602 份盲樣，檢測結(jié)果正確有573 份，總體正確率為95.18%。

2.2 不同年度比對結(jié)果

2018—2022 年，各年份檢測結(jié)果準(zhǔn)確率分別為99.05%、85.71%、93.33%、95.24%、100%，呈先下降后穩(wěn)步上升趨勢。

2.3 不同實(shí)驗(yàn)室比對結(jié)果差異

2.3.1 不同年份

2018 年有6 個(gè)縣級實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果準(zhǔn)確率為100%；2019 年有2 個(gè)實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)確率為100%，但也有3 個(gè)實(shí)驗(yàn)室的準(zhǔn)確率在85%以下；2020 年不同檢測準(zhǔn)確率范圍（100%，85%～99%，85%以下）的縣級實(shí)驗(yàn)室個(gè)數(shù)分別為：3、3、1；2021年100%準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)室為5 個(gè)，但有1 個(gè)實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)確率在85%以下；2022 年7 個(gè)縣級實(shí)驗(yàn)室的檢測準(zhǔn)確率均為100%。

2.3.2 不同縣

2.3.2.1 總體情況

G 縣獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測準(zhǔn)確率最高，為98.84%；E 縣實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)確率為90.70%，最低；7 個(gè)縣級實(shí)驗(yàn)室檢測準(zhǔn)確率均達(dá)到了90%以上。

2.3.2.2 不同年份

A 縣實(shí)驗(yàn)室2018 和2022 年的檢測結(jié)果準(zhǔn)確率均為100%，2019、2020 年分別為86.67%，2021 年為94.44%；

B 縣實(shí)驗(yàn)室2019 年準(zhǔn)確率為80%，其余各年檢測結(jié)果正確率均達(dá)100%；

C 縣實(shí)驗(yàn)室2019 年檢測結(jié)果準(zhǔn)確率為86.67%，其余各年的均為100%；

D 縣實(shí)驗(yàn)室2021、2022 年檢測結(jié)果正確率均為100%，2018、2019、2020 年分別為93.33%、66.67%和93.33%；

E 縣實(shí)驗(yàn)室2019、2021 年檢測準(zhǔn)確率分別為80.00%、72.22%，其余3 年均為100%；

F 縣實(shí)驗(yàn)室除2020 年檢測結(jié)果準(zhǔn)確率為80.00%，其余4 年的均為100%；

G 縣實(shí)驗(yàn)室除2020 年檢測結(jié)果準(zhǔn)確率為93.33%，其余4 年的均為100%。

2.3.2.3 不同檢測方法

A～G 縣實(shí)驗(yàn)室ELISA 檢測結(jié)果準(zhǔn)確率在92.31%～100%；HA-HI 方法檢測結(jié)果準(zhǔn)確率在61.90%～100%，其中E 縣的為61.90%，D 縣的為76.19%，其余縣的均在90%以上；除D 縣的SAT 方法檢測結(jié)果準(zhǔn)確率為92.86%，其余縣的均為100%；熒光PCR 方法A、D、F、G 縣檢測結(jié)果準(zhǔn)確率均為95.24%，B、C、E 縣的為100%；A～G 縣RBT 方法的準(zhǔn)確率均為100%（圖1）。

圖1 不同縣級實(shí)驗(yàn)室不同檢測方法檢測準(zhǔn)確率

2.4 不同檢測項(xiàng)目比對結(jié)果差異

項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)室符合率在28.57%～100%，2019年禽流感H7 亞型抗體檢測項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)室符合率最低，僅為28.57%，2020 年非洲豬瘟病毒核酸檢測項(xiàng)目的為42.86%，其余各項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)室符合率均在85%以上。各項(xiàng)目檢測結(jié)果準(zhǔn)確率在62.86%～100%，除2019 年的禽流感H7 亞型抗體檢測項(xiàng)目的檢測結(jié)果準(zhǔn)確率為62.86%，其余各項(xiàng)目的均在85%以上。

2.5 不同檢測方法比對結(jié)果差異

在2018—2022 年，ELISA、HA-HI、熒 光PCR、SAT 和RBT 的總體檢測結(jié)果正確率分別為97.80%、86.39%、97.28%、98.98%、100%（表2）。從各年份的檢測結(jié)果來看，除2019 年HA-HI 檢測準(zhǔn)確率為62.86%，其余各年份各方法比對結(jié)果準(zhǔn)確率均在85%以上。

表2 不同檢測方法檢測正確率統(tǒng)計(jì) 單位：%

3 討論

達(dá)州市獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測能力比對項(xiàng)目設(shè)置上，充分考慮了當(dāng)?shù)貙?shí)際情況，針對各階段的重點(diǎn)防控病種，結(jié)合縣級獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)設(shè)施等條件，盡可能覆蓋實(shí)驗(yàn)室檢測工作常用的ELISA、HA-HI、熒光PCR 等多種檢測方法。

3.1 總體水平

2018—2022 年總體準(zhǔn)確率為95.18%，總體檢測水平高，能滿足非洲豬瘟、禽流感、口蹄疫等主要?jiǎng)游镆卟z測需要[1]，說明縣級獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室能夠?yàn)檫_(dá)州市動(dòng)物疫病監(jiān)測預(yù)警乃至疫病防控體系提供堅(jiān)實(shí)的技術(shù)支撐。除2019 年準(zhǔn)確率為85.71%，其余年份準(zhǔn)確率均在93.33%及以上，表明達(dá)州市獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室整體檢測能力水平高但略微不穩(wěn)定。

3.2 不同實(shí)驗(yàn)室檢測水平差異

各縣級實(shí)驗(yàn)室檢測能力不同，部分實(shí)驗(yàn)室的檢測準(zhǔn)確率較低。從檢測能力與穩(wěn)定性來看，A、B、C、G、F 縣檢測水平高且穩(wěn)定，D、E 縣檢測能力稍弱且波動(dòng)起伏大，可能與D、E 縣的實(shí)驗(yàn)室財(cái)政資金不足，個(gè)別檢測項(xiàng)目技術(shù)不熟練有關(guān)。總體而言，縣級實(shí)驗(yàn)室能較好掌握常用的5種檢測方法，但個(gè)別縣的個(gè)別檢測方法檢測能力不足，如E 縣對HA-HI 方法掌握程度較低。

3.3 不同檢測項(xiàng)目差異

2019 年禽流感H7 亞型抗體檢測項(xiàng)目（HAHI 方法）和2020 年非洲豬瘟病毒核酸檢測項(xiàng)目（熒光PCR 方法）實(shí)驗(yàn)室符合率或檢測準(zhǔn)確率偏低?？赡苁荋A-HI 法受器材、稀釋液、抗原、待檢血清、紅細(xì)胞、人員操作等因素影響，試驗(yàn)結(jié)果易出現(xiàn)偏差[2]；2020 年各縣級實(shí)驗(yàn)室初步具備熒光PCR 檢測能力，首次進(jìn)行該項(xiàng)目比對，實(shí)際操作經(jīng)驗(yàn)不足，技術(shù)不熟練。且熒光PCR 從樣品處理、核酸提取、擴(kuò)增到結(jié)果判定，步驟復(fù)雜，對操作人員技術(shù)要求較高，可能造成結(jié)果差別較大[3]。

3.4 不同檢測方法差異

HA-HI 法準(zhǔn)確率僅有86.39%，其余4 種檢測方法準(zhǔn)確率均在97.28%以上，說明縣級實(shí)驗(yàn)室能熟練掌握RBT、SAT、ELISA、熒光PCR 4 種方法，但HA-HI 方法是檢測薄弱點(diǎn)，需強(qiáng)化培訓(xùn)指導(dǎo)與實(shí)際操作。出現(xiàn)上述結(jié)果可能與各檢測方法的特點(diǎn)有關(guān)，RBT 是實(shí)驗(yàn)室日常監(jiān)測布魯氏菌病、基層大量初篩的最常見方法[4]，其特點(diǎn)是操作簡便、省時(shí)省力；SAT 是布病抗體檢測的復(fù)核方法，準(zhǔn)確率高，特異性強(qiáng)，但耗時(shí)長[5]；ELISA是獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室最常用的血清學(xué)檢測方法，通常采用商品化試劑且結(jié)果判定使用儀器讀數(shù)[6]，操作簡便，準(zhǔn)確率高。相對而言，HA-HI 法和熒光PCR法的操作相對復(fù)雜，對操作人員技術(shù)要求較高。

3.5 檢測報(bào)告、原始記錄存在的問題

各縣獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室遞交的檢測報(bào)告、原始記錄都存在一些問題，主要包括：①檢測原始記錄不完善，部分記錄出現(xiàn)原始記錄填寫不詳盡、不規(guī)范、不完整、不清晰等現(xiàn)象；②檢測報(bào)告不規(guī)范，存在蓋章不全、三級審核簽字不齊、檢測信息填寫不當(dāng)?shù)惹闆r[7]。這些問題的出現(xiàn)與工作人員的職業(yè)素養(yǎng)相關(guān)，部分問題可能會(huì)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成一定的影響。

4 小結(jié)

在2018—2022 年達(dá)州市獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測能力比對中，各縣級獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室均展現(xiàn)出了較高的檢測能力，但部分實(shí)驗(yàn)室存在著檢測水平不穩(wěn)定的問題、對個(gè)別檢測方法能力不足、也存在著檢測報(bào)告不規(guī)范、原始記錄不完善等問題?？h級獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)以比對試驗(yàn)為契機(jī)，針對出現(xiàn)的問題進(jìn)行整改，提升自身檢測能力?？梢酝ㄒ韵滦┕ぷ魈岣邫z測能力：認(rèn)真總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，深入查找不足，解決存在問題；積極爭取資金，升級檢測設(shè)施；深化實(shí)驗(yàn)室建設(shè)，培養(yǎng)檢測人才；加強(qiáng)人員培訓(xùn)考核，重視檢測質(zhì)量。從而進(jìn)一步提高全市獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測水平，增強(qiáng)達(dá)州市動(dòng)物疫病監(jiān)測預(yù)警能力。