發(fā)酵棉籽粕替代豆粕對中華絨螯蟹幼蟹生長性能、免疫功能、抗氧化能力和腸道健康的影響

龐 棟 戚常樂 葉金云

(湖州師范學院生命科學學院,水生動物繁殖與營養(yǎng)國家地方聯(lián)合工程實驗室,浙江省水生生物資源養(yǎng)護與開發(fā)技術研究重點實驗室,湖州 313000)

豆粕是我國養(yǎng)殖水產(chǎn)動物飼料中最主要的植物蛋白質源,但我國大豆自給率長期不超過20%,嚴重依賴進口[1]。自中美貿易沖突以來,豆粕貿易多次被當作談判籌碼,導致豆粕價格不定,供應不穩(wěn),給我國水產(chǎn)動物飼料產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展造成嚴重影響。因此,水產(chǎn)動物飼料產(chǎn)業(yè)亟需開發(fā)能夠替代豆粕的新型植物蛋白質源。

我國是世界第一產(chǎn)棉大國,棉籽粕供應穩(wěn)定,價格相對低廉,可作為豆粕的潛在替代蛋白質源。但棉籽粕中含有較多的抗營養(yǎng)因子,如棉酚、植酸、單寧等,會造成水產(chǎn)動物抗氧化能力、免疫功能下降[2],肝臟、腸道、肌肉等組織器官受到損傷[3],飼料的適口性也會下降[4-5]。發(fā)酵棉籽粕(fermented cottonseed meal,FCM)是使用發(fā)酵技術發(fā)酵脫毒后的棉籽粕,其抗營養(yǎng)因子含量大幅度降低,營養(yǎng)成分含量和適口性增加,更具應用前景[6-7]。一些學者已經(jīng)在青魚(Mylopharyngodonpiceus)[8]、草魚(Ctenopharyngodonidella)[9]、鯽(Carassiusauratus)[10]、凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)[11]等水產(chǎn)養(yǎng)殖對象上進行了發(fā)酵棉籽粕替代的應用研究,但有關發(fā)酵棉籽粕替代豆粕在中華絨螯蟹(Eriocheirsinensis)飼料中的應用鮮有報道。中華絨螯蟹屬弓蟹科,絨螯蟹屬,又名河蟹、大閘蟹,是中國傳統(tǒng)美食珍品,2019年全國年產(chǎn)量超過77萬t[12]。植物蛋白質源對水產(chǎn)動物的生長性能、免疫功能、抗氧化能力和腸道菌群結構會造成影響[13-15]。基于此,本試驗以發(fā)酵棉籽粕替代飼料中不同比例的豆粕,研究其對中華絨螯蟹幼蟹生長性能、血淋巴生化指標、肝胰腺抗氧化指標、腸道組織結構與菌群的影響,以期為發(fā)酵棉籽粕在中華絨螯蟹配合飼料中的應用提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗飼料

以魚粉、豆粕、棉籽粕、發(fā)酵棉籽粕、菜籽粕為蛋白質源,魚油、豆油、大豆卵磷脂為脂肪源,糊化淀粉為糖源,配制5種等氮等脂的試驗飼料。5種試驗飼料中發(fā)酵棉籽粕替代豆粕的比例分別為0(FCM0,作為對照)、20%(FCM20)、40%(FCM40)、60%(FCM60)和80%(FCM80)。試驗飼料組成及營養(yǎng)水平見表1。飼料原料經(jīng)粉碎機粉碎,過60目篩,按照飼料配方稱重混勻,加水混合攪拌至適當濕度后,用雙螺桿壓條機壓制、粉碎,制成粒徑為1.5 mm的顆粒飼料,至烘箱40 ℃烘12～24 h,直至水分含量小于10%,保存于-20 ℃冰柜中備用。

表1 試驗飼料組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)

續(xù)表1項目 Items試驗飼料 Experimental dietsFCM0FCM20FCM40FCM60FCM80粗灰分 Ash6.886.846.816.756.76游離棉酚 Free gossypol/(mg/kg)144.00175.03206.05238.80270.69

1.2 飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖試驗在湖州師范學院水生生物養(yǎng)殖實驗中心內進行,中華絨螯蟹苗購于上海崇明某苗種廠。正式養(yǎng)殖試驗前,所購中華絨螯蟹苗先在300 L水桶中暫養(yǎng)7 d,暫養(yǎng)期間投喂商業(yè)配合飼料。將附肢完整的中華絨螯幼蟹[(0.38±0.01) g]隨機分配到20個水桶中,每桶30只,每5桶為1組,共分成5組,分別飼喂1種試驗飼料,飼喂期為8周。每個水桶中放置5捆藍色聚氯乙烯(PVC)軟管(長10 cm,直徑2.5 cm,每捆5根,用扎帶固定)和4塊拱形瓦片作為遮蔽物,以減少幼蟹間相互殘殺。飼養(yǎng)前加水至水桶4/5高處,充分曝氣。養(yǎng)殖期間初始投喂量為每桶幼蟹總重的4%,每日在06:00和18:00投喂,每次投喂量相同。投喂5 h后吸除糞便和殘餌,每天更換1/3的養(yǎng)殖用水。在養(yǎng)殖期間,每天檢查死蟹情況并稱重記錄。養(yǎng)殖水溫25.0～28.0 ℃,氨氮濃度<0.05 mg/L。

1.3 樣品采集

在為期8周的養(yǎng)殖試驗結束時,饑餓24 h,然后分別對每桶幼蟹進行計數(shù)和稱重。所有幼蟹均在冰上麻醉。每桶隨機取2只幼蟹保存于-20 ℃,用于體成分分析。每桶隨機取8只幼蟹,在幼蟹的第3附肢基部處取血淋巴,總共吸取約3 mL血淋巴,4 ℃保存過夜,經(jīng)高速冷凍離心機4 000 r/min離心后吸出血清,-20 ℃保存?zhèn)溆?取出肝胰腺,稱重后-80 ℃保存用于備用。每桶另隨機取5只幼蟹,取出腸道,保存在4%多聚甲醛溶液中,用于切片制作和組織學觀察。每組隨機取5只幼蟹,取出腸道,保存在-80 ℃用于腸道菌群測序。

1.4 指標測定

1.4.1 生長性能指標計算

使用如下公式計算成活率(SR)、增重率(WGR)、特定生長率(SGR)和肝胰腺指數(shù)(HSI):

成活率(%)=100×(終末蟹數(shù)/初始蟹數(shù));
增重率(%)=100×(終末體重-
初始體重)/初始體重;
特定生長率(%/d)=100×(ln終末體重-
ln初始體重)/養(yǎng)殖天數(shù);
肝胰腺指數(shù)(%)=100×(肝胰腺重/蟹體重)。

1.4.2 飼料和全蟹營養(yǎng)成分分析

飼料和全蟹的水分含量采用105 ℃干燥法測定,粗蛋白質含量采用燃燒法(杜馬斯定氮儀)測定,粗脂肪含量采用索氏抽提法測定,粗灰分含量采用馬弗爐灼燒法測定,游離棉酚含量參照GB/T 13086—2020測定。

1.4.3 血淋巴生化指標和肝胰腺抗氧化指標測定

稱量肝胰腺樣品0.1 g左右,按1∶9的比例加入預冷的磷酸鹽緩沖液(PBS),加入組織研磨珠2粒進行勻漿,然后在4 ℃下1 500×g離心30 min,吸取上清液,并等分保存在-80 ℃超低溫冰箱中。使用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒,根據(jù)試劑盒說明書的方法測定血淋巴中酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)、谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)活性以及肝胰腺中還原性谷胱甘肽(GSH)含量、總抗氧化能力(T-AOC)及谷胱甘肽過氧化物氧化酶(GSH-Px)、過氧化氫酶(CAT)、過氧化氫酶(CAT)、總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性。

1.4.4 腸道組織結構觀察

將使用4%多聚甲醛固定的腸道組織送至武漢塞維爾生物科技有限公司進行石蠟包埋,制作切片。腸道組織切片采用蘇木精-伊紅(HE)染色后進行組織結構觀察并拍照。

1.4.5 腸道菌群分析

將采集的腸道樣本(每組5個重復)送至杭州聯(lián)川生物技術股份有限公司進行腸道菌群DNA提取、建庫和16S rDNA測序分析。進行物種注釋分析的數(shù)據(jù)庫為SILVA。鑒定結果已上傳至NCBI,SRA登錄號:SRX19302757-SRX19302766。

1.5 統(tǒng)計分析

所有數(shù)據(jù)均使用SPSS 25.0軟件進行統(tǒng)計分析。數(shù)據(jù)通過Shapiro-Wilk和Levene方法進行正態(tài)分布檢驗和方差同質性檢驗。通過檢驗后的數(shù)據(jù)再進行單因素方差分析(one-way ANOVA)。所有數(shù)據(jù)均以平均值±標準誤(mean±SD)表示,各組平均值之間的差異顯著性采用Turkey法檢驗。腸道菌群數(shù)據(jù)使用成對樣品t檢驗(t-test)方法進行分析。統(tǒng)計學顯著差異用P<0.05表示。

2 結果與分析

2.1 發(fā)酵棉籽粕替代豆粕對中華絨螯蟹幼蟹生長性能的影響

由表2可知,在中華絨螯蟹幼蟹飼料中使用發(fā)酵棉籽粕替代不同比例豆粕,各組幼蟹的終末體重、特定生長率、增重率以及成活率均無顯著差異(P>0.05)。隨著替代比例的增加,肝胰腺指數(shù)呈先上升后下降的趨勢,以FCM40組的肝胰腺指數(shù)最高,顯著高于FCM0和FCM80組(P<0.05)。

表2 發(fā)酵棉籽粕替代豆粕對中華絨螯蟹幼蟹生長性能的影響

2.2 發(fā)酵棉籽粕替代豆粕對中華絨螯蟹幼蟹體成分的影響

由表3可知,在中華絨螯蟹幼蟹飼料中使用發(fā)酵棉籽粕替代不同比例豆粕對全蟹水分、粗脂肪和粗蛋白質含量均無顯著影響(P>0.05)。FCM20、FCM40和FCM80組全蟹粗灰分含量顯著低于FCM0和FCM60組(P<0.05)。

表3 發(fā)酵棉籽粕替代豆粕對中華絨螯蟹幼蟹體成分的影響(鮮重基礎)

2.3 發(fā)酵棉籽粕替代豆粕對中華絨螯蟹幼蟹血淋巴生化指標的影響

由表4可知,隨著替代比例的增加,血淋巴ACP和AKP活性呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢,且以FCM60組最高,顯著高于其他各組(P<0.05)。FCM60組血淋巴ALT活性顯著低于其他各組(P<0.05)。隨著替代比例的增加,血淋巴中AST活性呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢,且以FCM40組最低,顯著低于其他各組(P<0.05)。

表4 發(fā)酵棉籽粕替代豆粕對中華絨螯蟹幼蟹血淋巴生化指標的影響

2.4 發(fā)酵棉籽粕替代豆粕對中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺抗氧化指標的影響

由表5可知,FCM40組肝胰腺CAT活性顯著高于FCM0組(P<0.05),FCM60和FCM80組則顯著低于FCM0組(P<0.05)。與FCM0組相比,各替代組(FCM20、FCM40、FCM60和FCM80組)肝胰腺T-SOD活性顯著降低(P<0.05),但在5個替代組中以FCM40組最高。FCM60和FCM80組肝胰腺T-AOC與FCM0組相比顯著升高(P<0.05)。各替代組肝胰腺中GSH含量與FCM0組相比均顯著升高(P<0.05)。與FCM0組相比,FCM20、FCM40和FCM80組肝胰腺GSH-Px活性顯著降低(P<0.05)。

表5 發(fā)酵棉籽粕替代豆粕對中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺抗氧化指標的影響

2.5 發(fā)酵棉籽粕替代豆粕對中華絨螯蟹幼蟹腸道組織結構的影響

根據(jù)生長性能和肝臟抗氧化指標檢測結果,選取FCM0、FCM40和FCM80組進行腸道組織結構觀察。由圖1可知,FCM0組腸絨毛前部圍食膜與上皮細胞結合,未見明顯脫落情況,上皮細胞排列緊密,未見明顯損傷;FCM40組未見圍食膜與上皮細胞脫落,個別腸絨毛可見上皮細胞缺損;FCM80組圍食膜與上皮細胞脫落,上皮細胞可見明顯缺損。

2.6 發(fā)酵棉籽粕替代豆粕對中華絨螯蟹幼蟹腸道菌群的影響

基于生長性能、肝胰腺抗氧化指標及腸道組織學結果,選取FCM0和FCM40組進行腸道菌群分析。根據(jù)加權Unifrac距離,使用主坐標分析(PCoA)圖顯示FCM0和FCM40組中華絨螯蟹幼蟹腸道菌群的差異。由圖2可知,代表2個組樣本的色點區(qū)域重合,這表明從主坐標分析來看FCM0和FCM40組的腸道菌群組成無顯著差異。

A:FCM0組;B:FCM40組;C:FCM80組。切片觀察放大倍數(shù)為100×,比例尺長度為100 μm。箭頭a顯示圍食膜從腸道上皮細胞表面脫落;箭頭b顯示腸道上皮細胞損傷。

由表6可知,FCM0和FCM40組的腸道菌群覆蓋率(Goods coverage)都在99.99%以上,說明這2個組的腸道物種均已檢測到。2組間腸道菌群操作分類單元(OTUs)數(shù)量無顯著差異(P>0.05)。pielou_e指數(shù)和Chao1指數(shù)表現(xiàn)為FCM40組大于FCM0組,表明FCM40組腸道菌群均勻度更大,包含的物種數(shù)更多。Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)表現(xiàn)為FCM40組大于FCM0組。但2組間的上述各項指數(shù)均無顯著差異(P>0.05)。上述結果說明FCM40組中華絨螯蟹幼蟹腸道菌群的α多樣性與FCM40組無顯著差異。

圖2 FCM0和FCM40組中華絨螯蟹幼蟹腸道菌群主坐標分析圖

圖3為FCM0和FCM40組中華絨螯蟹幼蟹腸道菌群門水平組成,對FCM0和FCM40幼蟹腸道主要菌群的相對豐度進行統(tǒng)計分析,結果列于表7。在門水平下,中華絨螯蟹幼蟹腸道菌群中相對豐度排在前面的3個門分別是變形菌門、厚壁菌門和擬桿菌門,它們是中華絨螯蟹幼蟹腸道內的核心菌群。FCM0和FCM40組變形菌門相對豐度分別為47.28%、43.77%,厚壁菌門相對豐度分別為31.74%和32.82%,擬桿菌門相對豐度分別為17.80%和11.61%,2組間均不存在顯著差異(P>0.05);FCM0和FCM40組放線菌門相對豐度分別為1.13%和4.17%,浮霉菌門相對豐度分別為0.97%和2.96%,均以FCM40組相對豐度更高,但2組間差異均不顯著(P>0.05);FCM0和FCM40組藍藻門相對豐度分別為0.05%和1.92%,FCM40組顯著高于FCM0組(P<0.05);FCM0和FCM40組髕骨細菌門相對豐度分別為0.15%和1.08%,FCM40組相對豐度更高,但2組間差異不顯著(P>0.05)。在屬水平下,中華絨螯蟹幼蟹腸道菌群主要為ZOR0006(屬于厚壁菌門,無屬名)、Candidatus_Bacilloplasma、營發(fā)酵單細胞屬、希瓦氏菌屬、氣單胞菌屬、芽孢桿菌屬、不動桿菌屬和α-變形菌綱未分類屬,這些菌屬在FCM0和FCM40組間均無顯著差異(P>0.05)。

表6 發(fā)酵棉籽粕替代豆粕對中華絨螯蟹幼蟹腸道菌群α多樣性的影響

Proteobacteria:變形菌門;Firmicutes:厚壁菌門;Bacteroidota:擬桿菌門;Actinobacteriota:放線菌門;Planctomycetota:浮霉菌門;Cyanobacteria:藍藻門; Patescibacteria:髕骨細菌門;Verrucomicrobiota:疣微菌門;Bdellovibrionota:蛭弧菌門;Desulfobacterota:脫硫桿菌門;Myxococcota:黏菌門;Campylobacterota:彎曲菌門;Chloroflexi:綠彎菌門;Acidobacteriota:酸桿菌門;Deferribacterota:鐵脫桿菌門;Armatimonadota:裝甲菌門;Nitrospirota:硝化螺旋菌門;Gemmatimonadota:芽單胞菌門;Deinococcota:異常球菌門;Fusobacteriota:梭桿菌門;Chlamydiae:衣原體門;Unclassified:未分類。

表7 FCM0和FCM40中華絨螯蟹幼蟹腸道主要菌群的相對豐度

續(xù)表7分類水平Taxonomic levels主要菌群Main flora組別 GroupsFCM0FCM40ZOR00069.39±12.0719.19±17.90Candidatus_Bacilloplasma13.42±19.547.76±7.05營發(fā)酵單胞菌屬 Dysgonomonas13.80±15.567.29±12.92希瓦氏菌屬 Shewanella3.45±5.1710.49±12.95屬 Genus氣單胞菌屬 Aeromonas8.62±11.794.24±7.93芽孢桿菌屬 Gemmobacter1.06±0.638.37±13.59不動桿菌屬 Acinetobacter6.96±11.551.27±2.25α變形菌綱未分類屬 Alphaproteobacteria_unclassified4.46±4.383.44±4.28

3 討 論

3.1 發(fā)酵棉籽粕替代豆粕對中華絨螯蟹幼蟹生長性能和體成分的影響

生長性能是評價飼料或飼料原料對水產(chǎn)養(yǎng)殖動物影響的重要指標。飼料中添加過量的植物蛋白質源會對水產(chǎn)動物的生長造成負面的影響。例如,楊霞等[16]研究發(fā)現(xiàn),飼料中發(fā)酵棉籽粕添加量超過24%時會降低中華絨螯蟹的生長性能和成活率;Sun等[17]的研究指出,使用發(fā)酵棉籽粕替代75%的魚粉會顯著降低凡納濱對蝦的生長性能;Sun等[18]研究顯示,在黑鯛飼料使用24%的發(fā)酵棉籽粕替代魚粉會降低黑鯛的生長性能和飼料轉化率。飼料中不同的植物蛋白質源會影響水產(chǎn)動物的生長性能,但受養(yǎng)殖物種以及替代比例等諸多因素的影響。陳道仁等[9]使用23%的發(fā)酵棉籽粕替代9%的豆粕和全部棉籽粕后發(fā)現(xiàn),草魚的增重率顯著提升,飼料系數(shù)顯著下降。楊景豐等[19]的研究指出,在飼料中使用發(fā)酵豆粕替代魚粉,羅氏沼蝦的生長性能隨著替代比例的升高總體呈先升高再下降的趨勢。本研究結果顯示,飼料中使用發(fā)酵棉籽粕替代不同比例豆粕對中華絨螯蟹幼蟹的生長性能未產(chǎn)生顯著影響,但以發(fā)酵棉籽粕替代20%的豆粕(FCM20組)中華絨螯蟹幼蟹的特定生長率、增重率最高。

不同的植物蛋白質源對甲殼動物體成分也有一定影響。Han等[11]研究表明,在低魚粉飼料中使用發(fā)酵棉籽粕部分替代豆粕,凡納濱對蝦的粗脂肪含量顯著下降,其粗蛋白質含量隨著替代比例的增加呈先上升后下降的趨勢。楊霞等[16]研究發(fā)現(xiàn),飼料中使用棉籽粕和發(fā)酵棉籽粕替代魚粉均未對中華絨螯蟹的體成分產(chǎn)生顯著影響。本研究中,發(fā)酵棉籽粕替代豆粕對中華絨螯蟹幼蟹的粗蛋白質、粗脂肪和水分含量均未產(chǎn)生顯著影響,粗灰分含量隨著替代比例的升高呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢。粗灰分含量變化可能與蟹體內微量元素和無機鹽含量有關[20],此結果也與Han等[11]在凡納濱對蝦飼料中使用發(fā)酵棉籽粕替代豆粕的試驗結果相似。

3.2 發(fā)酵棉籽粕替代豆粕對中華絨螯蟹幼蟹血淋巴生化指標的影響

蝦蟹類不具有特異性免疫球蛋白,體液免疫是其重要的免疫方式[21]。ACP和AKP是中華絨螯蟹體內重要的非特異性免疫因子[22]。ALT和AST是肝細胞損傷的標志物[23]。本試驗中,使用發(fā)酵棉籽粕替代不同比例豆粕后,血淋巴中ACP和AKP活性隨替代比例的增加呈先上升后下降趨勢,并在FCM60組達到最大值,這表明飼料中添加發(fā)酵棉籽粕可使幼蟹血淋巴中體液免疫物質ACP和AKP的活性升高;血淋巴中ALT和AST活性則隨替代比例的增加呈下降趨勢,這與Cheng等[24]在中華絨螯蟹飼料中添加棉籽粕蛋白水解物所得試驗結果相似,表明本試驗設定的發(fā)酵棉籽粕替代豆粕比例會對中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺造成影響。

3.3 發(fā)酵棉籽粕替代豆粕對中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺抗氧化指標的影響

3.4 發(fā)酵棉籽粕替代豆粕對中華絨螯蟹幼蟹腸道組織結構的影響

圍食膜是附于中華絨螯蟹消化道內的多功能薄膜,主要由幾丁質和蛋白質構成,具有選擇透過性,可以將腸上皮細胞和內容物分開,其還是腸道菌群的主要共生場所[31]。本試驗中,發(fā)酵棉籽粕替代40%的豆粕時,個別腸絨毛上皮細胞可見損傷;發(fā)酵棉籽粕替代80%的豆粕時,腸道圍食膜出現(xiàn)明顯的脫落,腸道上皮細胞出現(xiàn)明顯損傷。植物蛋白質源對腸道造成損傷的原因主要是植物蛋白質源中通常包含多種抗營養(yǎng)因子[32],其中單寧可與圍食膜中的蛋白質結合,植酸可以改變腸道內pH導致幾丁質溶解。Han等[33]的研究也指出飼料中的植物抗原蛋白會造成幼蟹腸道出現(xiàn)類似損傷。

3.5 發(fā)酵棉籽粕替代豆粕對中華絨螯蟹幼蟹腸道菌群的影響

腸道菌群在中華絨螯蟹營養(yǎng)吸收過程中起重要作用,腸道菌群中的芽孢桿菌可以促進多糖和纖維素分解,提高飼料利用率[34]。因此,本試驗探究了發(fā)酵棉籽粕替代豆粕對幼蟹腸道菌群的影響,試驗結果表明,FCM0和FCM40組中華絨螯蟹幼蟹腸道菌群的均勻度(pielou_e指數(shù))、豐富度(Chao1指數(shù))和多樣性(Shannon指數(shù)、Simpson指數(shù))均無顯著差異。此外,測序結果顯示,這2個組腸道菌群在門水平上變形菌門、厚壁菌門和擬桿菌門的相對豐度分別為47.28%和43.77%、31.74%和32.82、17.80%和11.61%,變形菌門是絕對優(yōu)勢菌群,其次是厚壁菌門和擬桿菌門;FCM0和FCM40組藍藻門的相對豐度均較低,分別為0.05%和1.92%,但FCM40組的相對豐度顯著高于FCM0組。變形菌門是細菌中最大的一門。有研究指出,變形菌門相對豐度的增加可以改善魚體的健康狀況[35]。在屬水平上,FCM0和FCM40組腸道主要菌群的相對豐度均無顯著差異,其中主要益生菌是芽孢桿菌屬,FCM40組的相對豐度高于FCM0組。ZOR0006屬于厚壁菌門,尚無屬名,其相對豐度在FCM40組要高于FCM0組。陸宏達等[36]的研究發(fā)現(xiàn),較低品質的池塘養(yǎng)殖中華絨螯蟹腸道菌群中,ZOR0006的相對豐度較高,但并未說明該菌對華絨螯蟹生長及免疫和抗氧化性能的影響。

4 結 論

本試驗條件下,發(fā)酵棉籽粕替代20%的豆粕可提高中華絨螯蟹幼蟹的生長性能,但未達到顯著水平;發(fā)酵棉籽粕替代80%的豆粕顯著提升了中華絨螯蟹幼蟹的肝胰腺抗氧化能力;發(fā)酵棉籽粕替代40%的豆粕不會改變中華絨螯蟹幼蟹腸道主要菌群結構。因此,以生長性能作為評價指標,建議發(fā)酵棉籽粕替代豆粕的比例為20%;以肝胰腺和腸道健康為評價指標,發(fā)酵棉籽粕替代豆粕比例不宜超過40%。