BAG.1蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及與患者預(yù)后關(guān)系的研究

李元明，郝 娟，伊斯拉木江?吐爾遜，陳家驊

（1.新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830063；2.新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830000）

當(dāng)前全球發(fā)病率、致死率最高的惡性腫瘤即肺癌，且近年來其發(fā)病率呈現(xiàn)明顯的上升趨勢。約有80%的肺癌為非小細(xì)胞肺癌。目前，多學(xué)科聯(lián)合治療已取得長足進(jìn)展，但非小細(xì)胞肺癌患者的5 年生存率僅為15% 左右。肺癌發(fā)生的主要原因?yàn)榧?xì)胞凋亡[1]，但非小細(xì)胞肺癌的整體發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，涉及多種基因、蛋白。研究表明，BAG.1 作為一種多功能的蛋白，能夠與多種基因及蛋白進(jìn)行相互作用，調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖。在正常組織中，BAG.1 蛋白一般不表達(dá)或呈弱表達(dá)，同時(shí)其表達(dá)情況在不同種類惡性腫瘤中也不盡相同。在一些惡性腫瘤中，BAG.1 蛋白陽性表達(dá)的意義及與患者預(yù)后的關(guān)系尚未完全明確。當(dāng)前，關(guān)于BAG.1蛋白在惡性腫瘤中陽性表達(dá)的意義已成為臨床研究的熱點(diǎn)。本文就BAG.1 蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及與患者預(yù)后的關(guān)系進(jìn)行探討分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016 年1 月至2018 年1 月我院胸外科收治的非小細(xì)胞肺癌患者共計(jì)100 例作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合非小細(xì)胞肺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)；接受外科手術(shù)及術(shù)后病理學(xué)檢查；自愿參與本研究。在這些患者中，有男性60 例，女性40 例，年齡范圍30 ～78 歲，平均年齡（56.20±1.24）歲；病理類型：腺癌50 例（其中TNM 分期為Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期的患者分別有23 例、16 例、11 例），鱗狀細(xì)胞癌50 例（其中TNM 分期為Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期的患者分別有12 例、11 例、27 例）。

1.2 方法

術(shù)后采用免疫組化二步法對組織切片進(jìn)行檢測，觀察檢測結(jié)果，并對BAG.1 蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及與患者預(yù)后的關(guān)系進(jìn)行分析。免疫組化試劑：免疫抗人BAG.1 多克隆抗體（SC.939 工作濃度）、即用型PV 二步法免疫組化試劑盒、檸檬酸抗原修復(fù)液。免疫組化染色方法：采用免疫組化二步法，對染色體進(jìn)行處理，在處理過程中，將已知的BAG.1 蛋白為陽性對照，以PBS 代謝一抗為陰性對照，檢測過程中嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。術(shù)后通過電話隨訪、門診隨訪等方式了解患者術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等情況，并明確其總生存期、中位生存期等。本研究的中位隨訪時(shí)間為60 個月左右，門診隨訪時(shí)需對患者進(jìn)行胸部CT 檢查，完善隨訪資料。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）觀察100 例非小細(xì)胞肺癌患者BAG.1 蛋白的表達(dá)情況。（2）分析BAG.1 蛋白與非小細(xì)胞肺癌中患者預(yù)后的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以% 表示，用χ2 檢驗(yàn)，計(jì)量資料以均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，用t 檢驗(yàn)，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 BAG.1 蛋白的表達(dá)情況

對BAG.1 蛋白在100 例非小細(xì)胞肺癌患者中的表達(dá)情況進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)其中BAG.1 蛋白（+）患者有63 例，占63.00%，BAG.1 蛋白（.）患者有37 例，占37.00%。對BAG.1 蛋白的表達(dá)、組織學(xué)分級等情況進(jìn)行分析表明，組織學(xué)分級越高者BAG.1 蛋白的陽性表達(dá)率越低（P ＜0.05），而BAG.1 蛋白的陽性表達(dá)率與患者的性別、年齡、病理類型及TNM 分期等無明顯相關(guān)性（P ＞0.05）。詳見表1。進(jìn)一步分析表明，BAG.1 蛋白在胞漿中陽性率越高，患者的死亡率越低，生存時(shí)間越長。

表1 BAG.1 蛋白陽性及陰性患者一般情況及腫瘤病理特征的對比分析[例（%）]

2.2 BAG.1 蛋白與非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后關(guān)系的分析

通過對相關(guān)因素與非小細(xì)胞肺癌中患者預(yù)后的關(guān)系進(jìn)行分析表明，BAG.1 蛋白、TNM 分期及組織學(xué)分級均是影響患者預(yù)后的獨(dú)立因素，P=0.023、0.015、0.023。詳見表2。

表2 BAG.1 蛋白與非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后關(guān)系的分析

3 討論

肺癌是一種常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率和致死均較高。研究表明，肺癌的發(fā)生、發(fā)展具有遺傳學(xué)基礎(chǔ)，是癌基因激活、抑癌基因失活及微衛(wèi)星不穩(wěn)定性等多因素、多步驟參與的過程。近年來，隨著細(xì)胞凋亡(apoptosis) 概念的確立，人們對腫瘤發(fā)生發(fā)展有了新認(rèn)識，認(rèn)為細(xì)胞凋亡的缺陷或受阻是腫瘤發(fā)生發(fā)展的一個重要的因素。在其中找到對腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中有幫助的特異性高、敏感性高的基因，有助于腫瘤的早期診斷、判斷預(yù)后及個體化治療。

相關(guān)研究表明，80% 的肺癌為非小細(xì)胞肺癌[1]。針對非小細(xì)胞肺癌，臨床最常用的治療方法是手術(shù)切除病灶，對改善患者的預(yù)后具有積極的意義。但晚期非小細(xì)胞肺癌患者則不能采取手術(shù)治療，只能進(jìn)行化療、放療及免疫治療等保守治療[2]。研究表明，miRNA與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移及患者預(yù)后等具有密切的關(guān)系。let.7 家族是最早發(fā)現(xiàn)的miRNA 之一，在很多腫瘤細(xì)胞中影響基因的表達(dá)。Let.7 的表達(dá)能夠影響肺癌的分型，其低表達(dá)提示患者預(yù)后相對較差。RAS 家族、HMGA2 均受到Let.7 的調(diào)控[3]，因此可認(rèn)為Let.7 通過直接調(diào)控RAS、HMGA2 影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及患者預(yù)后。調(diào)查顯示，miRNA 在有效抑制腫瘤因子表達(dá)的同時(shí)，能夠?qū)ο鄳?yīng)的癌基因產(chǎn)生負(fù)調(diào)控作用，當(dāng)miRNA 表達(dá)降低時(shí)，能夠起到抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用。在腫瘤的早期階段，通過檢測血清腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行診斷的敏感度、特異性不高。系列研究表明，miRNA 穩(wěn)定存在于血液中，同時(shí)在不同人群中的表達(dá)存在一定的差異。肺癌患者體內(nèi)的miRNA 存在缺失情況，研究表明肺癌患者體內(nèi)的miRNA 表達(dá)譜與人體的血細(xì)胞表達(dá)譜具有一定的差別。正常人體的血細(xì)胞、血清表達(dá)譜作用相似，在血清學(xué)檢測中能夠有效實(shí)現(xiàn)腫瘤標(biāo)志物的檢測。研究發(fā)現(xiàn)，對肺癌患者進(jìn)行唾液細(xì)胞學(xué)檢查的敏感度、特異性分別為47.82%、100.00%，而miR.21 對于診斷肺癌敏感性較高[4]。部分學(xué)者在對癌癥靶向基因的研究中發(fā)現(xiàn)miRNA 與肺癌耐藥性明顯相關(guān)[5]。但在腫瘤的治療中引入miRNA 尚有一定困難，如何做好調(diào)控、確保安全有效還需繼續(xù)進(jìn)行研究[6]。

BAG.1 是一種抗凋亡基因，其表達(dá)的蛋白是一種已經(jīng)被確認(rèn)的多功能結(jié)合蛋白，與bc.2 形成復(fù)合物，發(fā)揮抗細(xì)胞凋亡的作用。BAG.1 也有助于抵抗熱休克、生長因子缺失、凋亡、缺氧、細(xì)胞毒性藥物、放射線、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)小體等多重應(yīng)激，還可影響腫瘤對化療的反應(yīng)。BAG.1 可作用于熱休克蛋白、絲氨酸/ 蘇氨酸蛋白激酶（Raf.1）、肝素結(jié)合表皮生長因子樣生長因子、肝細(xì)胞生長因子受體（HGF）、血小板生長因子受體（PDGF）、蛋白酶體、Hsc70 C 端反應(yīng)蛋白（CHIP）和一些核激素受體，調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡、分化、增殖、轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)移和活力，從而影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展。目前，多個臨床研究發(fā)現(xiàn)BAG.1 基因在肺癌、乳腺癌、食管癌、前列腺癌、肺癌等治療方面發(fā)揮著關(guān)鍵性作用。BAG.1 基因根據(jù)翻譯起始位點(diǎn)的不同主要編碼4 種不同的異構(gòu)蛋白。BAG.1 是抗凋亡基因，理論上BAG.1 蛋白高表達(dá)的患者其生存期及預(yù)后較差，而一些研究結(jié)論恰恰相反，這似乎存在矛盾[7]。至少在非小細(xì)胞肺癌的研究中直接證明了這一觀點(diǎn)。有研究團(tuán)隊(duì)在一項(xiàng)75 例非小細(xì)胞肺癌患者的回顧性分析中表明，那些凋亡指數(shù)增加的患者死亡風(fēng)險(xiǎn)增加1.9倍。這種表面上凋亡活動和生存之間相矛盾的關(guān)系在BCL.2 的抗凋亡活動中同樣存在[8]。而不清楚的是抗凋亡活動是如何改善患者生存的，這需要通過進(jìn)一步的研究來發(fā)現(xiàn)。BAG.1 調(diào)節(jié)途徑在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，一般與腫瘤形成、化療耐藥具有相關(guān)性，并為多種腫瘤的預(yù)后評估、治療靶點(diǎn)選擇提供了可能。BAG.1 蛋白在肺癌中的表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系存在一定爭議[9]。同時(shí)，根據(jù)我國前期的研究發(fā)現(xiàn)，BAG.1 蛋白與Stathmin 基因在非小細(xì)胞肺癌中均有高表達(dá)，提示BAG.1 蛋白與Stathmin 基因在非小細(xì)胞肺癌的進(jìn)展中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。此外，Stathmin 基因還與腫瘤的遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，并可能影響患者的預(yù)后。因此，BAG.1 蛋白與Stathmin基因可能成為預(yù)測非小細(xì)胞肺癌惡性程度及患者預(yù)后的指標(biāo)，并能為肺癌的治療提供一定參考[10]。對非小細(xì)胞肺癌及小細(xì)胞肺癌患者進(jìn)行個體化診療是當(dāng)前研究的重點(diǎn)和難點(diǎn)[11]。尋找與肺癌發(fā)生密切相關(guān)的特異性易感基因，可為本病的早期診斷、治療及預(yù)后評估等奠定基礎(chǔ)。BAG.1 分泌的多功能蛋白可通過多種途徑來實(shí)現(xiàn)抗凋亡的作用，但其中的一些具體機(jī)理尚不明確，且目前的一些研究成果也存在沖突[12]。

綜上所述，BAG.1 蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的陽性表達(dá)率較高，且與患者的預(yù)后有關(guān)，有望成為臨床預(yù)測非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的指標(biāo)。