2022年玉溪市禽流感監(jiān)測與分析

羅曉燕,楊秋楠,宋詩雅,李晶,張曉舟,楊曦,楊耀蘭,呂嶸

(玉溪市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,云南 玉溪 653100)

禽流感是由A型流感病毒引起的多種禽類急性感染和死亡的一種烈性傳染病。根據(jù)禽流感病毒(AIV) 對(duì)禽類的致病性,可分為高致病性禽流感病毒 (HPAIV)與低致病性禽流感病毒(LPAIV)。目前只發(fā)現(xiàn) H5 和 H7 亞型屬于 HPAIV[1],可引起多種禽類急性感染和死亡,而其他所有亞型(LPAIV)對(duì)禽類均為低致病性,可引起發(fā)病禽輕度呼吸道癥狀和產(chǎn)蛋性能下降,但是在合適的條件下很容易變成HPAIV。近年來,不斷有關(guān)于 LPAIV 流行的報(bào)道[2,3],其流行和污染面呈上升和擴(kuò)大趨勢。很多報(bào)道[4,5]顯示,H9 亞型是影響我國養(yǎng)禽業(yè)的主要禽流感病毒亞型,在活禽市場非常流行。2003 年在我國香港地區(qū)還出現(xiàn)了人感染 H9N2 亞型禽流感病毒病例[6]。

為了解玉溪市禽流感流行情況,2022年對(duì)玉溪市轄區(qū)9個(gè)縣(市、區(qū))規(guī)模養(yǎng)殖場和活禽市場進(jìn)行禽流感監(jiān)測,以期掌握其在規(guī)模場與活禽市場之間傳播的規(guī)律,為玉溪市禽流感防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

2022 年,按照玉溪市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局印發(fā)的《2022年玉溪市動(dòng)物疫病監(jiān)測與流行病學(xué)調(diào)查計(jì)劃》,對(duì)玉溪市轄區(qū) 9個(gè)縣(市、區(qū))的規(guī)模養(yǎng)殖場和活禽市場進(jìn)行監(jiān)測,每月輪流對(duì)其中的3個(gè)縣(市、區(qū))(每個(gè)縣(市、區(qū))每個(gè)季度監(jiān)測1次)各隨機(jī)選擇3個(gè)規(guī)模養(yǎng)殖場和1 個(gè)活禽市場進(jìn)行采樣。每個(gè)規(guī)模養(yǎng)殖場采集5份活禽咽喉(泄殖腔)棉拭子,5份環(huán)境棉拭子,5份運(yùn)輸工具棉拭子;每個(gè)活禽市場隨機(jī)選擇3個(gè)售賣活禽攤位,每個(gè)攤位采集5份活禽咽喉/泄殖腔雙拭子樣品;同時(shí)采集市場內(nèi)環(huán)境棉拭子樣品(案板、地面、污水等)5份,運(yùn)輸工具棉拭子樣品(雞籠、推車等)5份。每份樣品裝入1個(gè)離心管中,加入保存液低溫保存送實(shí)驗(yàn)室檢測。

1.2 主要儀器與試劑

NP968C型核酸自動(dòng)提取儀,西安天隆科技有限公司產(chǎn)品;QuantStudio 7 Flex熒光定量 PCR儀,美國ABI公司產(chǎn)品。 病毒 DNA/RNA 核酸提取試劑盒(4.0),西安天隆科技有限公司產(chǎn)品;A型流感病毒熒光 RT-PCR檢測試劑盒,寶生物工程(大連)有限公司產(chǎn)品;H5/H7/H9亞型AI三重?zé)晒?RT-PCR檢測試劑盒,中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司產(chǎn)品。

1.3 檢測方法

使用NP968C型核酸自動(dòng)提取儀,參照試劑盒說明書,提取病毒RNA。采用寶生物工程(大連)有限公司 One Step PrimeScript RT-PCR Kit(Perfect Real Time)流感病毒A型通用核酸檢測試劑盒方法配制體系,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR儀上進(jìn)行檢測; 若檢測為陽性,再用中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司 H5/H7/H9 亞型AI三重?zé)晒釸T-PCR檢測試劑盒進(jìn)行分型檢測。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

應(yīng)用Excel 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理,再通過SPSS 24.0 軟件對(duì)陽性率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 禽流感病毒通用型核酸監(jiān)測情況

2.1.1總體監(jiān)測情況

全年共采集9個(gè)縣(市、區(qū))32個(gè)鄉(xiāng)(鎮(zhèn))62個(gè)村90個(gè)養(yǎng)殖場(戶)及21個(gè)活禽市場,樣品2280份,檢出禽流感病毒通用型核酸陽性240份,分布于8個(gè)縣(市、區(qū))14個(gè)鄉(xiāng)(鎮(zhèn))1個(gè)村1個(gè)養(yǎng)殖戶17個(gè)活禽市場,場點(diǎn)陽性率16.22%(18/111),樣品總陽性率為10.53%(240/2 280)。

2.1.2不同場點(diǎn)監(jiān)測情況

從采集的規(guī)模養(yǎng)殖場1 530份樣品、活禽市場750份樣品中檢出禽流感病毒核酸陽性:規(guī)模場1戶4份陽性,場點(diǎn)陽性率1.11%(1/90),樣品陽性率為0.26%(4/1530);活禽市場17個(gè)場236份陽性,場點(diǎn)陽性率80.95%(17/21),樣品陽性率為31.47%(236/750),規(guī)模場和活禽市場不同場點(diǎn)間的場點(diǎn)陽性率和樣品陽性率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(表1)。結(jié)果顯示陽性主要分布于活禽市場。

表1 玉溪市養(yǎng)殖場和活禽市場A型禽流感病毒監(jiān)測情況

2.1.3不同樣品類型監(jiān)測情況

從采集的禽咽喉(泄殖腔)棉拭子940 份樣品、環(huán)境棉拭子720 份樣品、 運(yùn)輸工具棉拭子620份樣品中檢出A 型禽流感病毒核酸陽性,禽咽喉(泄殖腔)、環(huán)境、運(yùn)輸工具棉拭子陽性率分別為17.47%(164/940)、5%(36/720)、6.45%(40/620)。禽咽喉(泄殖腔)棉拭子陽性率較高,明顯高于環(huán)境和運(yùn)輸工具棉拭子,不同樣品類型間陽性率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。從規(guī)模場中檢出的4份陽性均為禽咽喉(泄殖腔)棉拭子。

2.1.4不同季度監(jiān)測情況

不同季度統(tǒng)計(jì)結(jié)果(表2)顯示2022年玉溪市每個(gè)季度都能檢出禽流感病毒通用型核酸陽性,不同季度陽性率存在差異,場次和樣品陽性率都是第二季度最低,隨后逐步上升,不同季度間場次陽性率差異不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),而不同季度間樣品陽性率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

表2 不同季度A型禽流感病毒監(jiān)測情況

2.1.5不同地區(qū)監(jiān)測情況

不同地區(qū)統(tǒng)計(jì)結(jié)果(表3)顯示,除元江縣外,其余8縣(市、區(qū))均檢出禽流感病毒通用型核酸陽性樣品,但陽性率不一,場點(diǎn)陽性率無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。樣品陽性率澄江最高,通海次之,不同地區(qū)間樣品陽性率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

表3 不同地區(qū)禽流感病毒通用型核酸監(jiān)測結(jié)果統(tǒng)計(jì)

2.2 H5/H7/H9亞型分型情況

對(duì)檢出的240份禽流感病毒通用核酸陽性樣品,進(jìn)一步做H5/H7/H9 亞型禽流感病毒核酸檢測分型。結(jié)果:H9 亞型 AIV 核酸陽性 233 份,樣品陽性率10.22%(233/2280),占比為97.08%(233/240);7 份未確定亞型,占比為2.92%(7/240);未檢出H5和H7亞型AIV。

3 討論

本研究對(duì)玉溪市轄區(qū)內(nèi) 9 個(gè)縣(市、區(qū))的規(guī)模場和活禽市場開展禽流感監(jiān)測,結(jié)果顯示禽流感病毒在養(yǎng)殖環(huán)節(jié)檢出率較低,且以H9亞型流行為主,未檢出 H5、H7 亞型AIV 陽性。這可能與國家全面實(shí)施高致病性禽流感強(qiáng)制免疫(H5+H7二價(jià)疫苗)政策,且疫苗毒株更新及時(shí),從而在養(yǎng)殖環(huán)節(jié)有效控制了疫病的發(fā)生有關(guān)。檢出的4份陽性均為土雜雞養(yǎng)殖場的禽咽喉(泄殖腔)棉拭子,這可能與土雜雞飼養(yǎng)周期短、免疫次數(shù)少、養(yǎng)殖戶防疫意識(shí)薄弱等因素有關(guān),下一步應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)土雜肉雞H9亞型禽流感疫苗免疫,減少養(yǎng)殖環(huán)節(jié)禽流感病毒流行。

在活禽市場,活禽、市場環(huán)境、運(yùn)輸工具中均檢出H9 亞型AIV,活禽陽性率高于環(huán)境和運(yùn)輸工具,差異顯著,說明活禽市場就是一個(gè)禽流感病毒的“儲(chǔ)存器、增殖器、混合器、放大器”,活禽市場成為禽流感病毒持續(xù)存在的高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域[7]。因此,應(yīng)加強(qiáng)對(duì)流入市場家禽的監(jiān)管和檢疫,盡量避免外表健康的隱性感染家禽進(jìn)入市場,同時(shí),也應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行活禽交易市場“1110 制度”(一日一清洗、一周一消毒、一月一休市、過夜零存欄),有條件的市場可推行白條雞上市。

從不同季節(jié)看,一年四季都能檢出禽流感病毒,均維持在5%～15%,三、四季度最高,二季度最低,可能與玉溪天氣有關(guān),玉溪4—5月氣溫高,降雨少,空氣干燥,7—8月進(jìn)入雨季,濕度加大,秋冬季氣溫降低,利于病毒存活。因此,除應(yīng)重點(diǎn)加強(qiáng)冬春季節(jié)的禽流感防控外,其余季節(jié)的防控也不可掉以輕心。

從不同地區(qū)看,全市除元江縣外,其余8縣(市、區(qū))均檢出陽性,污染面廣,特別是飼養(yǎng)密度較大,交易頻繁的縣(區(qū))陽性率較高。因此,各縣(區(qū))可根據(jù)各自活禽交易市場的H9 亞型 AIV 流行特點(diǎn),結(jié)合自身實(shí)際,制定切實(shí)可行的綜合防控措施。

本次監(jiān)測的對(duì)象主要是雞,未涉及其他禽類,監(jiān)測結(jié)果未能全面反映AIV流行情況。下一步將繼續(xù)加強(qiáng)對(duì)其他禽類(鴨、鵝)及其他環(huán)節(jié)的禽流感監(jiān)測,以期充分了解和掌握本地AIV 流行趨勢,提出有針對(duì)性的防控建議和措施。