基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接分析小續(xù)命湯治療阿爾茨海默病的作用機(jī)制

鄒旭歡,付雪琴,王瑋瑋,王漫漫,蘭 瑞

阿爾茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)是一種以感覺或運(yùn)動(dòng)功能喪失、記憶力減退和癡呆癥為主要表現(xiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)退行性改變,多發(fā)于中老年人,占全部癡呆類型的60%～80%[1]。我國(guó)2015—2018年AD患病率為6.6%,根據(jù)國(guó)家人口預(yù)測(cè),2050年AD患病人數(shù)約為3 003萬人,其病理學(xué)特征為淀粉樣蛋白(amyloid-beta peptide,Aβ)沉淀形成的老年斑和tau蛋白的過度磷酸化形成的神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)原纖維纏結(jié),組織病理學(xué)研究顯示,AD神經(jīng)元細(xì)胞骨架不規(guī)則、突觸異常[2-4]。AD病情的發(fā)生、發(fā)展與線粒體突觸功能失常、Aβ的形成和積累、Tau蛋白的過度磷酸化、miRNA的失調(diào)、突觸損傷、氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、乙酰膽堿(acetylcholine,ACh)的缺失等密切相關(guān)[5]。目前,尚無特效藥物可治愈或逆轉(zhuǎn)AD的疾病過程,僅能減輕癥狀、延緩病情發(fā)展。小續(xù)命湯首見于孫思邈的《千金要方》,由12味藥組成,歷代醫(yī)家常用來治療中風(fēng)病,現(xiàn)有的臨床及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,小續(xù)命湯可保護(hù)腦卒中后的神經(jīng)血管單元、神經(jīng)元細(xì)胞、線粒體等,除此之外,也在降血脂、抗凝血、改善學(xué)習(xí)記憶能力方面具有重要作用[6]?；谥嗅t(yī)辨證施治的“異病同治”理論,研究發(fā)現(xiàn),提取出的小續(xù)命湯有效成分組對(duì)β-淀粉樣蛋白片段、L-谷氨酸、過氧化氫的損傷具有保護(hù)作用,且采用高效液相色譜法能夠快速有效地分析小續(xù)命湯抗AD成分中的有效成分,為小續(xù)命湯治療AD提供了可行的理論支撐[7-8]。小續(xù)命湯藥物味數(shù)多、成分復(fù)雜,目前關(guān)于小續(xù)命湯治療AD的具體作用機(jī)制尚未明確。因此,本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法預(yù)測(cè)小續(xù)命湯有效成分治療AD的潛在靶點(diǎn)和作用機(jī)制,并通過分子對(duì)接技術(shù)進(jìn)行驗(yàn)證。

1 資料與方法

1.1 小續(xù)命湯有效成分與靶點(diǎn)預(yù)測(cè)

在中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)和分析平臺(tái)(https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php,TCMSP)中查詢藥物的有效活性成分,并以通用的口服利用度(OB)≥30%、類藥性(DL)≥0.18為篩選標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行初篩,核查去重后,獲得小續(xù)命湯總的有效活性化合物。在UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行靶點(diǎn)基因名轉(zhuǎn)換,去重后獲得小續(xù)命湯的靶點(diǎn)基因。

1.2 AD疾病相關(guān)靶點(diǎn)的獲取

以“阿爾茨海默病(Alzheimer disease)”為檢索詞分別挖掘在線人類孟德爾遺傳數(shù)據(jù)庫(kù)(OMIM)、基因名片(GeneCard)數(shù)據(jù)庫(kù)獲得AD的潛在治療靶點(diǎn),合并數(shù)據(jù)庫(kù)靶點(diǎn),去重后獲得總的AD靶點(diǎn)。

1.3 小續(xù)命湯治療AD潛在靶點(diǎn)蛋白質(zhì)相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及拓?fù)浞治?/h3>

利用韋恩圖制作軟件Venny 2.1.0制作藥物靶點(diǎn)與AD疾病交集圖,將交集靶點(diǎn)輸入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò),設(shè)定物種“homo sapiens”,獲得PPI網(wǎng)絡(luò)并下載TSV文件。再將獲得的TSV文件導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2中,通過“Network Analyzer”工具進(jìn)行拓?fù)浞治?通過度值(Degree)排序,篩選核心靶點(diǎn)。利用Cytoscape 3.7.2繪制小續(xù)命湯藥物-成分-作用靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)圖。

1.4 關(guān)鍵成分通路富集分析

將交集靶點(diǎn)導(dǎo)入Metascape數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行基因本體(gene ontology,GO)分析與京都基因與基因組百科全書(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析,并繪制圖形展示。

1.5 利用AutoDock Vina進(jìn)行關(guān)鍵活性成分和靶點(diǎn)的分子對(duì)接

將篩選出的Degree值排名前5位的關(guān)鍵蛋白與其相應(yīng)的關(guān)鍵活性成分進(jìn)行能量匹配、空間匹配,展示靶點(diǎn)與成分之間的親和力。

2 結(jié) 果

2.1 小續(xù)命湯有效成分獲取與篩選

以O(shè)B≥30%和DL≥0.18為準(zhǔn)則在TCMSP中篩選藥物有效成分,最終獲得小續(xù)命湯(麻黃、桂枝、防風(fēng)、防己、杏仁、黃芩、人參、川芎、白芍、附子、甘草、生姜)有效成分共182種(見表1)。將獲得的蛋白質(zhì)靶點(diǎn)在UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行基因名匹對(duì),剔除重復(fù)項(xiàng)后獲得靶點(diǎn)基因272個(gè)。

表1 小續(xù)命湯的有效活性成分

2.2 AD疾病相關(guān)靶點(diǎn)的獲取

檢索OMIM疾病數(shù)據(jù)庫(kù),分別獲得AD靶點(diǎn)835個(gè),從Genecard數(shù)據(jù)庫(kù)獲得AD靶點(diǎn)9 606個(gè),依照“相關(guān)性得分”(relevance score)進(jìn)行中位數(shù)篩選,經(jīng)過3次中位數(shù)篩選,最后以中位數(shù)11.428 988 46為界限,獲得相關(guān)性較大的靶點(diǎn)1 201個(gè),合并2個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)靶點(diǎn)并去除重復(fù)值后獲得1 834個(gè)靶點(diǎn)。

2.3 小續(xù)命湯與AD交集靶點(diǎn)韋恩圖及PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

分別將272個(gè)藥物靶點(diǎn)與1 834個(gè)疾病靶點(diǎn)輸入Venny 2.1.0軟件,獲得交集靶點(diǎn)139個(gè)(見圖1),并導(dǎo)入String數(shù)據(jù)庫(kù),設(shè)定物種“homo sapiens”,構(gòu)建小續(xù)命湯藥物與AD蛋白相互關(guān)系網(wǎng)絡(luò)圖(見圖2)。

圖1 小續(xù)命湯治療AD交集靶點(diǎn)韋恩圖

圖2 小續(xù)命湯治療AD交集靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)圖

2.4 基于PPI網(wǎng)絡(luò)的拓?fù)浞治?/h3>

將獲得的TSV文件導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2,利用Net work Analyer插件計(jì)算得出靶點(diǎn)的相關(guān)度評(píng)分,根據(jù)Degree值獲得小續(xù)命湯治療AD關(guān)鍵靶點(diǎn),與AD相關(guān)的排名前5位的靶點(diǎn)為信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3(STAT3)、P53腫瘤蛋白(TP53)、絲裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)、V-REL網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病毒癌基因同源物A重組蛋白(RELA)、絲氨酸/蘇氨酸激酶(AKT1)。詳見表2。利用Cytoscape 3.7.2繪制小續(xù)命湯藥物-成分-作用靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)圖(見圖3),并計(jì)算Degree值,篩選出排名前5位的活性成分,分別是槲皮素、山柰酚、木樨草素、漢黃芩素、β-谷甾醇(見表3)。

圖3 小續(xù)命湯藥物-成分-作用靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)圖(紅色圓形為疾病名稱,粉色菱形為靶點(diǎn)基因,綠色正方形為藥物成分,橘黃色橢圓形為藥物活性成分)

表2 小續(xù)命湯治療AD排名前20位的靶點(diǎn)

表3 小續(xù)命湯治療AD的關(guān)鍵活性成分

2.5 小續(xù)命湯治療AD的潛在靶點(diǎn)GO富集分析

GO富集分析獲得AD相關(guān)的5 231條生物過程(BP),結(jié)果顯示,小續(xù)命湯治療AD在生物過程中,主要參與對(duì)無機(jī)物的反應(yīng)(response to inorganic substance)、對(duì)激素的反應(yīng)(response to hormone)等。在細(xì)胞組分(CC)富集到486項(xiàng),說明治療過程中主要通過膜筏(membrane raft)、囊腔(vesicle lumen)、質(zhì)膜外側(cè)(external side of plasma membrane)、受體復(fù)合體(receptor complex)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)腔(endoplasmic reticulum lumen)等部位進(jìn)行。分子功能(MF)富集到712項(xiàng),其中信號(hào)受體調(diào)節(jié)活性(signaling receptor regulator activity)、激酶結(jié)合(kinase binding)、蛋白質(zhì)同源二聚化活性(protein homodimerization activity)等最為緊密。選取結(jié)合度排名前10位的結(jié)果進(jìn)行可視化,繪制柱狀圖,柱狀圖橫軸代表生物學(xué)過程,縱軸代表靶點(diǎn)的數(shù)量。詳見圖4。

圖4 GO分析柱狀圖

2.6 小續(xù)命湯治療AD潛在靶點(diǎn)KEGG通路富集分析

在KEGG通路富集結(jié)果中,共富集到259條通路,結(jié)果顯示,脂質(zhì)與動(dòng)脈粥樣硬化通路(lipid and atherosclerosis)、晚期糖基化終末產(chǎn)物-糖基化終末產(chǎn)物受體信號(hào)通路(advanced glycosylation end products-receptor of AGEs,AGE-RAGE)、神經(jīng)退行性病變相關(guān)通路(pathways of neurodegeneration-multiple diseases)、缺氧誘導(dǎo)因子-1(HIF-1)信號(hào)通路(HIF-1 signaling pathway)等與小續(xù)命湯治療AD密切相關(guān)。關(guān)系緊密的前10條通路通過氣泡圖進(jìn)行展示。詳見圖5。

圖5 KEGG富集氣泡圖

2.7 利用AutoDock Vina進(jìn)行關(guān)鍵活性成分和靶點(diǎn)的分子對(duì)接

分別通過PubChem和PDB數(shù)據(jù)庫(kù)獲取關(guān)鍵成分的3D結(jié)構(gòu)及核心蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu),運(yùn)用Autodock Vina軟件進(jìn)行分子對(duì)接,Pymol軟件可視化顯示,且分子對(duì)接結(jié)果顯示STAT3、AKT1與槲皮素結(jié)合更緊密。詳見圖6、表4。

圖6 有效成分槲皮素、山柰酚、漢黃芩素與STAT3、AKT1結(jié)合位點(diǎn)圖

表4 關(guān)鍵分子與靶點(diǎn)對(duì)接親密度

3 討 論

AD屬中醫(yī)“癡呆”范疇,病屬本虛標(biāo)實(shí),以腎虛為本,痰濁、瘀血為標(biāo)[9]。小續(xù)命湯出自《千金要方》,為治療中風(fēng)的常用方劑,治療中風(fēng)病標(biāo)本兼顧,收效頗豐。小續(xù)命湯中用附子引人參走于十二經(jīng),溫陽復(fù)陽以固腎,引川芎入血分,行血養(yǎng)血以滋養(yǎng)真陰。元陽、真陰藏于腎,癡呆起病以腎虛,小續(xù)命湯溫陽滋陰固腎,故而治于癡呆。

在對(duì)活性成分的篩選中,篩選出槲皮素、山柰酚、木樨草素、漢黃芩素、β-谷甾醇等排名靠前。槲皮素存在于麻黃、甘草中,可穿透血腦屏障而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用[10]。研究表明,槲皮素可抑制Aβ聚集和Tau磷酸化,抑制乙酰膽堿酯酶活性、抗氧化應(yīng)激,并減輕炎癥反應(yīng),在3xTg-AD轉(zhuǎn)基因AD小鼠模型,腹腔注射槲皮素進(jìn)行治療,可減少AD小鼠海馬和杏仁核中的Tau蛋白過度磷酸化、Aβ的堆集,從而改善認(rèn)知功能[11]。乙酰膽堿的缺失會(huì)導(dǎo)致AD癥狀加重,乙酰膽堿酯酶(acetylcholinesterase,AChE)可降解ACh,抑制AChE活性可改善AD的認(rèn)知障礙[1]。槲皮素是AChE和丁酰膽堿酯酶(butyrylcholinesterase,BChE)的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑,可抑制AChE繼發(fā)于疏水性相互作用和與酶的強(qiáng)氫鍵結(jié)合,從而減少ACh的水解[12]。線粒體是活性氧(reactive oxygen species,ROS)產(chǎn)生的主要部位,線粒體功能障礙可導(dǎo)致ROS過度積累,從而產(chǎn)生氧化應(yīng)激,隨后ATP耗竭導(dǎo)致細(xì)胞死亡[13-14]。槲皮素作為有效的抗氧化劑,通過誘導(dǎo)核因子E2相關(guān)因子2/抗氧化反應(yīng)元件通路(Nrf2/ARE)和對(duì)氧磷酶2(paraoxonase 2,PON2)激活調(diào)節(jié)AD中錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)聚集體的形成和降解[13,15]。槲皮素通過抑制小膠質(zhì)細(xì)胞中一氧化氮、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的表達(dá),以減輕炎癥,延緩AD的進(jìn)展[16]。山柰酚存在于中藥麻黃、白芍、甘草、人參中,研究發(fā)現(xiàn),AD模型果蠅暴露于山柰酚環(huán)境中可降低氧化應(yīng)激和AChE活性,延緩攀爬能力、記憶力的喪失[2]。Aβ-42的沉積會(huì)增加AChE的表達(dá),乙酰膽堿酯酶活性升高、乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶活性的降低,使AD病人腦內(nèi)的ACh的表達(dá)明顯減少,而山柰酚可以降低Aβ-42的毒性,并與其寡聚體結(jié)合,形成無毒寡聚體,進(jìn)而阻斷Aβ斑塊的構(gòu)象轉(zhuǎn)變,以改變Aβ誘導(dǎo)的神經(jīng)元壞死、氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、小膠質(zhì)細(xì)胞活化等一系列加重AD病情的病理過程[17-18]。漢黃芩素存在于防風(fēng)、黃芩中,研究發(fā)現(xiàn),其可通過抑制雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)通路自噬介導(dǎo)促進(jìn)原代神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞中Aβ的清除,從而抑制糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)以減少Tau蛋白的磷酸化,通過下調(diào)促分裂素原活化蛋白激酶/核轉(zhuǎn)錄因子(MAPK/NF-κB)信號(hào)通路以緩解Aβ25-35刺激的PC12細(xì)胞中的神經(jīng)元凋亡和炎癥發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用,以達(dá)到治療AD的目的[19-20]。木樨草素存在于麻黃中,β-谷甾醇存在于小續(xù)命湯多味中藥中,研究發(fā)現(xiàn),木樨草素和β-谷甾醇均具有較強(qiáng)的抗氧化、抗炎作用[21-22]。對(duì)于PPI網(wǎng)絡(luò)關(guān)鍵靶點(diǎn)質(zhì)譜分析中,STAT3、AKT1、TNF、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A(VEGFA)等靶點(diǎn)對(duì)小續(xù)命湯治療AD起到關(guān)鍵作用。在AD病理環(huán)境的刺激下,小膠質(zhì)細(xì)胞激活,促進(jìn)神經(jīng)斑塊附近的星形膠質(zhì)細(xì)胞活化為A1型,高表達(dá)凋亡相關(guān)基因,損傷神經(jīng)突觸,推進(jìn)AD病程的進(jìn)展[23]。在對(duì)AD的實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn),可通過調(diào)控Janus激酶2(JAK2)/STAT3信號(hào)通路抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞活化,并負(fù)反饋調(diào)節(jié)抑制蛋白3(SCO3)的表達(dá),抑制促炎的釋放,減輕神經(jīng)炎性反應(yīng),修復(fù)神經(jīng)元結(jié)構(gòu)和功能[24-25];并可調(diào)控STAT3參與的miR-124/STAT3軸以抑制Aβ誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)元凋亡,從而治療AD[26]。AKT1可在不同的通路中發(fā)揮抗AD的作用,研究表明,在其參與的PI3K/AKT通路的活性減少會(huì)增加Tau蛋白磷酸化以及Aβ斑塊沉積增加,AKT基因過度表達(dá)可降低Tau蛋白過度磷酸化[27-28];而抑制AKT1-mTOR信號(hào)通路表達(dá)可以誘導(dǎo)自噬以延緩AD模型衰老和Aβ的表達(dá)水平[29]。ROS介導(dǎo)的AKT1的氧化修飾可導(dǎo)致AD中的突觸功能障礙,在突觸中促進(jìn)AKT1-mTOR信號(hào)傳導(dǎo)的治療策略可能為AD的疾病緩解治療提供新的靶標(biāo)[30]。TNF-α是小膠質(zhì)細(xì)胞在被持續(xù)激活狀態(tài)下釋放的,可加重AD的神經(jīng)元變性和腦組織損傷[31-32]。在使用遺傳和藥理學(xué)的研究表明,TNF-α信號(hào)傳導(dǎo)在體內(nèi)會(huì)加劇Aβ和Tau病理[33]。且研究發(fā)現(xiàn),TNF-α可抑制膽堿能神經(jīng)元突觸傳遞,加重中樞膽堿能系統(tǒng)損害[3]。VEGFA是一種高度特異性地促血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子,可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移和血管新生,血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷會(huì)增強(qiáng)血腦屏障的通透性,使外周Aβ更易進(jìn)入大腦,腦內(nèi)Aβ含量堆集,外周的有害物質(zhì)更易進(jìn)入大腦,激活小膠質(zhì)細(xì)胞釋放促炎因子,誘發(fā)神經(jīng)元凋亡,從而誘發(fā)癡呆[34]。

AD病人分為輕、中、重3度,輕度病人主要以近期記憶力喪失、視空間障礙為主;中度病人學(xué)習(xí)新知識(shí)、工作能力減退,出現(xiàn)明顯的人格改變;重度病人已不能完成基本日常活動(dòng),終日無語而臥床,與外界逐漸喪失接觸能力,因此,營(yíng)養(yǎng)水平與AD的發(fā)展及預(yù)后呈正相關(guān)[4]。腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)可提高學(xué)習(xí)與記憶能力,研究表明,AD病人的BDNF表達(dá)下降,血清BDNF、尿酸(UA)水平與病人認(rèn)知功能損傷呈負(fù)相關(guān)[35-36]。在本課題組的前期研究中發(fā)現(xiàn),在腦缺血再灌注損傷動(dòng)物模型中,小續(xù)命湯可上調(diào)缺血半暗帶皮層BDNF、膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)的表達(dá),減輕急性腦缺血再灌注導(dǎo)致的神經(jīng)細(xì)胞損傷,改善神經(jīng)功能缺損癥狀[37]。這為小續(xù)命湯治療AD提供了理論支撐。

KEGG信號(hào)通路富集結(jié)果顯示,小續(xù)命湯治療AD可能與脂質(zhì)與動(dòng)脈粥樣硬化通路、AGE-RAGE信號(hào)通路等有關(guān)。動(dòng)脈粥樣硬化不僅是缺血性腦卒中的危險(xiǎn)因素,也是認(rèn)知障礙的相關(guān)因素,而且年齡、動(dòng)脈高血壓、高膽固醇血癥、糖尿病和肥胖是AD和動(dòng)脈粥樣硬化的共同危險(xiǎn)因素,針對(duì)危險(xiǎn)因素治療AD、動(dòng)脈粥樣硬化也是臨床治療的共通點(diǎn)[38]。在臨床研究中發(fā)現(xiàn),通過對(duì)比患有和未患有腦血管動(dòng)脈粥樣硬化的AD病人2年內(nèi)的神經(jīng)認(rèn)知功能和日常生活活動(dòng)的過程發(fā)現(xiàn),患有腦血管動(dòng)脈粥樣硬化的AD病人,在神經(jīng)心理學(xué)評(píng)估下的認(rèn)知能力呈現(xiàn)進(jìn)行性損害且不受動(dòng)脈粥樣硬化患病時(shí)間和顱外或顱內(nèi)位置的影響,動(dòng)脈粥樣硬化通過減少腦血流量引起大腦缺氧從而促進(jìn)腦內(nèi)Aβ的積累,加重AD,而Aβ的積累又可通過影響內(nèi)皮功能、氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生[39-41]。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),通過CCAAT-增強(qiáng)子結(jié)合蛋白(C/EBPβ)/天冬氨酸內(nèi)肽酶(AEP)信號(hào)通路傳導(dǎo)可將動(dòng)脈粥樣硬化與AD的發(fā)病機(jī)制結(jié)合起來,AEP是由酸中毒激活的半胱氨酸蛋白酶,主要存在于內(nèi)切溶酶體中,其作為δ-分泌酶分別在N585和N368殘基處切割I(lǐng)類跨膜蛋白(APP)和Tau,加速Aβ的產(chǎn)生和Tau聚集[42]。用小分子抑制劑抑制AEP可阻斷AD病變,改善AD小鼠模型中的認(rèn)知功能障礙,頸動(dòng)脈粥樣硬化病人的頸動(dòng)脈斑塊和血漿中的AEP均增加[43-45]。而C/EBPβ在衰老過程中調(diào)節(jié)AEP的基因(LGMN)mRNA轉(zhuǎn)錄,從3xTg小鼠中敲除C/EBPβ可降低AEP水平并消除AD病變,恢復(fù)認(rèn)知功能[46]。高脂血癥載脂蛋白E敲除(ApoE-/-)小鼠中C/EBPβ的造血缺失可減輕炎癥和高脂血癥,從而中斷動(dòng)脈粥樣硬化的病理發(fā)展[47]。2型糖尿病(diabetes mellitus type 2,T2DM)與AD之間的臨床關(guān)系存在爭(zhēng)議,雖然兩者之間并沒有明確的相關(guān)性,但有研究表明T2DM是AD的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,兩者都與衰老和晚期局部淀粉樣蛋白沉積有關(guān),胰島素異常、胰島素抵抗和晚期糖基化終產(chǎn)物(AGEs)對(duì)神經(jīng)淀粉樣蛋白斑塊和神經(jīng)原纖維纏結(jié)的發(fā)展都有影響[5]。胰島素可調(diào)節(jié)AD發(fā)病過程中淀粉樣蛋白、神經(jīng)原纖維纏結(jié)的主要成分Aβ和Tau的代謝,通過競(jìng)爭(zhēng)胰島素降解酶參與Aβ降解的金屬蛋白酶,促進(jìn)Aβ沉積[6]。而AGE及其受體RAGE對(duì)ROS反應(yīng)敏感,從而增加相互作用,促進(jìn)Aβ的合成,導(dǎo)致Aβ沉積和Tau蛋白磷酸化,最終形成了斑塊和神經(jīng)原纖維纏結(jié)[7]。且高遷移率族框1(HMGB1)和與RAGE相互作用以產(chǎn)生其他ROS的S100的合成,從而增強(qiáng)AD病理學(xué)進(jìn)展[48]。

綜上所述,小續(xù)命湯通過多成分、多靶點(diǎn)、多通路治療AD,靶向作用STAT3、AKT1、TNF、VEGFA等關(guān)鍵靶點(diǎn),涉及抗氧化應(yīng)激與體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)水平進(jìn)行治療,涉及激酶結(jié)合、蛋白質(zhì)同源二聚化活性、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合、氧化還原酶活性等分子功能,作用于膜筏、囊腔、突觸后膜、受體復(fù)合體等細(xì)胞部位。本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)收集了小續(xù)命湯治療AD的潛在靶點(diǎn),可能為進(jìn)一步研究小續(xù)命湯治療AD的實(shí)驗(yàn)及臨床應(yīng)用提供理論依據(jù),但由于數(shù)據(jù)庫(kù)不全,導(dǎo)致可能數(shù)據(jù)收集不完備,潛在靶點(diǎn)及可能機(jī)制無法進(jìn)行全面的挖掘及分析,此外,小續(xù)命湯治療AD的研究較少,尚未形成完整的理論及實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證體系,尚需進(jìn)一步研究明確小續(xù)命湯治療AD的潛在機(jī)制,為AD的治療提供科學(xué)的理論指導(dǎo)、理論指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)、實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證理論,對(duì)小續(xù)命湯治療AD的作用機(jī)制進(jìn)行更深一步的研究。