不同生長(zhǎng)年限及粗度徑級(jí)對(duì)黃芪飲片藥效成分含量的影響

趙江怡，田文倉(cāng)，馮紫薇，彭博揚(yáng)，唐進(jìn)程，張 媛, 5，劉鳳波, 5，趙 婷, 5*，魏勝利, 5*

不同生長(zhǎng)年限及粗度徑級(jí)對(duì)黃芪飲片藥效成分含量的影響

趙江怡1，田文倉(cāng)2，馮紫薇3，彭博揚(yáng)4，唐進(jìn)程1，張 媛1, 5，劉鳳波1, 5，趙 婷1, 5*，魏勝利1, 5*

1. 北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 102488 2. 北京同仁堂健康藥業(yè)寧夏有限公司，寧夏 750021 3. 魯南制藥山東新時(shí)代藥業(yè)有限公司，山東 273400 4. 中國(guó)中藥有限公司，北京 100089 5. 中藥材規(guī)范化生產(chǎn)教育部工程研究中心，北京 100102

測(cè)定不同年限蒙古黃芪產(chǎn)出不同粗度徑級(jí)黃芪飲片的比例，比較各粗度徑級(jí)黃芪飲片藥效成分含量的差異，為黃芪飲片質(zhì)量等級(jí)的科學(xué)劃分提供理論依據(jù)。以4～6年生仿野生蒙古黃芪為材料，按照直徑在0.5～0.8 cm（不包含0.8 cm）、0.8～1.0 cm和大于1.0 cm對(duì)樣品進(jìn)行劃分，測(cè)定不同年限黃芪各粗度徑級(jí)飲片的產(chǎn)出比率及藥效成分含量。生長(zhǎng)年限對(duì)不同粗度徑級(jí)黃芪飲片的質(zhì)量占比具有極顯著影響（＜0.01）。0.5～0.8 cm粗度徑級(jí)的黃芪飲片在4年生黃芪中質(zhì)量占比最高，而粗度大于1.0 cm的黃芪飲片在6年生黃芪中質(zhì)量占比最高。生長(zhǎng)年限、粗度徑級(jí)及二者的交互作用對(duì)黃芪中黃酮類和皂苷類成分含量均有極顯著影響（＜0.01）。黃酮類成分含量受年限因素的影響大于粗度徑級(jí)，在6年生黃芪的0.8～1.0 cm粗度部位中達(dá)到最高；而黃芪甲苷含量受粗度徑級(jí)的影響大于年限因素，在0.5～0.8 cm粗度徑級(jí)的5年生黃芪中達(dá)到最高。生長(zhǎng)年限、粗度徑級(jí)均會(huì)影響黃芪藥效成分含量，黃芪飲片在劃分質(zhì)量等級(jí)時(shí)，在傳統(tǒng)考慮粗度直徑的同時(shí)，要特別注意生長(zhǎng)年限的影響。

黃芪飲片；蒙古黃芪；生長(zhǎng)年限；粗度徑級(jí)；黃芪甲苷；成分含量

根及根莖類藥材常根據(jù)粗度劃分為不同等級(jí)，分別定價(jià)出售。在市場(chǎng)上，粗度大的根段通常被認(rèn)為是高等級(jí)優(yōu)質(zhì)藥材并以高價(jià)售賣[1]。但讓人存疑的是，根及根莖類飲片等級(jí)劃分標(biāo)準(zhǔn)也參照藥材，將粗度直徑大的飲片作為高等級(jí)，而粗度直徑小的作為低等級(jí)。很顯然中藥飲片的直徑與藥材的生長(zhǎng)年限或質(zhì)量未必呈顯著相關(guān)，比如高年限根的下部與低年限根的上部可能粗度直徑相同，但他們質(zhì)量一致嗎？不同年限根類藥材產(chǎn)出各直徑飲片的比例分別是多少？飲片的質(zhì)量等級(jí)受其直徑和生長(zhǎng)年限的影響是什么關(guān)系？這對(duì)于科學(xué)劃分中藥飲片的質(zhì)量等級(jí)至關(guān)重要，然而目前多數(shù)藥材都缺乏這樣的研究。

黃芪為豆科植物蒙古黃芪(Fisch.) Bge.var.(Bge.) Hsiao或膜莢黃芪(Fisch.) Bge.的干燥根[2]，作為典型的根類中藥，其藥材規(guī)格與飲片規(guī)格等級(jí)均依據(jù)直徑粗度劃分[3]。有關(guān)不同粗度黃芪藥材質(zhì)量差異已多有報(bào)道，皂苷類和黃酮類成分含量與黃芪粗度的相關(guān)性有所差別[4-5]。牛倩蕓等[6]對(duì)市場(chǎng)上不同商品規(guī)格等級(jí)的黃芪藥材中成分含量進(jìn)行比較后發(fā)現(xiàn)，黃芪甲苷含量與等級(jí)呈負(fù)相關(guān)，毛蕊異黃酮葡萄糖苷和總多糖含量與等級(jí)沒(méi)有顯著相關(guān)性。而多數(shù)研究發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)年限對(duì)黃芪化學(xué)成分含量具有顯著影響，且不同成分隨著藥材年限增長(zhǎng)的變化規(guī)律并不完全一致[7-9]。但是，尚未見對(duì)不同年限黃芪產(chǎn)出不同粗度徑級(jí)飲片比率的報(bào)道，更未見同時(shí)分析生長(zhǎng)年限和粗度徑級(jí)對(duì)飲片質(zhì)量影響的研究。為此，本研究選取產(chǎn)地（陜西子洲）和采收時(shí)間（10月中旬）一致的4～6年生仿野生黃芪為材料，系統(tǒng)分析了不同年限黃芪產(chǎn)出各粗度徑級(jí)飲片比率的差異，以及生長(zhǎng)年限和粗度徑級(jí)對(duì)飲片中皂苷類、黃酮類成分含量的影響。研究結(jié)果對(duì)黃芪飲片質(zhì)量等級(jí)的科學(xué)劃分具有重要的指導(dǎo)價(jià)值。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 1100高效液相色譜儀（安捷倫科技有限公司）、Waters e2695高效液相色譜儀（沃特世科技有限公司）、UV-2800紫外可見分光光度計(jì)（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司）、AL204型電子分析天平（d＝0.000 1 g，梅特勒-托利多儀器有限公司）、全新氣流式超微粉機(jī)（欣鎮(zhèn)精密企業(yè)有限公司）、KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、SIGMA 3K15型臺(tái)式冷凍離心機(jī)（德國(guó)希格瑪離心機(jī)有限公司）、北京科偉HH-S8 恒溫水浴鍋、RE-3000 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器有限公司）。

1.2 試劑

黃芪甲苷（批號(hào)YM328HA14）、毛蕊異黃酮葡萄糖苷（批號(hào)R31A0F96530）、芒柄花苷（批號(hào)P03A10F84910）、(6,11)-9,10-二甲氧基紫檀烷- 3--β--葡萄糖苷（簡(jiǎn)稱紫檀烷苷；批號(hào)P21N9F75533）、2′-羥基-3′,4′-二甲氧基異黃烷- 7--β--葡萄糖苷（簡(jiǎn)稱異黃烷苷；批號(hào)Y08S8H43409）、毛蕊異黃酮（批號(hào)Y11JJ10H92789）、芒柄花素（批號(hào)F27J7S18516）、(6α,11α)-3-羥基-9, 10-二甲氧基紫檀烷（簡(jiǎn)稱紫檀烷；批號(hào)Y28M10H84302）、7,2′-二羥基-3′,4′-二甲氧基異黃烷（簡(jiǎn)稱異黃烷，批號(hào)Y28M10H84303）對(duì)照品均購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)均大于98%。乙腈為色譜純，水為娃哈哈純凈水，其余試劑均為分析純。

1.3 藥材

不同生長(zhǎng)年限的黃芪由課題組成員于2019年10月18日，前往陜西省榆林市子洲縣三川口鎮(zhèn)畢家鹼村（N37°07′15.20″，E109°89′19.93″，海拔900 m）黃芪仿野生種植基地采挖。樣品原植物標(biāo)本經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)魏勝利教授鑒定為豆科植物蒙古黃芪(Fisch.) Bge. var.(Bge.) Hsiao.。分別選擇土壤肥力水平和人工管理模式相對(duì)一致的4～6年生黃芪種植地塊，采集具有代表性的黃芪藥材各18根，剪去側(cè)根、蘆頭及空心部位，結(jié)合當(dāng)?shù)禺a(chǎn)地加工規(guī)范和市場(chǎng)情況，曬干后將每根黃芪按照大于1.0 cm、0.8～1.0 cm和0.5～0.8 cm（不包含0.8 cm）的直徑范圍從上往下劃分為3部分，用于后續(xù)不同粗度徑級(jí)飲片質(zhì)量占比和藥效成分含量的測(cè)定。樣品保存于北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院中藥資源樣品庫(kù)。

2 方法與結(jié)果

2.1 不同粗度徑級(jí)飲片占比的測(cè)定

將上述4～6年生黃芪不同粗度樣品，每6根作為1組，分別稱量各粗度徑級(jí)飲片質(zhì)量，并計(jì)算不同年限下各粗度徑級(jí)飲片的占比。

2.2 藥效成分含量測(cè)定

2.2.1 黃芪甲苷的測(cè)定[10]

（1）對(duì)照品溶液的制備：精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解，搖勻定容，制得質(zhì)量濃度為0.750 mg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液，0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

（2）供試品溶液的制備：取本品粉末約2.0 g，精密稱定，置50 mL離心管中，加甲醇30 mL，超聲處理30 min，以9000 r/min的轉(zhuǎn)速離心5 min，殘?jiān)眉状枷礈?2 次，每次15 mL，超聲處理10 min，離心5 min，合并上清液，減壓回收溶劑至干。殘?jiān)? mL 10%氨水溶液，超聲促溶，放置10 min，不時(shí)振搖，定容于10 mL量瓶中，搖勻，0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

（3）色譜條件：Agilent Zorbax SB-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈（A）-水（B）；32%A等度洗脫；體積流量1.0 mL/min；柱溫30 ℃；漂移管溫度95 ℃；氮?dú)饬魉?.0 L/min；進(jìn)樣量20 μL。

（4）線性回歸方程的繪制：精密吸取黃芪甲苷對(duì)照品儲(chǔ)備液1、5、10、15、20、25 μL，分別進(jìn)樣測(cè)定并記錄峰面積。以進(jìn)樣量的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)（）、峰面積的對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)（）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算回歸方程：＝1.481＋16.045，R＝0.999 4。黃芪甲苷在0.750～18.750 μg內(nèi)線性關(guān)系良好。

（5）方法學(xué)考察：精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性考察結(jié)果的RSD值均小于3%，平均加樣回收率為97.14%，RSD值為1.99%，表明儀器精密度、方法重復(fù)性、樣品24 h內(nèi)穩(wěn)定性和方法準(zhǔn)確度均良好。

（6）樣品測(cè)定：采用HPLC-ELSD法測(cè)定黃芪甲苷的含量，色譜圖見圖1。

圖1 黃芪甲苷對(duì)照品(A)及黃芪樣品(B) HPLC圖

2.2.2 8種黃酮類成分的測(cè)定[11]

（1）混合對(duì)照品溶液的制備：精密稱取毛蕊異黃酮葡萄糖苷、芒柄花苷、紫檀烷苷、異黃烷苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素、紫檀烷、異黃烷對(duì)照品各適量，分別置于10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度分別為0.834、0.669、0.400、0.325、0.263、0.640、0.542、0.342 mg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液，0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

（2）供試品溶液的制備：取本品粉末約1.5 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加入75 mL甲醇，于75 ℃加熱回流4 h，濾過(guò)，回收溶劑至干，加15 mL甲醇超聲促溶，再加25 mL醋酸乙酯，靜置1 h，待大量多糖沉淀析出后抽濾，取濾液回收至干，殘?jiān)?0%甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加70%甲醇定容至刻度，搖勻，0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

（3）色譜條件：Waters Atlantis T3色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈（A）-水（B）；梯度洗脫：0～13 min，16%～20% A；13～35 min，20%～28%A；35～45 min，28%～50% A；45～50 min，50%～80% A；50～60 min，80% A；體積流量1.0 mL/min；柱溫25 ℃；進(jìn)樣量20 μL。其中紫檀烷苷、異黃烷苷、紫檀烷、異黃烷在217 nm下檢測(cè)，毛蕊異黃酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素在260 nm下檢測(cè)。

（4）線性回歸方程的繪制：分別精密量取8種黃酮對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋制成不同濃度梯度的對(duì)照品溶液，進(jìn)樣20 μL進(jìn)行測(cè)定。以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)（）、峰面積為縱坐標(biāo)（）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算回歸方程?；貧w方程分別為毛蕊異黃酮葡萄糖苷＝59 787 407＋454 092，R＝0.999 9，線性范圍0.083～16.680 μg；芒柄花苷＝54 442 475＋42 838，R＝0.999 9，線性范圍0.067～13.380 μg；紫檀烷苷＝42 242 017－11 142，R＝0.999 6，線性范圍0.040～8.000 μg；異黃烷苷＝36 109 560－6 291，R＝0.999 8，線性范圍0.033～6.500 μg；毛蕊異黃酮＝98 270 766－51 136，R＝0.999 7，線性范圍0.026～5.260 μg；芒柄花素＝87 206 398＋51 919，R＝0.999 7，線性范圍0.064～3.200 μg；紫檀烷＝63 660 218＋56 452，R＝0.999 9，線性范圍0.054～2.710 μg；異黃烷＝59 357 677＋23 924，R＝0.999 3，線性范圍0.034～1.710 μg。表明8種黃酮類成分進(jìn)樣濃度與峰面積在相應(yīng)范圍內(nèi)均有良好的線性關(guān)系。

（5）方法學(xué)考察：毛蕊異黃酮葡萄糖苷、芒柄花苷、紫檀烷苷、異黃烷苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素、紫檀烷、異黃烷的精密度、重復(fù)性、24 h內(nèi)穩(wěn)定性考察結(jié)果的RSD值均小于3%，平均加樣回收率分別為98.68%、100.29%、98.47%、97.43%、100.50%、101.14%、101.49%、99.87%，RSD值分別為2.32%、2.87%、1.98%、1.36%、0.95%、0.89%、1.29%、1.78%，表明儀器精密度、方法重復(fù)性、樣品24 h內(nèi)穩(wěn)定性和方法準(zhǔn)確度均良好。

（6）樣品測(cè)定：采用HPLC-DAD法測(cè)定毛蕊異黃酮葡萄糖苷、芒柄花苷、紫檀烷苷、異黃烷苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素、紫檀烷、異黃烷的含量。色譜圖見圖2。

1-毛蕊異黃酮葡萄糖苷 2-芒柄花苷 3-紫檀烷苷 4-異黃烷苷 5-毛蕊異黃酮 6-芒柄花素 7-紫檀烷 8-異黃烷

2.2.3 總黃酮的測(cè)定[10]

（1）對(duì)照品溶液的制備：精密稱取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對(duì)照品適量，置于100 mL量瓶中，用75%乙醇溶解，制成質(zhì)量濃度為1.480 mg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液，即得。

（2）供試品溶液的制備：取本品粉末約0.5 g，精密稱定，置50 mL錐形瓶中，加25 mL 75%乙醇，50 ℃下超聲處理30 min，濾過(guò)，加適量75%乙醇洗滌濾渣，合并濾液并定容至50 mL量瓶中，從中精密量取2.0 mL溶液轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，再用75%乙醇定容，搖勻即得。

（3）線性回歸方程的繪制：精密量取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對(duì)照品（測(cè)定總黃酮用）儲(chǔ)備液1、2、4、6、8 mL，分別置于25 mL量瓶中，加75%乙醇稀釋成不同濃度梯度，于260 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以對(duì)照品溶液濃度為橫坐標(biāo)（）、吸光度為縱坐標(biāo)（）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算回歸方程：＝56.794＋0.002，R＝0.999 9。表明總黃酮在0.059～0.474 mg/mL內(nèi)線性關(guān)系良好。

（4）方法學(xué)考察：精密度、重復(fù)性、20 h內(nèi)穩(wěn)定性考察結(jié)果的RSD值均小于3%，平均加樣回收率為99.92%，RSD值為1.20%，表明儀器精密度、方法重復(fù)性、樣品20 h穩(wěn)定性和方法準(zhǔn)確度均良好。

（5）樣品的測(cè)定：采用紫外分光光度計(jì)測(cè)定總黃酮含量。

2.2.4 統(tǒng)計(jì)方法 采用Excel 2016對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，4種黃酮苷類含量加和作為總黃酮苷含量，4種黃酮苷元含量加和作為總黃酮苷元含量。將數(shù)據(jù)導(dǎo)入SPSS 25.0中，用箱線圖剔除異常值后，進(jìn)行生長(zhǎng)年限的單因素方差分析和Duncan多重比較。并采用雙因素方差分析，根據(jù)偏（Eta）2的大小，比較生長(zhǎng)年限、粗度徑級(jí)以及二者交互作用對(duì)黃芪飲片藥效成分含量的影響強(qiáng)弱。偏（Eta）2小于0.06為小效應(yīng)量，0.06～0.14為中效應(yīng)量，大于0.14為大效應(yīng)量[12]。偏（Eta）2越大，表明該因素的影響作用越大。

2.3 不同生長(zhǎng)年限黃芪各粗度徑級(jí)飲片質(zhì)量占比分析

方差分析表明，3個(gè)粗度徑級(jí)的飲片產(chǎn)出率均在不同生長(zhǎng)年限黃芪間具有極顯著差異（＜0.05，表1）。多重比較結(jié)果顯示，在0.5～0.8 cm和大于1.0 cm 2個(gè)徑級(jí)中，任意2個(gè)年限之間的差異也均達(dá)到了顯著水平（＜0.05）。各年限徑級(jí)產(chǎn)出率總體表現(xiàn)為生長(zhǎng)年限高的黃芪出產(chǎn)粗徑級(jí)飲片比率高，而生長(zhǎng)年限低的黃芪出產(chǎn)細(xì)徑級(jí)飲片比率高。如大于1.0 cm徑級(jí)的飲片占比為6年生＞5年生＞4年生，而0.5～0.8 cm徑級(jí)的飲片產(chǎn)出率為4年生＞5年生＞6年生。但是0.8～1.0 cm徑級(jí)飲片以6年生的占比最高，而4、5年生黃芪之間并未呈現(xiàn)顯著差異。以上結(jié)果顯示，依據(jù)飲片徑級(jí)大小劃分規(guī)格等級(jí)只能在一定程度上體現(xiàn)年限大小。因?yàn)椴煌晗揲g存在相同徑級(jí)的交叉，所以對(duì)于徑級(jí)相同而年限不同的飲片質(zhì)量差異必須進(jìn)行進(jìn)一步確認(rèn)。

表1 不同年限黃芪產(chǎn)出各粗度徑級(jí)飲片質(zhì)量占比差異(, n = 3)

不同小寫字母表示處理間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）

Different lower case letters indicate statistically significant differences (< 0.05)

2.4 不同生長(zhǎng)年限黃芪各粗度徑級(jí)飲片黃芪甲苷含量差異分析

方差分析表明，同一粗度徑級(jí)中不同年限黃芪間黃芪甲苷含量具有極顯著差異（＜0.01，圖3）。多重比較結(jié)果顯示，在3個(gè)粗度徑級(jí)中，4、6年生黃芪間黃芪甲苷含量均具有極顯著差異（＜0.01）。從總體趨勢(shì)上看，黃芪甲苷含量隨著黃芪年限的增長(zhǎng)和徑級(jí)的增大而逐漸降低，在低年限細(xì)徑級(jí)飲片中有較高水平。據(jù)報(bào)道[5]，黃芪中皂苷類成分主要分布在表皮，在木質(zhì)部、韌皮部中分布較少。而細(xì)徑級(jí)飲片中表皮的占比較大，且低年限黃芪產(chǎn)出細(xì)徑級(jí)飲片的比例也較高。

2.5 不同生長(zhǎng)年限黃芪各粗度徑級(jí)飲片黃酮類成分含量差異分析

同一粗度徑級(jí)中，生長(zhǎng)年限對(duì)黃芪總黃酮含量具有極顯著影響（＜0.01，圖4）。多重比較結(jié)果表明，6年生黃芪總黃酮含量與相同徑級(jí)中的4年生黃芪相比均具有極顯著差異（＜0.01）。且在3個(gè)粗度徑級(jí)中，總黃酮含量均在6年生中達(dá)到最高。此外還發(fā)現(xiàn)，部分細(xì)徑級(jí)高年限飲片中總黃酮含量比粗徑級(jí)低年限飲片更高。如0.5～0.8 cm粗度徑級(jí)的6年生黃芪中總黃酮含量高于0.8～1.0 cm粗度徑級(jí)的4年生黃芪。這提示粗度徑級(jí)并不能完全反映飲片質(zhì)量，還需考慮年限因素的影響。

圖3 不同粗度徑級(jí)各年限黃芪飲片黃芪甲苷含量

圖4 不同粗度徑級(jí)各年限黃芪飲片總黃酮含量

生長(zhǎng)年限對(duì)3個(gè)徑級(jí)飲片中8種黃酮單體成分含量均具有極顯著影響（＜0.01，表2）。其中，0.8～1.0 cm徑級(jí)中的8種黃酮單體成分含量在任意2個(gè)年限之間均具有顯著差異（＜0.05）。整體來(lái)看，黃酮苷類成分在高年限粗徑級(jí)飲片中有較高含量，而黃酮苷元在高年限細(xì)徑級(jí)飲片中含量較高。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，相較于粗徑級(jí)的低年限黃芪，細(xì)徑級(jí)的高年限黃芪中可能含有更多的黃酮苷類成分。如大于1.0 cm粗度徑級(jí)的4年生黃芪中總黃酮苷含量不及0.5～0.8 cm粗度徑級(jí)的6年生黃芪。以上分析表明，粗徑級(jí)飲片質(zhì)量并不一定優(yōu)于細(xì)徑級(jí)飲片，飲片質(zhì)量還受到生長(zhǎng)年限的影響，且不同成分受年限、徑級(jí)的影響情況有所差異。

2.6 生長(zhǎng)年限和粗度徑級(jí)對(duì)黃芪飲片質(zhì)量的影響分析

對(duì)黃酮類成分和黃芪甲苷含量進(jìn)行生長(zhǎng)年限（因素A）和粗度徑級(jí)（因素B）的雙因素方差分析，結(jié)果表明二者及其交互作用均具有極顯著影響（＜0.01），且均為影響成分含量的大效應(yīng)量（表3）。各類成分偏（Eta）2的相對(duì)大小表明，年限因素對(duì)黃酮類成分含量的影響程度大于粗度徑級(jí)；而對(duì)于黃芪甲苷則相反，粗度徑級(jí)的影響程度大于年限因素。這可能是因?yàn)辄S芪中黃酮類成分在木質(zhì)部、韌皮部和表皮分布較為平均，故含量受粗度徑級(jí)影響較?。欢S芪甲苷主要集中分布在表皮，故含量受粗度徑級(jí)影響較大[5]。這提示在進(jìn)行黃芪飲片等級(jí)劃分時(shí)，應(yīng)綜合考慮生長(zhǎng)年限和粗度徑級(jí)2大因素；且針對(duì)不同的成分，考慮的側(cè)重點(diǎn)應(yīng)有所差別。

3 討論

按照現(xiàn)有的商品規(guī)格等級(jí)劃分標(biāo)準(zhǔn)，根及根莖類藥材粗度越大等級(jí)越高，價(jià)格也越昂貴。但本文研究結(jié)果顯示，不同生長(zhǎng)年限黃芪可產(chǎn)出相同粗度的根段，這在飲片市場(chǎng)上將會(huì)作為同樣等級(jí)的商品出售。而生長(zhǎng)年限會(huì)影響飲片的藥效成分含量，相同粗度不同年限的黃芪商品中有效成分含量存在顯著性差異。單按粗度進(jìn)行商品等級(jí)劃分，勢(shì)必掩蓋年限因素的影響，削弱等級(jí)與飲片質(zhì)量的相關(guān)性，高等級(jí)飲片中不一定含有更多的藥效成分。這就提示了在進(jìn)行飲片商品等級(jí)劃分時(shí)，僅考慮粗度而不考慮年限是不合理的。應(yīng)當(dāng)在考慮生長(zhǎng)年限的前提下，再根據(jù)粗度進(jìn)行相應(yīng)的劃分。

本研究樣品均采自陜西省子洲縣，所得的部分研究結(jié)果已有文獻(xiàn)證實(shí)。如總黃酮在較粗黃芪中含量較高，而黃芪甲苷在較細(xì)黃芪中有較高含量[4]。但因尚未見同時(shí)分析年限、粗度徑級(jí)兩因素對(duì)黃芪飲片質(zhì)量影響的報(bào)道，故后續(xù)可擴(kuò)大樣品采集范圍，對(duì)二者的交互作用之于其他產(chǎn)地黃芪質(zhì)量的影響情況進(jìn)行考察，對(duì)本研究所得結(jié)論做進(jìn)一步的驗(yàn)證。

表2 不同粗度徑級(jí)各年限黃芪飲片8種黃酮類成分含量(, n = 3)

不同小寫字母表示處理間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）

Different lower case letters indicate< 0.05

表3 生長(zhǎng)年限和粗度徑級(jí)對(duì)黃芪飲片成分含量影響方差分析

黃芪中化學(xué)成分種類眾多，不同成分隨著藥材年限增長(zhǎng)的積累規(guī)律以及在各粗度部位的含量分布情況均存在差異。已有報(bào)道表明，皂苷類、黃酮類為黃芪中主要藥效成分，其中皂苷類成分具有利水消腫、活血等功效，表現(xiàn)為調(diào)節(jié)水通道蛋白、強(qiáng)心、抗纖維化等藥理活性[13-14]；黃酮類成分具有補(bǔ)氣固表、止渴等功效，表現(xiàn)為增強(qiáng)免疫、改善物質(zhì)代謝、調(diào)節(jié)血糖等藥理活性[15-16]。且有研究表明[17]，糖苷的引入會(huì)影響分子的極性，造成黃酮苷和苷元之間藥理活性的差異，如黃酮苷的抗氧化能力小于對(duì)應(yīng)的苷元。本研究還發(fā)現(xiàn)，高年限黃芪上端中心出現(xiàn)腐爛現(xiàn)象，飲片質(zhì)量受到了較大影響，如6年生黃芪中大于1.0 cm粗度徑級(jí)的總黃酮含量較之0.8～1.0 cm粗度徑級(jí)有所下降。此外，黃芪甲苷在細(xì)徑級(jí)飲片中有較高含量，而低年限黃芪出產(chǎn)細(xì)徑級(jí)飲片的比率更高。這表明黃芪并不是年限越長(zhǎng)質(zhì)量就一定越好，應(yīng)根據(jù)黃芪的精準(zhǔn)用途對(duì)其生長(zhǎng)年限進(jìn)行明確規(guī)定，這也為精準(zhǔn)飲片的生產(chǎn)提供了理論指導(dǎo)。

本研究結(jié)果還提示在進(jìn)行飲片質(zhì)量評(píng)價(jià)時(shí)，不應(yīng)簡(jiǎn)單地用“優(yōu)質(zhì)”和“不優(yōu)質(zhì)”來(lái)一概而論。要想在中藥制藥和臨床使用中科學(xué)應(yīng)用黃芪飲片，應(yīng)基于臨床藥效需求選擇適宜年限和粗度徑級(jí)的黃芪，從而實(shí)現(xiàn)更為精準(zhǔn)的臨床療效。同時(shí)也提示中藥飲片質(zhì)量等級(jí)可以根據(jù)精準(zhǔn)用途科學(xué)劃分，這對(duì)于推動(dòng)中藥制藥工業(yè)精準(zhǔn)化，實(shí)現(xiàn)最佳的臨床療效具有重要的借鑒意義。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Effects of growth year, thickness and diameter class on content of active compounds ofdecoction pieces

ZHAO Jiang-yi1, TIAN Wen-cang2, FENG Zi-wei3, PENG Bo-yang4, TANG Jin-cheng1, ZHANG Yuan1, 5, LIU Feng-bo1, 5, ZHAO Ting1, 5, WEI Sheng-li1, 5

1. School of Chinese Materia Medica, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 102488, China 2. Beijing Tongrentang Health Pharmaceutical (Ningxia) Co., Ltd., Ningxia 750021, China 3. Lunan Pharmaceutical Shandong New Era Pharmaceutical Co., Ltd., Shandong 273400, China 4. China National Traditional Chinese Medicine Co., Ltd., Beijing 100089, China 5. Engineering Research Center of Good Agricultural Practice for Chinese Crude Drugs of Ministry of Education, Beijing 100102, China

To compare the weight proportion and active component content ofof different thickness and diameters with different growth years, so as to provided a theoretical basis for scientific classification of quality grades of Huangqi () decoction pieces.The 46-year old imitating wildwere selected as the research material. Before measurement, they were divided into three parts according to the diameter: 0.5—0.8 cm (excluding 0.8 cm), 0.8—1.0 cm and＞1.0 cm. The weight proportion and active component content ofdecoction pieces of different thickness and diameters with different growth years were measured.The growth years had a very significant effect on the quality proportion ofdecoction pieces with different thickness and diameters (< 0.01). The weight proportion of the thickness of 0.5—0.8 cm was the highest in four-year-old, while the weight proportion of the thickness of more than 1.0 cm was the highest in six-year-old ones. The content of flavonoids and saponins indecoction pieces was significantly affected by growth years, thickness and diameter class and their interaction (< 0.01). The content of flavonoids was more affected by growth years than thickness and diameters, and it was the highest in 0.8—1.0 cm thick parts of six-year-olddecoction pieces. The content of saponins was more affected by thickness and diameters than growth years, and it was the highest in 0.5—0.8 cm thick parts of five-year-olddecoction pieces.Both the growth years and the thickness and diameters will affect the content of the active components of. When classifying the quality grades ofdecoction pieces, we should pay special attention to the influence of growth years while taking the thickness and diameters into account.

decoction pieces;(Fisch.) Bge.var.(Bge.) Hsiao; growth year; thicknessand diameter class; astragaloside IV; component content

R286.2

A

0253 - 2670(2023)20 - 6819 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.20.025

2023-02-03

寧夏回族自治區(qū)科學(xué)技術(shù)廳重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃（2020BBF02005）

趙江怡（1999—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴庂|(zhì)量評(píng)價(jià)。E-mail: jpzjy46@126.com

通信作者：魏勝利（1974—），博士，教授，從事中藥資源定向培育及中藥資源綜合開發(fā)研究。E-mail: wsl7491@126.com

趙 婷（1980—），博士，講師，從事中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。E-mail: 19053181@qq.com

[責(zé)任編輯 時(shí)圣明]