液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢驗(yàn)氟乙酸致死1 例

宋愛(ài)英，趙翌博，楊利君

甘肅政法大學(xué)司法警察學(xué)院（公安分院），甘肅 蘭州 730071

1 案 例

1.1 簡(jiǎn)要案情

某年11 月，李甲（男，5 歲）和李乙（男，3 個(gè)月）被母親張某殺害。經(jīng)調(diào)查，嫌疑人張某患有嚴(yán)重的產(chǎn)后抑郁癥，將購(gòu)買的“溴鼠靈”（玫紅色液體，原裝于黃色藥瓶中）加入瓶裝飲料中，騙其子李甲喝下，并用被子捂住其子李乙的口鼻。事后張某服用“溴鼠靈”，出現(xiàn)嚴(yán)重的嘔吐癥狀。3 人被家人發(fā)現(xiàn)后送醫(yī)院搶救，李甲和李乙送到醫(yī)院時(shí)均已死亡，張某經(jīng)搶救后病情穩(wěn)定。

提取李甲和李乙的心血、胃內(nèi)容物，張某的嘔吐物、洗胃液、靜脈血，以及現(xiàn)場(chǎng)的黃色藥瓶和飲料瓶?jī)?nèi)液體，進(jìn)行毒（藥）物檢驗(yàn)。

1.2 毒（藥）物檢驗(yàn)

采用《法庭科學(xué) 230 種藥（毒）物液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜篩查方法》（GA/T 1530—2018）對(duì)常見(jiàn)農(nóng)藥、鎮(zhèn)靜催眠藥和生物堿進(jìn)行檢驗(yàn)，采用《生物樣品中氰離子的氣相色譜法和化學(xué)檢驗(yàn)方法》（GA/T 930—2011）對(duì)氰根離子進(jìn)行檢驗(yàn)，采用《血液、尿液中毒鼠強(qiáng)的測(cè)定氣相色譜法》（SF/Z JD0107003—2010）對(duì)毒鼠強(qiáng)進(jìn)行檢驗(yàn)。

1.2.1 主要儀器

UltiMate 3000 HPLC系統(tǒng)、TSQ AltisTM三重四極桿質(zhì)譜儀（美國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司），AllegraTMX-22R 臺(tái)式冷凍離心機(jī)（美國(guó)Beckman Coulter公司），Arium?Comfort 組合式水系統(tǒng)（德國(guó)Sartorius 公司）。

1.2.2 樣品前處理

分別取血液、洗胃液、胃內(nèi)容物、嘔吐物0.2 mL（或0.2 g）置于15 mL 離心管中，加入乙腈0.4 mL，振蕩10 min，離心后取上清液，經(jīng)兩相微孔濾膜過(guò)濾后作為檢材樣品提取液供儀器檢測(cè)。如果毒（藥）物濃度過(guò)高，可用初始流動(dòng)相溶液稀釋100 倍后再進(jìn)樣。黃色藥瓶和飲料瓶?jī)?nèi)的液體直接用初始流動(dòng)相處理，離心后取上清液，經(jīng)兩相微孔濾膜過(guò)濾后供儀器檢測(cè)。

1.2.3 色譜條件

CORTECS HILIC色譜柱（2.1 mm×100 mm，1.6 μm；美國(guó)Waters 公司），流速0.3 mL/min，柱溫35 ℃，進(jìn)樣量1 μL。流動(dòng)相A 為乙腈，流動(dòng)相B 為10 mmol/L乙酸銨溶液。梯度洗脫程序?yàn)椋?～2.0 min 2%B，2.0～2.2 min 2%B～50%B，2.2～5.5 min 50%B，5.5～6.0 min 50%B～2%B，6.0～12.0 min 2%B?？傔M(jìn)樣時(shí)間12.0 min。

1.2.4 質(zhì)譜條件

采用電噴霧離子源（electrospray ionization，ESI），在負(fù)離子模式下選用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（multiple reaction monitoring，MRM）的質(zhì)譜掃描方式進(jìn)行測(cè)定，電噴霧電壓3 800 V，離子管傳輸溫度325 ℃，干燥氣為氮?dú)猓瑴囟葹?50 ℃，碰撞氣為氬氣，壓力為0.2 Pa，鞘氣流速40 L/min，輔助氣流速10 L/min，尾吹氣流速0.3 L/min。氟乙酸的定性離子對(duì)為77/33.2、77/57.1，碰撞電壓為-13 V、-11 V，去簇電壓為-55 V。

1.2.5 檢驗(yàn)結(jié)果

李甲的心血、胃內(nèi)容物，張某的嘔吐物、洗胃液，以及黃色藥瓶和飲料瓶中均檢出氟乙酸（圖1～3），未檢出其他常見(jiàn)農(nóng)藥、鎮(zhèn)靜催眠藥、生物堿以及氰根離子、毒鼠強(qiáng)等毒（藥）物成分。李乙的心血、胃內(nèi)容物和張某的靜脈血中均未檢出氟乙酸和常見(jiàn)農(nóng)藥、鎮(zhèn)靜催眠藥、生物堿以及氰根離子、毒鼠強(qiáng)等毒（藥）物成分。

圖1 空白血液樣本的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)色譜圖Fig.1 MRM chromatogram of the blank blood sample

圖2 李甲心血樣本的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)色譜圖Fig.2 MRM chromatogram of LI Jia’s heart blood sample

圖3 飲料瓶?jī)?nèi)液體的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)色譜圖Fig.3 MRM chromatogram of the liquid in beverage bottle

2 討論

氟乙酰胺類鼠藥屬于有機(jī)氟類殺鼠劑，由于其毒性極大、見(jiàn)效快、致死率高，極易引起群體性中毒[1-3]。我國(guó)已明令禁止生產(chǎn)和使用氟乙酰胺類農(nóng)藥[4]，但由于其生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單、價(jià)格低廉、殺鼠效果顯著，在民間仍有銷售、使用氟乙酰胺類殺鼠藥的現(xiàn)象，因使用不當(dāng)而誤食、服毒自殺以及投毒引起人畜中毒的案（事）件時(shí)有發(fā)生[5-6]。

氟乙酰胺類鼠藥含有氟乙酸、氟乙酰胺、氟乙酸鈉（又名氟醋酸鈉、“1080”）等一種或多種成分。氟乙酸鈉可在酸性條件下轉(zhuǎn)化為氟乙酸，氟乙酰胺、氟乙酸鈉亦可以在生物體內(nèi)代謝產(chǎn)生氟乙酸[7]，因此，檢驗(yàn)此類鼠藥時(shí)主要檢驗(yàn)氟乙酸成分[8]。

目前，氟乙酸的檢測(cè)方法主要有離子色譜法（ion chromatography，IC）[9]、高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）[10]、氣相色譜-質(zhì)譜法（gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）[8]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）[11]。IC 和HPLC 容易出現(xiàn)假陽(yáng)性，GC-MS 前處理復(fù)雜、耗時(shí)、檢出限高，容易出現(xiàn)漏檢。本研究前處理時(shí)采用乙腈沉淀蛋白，使用三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行檢驗(yàn)，前處理簡(jiǎn)單（耗時(shí)約10 min，成本低），檢出限為20 ng/mL，與目前使用的公共安全行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法[8，12]相比具有快速、簡(jiǎn)便、高效、靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)，解決了生物檢材中氟乙酸難以檢出的技術(shù)難題。

根據(jù)調(diào)查和實(shí)驗(yàn)結(jié)果，本例案件事實(shí)如下：（1）張某獨(dú)自照顧2 個(gè)孩子（其中李乙剛滿3 個(gè)月），出現(xiàn)抑郁、煩躁、焦慮等情緒，同時(shí)繁重的家務(wù)勞動(dòng)使其患了嚴(yán)重的產(chǎn)后抑郁癥，造成殺害2 個(gè)孩子后自殺未遂的嚴(yán)重后果。（2）李甲的心血、胃內(nèi)容物以及黃色藥瓶和飲料瓶中均檢出氟乙酸，但未檢出溴鼠靈，說(shuō)明標(biāo)有“溴鼠靈”的黃色藥瓶中盛裝的應(yīng)該是氟乙酸。該檢驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了張某把黃色藥瓶中的玫紅色液體殺鼠藥故意加入瓶裝飲料中，并哄騙李甲飲用后致其死亡的事實(shí)，與張某的供述一致。（3）李乙的心血和胃內(nèi)容物中均未檢出氟乙酸，結(jié)合案情調(diào)查結(jié)果，證實(shí)李乙未服用殺鼠藥，而是因窒息死亡。（4）張某的嘔吐物和洗胃液中均檢出氟乙酸，說(shuō)明張某服用了黃色藥瓶中的殺鼠藥，但其靜脈血中未檢出氟乙酸，可能因張某服用殺鼠藥后很快出現(xiàn)嘔吐，并且搶救及時(shí)，導(dǎo)致其血液中氟乙酸含量很低，未達(dá)到本方法的檢出限，這與張某癥狀不明顯且得到及時(shí)搶救的事實(shí)一致。

由于氟乙酸有劇毒，服用較小劑量就能引起嚴(yán)重的后果，經(jīng)過(guò)搶救或代謝后在血液和尿液中的含量更低，容易出現(xiàn)漏檢。因此，在氟乙酸中毒死亡案件的檢驗(yàn)中，不能只提取血液和尿液，還應(yīng)提取藥瓶、飲料瓶、嘔吐物、洗胃液等作為毒物檢驗(yàn)的樣品。