HPLC-MS/MS法測定豬肉中噻蟲胺殘留量的不確定度評定

陳琳涵，陳慧冰

（廣州南沙明曦檢測服務(wù)有限公司，廣東廣州 511400）

噻蟲胺是高效、高選擇性的新煙堿類殺蟲劑，主要用于水稻、蔬菜、水果等作物的害蟲防治[1-2]。目前，分析噻蟲胺的檢測方法主要有液相色譜法[3]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[4]和氣質(zhì)聯(lián)用法[5]等，研究對象包括植物源性樣品基質(zhì)和動物源性樣品基質(zhì)。我國GB 2763—2021中規(guī)定噻蟲胺在谷物和蔬菜等植物源性食品中的最大殘留限量在0.01～10.00 mg·kg-1，在肉、蛋、乳等動物源性食品中的最大殘留限量在0.01～0.20 mg·kg-1。目前，對豬肉中噻蟲胺殘留的不確定度分析鮮有報道。因此，本文采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定豬肉中的噻蟲胺，參照現(xiàn)行不確定度分析方法及要求，對其結(jié)果進行不確定度評估計算，找出影響檢測結(jié)果的主要因素，為保證檢測結(jié)果的準確性提供理論依據(jù)[6-8]。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

市售豬肉；噻蟲胺標準品（農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護科研監(jiān)測所，100 μg·mL-1，擴展不確定度為0.12 μg·mL-1）；乙腈、甲醇（默克公司，色譜級）；乙腈、無水硫酸鎂、氯化鈉（分析純）。

1.2 儀器與設(shè)備

1290-6460液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀及色譜柱InfinityLab Poroshell 120 EC-C18（100 mm×2.1 mm，2.7 μm）（安捷倫公司）；Centrifuge 5810 R冷凍離心機（艾本德公司）；N-EVAP 32氮吹儀（Organomation公司）；JJ500電子天平（雙杰公司）。

1.3 實驗方法

1.3.1 標準溶液的配制

（1）噻蟲胺標準中間液的配制。用1 mL移液管移取1.00 mL噻蟲胺標準儲備液至50 mL容量瓶中，加乙腈定容至刻度，得到噻蟲胺標準中間液的濃度為2 mg·L-1。

（2）噻蟲胺標準系列溶液的配制。分別移取不同體積的噻蟲胺標準中間液至100 mL容量瓶中，加乙腈定容至刻度，得到濃度為0.000 5 mg·L-1、0.001 0 mg·L-1、0.002 0 mg·L-1、0.005 0 mg·L-1、0.010 0 mg·L-1、0.020 0 mg·L-1、0.050 0 mg·L-1和0.100 0 mg·L-1的系列標準工作溶液。

1.3.2 樣品前處理

準確稱取5.00 g試樣于50 mL離心管中，加入3 g無水硫酸鈉，混勻，加入10 mL乙酸-乙腈溶液、10 mL正己烷，均質(zhì)3 min，4 000 r·min-1離心10 min，提取液全部移至分液漏斗中，手搖1 min后靜置分層，收集乙腈層，按同樣操作重復(fù)提取一次。用10 mL乙腈洗滌正己烷層，手搖1 min后靜置分層，收集乙腈層。合并3次收集的乙腈層，在40℃下旋蒸至近干，用乙酸-乙腈溶液定容到20 mL，取1.0 mL加適量分散固相萃取劑凈化，劇烈振搖1 min，4 000 r·min-1離心10 min，取上清液用0.22 μm濾膜過濾，測定。

1.3.3 儀器條件

（1）色譜條件。色譜柱：InfinityLab Poroshell 120 EC-C18（100 mm×2.1 mm，2.7 μm）；柱溫：40 ℃；進樣量：2 μL；流動相A：5 mmol·L-1乙酸銨水溶液（含0.1%甲酸）；流動相B：甲醇；流速：0.3 mL·min-1；洗脫條件見表1。

表1 洗脫條件

（2）質(zhì)譜條件。電噴霧離子源：ESI+；干燥氣溫度：250 ℃；干燥氣流量：7 L·min-1；霧化氣壓力：30 psi；鞘氣溫度：350 ℃；鞘氣流量：11 L·min-1；毛細管電壓：4 500 V；監(jiān)測模式：多反應(yīng)監(jiān)測，母離子為250.2，監(jiān)測離子對為169.1/132；碎裂電壓：80 V；碰撞電壓：10/15 V。

2 結(jié)果與分析

2.1 數(shù)學(xué)模型

噻蟲胺藥物含量計算公式為

式中：X為樣品中噻蟲胺的含量，mg·kg-1；C為樣品溶液中噻蟲胺的濃度，mg·L-1；V為樣品定容體積，mL；m為稱樣質(zhì)量，g。

2.2 不確定度來源分析

根據(jù)樣品檢測的藥物含量計算公式，得到不確定度來源，見圖1。

圖1 豬肉樣品中噻蟲胺測定的不確定度來源

2.3 不確定度分量計算

2.3.1 試樣溶液重復(fù)性測定引入的不確定度urel(A)

預(yù)評估時，在統(tǒng)計控制狀態(tài)下，按照GB 23200.39—2016進行測量，對處理好的樣品獨立測量7次，樣品含量平均值為0.003 59 mg·kg-1，單次測量標準偏差為

實際測量時將在重復(fù)性試驗條件下獨立測定樣品2次（2個平行樣）的平均值作為檢測結(jié)果，平行測定的結(jié)果為0.020 44 mg·kg-1和0.019 74 mg·kg-1，平均值為0.020 1 mg·kg-1，因此測量重復(fù)性引入的標準不確定度為

測量重復(fù)性引入的相對標準不確定度為

2.3.2 稱量樣品質(zhì)量時電子天平引入的不確定度urel(B1)

稱量使用的電子分析天平（精度為0.01 g），查電子天平檢定證書，U=0.02 g，k=2，因此單次稱量標準不確定度為u1==0.01 g。樣品稱量m=5.00 g，因此相對標準不確定度為urel=×100%=0.200%。由于稱量時采用差減法，一次作為空盤，另一次作為稱重，每一次稱重均為獨立的觀測結(jié)果，互不相關(guān)，由此得到稱量樣品質(zhì)量時電子天平引入的合成相對標準不確定度為

2.3.3 標準物質(zhì)濃度引入的不確定度urel(B2)

根據(jù)標準物質(zhì)證書提供的信息，噻蟲胺標準物質(zhì)的擴展不確定度為0.12 μg·mL-1，k=2，標準值為100 μg·mL-1，則標準物質(zhì)濃度引入的相對擴展不確定度為

相對標準不確定度為

2.3.4 標準溶液配制引入的不確定度urel(B3)

（1）移取1 mL噻蟲胺標準儲備液引入的不確定度urel(V1)。該步驟使用的是經(jīng)檢定合格的1 mL A類分度吸量管，經(jīng)查檢定證書，U=0.003 5 mL，k=2，因此單次移取溶液的標準不確定度為

移取1 mL液體引入的相對標準不確定度為

（2）噻蟲胺中間液定容50 mL體積引入的不確定度urel(V2)。該步驟使用的是經(jīng)檢定合格的50 mL A類單標線容量瓶，經(jīng)查檢定證書，U=0.030 mL，k=2，因此容量瓶引入的標準不確定度為

50 mL容量瓶引入的相對標準不確定度為

（3）移取0.5 mL噻蟲胺中間液引入的不確定度urel(V3)。該步驟使用的是經(jīng)檢定合格的0.5 mL A類分度吸量管，經(jīng)查檢定證書，U=0.002 5 mL，k=2，因此單次移取溶液引入的標準不確定度為

移取0.5 mL液體引入的相對標準不確度為

（4）噻蟲胺上機液定容至100 mL引入的不確定度urel(V4)。該步驟使用的是經(jīng)檢定合格的100 mL A類單標線容量瓶，經(jīng)查檢定證書，U=0.050 mL，k=2，因此容量瓶引入的標準不確定度為

100 mL容量瓶引入的相對標準不確定度為

故標準溶液配制引入的相對標準不確定度為

2.3.5 試樣溶液制備引入的相對不確定度urel(B4)

移取提取溶液20 mL使用的是經(jīng)檢定合格的20 mL A類分度吸量管，經(jīng)查檢定證書，U=0.050 mL，k=2，因此單次移取的標準不確定度為

移取1 mL液體引入的相對標準不確定度為

故試樣溶液制備引入的相對不確定度為

2.3.6 標準物質(zhì)校準曲線引入的不確定度urel(B5)

對系列標準工作溶液分別進行1次測定，峰面積響應(yīng)值分別為862、1 757、3 057、6 537、14 765、28 284、68 697和143 851。以溶液濃度為橫坐標（x），峰面積響應(yīng)值為縱坐標（y）進行曲線擬合，得到校正曲線方程為y=1 412.895 693x+184.983 460，R2=0.999 130 34。校準曲線引入的標準不確定度為

式中：SR為殘差標準差，SR=0.674 7；b為回歸方程中的斜率，b=184.983 460；P為樣品測定次數(shù)，P=7；n為擬合工作曲線時的測定次數(shù)，n=1；C為預(yù)評估時由線性方程計算所得濃度，C=0.000 897 mg·L-1；Ci為標準工作溶液濃度，mg·L-1；為標準工作溶液濃度的平均值，mg·L-1。

經(jīng)計算，樣品測定引入的標準不確定度u(B5)為0.000 024 7 mg·L-1，因此校準曲線引入的相對標準不確定度為

2.4 合成標準不確定度

測定噻蟲胺含量的相對合成不確定度為

合成標準不確定度u=X×ucrel=0.020 1×3.05%=0.000 61 mg·kg-1，擴展不確定度為U=k×u=2×0.000 61=0.001 2 mg·kg-1，試樣中噻蟲胺含量的檢測結(jié)果報告為X=（0.020 1±0.001 2）mg·kg-1，k=2。

3 結(jié)論

通過對豬肉中噻蟲胺殘留量測定過程進行不確定度分析，得出試樣中噻蟲胺含量的檢測結(jié)果為（0.020 1±0.001 2）mg·kg-1，k=2。在各不確定度分量中，標準曲線擬合對噻蟲胺含量測定的不確定度影響較大。實驗室要加強檢測人員培訓(xùn)，提高檢測人員的技術(shù)水平，在樣品處理和檢測過程中，嚴格按照標準方法進行操作，定期維護儀器，保證儀器的穩(wěn)定性，減少檢測過程中的不確定度。