LC-MS/MS 法測定食品接觸材料中12 種N-亞硝胺遷移量的不確定度分析★

周 雷，魏小春，陳海園

（1.溫州方圓檢驗(yàn)認(rèn)證有限公司，浙江 溫州 325007；2.溫州市質(zhì)量技術(shù)檢測科學(xué)研究院，浙江 溫州 325007）

0 引言

我國食品接觸材料新國標(biāo)將食品接觸材料分為9 大類[1]。其中食品接觸用橡膠材料因耐腐蝕、高彈性、對流體滲透性低等優(yōu)點(diǎn)，常被應(yīng)用于嬰兒用牙膠，碗勺和奶嘴等，但由于使用加工助劑等原因，會(huì)使有毒有害的物質(zhì)從橡膠材料中遷移到食品中，如亞硝胺等[2]。

N-亞硝胺是含有-N-N=O 官能團(tuán)的物質(zhì)，引發(fā)多種類動(dòng)物不同器官的腫瘤[2]。對于其測定的檢測手段有薄層層析法、紫外光譜法、熱能分析法、質(zhì)譜法等[3-5]，其中LC-MS/MS 法是以液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀為檢測儀器，該方法前處理簡便、可行性高、回收率好，避免了N-亞硝胺因有機(jī)溶劑洗脫及濃縮造成的損失，也避免了出現(xiàn)假陽性的結(jié)果。因此，對該方法的測定量不確定度進(jìn)行評定來驗(yàn)證檢測結(jié)果的可信度，是非常有必要的。

1 材料與方法

材料為橡膠奶嘴。

前處理采用人工模擬唾液[6]，將N-亞硝胺遷移到含亞硝酸鹽的人工唾液鹽溶液中，測試溶液中的N-亞硝胺含量。

主要儀器采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀；試劑為甲醇、甲酸、超純水；標(biāo)準(zhǔn)品為12 種N-亞硝胺混標(biāo)，以甲醇作溶劑配制工作曲線。

前處理方法及儀器條件依據(jù)文獻(xiàn)[7]中的規(guī)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 模型

測定奶嘴中中亞硝胺含量的模型公式見式（1）：

式中：A 為亞硝胺含量，mg/kg；C 為由標(biāo)準(zhǔn)工作曲線所得的試樣溶液中亞硝胺的質(zhì)量濃度，μg/L；V 為定容體積，mL；m 為樣品質(zhì)量，g。

2.2 不確定度來源分析

分析試驗(yàn)過程和數(shù)學(xué)模型，不確定度來源如下[8]：稱重；標(biāo)準(zhǔn)溶液純度；配制標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液；配制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線；試液定容體積；樣品重復(fù)測定；擬合工作曲線。

2.3 測定結(jié)果不確定度分量的評定

2.3.1 樣品稱量

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液實(shí)驗(yàn)使用的N-亞硝胺各物質(zhì)濃度為100 mg/L。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液檢測證書，其不確定度urel(2)見表1。

表1 各分量相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度

2.3.3 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液

標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋得到標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。以1 mL 移液器[10]移取1.000 mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液至10 mL 單標(biāo)容量瓶[11]中，以甲醇定容，得到10.0 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液1。從標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1 中，以100 μL 移液器移取100 μL至10 mL 單標(biāo)容量瓶中，再以甲醇定容至10 mL，得到100 ng/mL 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液2。則配制過程中產(chǎn)生的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量μrel(3)為：

2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液曲線

將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液2 進(jìn)行稀釋，配置成標(biāo)準(zhǔn)工作溶液曲線，使用時(shí)將混標(biāo)工作溶液用甲醇稀釋，制作質(zhì)量濃度為1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 μg/L 的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。按照移液器檢定規(guī)程，按照均勻分布處理配制過程中產(chǎn)生的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：urel(4.1)=0.017 40；urel(4.2)=0.015 63；urel(4.3)=0.014 23；urel(4.4)=0.014 23；urel(4.5)=0.015 36。

2.3.5 試液定容體積

以100 mL 量筒移取50 mL 的模擬唾液，試液定容過程中引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度

2.3.6 測量重復(fù)性

由于樣品中未檢出N-亞硝胺的遷移量，故對樣品進(jìn)行加標(biāo)后重復(fù)性測試7 次。采用貝塞爾（Bessel）公式，見式（2）：

具體結(jié)果見表1。

2.3.7 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線擬合

配制濃度為1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液1～5，進(jìn)行上機(jī)測試。

由校準(zhǔn)曲線擬合產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)不確定度可由式（3）表示：

其中，s 計(jì)算公式見（4）：

由校準(zhǔn)曲線擬合產(chǎn)生的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度可由式（5）表示：

12 種亞硝胺物質(zhì)相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(7)見表1。

2.4 合成不確定度的計(jì)算

12 種亞硝胺物質(zhì)合成相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度按照式（6）進(jìn)行計(jì)算：

樣品中亞硝胺物質(zhì)含量A 的計(jì)算公式見式（7）：

式中：A1為試樣溶液中亞硝胺的質(zhì)量濃度，μg/L。

合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算公式見式（8）：

當(dāng)置信度為95%，置信因子k=2，擴(kuò)展不確定度計(jì)算為式（9）：

具體結(jié)果見表2。

表2 12 種亞硝胺不確定度計(jì)算結(jié)果

3 結(jié)語

合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度的來源依次為：工作曲線的擬合、標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制、樣品重復(fù)性測量以及標(biāo)準(zhǔn)溶液的純度、標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制、移液和定容以及因稱量產(chǎn)生的不確定度，其中工作曲線的擬合、標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制、樣品重復(fù)性測量以及標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的純度是不確定度的主要來源，影響最小的是因稱量產(chǎn)生的不確定度，可以忽略不計(jì)。