雜交構樹葉對產(chǎn)蛋初期大午金鳳蛋雞生產(chǎn)性能、腸組織形態(tài)和消化酶活性及其血清抗氧化和生化指標的影響

■ 魏攀鵬 閆靈敏 蔣兵兵 李 曉 曾煥青 屈 偉 梁 博 王品勝*

（1.河南省高新技術實業(yè)有限公司，河南省構樹產(chǎn)業(yè)工程技術研究中心，河南鄭州 450002；2.河南省科學院，河南鄭州 450002；3.河南省納普生物技術有限公司，河南鄭州 450002）

現(xiàn)階段，我國畜牧行業(yè)中傳統(tǒng)玉米-豆粕型飼料原料，特別是蛋白質(zhì)飼料資源極為短缺[1-2]，且國辦發(fā)[2020]31 號《關于促進畜牧業(yè)高質(zhì)量發(fā)展的意見》中指出“調(diào)整優(yōu)化飼料配方結(jié)構，促進玉米、豆粕減量替代。因地制宜推行糧改飼，開發(fā)利用雜交構樹、飼料桑等新飼草資源。加快生物飼料開發(fā)應用，研發(fā)推廣新型安全高效飼料添加劑”[1]。因此，有效利用并開發(fā)新的蛋白質(zhì)飼料資源對促進畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展意義重大、迫在眉睫。構樹（Broussonetiapapyrifera）亦稱皮樹、楮樹、漿樹、鹿仔樹、沙紙樹、構桃樹或惡樹等，野生構樹具有分布廣、耐鹽堿貧瘠、耐干冷濕熱、生命力頑強、種子易傳播萌發(fā)、根系發(fā)達和生長旺盛等優(yōu)點[2-3]。經(jīng)過中國科學院植物研究所沈世華研究員科研團隊數(shù)十年的太空搭載和雜交選育等手段成功培育出的“中科1 號101”雜交構樹在野生構樹的優(yōu)點上獨具產(chǎn)量高、耐多次采伐、易于機械收割的特點[4-6]。2015 年雜交構樹產(chǎn)業(yè)已被列入我國十大扶貧工程之一[5]。富含7種畜禽必需氨基酸、粗蛋白含量高達26%的“中科1 號101”雜交構樹全葉加工制成粉后可作為優(yōu)質(zhì)的畜禽飼料原料，且其粗蛋白、粗脂肪、鈣、磷、中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維含量分別為17.78%～26.47%、1.58%～5.31%、2.23%～3.64%、0.30%～0.61%、25.48%～39.51%、17.07%～26.13%[7]。自古以來，我國先人就有用構樹葉圈飼畜禽的養(yǎng)殖習慣。近年來將構樹葉直接或間接作為非常規(guī)蛋白質(zhì)飼料原料在雄性馬崗鵝、產(chǎn)蛋皖西白鵝、三黃雛雞、海蘭灰雛雞、AA肉雞、良鳳花肉雞、產(chǎn)蛋后期海蘭褐蛋種雞這些家禽的（生長發(fā)育、屠宰等）生產(chǎn)性能（產(chǎn)蛋重、產(chǎn)蛋率等）繁殖性能、（十二指腸、盲腸等）腸黏膜形態(tài)、腸內(nèi)容物中消化酶及其營養(yǎng)代謝、血清免疫及抗氧化指標的研究表明，構樹葉作為添加劑應用在禽類飼糧中是大有裨益、切實可行的[8-13]。大午金鳳蛋雞是我國自主培育的具有生產(chǎn)性能高、適應性強、綜合效益高等諸多優(yōu)點的高產(chǎn)紅羽粉殼蛋雞[14]。因此，本研究通過不同比例雜交構樹葉替代產(chǎn)蛋早期蛋雞基礎飼糧中部分玉米豆粕展開飼養(yǎng)試驗，闡明雜交構樹葉對產(chǎn)蛋早期大午金鳳蛋雞生產(chǎn)性能、腸道形態(tài)和消化酶及其血清抗氧化和生化指標的影響，以期為雜交構樹葉作為飼料添加劑在高產(chǎn)品種蛋雞產(chǎn)蛋初期中的合理應用提供強有力的數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗材料和試驗動物

雜交構樹全葉：采自河南省科學院構樹產(chǎn)業(yè)工程技術研究中心蘭考試驗示范基地（以下簡稱：省科學院構樹基地）種植區(qū)1～2年生、株高長至140 cm的夏季雜交構樹中科1 號101，經(jīng)葉片除塵、自然風干、加工粉碎、過篩后，測定分析雜交構樹葉的主要營養(yǎng)成分及其主要氨基酸的含量（見表1～表2）。試驗蛋雞：540 只147日齡健康、精神狀態(tài)良好、產(chǎn)蛋率相近、體重1.49～1.50 kg、脛長99.10～99.30 mm的大午金鳳商品代蛋雞。

表1 雜交構樹葉主要營養(yǎng)物質(zhì)含量（風干基礎，%）

表2 雜交構樹葉主要氨基酸含量（風干基礎，%）

1.2 試驗設計

將試驗蛋雞以單因子完全隨機設計的方法分成6 組（每組90 只）：0（對照）組、1.5%組、2.5%組、3.5%組、4.5%組、8.0%組，每組6個重復，每個重復5籠，每籠3 只。6 組蛋雞分別以質(zhì)量占比0、1.5%、2.5%、3.5%、4.5%和8.0%雜交構樹全葉粉替代基礎飼糧中部分玉米和豆粕進行飼喂。預試期7 d，正試期56 d。飼糧組成及營養(yǎng)水平見表3。

1.3 飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗在省科學院構樹基地養(yǎng)殖區(qū)進行，傳統(tǒng)三層全階梯式籠養(yǎng)（每籠容積：長×寬×高=36.0 cm×38.5 cm×37.5 cm]。各組除設置的飼糧不同外，光照、空間方位、均勻分布等其他因素均相同。舍內(nèi)采用自然通風+機械縱向負壓通風模式和人工光照+自然光照方式。舍內(nèi)溫度、濕度、光照、驅(qū)蟲、免疫、消毒程序和投料量均按照河北大午農(nóng)牧集團《大午金鳳商品代標準和飼養(yǎng)管理手冊》執(zhí)行。采用自由采食和飲水，每天07：30、15：00 各喂料1 次（各處理組當天飼糧現(xiàn)用現(xiàn)配）。舍內(nèi)產(chǎn)生的雞糞每天10：00 用自動刮糞機清理1 次。雞群飼喂、健康有無異常、產(chǎn)蛋等相關試驗數(shù)據(jù)由專人負責記錄。

1.4 測定指標及方法

1.4.1 生產(chǎn)性能

以各組的每個重復為單位，在相同條件下準確記錄正試驗期內(nèi)每天的總采食量（TFI）、總死淘數(shù)（即死亡、傷殘?zhí)蕴瓟?shù)，TNOD）和存欄數(shù)（MOLOH），并在每天16：00定時收集雞蛋時詳細統(tǒng)計各組每個重復的總產(chǎn)蛋數(shù)（TEN）、破殼蛋數(shù)（BEN）、畸形蛋數(shù)（即特小、特大、變形、雙黃、軟殼、沙殼蛋數(shù)，EAN）、合格蛋數(shù)（QEN）、總產(chǎn)蛋重量（TPEW）（各組試驗蛋雞在16：00收蛋統(tǒng)計完畢之后再產(chǎn)的蛋計入次日相關統(tǒng)計）。最終根據(jù)各組每個重復的相關試驗記錄計算出各組蛋雞在整個試驗期間的生產(chǎn)性能指標。

料蛋比（F/E）=TFI/TPEW

產(chǎn)蛋率（%）=TEN/正試驗期內(nèi)每天MOLOH 總和×100

平均蛋重（g）=TPEW/TEN

破殼率（%）=BEN/TEN×100

畸形蛋率（%）=EAN/TEN×100

合格蛋率（%）=QEN/TEN×100

死淘率（%）=正試驗期內(nèi)TNOD/正試期第1 天總雞數(shù)×100

1.4.2 腸道組織形態(tài)

在正試期第56 天下午收集雞蛋結(jié)束后，從每個重復中隨機選取5 只蛋雞（即每組30 只），禁食12 h，用負壓靜脈采血針管在翅根靜脈采血5 mL/只（用于血清抗氧化、生化指標測定）后解剖腹腔，截取4.0 cm長的十二指腸，用75%乙醇浸泡消毒后的絨線扎緊腸段的兩端，放入液氮中速凍后再放入-20 ℃冰箱中（用于消化酶活性測定）。

在十二指腸、空腸、回腸和盲腸中段各截取約4 cm 長的腸道樣品，生理鹽水緩慢沖洗腸道內(nèi)容物后，4%多聚甲醛溶液常溫固定24 h。將樣品用濃度梯度逐級遞增的乙醇溶液脫水，二甲苯?jīng)_洗后進行浸蠟包埋，并用石蠟切片機修整至4 μm 厚度制成切片，進行蘇木精-伊紅（H.E.）染色，中性樹膠封固，正置光學顯微鏡觀察腸道形態(tài)結(jié)構。用圖像分析軟件（Case Viewer,CV）測量并記錄絨毛高度（VH）、隱窩深度（CD），計算絨毛高度／隱窩深度（VH/CD），盲腸只測量并記錄其皺襞高度（PH）。

1.4.3 十二指腸消化酶活性

取出低溫保存的十二指腸腸段樣品在室溫下解凍，收集十二指腸食糜并稱重，冰浴條件下以1∶9（質(zhì)量∶體積）加入4 ℃生理鹽水后勻漿30 s，4 ℃、3 000 r/min離心15 min取上清液，用胰蛋白酶試劑盒A080-2（南京建成生物工程研究所有限公司）、糜蛋白酶SKT-1251（北京凱詩源生物科技有限公司）、脂肪酶LPS 試劑盒YT6314（北京伊塔生物科技有限公司）、淀粉酶試劑盒R21842（上海源葉生物科技有限公司）分別測定胰蛋白酶（TPS）、糜蛋白酶（CMT）、脂肪酶（LPS）、淀粉酶（AMS）活性。

1.4.4 血清抗氧化、生化指標

迅速將從翅根靜脈采集的血液樣本在室溫下傾斜靜置凝固后，再將析出的上層液體進行4 ℃、4 000 r/min 離心10 min，取血清至EP 管中做好標號，立即置于-20 ℃冰箱凍存后送至河南農(nóng)業(yè)大學附屬豫農(nóng)動物醫(yī)院委托其對各組試驗蛋雞的血清抗氧化和血清生化指標進行檢測。

血清抗氧化指標：超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、總抗氧能力（T-AOC）。

血清生化指標：總蛋白（TP）、白蛋白（ALB)、球蛋白（GLO）、白球比（A/G）、總膽紅素（TB）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、淀粉酶（AL）、肌酸激酶（CK）、葡萄糖（GLU）、三酰甘油（TG）、鈣（Ca）、無機磷（IP）。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗數(shù)據(jù)先用WPS Office XLS 進行初步匯總整理，再用IBM SPSS Statistics 23.0 軟件進行one-way ANOVA 方差分析，方差齊性檢驗合理，Duncan’s進行多重比較檢驗，以P＜0.01（差異極顯著）、P＜0.05（差異顯著）作為差異顯著性判斷標準，用“平均值”表示試驗數(shù)據(jù)分析結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 雜交構樹葉對產(chǎn)蛋初期蛋雞生產(chǎn)性能的影響

從表4 中可看出，與對照組相比，其余各組的料蛋比、產(chǎn)蛋率、平均蛋重、破殼率、畸形蛋率和合格蛋率均無顯著變化（P＞0.05）。除2.5%組的死淘率與對照組相比無顯著差異（P＞0.05）外，其他各處理組的死淘率均為0，且極顯著低于對照組（P＜0.01）。

2.2 雜交構樹葉對產(chǎn)蛋初期蛋雞腸組織形態(tài)的影響

從表5 中可看出，在十二指腸中，當雜交構樹葉添加量≥2.5%時，能提高蛋雞產(chǎn)初期十二指腸的VH，其中2.5%、4.5%、8.0%組極顯著高于對照組（P＜0.01）；而3.5%組CD 最低、VH/CD 最高，且與對照組相比均差異極顯著（P＜0.01）。在空腸中，與對照組相比，4.5%、8.0%組VH 均有極顯著差異（P＜0.01），3.5%、8.0%組的空腸CD 極顯著降低（P＜0.01），而3.5%組VH/CD 最高，但與對照組相比無顯著差異（P=0.05）。在回腸中，與對照組相比，各處理組VH均極顯著提高（P＜0.01），4.5%組CD 最低，各處理組VH/CD 均提高，且3.5%、4.5%組和8.0%組極顯著高于對照組（P＜0.01）。在盲腸中，雜交構樹葉不同添加量對盲腸的PH無顯著影響（P＞0.05）。

表5 雜交構樹葉對產(chǎn)蛋初期蛋雞腸組織形態(tài)的影響

從圖1 中可看出，各組十二指腸、空腸、回腸和盲腸（以下簡稱：各腸）腸組織的結(jié)構形態(tài)切片染色均鮮明、清晰。對照組各腸段腸組織的結(jié)構形態(tài)均正常（圖A1～A4），飼糧中添加雜交構樹葉后，隨著添加量的增加，各腸段腸組織的結(jié)構形態(tài)表現(xiàn)出不同程度的損傷（B1～F1、B2～F2、B3～F3、B4～F4），4.5%組和8.0%組與對照組相比其各腸的腸腺上皮細胞和腸絨毛逐漸大量脫落、雜亂變稀疏、固有層龜裂嚴重，尤其是8.0%組最為嚴重；而1.5%、2.5%組和3.5%組與對照組相比其對應的各腸的腸壁、腸黏膜輪廓相對比較完整，排列相對比較規(guī)則整齊，且3.5%組各腸腸組織的完整性和腸道形態(tài)的負面影響最小。

圖1 雜交構樹葉對產(chǎn)蛋初期蛋雞腸組織形態(tài)的影響（40×）

2.3 雜交構樹葉對產(chǎn)蛋初期蛋雞十二指腸消化酶活性的影響

從表6 中可看出，與對照組相比，各處理組TPS、CMT、LPS 和AMS 活性基本上均呈現(xiàn)出劑量依賴性先提高、后降低的鐘形曲線趨勢；對于TPS 活性，與對照組相比，1.5%組差異不顯著（P＞0.05），2.5%、3.5%組和4.5%組極顯著提高（P＜0.01），8.0%組極顯著降低（P＜0.01）；對于CMT 活性，與對照組相比各處理組均極顯著提高（P＜0.01）；對于LPS 活性，與對照組相比除1.5%組極顯著降低（P＜0.01）外，其余各處理組均極顯著升高（P＜0.01）；對于AMS 活性，與對照組相比2.5%組和3.5%組均極顯著升高（P＜0.01），而1.5%、4.5% 組 和8.0% 組 均 極 顯 著 降 低（P＜0.01）。

表6 雜交構樹葉對產(chǎn)蛋初期蛋雞十二指腸消化酶活性的影響

2.4 雜交構樹葉對產(chǎn)蛋初期蛋雞血清抗氧化、生化指標的影響

從表7 中可看出，與對照組相比，1.5%、2.5%組和3.5%組蛋雞血清中SOD活性及1.5%、3.5%、4.5%組和8.0%組蛋雞血清中MDA 含量差異不顯著（P＞0.05），4.5%組和8.0%組蛋雞血清中SOD 活性極顯著降低（P＜0.01）、2.5%組蛋雞血清中MDA 含量極顯著提高（P＜0.01）。與對照組相比，各處理組蛋雞血清中TAOC和ALB含量均極顯著降低（P＜0.01），CK、TG和Ca含量均極顯著降低（P＜0.01）。與對照組相比，蛋雞血清中TP 含量除1.5%組極顯著提高（P＜0.01）外，其余各處理組均極顯著降低（P＜0.01）。與對照組相比，1.5%、2.5%、8.0%組血清GLO 含量極顯著提高（P＜0.01），3.5%、4.5%組極顯著降低（P＜0.01）。與對照組相比，蛋雞血清中A/G和GLU含量除4.5%組極顯著提高（P＜0.01），其余各處理組均極顯著降低（P＜0.01）。與對照組相比，血清中TB含量1.5%組和8.0%組極顯著提高（P＜0.01），4.5%組極顯著降低（P＜0.01），而2.5%組和3.5%組與對照組差異不顯著（P＞0.05）。與對照組相比，1.5%、2.5%、4.5%組血清AST含量極顯著降低。1.5%、2.5%組和3.5%組血清中AL含量與對照組相比極顯著提高（P＜0.01），4.5%組極顯著降低（P＜0.01），而8.0%組與對照組差異不顯著（P＞0.05）。相比于對照組，2.5%組蛋雞血清中IP含量極顯著（P＜0.01）提高，4.5%組和8.0%組蛋雞血清中IP 含量極顯著降低（P＜0.01），而其余各處理組差異不顯著（P＞0.05）。

表7 雜交構樹葉對產(chǎn)蛋初期蛋雞血清抗氧化、生化指標的影響

3 討論

3.1 雜交構樹葉對產(chǎn)蛋初期蛋雞生產(chǎn)性能的影響

生產(chǎn)性能是衡量蛋雞養(yǎng)殖效益的關鍵性指標，因此如何提高蛋雞的生產(chǎn)性能顯得尤為重要[16]。眾所周知，產(chǎn)蛋率和合格蛋率越高，平均蛋重相對越重，料蛋比、畸形蛋率和死淘率越低，蛋雞的養(yǎng)殖效益就越好、經(jīng)濟利潤就越高。除1.5%、3.5%、4.5%組和8.0%組的死淘率極顯著低于對照組外，其余指標差異均不顯著，這至少表明飼喂雜交構樹葉粉對產(chǎn)蛋早期蛋雞生產(chǎn)性能的經(jīng)濟指標具有一定的提高作用。飼糧中添加雜交構樹葉后雖試驗各處理組的破殼蛋率均高于對照組，但差異不顯著，從結(jié)果中可以看出這可能與添加量有關?？傮w來看，雜交構樹葉替代產(chǎn)蛋初期蛋雞基礎飼糧中部分玉米豆粕后對蛋雞生產(chǎn)性能是有益影響的。

3.2 雜交構樹葉對產(chǎn)蛋初期蛋雞腸組織形態(tài)的影響

蛋雞小腸由十二指腸、空腸和回腸3 段構成，其各段的腸絨毛高度、隱窩深度、絨隱比和形態(tài)完整性是評價腸道消化、吸收功能健康的重要指標，也是決定小腸消化和吸收營養(yǎng)物質(zhì)的關鍵因素[17-20]。研究表明，VH 越高越有利于增加腸黏膜與食糜等營養(yǎng)物質(zhì)消化、吸收的接觸面積[21-22]，CD 越淺則腸上皮細胞生成速率和成熟率就越高[21-22]，VH/CD 值越大則腸黏膜吸收功能增強且腸黏膜形態(tài)結(jié)構越完整[18，23]。王永峰[24]和陶振陽等[25]分別以不同比例低添飼量的發(fā)酵構樹飼喂早期（1%和5%）、晚期（1.5%、3.0%和4.5%）海蘭褐蛋雞后，發(fā)現(xiàn)均并未對蛋雞小腸各段的腸道黏膜組織形態(tài)結(jié)構造成不良影響，說明飼糧中添加發(fā)酵構樹成分對蛋雞小腸消化并無壞處。然而，近幾年來有關雜交構樹葉在替飼蛋雞飼糧中部分豆粕玉米后對腸道健康的影響鮮見報道。由表5 可以看出，在十二指腸、空腸和回腸中VH最高的分別是8.0%組、4.5%組和8.0%組，CD 最淺的分別為3.5%組、3.5%組和4.5%組，VH/CD 值最大的分別為3.5%組、3.5%組和8.0%組，說明蛋雞飼糧中用雜交構樹葉替飼部分玉米豆粕的比例為3.5%時有利于十二指腸和空腸對其攝食營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，這從圖1（D1）和（D2）的形態(tài)結(jié)構上也印證了這一點；當比例為8.0%時雖有利于回腸對其攝食營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，但從圖1（F3）中不難發(fā)現(xiàn)替飼8.0%雜交構樹葉對回腸的正常形態(tài)結(jié)構造成了損傷。由此可見，適宜低替飼比（3.5%）雜交構樹葉有助于維持和修復蛋雞小腸中十二指腸和空腸腸組織形態(tài)結(jié)構的完整性，而高替飼比（8.0%）雜交構樹葉雖有利于增加小腸中十二指腸、空腸和回腸腸黏膜與食糜等營養(yǎng)物質(zhì)消化、吸收的接觸面積，但卻對小腸中這3 段腸組織的完整性和腸道形態(tài)產(chǎn)生了負面影響，這一試驗結(jié)論和左鑫[11]用構樹枝葉在鵝小腸黏膜組織形態(tài)上的研究結(jié)論基本上一致。蛋雞的盲腸以錐形銜接、對稱分布于大、小腸結(jié)合處的兩側(cè)，盲腸皺襞（PH）越增加越有助于其內(nèi)含有的大量微生物對攝食植物性纖維的消化，更有助于阻止小腸中的食物流入大腸以達到促使小腸中的食物充分消化吸收的目的[26-29]。從表5 和圖1（A4）可知，本研究中1.5%～8.0%雜交構樹葉替飼蛋雞飼糧中部分玉米豆粕后并未對蛋雞盲腸PH造成顯著性影響，但1.5%雜交構樹葉替飼組的盲腸PH最大，說明低劑量雜交構樹葉替飼蛋雞飼糧中的部分玉米豆粕對蛋雞盲腸發(fā)揮其促進小腸對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收作用具有略微有益影響。

3.3 雜交構樹葉對產(chǎn)蛋初期蛋雞十二指腸消化酶活性的影響

蛋雞對攝入飼糧中蛋白質(zhì)、脂肪和淀粉三大營養(yǎng)物質(zhì)的消化主要是分別通過由體內(nèi)胰腺分泌的含有（胰、糜）蛋白酶（TPS、CMT）、脂肪酶（LPS）和淀粉酶（AMS）這3 種類型的消化酶以胰液形式經(jīng)胰導管輸入十二指腸后來完成的，蛋雞機體消化效率和功能與TPS、CMT、LPS 和AMS 的活性密切相關，酶活性值增加則蛋雞機體消化效率和功能越高[30-32]。本試驗結(jié)果表明，當雜交構樹葉替飼蛋雞飼糧中部分玉米豆粕的比例為1.5%時，對蛋雞十二指腸中TPS 的活性無顯著影響，但能極顯著提高CMT 的活性、極顯著降低LPS 和AMS 的活性；當替飼比例為3.5%時可極顯著地使蛋雞十二指腸中AMS 的活性達到最高峰值，當替飼比例為4.5%時，可極顯著地使蛋雞十二指腸中TPS、CMT和LPS的活性達到最高峰值；當替飼比例為8.0%時，可極顯著地使蛋雞十二指腸中TPS 和AMS的活性降低到最低值。總體來看，雜交構樹葉替飼蛋雞飼糧中部分玉米豆粕的比例過低時對十二指腸中這3 種類型消化酶的活性影響作用不大，替飼比例在一定范圍內(nèi)加大時可顯著提高這3 種類型消化酶的活性、且能達到最高峰值，但替飼比例過高時可顯著降低這3 種類型消化酶的活性、且能降低到最低值。綜合查閱的大量科研文獻后推測造成本試驗結(jié)果的原因可能與本試驗蛋雞飼糧中部分玉米豆粕和雜交構樹葉含有的黃酮類物質(zhì)有關，當雜交構樹葉與玉米豆粕的替飼比例適中時，這3 種成分各自含有的黃酮類物質(zhì)直接或間接加速了胰腺分泌后流入十二指腸中TPS、CMT、LPS 和AMS 含量，同時也提高了這幾種酶在十二指腸中的活性[3，33-40]。

3.4 雜交構樹葉對產(chǎn)蛋初期蛋雞血清抗氧化指標的影響

構樹葉的提取物中富含以多糖、多酚和黃酮為主的抗氧化物質(zhì)[41]。徐百昌等[42]的體外試驗表明，雜交構樹葉多酚具有較好的抗氧化活性，當雜交構樹葉多酚的濃度為0.6 mg/mL 和0.2 mg/mL 時分別對自由基DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基肼）和ABTS[2,2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽]的清除率可達到維生素C 水平；賈東輝等[43]試驗測得構樹葉提取液中黃酮類物質(zhì)含量為273 mg/kg，且構樹葉提取物的抗氧化作用與其所含黃酮類物質(zhì)的濃度呈正相關。另外，戚亞偉等[44]試驗表明構樹葉能夠增強高脂日糧營養(yǎng)性肥胖小鼠的抗氧化性能。本研究發(fā)現(xiàn)，雜交構樹葉替飼部分玉米豆粕對蛋雞血清中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和總抗氧能力（T-AOC）這3 種抗氧化指標影響程度不盡相同。對機體抗氧化防御體系金屬酶SOD 而言，當替飼比例較低（1.5%～3.5%）時并無顯著影響，當替飼比例越高（4.5%～8.0%）時SOD值越顯著下降，此結(jié)果極有可能是隨著替飼比例增加，大量雜交構樹葉中含有的蛋白質(zhì)在蛋雞體內(nèi)被水解后產(chǎn)生的羥和DPPH 自由基也隨之增加，從而導致大量SOD被用于清除羥和DPPH自由基所致[45-46]。對機體脂質(zhì)過氧化反應的終產(chǎn)物MDA 而言，當替飼比例越高（1.5%～2.5%）時MDA 含量越顯著升高，當替飼比例過高（3.5%～8.0%）時MDA 含量雖有無規(guī)律性波動但無顯著影響，其很有可能與不同替飼比雜交構樹葉中含有多糖、多酚和黃酮的量對蛋雞體內(nèi)脂質(zhì)氧化和腸道黏膜細胞損傷修復有關[47]。對反映機體整體抗氧化能力的指標T-AOC 而言，各處理組T-AOC 均呈現(xiàn)顯著降低趨勢，替飼比例過高（8.0%）和過低（1.5%）時兩者的T-AOC 無顯著差異，由此推測這是因適宜替飼比例范圍內(nèi)，雜交構樹葉替飼比例的增加引起蛋雞血清中氧化物質(zhì)的增加所致[48]。

3.5 雜交構樹葉對產(chǎn)蛋初期蛋雞血清生化指標的影響

蛋雞血清生化指標的變化是對蛋雞營養(yǎng)代謝、器官功能和健康狀況等內(nèi)部生理功能水平的一種間接微觀層面的反映[49]。在血清蛋白質(zhì)中，總蛋白（TP）包含白蛋白（ALB）和球蛋白（GLO）[50]。ALB具有結(jié)合和運輸內(nèi)源性與外源性物質(zhì)、維持血液膠體滲透壓、清除自由基、抑制血小板聚集和抗凝血等生理功能[51]。本研究發(fā)現(xiàn)各處理組蛋雞血清中ALB 含量均極顯著低于對照組，因此1.5%～8.0%雜交構樹葉替飼蛋雞飼糧中的部分玉米豆粕可能會對蛋雞代謝和生命健康造成一定的不利影響。GLO具有增強機體抵抗力以預防感染的作用[52-54]，本研究結(jié)果表明，蛋雞飼糧中部分玉米豆粕用雜交構樹葉以1.5%比例替飼將對增強蛋雞機體免疫力產(chǎn)生最佳效果。有報道稱，正常生理狀態(tài)下血清中GLO 含量適當降低對蛋雞雛雞維持需要的減少、營養(yǎng)物質(zhì)合成沉積的增加以及生長性能的改善產(chǎn)生積極影響；應激狀態(tài)時適當免疫血清中GLO含量提高則有助于蛋雞雛雞生命健康，并能減少死淘率[55]。血清中白球比（A/G）是對血清中ALB和GLO這兩種蛋白占比的一種反饋，A/G 值越高或越低則分別說明血清中ALB 或GLO 含量越高且越有利于發(fā)揮各自對機體應有的功能作用[56-57]。本研究發(fā)現(xiàn)，4.5%組和1.5%組血清中GLO 含量分別最低、最高，但蛋雞飼糧中部分玉米豆粕用雜交構樹葉分別以4.5%和1.5%這兩種比例替飼是否能分別在正常生理狀態(tài)和應激狀態(tài)時發(fā)揮應有的作用尚有待于進一步研究。

血清中總膽紅素（TB）含量升高時表明其在肝臟或膽道中被攝取、結(jié)合和排泄這3 個代謝過程發(fā)生了障礙，且體內(nèi)紅細胞破壞量較大[58-59]。本試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，雜交構樹葉替飼比例過低（1.5%）或過高（8.0%）均不利于蛋雞肝臟代謝功能，且以4.5%替飼比可對蛋雞起到保肝護肝的攝食功效。除TB外，天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）也是反映肝臟健康的一項重要敏感性指標，當肝臟受到損傷、炎癥或壞死時血液中AST 水平升高，而當血清中AST 水平降低時則表明機體利用氨基酸合成蛋白質(zhì)的能力提高[60-61]。因此，由本研究結(jié)果可知添飼雜交構樹葉不會對蛋雞肝臟造成損傷，以2.5%替飼比有利于提高蛋雞機體利用氨基酸合成蛋白質(zhì)的能力。血清淀粉酶（AL）是診斷急性胰腺炎癥的常規(guī)指標，AL含量升高代表胰腺發(fā)生損傷或病變[62]。據(jù)此由本試驗結(jié)果可推測，雜交構樹葉替飼比較低時（1.5%～3.5%）會對胰腺造成炎癥性損傷，而較高時（4.5%）會增強胰腺抗炎癥的能力。

血清中肌酸激酶（CK）在維持細胞內(nèi)能量平衡、可逆催化肌酸與ATP 之間的轉(zhuǎn)磷酰基反應中起著關鍵作用[63-64]。本試驗各處理組蛋雞血清中CK 含量均極顯著低于對照組，且隨著雜交構樹葉替飼量的增加而顯著下降，這與陶璐璐等[65]用和雜交構樹葉同為?？茖僦参锶~片的桑葉粉以5%、10%和15%比例添飼于獺兔日糧中測得獺兔血清中CK 含量變化結(jié)果相一致。研究發(fā)現(xiàn)，無論是缺血大鼠還是患有糖尿病心肌病大鼠，當灌喂不同比例的桑葉總黃酮后血清中CK含量均顯著性低于對照組，且大鼠血清中CK 含量隨著灌胃桑葉總黃酮劑量的增加而顯著性降低[66-67]，顯然造成本試驗與此相似結(jié)果的原因與雜交構樹葉中含有的總黃酮密切相關，雜交構樹葉替飼比越大，蛋雞攝入體內(nèi)的總黃酮量也就越多，最終可能因蛋雞體內(nèi)總黃酮過量積累抑制了血清中CK 的分泌并使其活性降低。動物機體所需能量的70%都來源于葡萄糖（GLU），血清GLU 含量是衡量機體糖代謝的主要指標，通常情況下GLU在血清中含量受胰島素和胰高血糖素聯(lián)合調(diào)控始終維持在相對穩(wěn)定的正常范圍之內(nèi)[68-70]。本試驗結(jié)果表明，除4.5%組外，各處理組蛋雞血清中GLU含量均極顯著低于對照組，說明雜交構樹葉具有降血糖的功效，這與我們先前研究結(jié)果的一致[71]。4.5%組蛋雞血清中GLU 含量極顯著高于對照組和其他各處理組，這可能是4.5%雜交構樹葉替代蛋雞飼糧中部分玉米豆粕后蛋雞的適口性最佳，促進了蛋雞的采食量，進而導致蛋雞攝食GLU量增加。

三酰甘油（TG）作為血脂組成和代謝的重要指標，其在蛋雞血清中含量的高低與蛋雞分解脂肪能力的強弱負相關[72]。各處理組蛋雞血清中TG 含量均極顯著低于對照組，其中以4.5%組最低，說明雜交構樹葉可增強蛋雞分解脂肪的能力，其中以4.5%替飼比最佳。血清中鈣（Ca）和無機磷（IP）含量的高低由維生素D、降鈣素和甲狀旁腺激素的相互作用進行調(diào)控，在蛋雞機體形成蛋殼過程中當血液中Ca、IP 不足以達到需求時將會動員骨骼中貯存的Ca、P 進入血液維持血液中正常的Ca、IP含量[73]。本研究發(fā)現(xiàn)飼糧中部分玉米豆粕被雜交構樹葉替飼后，極顯著降低了蛋雞血清中Ca 含量，而2.5%和4.5%～8.0%替飼比分別能極顯著提高和極顯著降低蛋雞血清中IP 含量。顯然，雜交構樹葉加速了蛋殼形成過程中對血液中Ca的需求，且只有當雜交構樹葉替飼比過高時才有助于蛋殼形成過程中對血液中IP的需求。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，根據(jù)生產(chǎn)性能、腸組織形態(tài)和消化酶活性及其血清抗氧化和生化指標方面的不同需求，從1.5%～8.0%中選擇合適比例的雜交構樹葉替代產(chǎn)蛋初期蛋雞飼糧中部分玉米豆粕是切實可行的，替飼比為3.5%～4.5%綜合效果最佳，最適宜在生產(chǎn)中應用。