基于GC-MS技術(shù)和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法探討那如-3味丸治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制

額尼日勒,廖翠平,高 雅,圖 雅

(1.內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院,內(nèi)蒙古 通遼 028000;2. 中國中醫(yī)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心,北京 100700;3.中國中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)藥發(fā)展研究中心, 北京 100700)

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis,RA)是一種多關(guān)節(jié)炎為主要臨床表現(xiàn)的自身免疫性疾病。RA病的特征是多關(guān)節(jié)、對稱性、侵襲性的關(guān)節(jié)炎,晚期多畸形、殘疾,是造成我國人群喪失勞動(dòng)力和殘疾的主藥病因之一?？衫奂靶?、肺、腎等器官損傷[1]。RA發(fā)病率在0.35%左右,高發(fā)年齡段為39～59歲。該病女性的發(fā)病率要高于男性,女患者多以氣血虧損為證[1-3]。

蒙藥那如-3味丸由金色訶子、蓽茇、草烏(制)組成,味苦、性溫、氣香,本方出自《至高要方》,異名為“納如蘇木珠日”,中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(蒙藥分冊)[4]中也有關(guān)那如-3味丸的記載,以功能組方為溫性,治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的良方,臨床效果佳。蒙醫(yī)臨床中,類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎也稱為“協(xié)日烏素癥”。

“協(xié)日烏素癥”也稱為“黃水癥”,是蒙醫(yī)分類疾病的“六基癥”之一[5]。從蒙醫(yī)基礎(chǔ)理論上可以將“協(xié)日烏素癥”分為寒性和熱性兩大類?！皡f(xié)日烏素”與血、希日熱合并則形成熱性協(xié)日烏素病,稱為“黑協(xié)日烏素病”;與巴達(dá)干、赫依之寒合并則形成“寒性協(xié)日烏素癥”[6]?！皡f(xié)日烏素癥”(黃水病)的病質(zhì)主要為膩、銳、熱、濕、泄。關(guān)于“協(xié)日烏素癥”的產(chǎn)生文獻(xiàn)中的記錄是這樣記載的:當(dāng)人們的一日三餐通過胃加工,將營養(yǎng)精華輸送到肝,然后演變成血,血的精華輸送到心臟,而血的糟粨到膽囊演變成膽汁,膽汁的精華演變成“協(xié)日烏素”[7]。 治療“協(xié)日烏素”癥需在調(diào)理“赫依”、“希拉”、“巴達(dá)干”三根的基礎(chǔ)上,使用多為溫平藥味的方劑來治療,達(dá)到扶胃,燥“協(xié)日烏素”并清熱或祛寒[2]。由于四個(gè)“亞如門德格”——“飲食、起居、時(shí)節(jié)及其他因素”的影響,上述任何一個(gè)或幾個(gè)因素失去正常狀態(tài)及相互之間的平衡關(guān)系,都會(huì)導(dǎo)致“協(xié)日烏素癥”發(fā)病[8]。飲食方面:食如過多的刺激性的食物,例如魚肉、動(dòng)物內(nèi)臟、不易消化、生冷、容易導(dǎo)致過敏的食物“《月光醫(yī)經(jīng)》將類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎歸屬于寒性病或寒癥,培補(bǔ)養(yǎng)血治療[8]?！睹舍t(yī)內(nèi)科學(xué)》(1976年)在托列病的討論中,提到“該病多見于女性和中青年人群,以手指關(guān)節(jié)、腕關(guān)節(jié)等小關(guān)節(jié)對稱性受累為特點(diǎn)”等臨床表現(xiàn)[8]。蒙醫(yī)認(rèn)為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是協(xié)日烏素偏盛、偏衰和功能紊亂而導(dǎo)致病變,并損及全身關(guān)節(jié)而引起的急性發(fā)病或慢性經(jīng)過的一種疾病[9]。并認(rèn)為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的主要發(fā)病機(jī)制是由于協(xié)日烏素增盛,與巴達(dá)干黏液和血液相搏,凝聚于關(guān)節(jié)內(nèi)而阻礙氣血運(yùn)行所致[3]。機(jī)體的各個(gè)組織器官都有可能發(fā)生“協(xié)日烏素癥”,包括了超敏反應(yīng)性疾病、自身免疫性疾病等多種非感染性炎性疾病,也包括部分感染性疾病的中后期病變[9]。治療“協(xié)日烏素癥”的藥物以辛、苦為主,以寒、鈍、輕、糙的藥味性能居多,藥效以鈍、燥、輕為主?？辔逗?、鈍性能。能克制“協(xié)日”熱銳之主質(zhì),以達(dá)消黏、解毒、調(diào)解“赫依”、“希日”、“巴達(dá)干”三根之能。

蒙醫(yī)臨床上治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的常用藥物有嘎日迪五味丸、文冠木十味湯(森等-10音湯)、驢血二十五味丸(額勒吉根·齊素-25)、苦參三味湯(道格勒·額布蘇-3音湯)等[10]。

因此本研究采用GC-MS方法對那如-3味丸揮發(fā)油成分進(jìn)行分析,并應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測其治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)的活性成分和作用靶點(diǎn),為闡明那如-3味丸預(yù)防或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥效物質(zhì)及作用機(jī)制提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料

1.1 藥材

蒙藥那如-3味丸購買內(nèi)蒙古通遼附屬醫(yī)院。

1.2 儀器與試劑

7890A-5975C氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國Agilent公司);XS105DU型電子分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司);FA2204B型電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司);98-1-B型電子調(diào)溫電熱套(天津市泰斯特儀器有限公司);水為娃哈哈純凈水;環(huán)己烷(天津大茂化學(xué)試劑廠,批號(hào)20201010)。

1.3 數(shù)據(jù)庫及軟件

中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫和分析平臺(tái)(TCMSP,https://tcmspw.com/index.php);Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(http://www.swisstargetprediction.ch/);PubChem數(shù)據(jù)庫(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/);UniProt數(shù)據(jù)庫(https://www.uniprot.org/);在線人類孟德爾遺傳數(shù)據(jù)庫(OMIM,http://www.omim.org/);KEGG數(shù)據(jù)庫(http://www.kegg.jp/);GeneCards數(shù)據(jù)庫(https://www.genecards.org/);DAVID 6.8數(shù)據(jù)庫(https://david.ncifcrf.gov/);imageGP平臺(tái)(http://www.ehbio.com/ImageGP/);蛋白結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫(PDB,http://www.rcsb.org/);Cytoscape 3.9.0軟件和Discovery Studio 2019軟件。

2 方法

2.1 那如-3味丸揮發(fā)油的提取

取那如-3味丸1.0 kg,置于10000mL圓底燒瓶,加入蒸餾水10L連接揮發(fā)油測定器與冷凝管。置電熱套中緩慢加熱至沸,并保持微沸約6 h,至測定器中油量不再增加,停止加熱,放置片刻,收集那如三味丸,得淡黃色透明的油狀液體,取那如三味丸丸揮發(fā)油100μL加環(huán)己烷定容至1 mL量瓶,經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾,即得供試品溶液。

2.2 GC-MS分析

2.2.1色譜條件

HP-5MS色譜柱(0.25mm×30mm,0.25μm)。初始溫度為50℃,以16℃·min-1升溫至130℃,以1℃·min-1升溫至135℃,保持5min;以3℃·1min-1升溫至150℃,保持3min;再以5℃·min-1升溫至210℃。分流比10:1,進(jìn)樣體積0.4μL,載氣為He,載氣量1.0mL·min-1。

2.2.2質(zhì)譜條件

EI檢測器,電離電壓70eV,離子源溫度230℃,傳輸線溫度260℃,四極桿溫度150℃。掃描質(zhì)量范圍m/z50～500,溶劑延遲1.0min。

2.3 那如-3味丸揮發(fā)油化學(xué)成分的鑒定

經(jīng)GC-MS測那如-3味丸揮發(fā)油,得到樣品的總離子流圖。通過檢索比對NIST數(shù)據(jù)庫,鑒定那如-3味丸揮發(fā)油樣品中的化學(xué)成分,并計(jì)算各化學(xué)成分的含量。

2.4 基于“活性成分-靶點(diǎn)-通路”的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析

2.4.1那如-3味丸成分選擇及其作用靶點(diǎn)預(yù)測

中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫和分析平臺(tái)(TCMSP, http://tcmspw.com/index.php)和SwissTargetPredicition數(shù)據(jù)庫(http://www.swisstargetprediction.ch/),分別輸入那如-3味丸的有效成分,以口服利用度(oral bioavailability,OB)≥30%和藥物相似性(drug-likeness,DL)≥0.18為條件篩選,得到各藥的活性成分。并通過pubchem(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)查找Canonical SMILES、InChIKey和CAS號(hào)為后續(xù)工作做準(zhǔn)備。

2.4.2治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎疾病靶點(diǎn)的搜集

以“Rheumatoid Arthritis,RA”為關(guān)鍵詞,檢索3個(gè)疾病靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(OMIM、GeneCards、KEGG),以相關(guān)性得分(relevance score)>1為標(biāo)準(zhǔn),得到類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)的作用靶點(diǎn)。通過Uniport數(shù)據(jù)庫將靶點(diǎn)蛋白信息轉(zhuǎn)化為Uniport ID,去除重復(fù)靶點(diǎn)基因,利用Venny數(shù)據(jù)庫取那如-3味丸的揮發(fā)油的活性成分靶點(diǎn)與RA疾病靶點(diǎn)交集,獲得那如-3味丸的作用靶點(diǎn)。

2.4.3生物通路富集分析

將“2.4.2”搜集到的潛在靶點(diǎn)輸入DAVID數(shù)據(jù)庫,選擇物種為“Homo Sapiens”,進(jìn)行GO注釋分析,其中GO分析包括生物過程(biological process,BP)、分子功能(molecular function,MF)、及細(xì)胞組分(cellular component,DC)。保存其結(jié)果,并通過imageGP平臺(tái)對結(jié)果可視化。選取有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)的所有通路。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)篩選得到直接或間接與類風(fēng)濕相關(guān)的通路。

2.4.4“活性成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析

將那如-3味丸的成分、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的靶點(diǎn)數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape 3.9.0軟件,構(gòu)建那如-3味丸治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的“活性成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)。利用“Network Analysis”功能計(jì)算網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù),導(dǎo)出介度值、中心度值、度值等參數(shù),度值>平均值的成分可能是那如-3味丸治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的潛在活性成分。

2.4.5分子對接

根據(jù)網(wǎng)絡(luò)的拓?fù)浞治鲞x取成分中degree較大且含量較高的12個(gè)那如-3味丸的主要成分依次與10個(gè)核心治療靶點(diǎn)對接,在PubChem數(shù)據(jù)庫下載活性成分的3D結(jié)構(gòu),在PDB數(shù)據(jù)庫下載靶點(diǎn)的蛋白結(jié)構(gòu),采用Discovery Studio2019軟件進(jìn)行分子結(jié)構(gòu)常規(guī)預(yù)處理,去除水分子,加氫后進(jìn)行力場優(yōu)化。導(dǎo)入成分配體選擇LibDock對接模式,記錄受體與配體的對接分?jǐn)?shù)。

3 結(jié)果

3.1 那如-3味丸揮發(fā)油化學(xué)成分的鑒定

使用水蒸氣蒸餾法提取那如-3味丸干燥心材的揮發(fā)油,通過GC-MS對揮發(fā)油進(jìn)行分析,其總離子流色譜圖(TIC)見圖1。通過檢索比對NIST數(shù)據(jù)庫,共分離鑒定出那如-3味丸樣品中56中化學(xué)成分,結(jié)果見表1。

表1 那如-3味丸揮發(fā)油中化學(xué)成分的氣質(zhì)鑒定

圖1 那如-3味丸丸揮發(fā)油氣質(zhì)分析的TIC

3.2 靶點(diǎn)預(yù)測

通過中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫和分析平臺(tái);SwissTargetPredicition數(shù)據(jù)庫預(yù)測得到630個(gè)成分靶點(diǎn),利用OMIM、GeneCards 數(shù)據(jù)庫查詢類風(fēng)濕疾病的相關(guān)靶點(diǎn)信息,得到2693個(gè)疾病靶點(diǎn)。

3.3 相關(guān)靶點(diǎn)的GO功能和KEGG通路富集分析

GO功能注釋是通過BP、MF、 CC對基因進(jìn)行注釋和分類(圖2A～C)。在BP中信號(hào)傳導(dǎo),蛋白質(zhì)磷酸化占比例較高;在CC中細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)的占比例較高;在MF中蛋白結(jié)合、ATP結(jié)合較高。為了進(jìn)一步確定靶點(diǎn)的生物能,進(jìn)行KEGG通路分析,取有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的(P<0.05)的通路,根據(jù)文獻(xiàn)篩選得到16個(gè)類風(fēng)濕相關(guān)的通路,如PI3K-Akt信號(hào)、MAPK信號(hào)通路和Ras信號(hào)通路等,見圖2D。

A.BP;B.CC;C.MF;D.KEGG圖2 那如-3味丸治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)靶蛋白的GO注釋功能富集分析及KEGG通路分析

3.4 “活性成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)分析

在輸出的網(wǎng)絡(luò)中,以不同顏色的節(jié)點(diǎn)表示活性成分、靶點(diǎn)及作用通路,紅色菱形節(jié)點(diǎn)代表活性成分,藍(lán)色菱形節(jié)點(diǎn)代表作用靶點(diǎn),而藍(lán)色方形節(jié)點(diǎn)代表作用通路,見圖3。對網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)浞治?節(jié)點(diǎn)大小與連接度(degree)呈正相關(guān),以節(jié)點(diǎn)中介中心性大于中位數(shù)0.006,節(jié)點(diǎn)緊密度大于中位數(shù)0.353,degree大于2倍中位數(shù)6,篩選得到前列腺素內(nèi)過氧化物合酶(prostaglandin-endoperoxide synthase 2)、受體激酶插入域(Kinase insert Domain Receptor)等10個(gè)核心靶點(diǎn),見表2。對網(wǎng)絡(luò)中那如-3味丸的53個(gè)活性成分根據(jù)degree排序,其中degree大于2倍中位數(shù)6且含量較高(峰面積百分比大于1)的活性成分為A-曲乳酰胺、乙酰丁香酚等,見表3。對網(wǎng)絡(luò)中9個(gè)通路中degree較高的通路為PI3K-Akt信號(hào)、MAPK信號(hào)通路和Ras信號(hào)通路等,見表4。

表2 那如-3味丸丸治療偏頭痛的核心靶點(diǎn)

表3 那如-3味丸治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)成分的網(wǎng)絡(luò)參數(shù)

表4 那如-3味丸調(diào)控的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎關(guān)信號(hào)通路

圖3 那如-3味丸治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的“活性成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)注:方塊為核心靶點(diǎn),圓圈為活性成分成分,菱形為關(guān)鍵通路

3.5 分子對接結(jié)合

選取“活性成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)中degree值較大且含量較高的11個(gè)主要成分和10個(gè)核心靶點(diǎn)進(jìn)行分子對接,對接分?jǐn)?shù)見表5。結(jié)果表明反式戊烯醇乙酸酯 、A-曲乳酰胺可與靶點(diǎn)JAK2發(fā)生相互作用且對接分?jǐn)?shù)較高;二氯甲烷可與7個(gè)核心靶點(diǎn)發(fā)生較高的對接,則血小板衍生生長因子受體β、胞內(nèi)磷脂酰肌醇激酶和前列腺素內(nèi)過氧化物合酶靶點(diǎn)對任一成分沒有對接,其推測那如-3味丸揮發(fā)油成分主要通過上述7個(gè)靶點(diǎn)發(fā)揮著預(yù)防或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用。選取打分最高的成分與靶點(diǎn)進(jìn)行分析,其對接結(jié)果見圖4。結(jié)果表明反式戊烯醇乙酸酯與JAK2發(fā)生相互作用。

表5 那如-3味丸活性成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)蛋白的對接打分

圖4 反式戊烯醇乙酸酯與JAK2的分子對接

4 討論

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是基于系統(tǒng)生物學(xué)理論,通過“多成分-多靶點(diǎn)-多途徑” 構(gòu)建多層次的網(wǎng)絡(luò),用于探索疾病與藥物之間的相關(guān)性,為預(yù)測藥物作用機(jī)制的新策略[11]。運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法初步預(yù)測了那如-3味丸揮發(fā)油類成分治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制。為進(jìn)一步探討那如-3味丸揮發(fā)油治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制,本研究構(gòu)建“成分-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)篩選其可能的作用靶點(diǎn),得到那如-3味丸揮發(fā)油治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的10個(gè)核心基因?yàn)镻TGS2、JAK2、MAPK1、AKT1、PIK3CD、MAKP8、JAK1、IKBKB、PDGFRB。PTGS2又稱環(huán)氧合酶2(COX-2),是一種跟炎癥反應(yīng)相關(guān)的酶,在細(xì)胞中可被促炎細(xì)胞因子和生長因子等高度誘導(dǎo),從而參與炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡等多種病理過程。非甾體抗炎藥可通過抑制COX-2,阻止前列腺素的合成達(dá)到抗炎解熱鎮(zhèn)痛的作用[12-13]。JAK1、JAK2是JAK 蛋白酪氨酸激酶家族的成員,JAK1能夠?qū)?xì)胞因子IL-2、IL-6、IL-10進(jìn)行應(yīng)答,JAK2基因的突變可導(dǎo)致真性紅細(xì)胞增多增,特發(fā)性血小板增多癥、特發(fā)性骨髓纖維化。研究表明,JAK2已成為治療和預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎發(fā)生的確切靶點(diǎn)[14]。MAPK1、MAPK8 是MAPK家族成員,在控制炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng)的誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)中具有重要作用[15]。MAPK1 在 MAPK/ERK 級(jí)聯(lián)中起著重要作用,介導(dǎo)著細(xì)胞生長、黏附、存活和分化等多種生物學(xué)功能。AKT1 作為絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶之一,研究表明AKT1與自噬性死亡有關(guān)[16]。IKBKB基因病理性突變會(huì)引起一種免疫表型特殊的聯(lián)合免疫缺陷病[17]。

對關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG通路富集分析探究其信號(hào)通路中的作用,結(jié)果發(fā)現(xiàn)那如-3味丸可能通過調(diào)控PI3K-ATK、MAKP、RAS、Clacium、PD-L1、JAK-STAT、FoxO、VEGF、mTOR、TNF信號(hào)通路等揮發(fā)抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用。PI3K-ATK信號(hào)通路與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎存在一定關(guān)聯(lián)性。PI3K-ATK信號(hào)通路被認(rèn)為是成纖維樣滑膜細(xì)胞(FLS)增殖與凋亡失衡發(fā)生的橋梁,并且被認(rèn)為作為媒介介導(dǎo)RA滑膜炎的發(fā)展[18]。MAPK信號(hào)通路在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)中發(fā)揮著重要作用,此信號(hào)通路的過度活化與滑膜組織炎性增生與其關(guān)節(jié)軟骨組織破壞密切相關(guān),一直以來被認(rèn)為是用以治療類風(fēng)濕性的前途靶點(diǎn)[19-20]。RAS信號(hào)通路作為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎易敏感點(diǎn),在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)發(fā)生、發(fā)展過程中意義重大[21]。RAS信號(hào)通路的激活介導(dǎo)了類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的FLS細(xì)胞的異常激活及關(guān)節(jié)骨及軟骨的破壞侵蝕。Ras/Raf1信號(hào)通路在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中表達(dá)上調(diào),并促進(jìn)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)的進(jìn)展[22]。研究表明,抑制RAS信號(hào)通路的活化有助于緩解類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的骨破壞,可改善類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的病情[21]。PD-L1信號(hào)通路是機(jī)體免疫系統(tǒng)的強(qiáng)大調(diào)節(jié)劑,可通過抑制次信號(hào)通路活化T細(xì)胞的增殖和分化,從而阻止自身免疫性疾病的發(fā)生。PD-L1在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等免疫性疾病中表達(dá)下調(diào),可以作為靶點(diǎn)的免疫治療可緩解自身免疫的炎癥狀態(tài)。為治療免疫性疾病的防御與治療提供新的策略[23]。JAK-STAT是多種細(xì)胞的生長、活化、分化、凋亡及其功能發(fā)揮過程中重要的信號(hào)通路[24]。研究表明[25],JAK和STAT1、SOCS3在正常人或關(guān)節(jié)炎病人滑膜中表達(dá)很少表達(dá)。在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者滑膜組織中表達(dá)較高?？山?jīng)過抑制此信號(hào)通路,在臨床上為患者提供新的治療方案。VEGF是一種極為重要的促血管生成因子,可以與滑膜血管內(nèi)皮上的受體結(jié)合,促進(jìn)滑膜血管的新生,增加血管通透性和炎性因子的釋放[26]。文獻(xiàn)表明,類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎局部組織PI3K/AKT/mTOR通路被激活,使細(xì)胞維持穩(wěn)定的功能下降,細(xì)胞凋亡增加而使結(jié)構(gòu)與功能受到破壞,抑制PI3K/AKT/mTOR通路可有效改善類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎癥狀[27]。TNF可以激活免疫細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞,導(dǎo)致炎癥介質(zhì)的釋放,如白細(xì)胞介質(zhì)、血小板活化因子等。并且調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的產(chǎn)生和分泌,從而影響免疫細(xì)胞的功能和免疫反應(yīng)。本文篩選得到的通路和文獻(xiàn)報(bào)道的類風(fēng)濕重要通路較為一致。為深入闡釋那如-3味丸揮發(fā)油治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作用機(jī)制提供依據(jù)。

綜上所述,本研究基于GC-MS技術(shù)定性表征那如-3味丸揮發(fā)油的化學(xué)成分,并結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對接篩選及驗(yàn)證,其初步探討了那如-3味丸揮發(fā)油治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的潛在作用機(jī)制,為進(jìn)一步闡明那如-3味丸的治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎機(jī)制提供了一定的研究方向和數(shù)據(jù)支持。