銀川市某醫(yī)院不同年齡段兒童下呼吸道感染病原檢測(cè)及分析

韓 磊,韓 靜,岳 斌,郭 翠

由于兒童生長(zhǎng)發(fā)育迅速,因此處于不同年齡階段的兒童對(duì)同種疾病易感性差異性較大［1］。基于呼吸系統(tǒng)解剖特點(diǎn)及兒童免疫能力低下等諸多原因,兒童容易發(fā)生下呼吸道感染。下呼吸道感染作為臨床常見(jiàn)的感染性疾病,可由多種病原體引起,包括常見(jiàn)細(xì)菌、真菌、衣原體、支原體及病毒等,具有病原構(gòu)成復(fù)雜、臨床癥狀缺乏特異性的特點(diǎn),因此難以憑借臨床特征進(jìn)行疾病診斷［2-5］。該病亦是導(dǎo)致5歲以下患兒死亡的主要病因之一［4-5］。研究顯示,對(duì)于下呼吸道感染,不僅成人與兒童間病原菌菌譜差異顯著,不同年齡段的兒童間病原譜同樣有此情形［6-7］。兒童成長(zhǎng)至3歲左右,其免疫力可達(dá)成人水平,這也就導(dǎo)致3歲及以下兒童與3歲以上兒童的下呼吸道感染病原譜間存在顯著差異。寧夏地處西北半干旱地區(qū),氣候有著明顯的地理特點(diǎn),不同年齡階段人群的下呼吸道感染病原譜尚不明確,給臨床對(duì)于下呼吸道感染患者的快速診斷及治療帶來(lái)了較大影響。本研究以3歲為年齡分水嶺,通過(guò)芯片法檢測(cè)分析了銀川市某醫(yī)院不同年齡段患兒的病原譜差異及其對(duì)不同病原菌的易感性,旨在有針對(duì)性地為該院不同年齡段下呼吸道感染患兒診療提供快速準(zhǔn)確的病原學(xué)依據(jù)和指導(dǎo),并為之后流行病學(xué)研究提供翔實(shí)數(shù)據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 樣本來(lái)源:樣本來(lái)源于2021年5月到2022年10月在銀川市婦幼保健院普兒科就診的515例下呼吸道感染患兒。按照年齡分為2組,≤3歲為A組,共316例(61.4%);>3歲為B組,共199例(38.6%)?；純鹤钚∧挲g為6天12時(shí),最大年齡為13歲9月。臨床癥狀表現(xiàn)為肺炎、支氣管炎、毛細(xì)支氣管炎、發(fā)熱、支氣管哮喘等。

1.1.2 納入標(biāo)準(zhǔn):14周歲以下;患兒符合下呼吸道感染的診斷標(biāo)準(zhǔn);病理資料完整,家屬知情同意且簽署知情同意書(shū)。

1.1.3 排除標(biāo)準(zhǔn):中途轉(zhuǎn)院、放棄治療等原因造成資料有所缺失的患兒;外市患兒;已接受抗生素治療患兒。

1.2 研究方法

1.2.1 痰液采集:受檢者入院2 h內(nèi),予以生理鹽水清潔口腔。之后醫(yī)護(hù)人員持無(wú)菌吸痰管經(jīng)鼻腔在負(fù)壓條件下采集氣道深部痰液(對(duì)于月齡較小或缺乏自主咳痰能力的患兒,醫(yī)護(hù)人員應(yīng)當(dāng)對(duì)其進(jìn)行咽部吸取痰標(biāo)本采集),置于一次性無(wú)菌痰盒中,此時(shí)對(duì)樣本進(jìn)行視檢,需無(wú)明顯泡沫、口水及食物殘?jiān)?同時(shí)樣本量需≥0.6 mL。之后在顯微鏡下對(duì)所采集痰液標(biāo)本再度檢查,當(dāng)滿足低倍視野下白細(xì)胞數(shù)>25且上皮細(xì)胞<10時(shí)視為合格樣本。

1.2.2 肺泡灌洗液采集:患兒按要求術(shù)前8h禁止飲食,經(jīng)鼻腔送入支氣管鏡,在通過(guò)支氣管鏡充分觀察后于肺部病灶處注入常溫0.9% NaCl溶液進(jìn)行灌洗。灌洗量由患兒體重決定,按每次每千克0.5～1 mL標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行,且每次灌洗時(shí)間不得超過(guò)10 min,灌洗三次后即可結(jié)束,注意總灌洗液用量不得超過(guò)20 mL。首次灌洗過(guò)后,需將灌洗液留存,轉(zhuǎn)入到送檢用標(biāo)本管內(nèi),及時(shí)送至實(shí)驗(yàn)室。

1.2.3 恒溫?cái)U(kuò)增芯片法病原檢測(cè):采用呼吸道病原菌核酸檢測(cè)試劑盒(北京博奧生物集團(tuán)有限公司)及RTisochipTM-A恒溫?cái)U(kuò)增芯片核酸分析儀(北京博奧生物集團(tuán)有限公司)。依照說(shuō)明書(shū)提取痰液等標(biāo)本中的核酸,進(jìn)行病原菌核酸檢測(cè)。芯片法檢測(cè)抗原包括流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌、耐甲氧西林葡萄球菌、金黃色葡萄球菌等共計(jì)十三種病原體,配套軟件可對(duì)其檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行自動(dòng)化判讀。

1.2.4 痰培養(yǎng)法:收集合格標(biāo)本分別接種于血平板、麥康凱平板、加萬(wàn)古霉素巧克力平板和羅氏培養(yǎng)基(法國(guó)梅里埃生物公司),于35 ℃、5% CO2條件在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),觀察培養(yǎng)基并篩選可能的致病菌使用VIT-EK2-Compact全自動(dòng)微生物鑒定儀(法國(guó)梅里埃生物公司)進(jìn)行鑒定。

2 結(jié)果

2.1 芯片法與痰培養(yǎng)法比較:同時(shí)行芯片法與痰培養(yǎng)法檢測(cè)的共有509例。其中芯片法陽(yáng)性共335例(65.8%),痰培養(yǎng)法陽(yáng)性共125例(24.6%),見(jiàn)表1。

表1 陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果一致性分析[n(%)]

2.2 芯片法檢測(cè)結(jié)果:515例標(biāo)本中,芯片法共檢出陽(yáng)性341例(66.2%),其中A組193例,陽(yáng)性檢出率61.1%,B組148例,陽(yáng)性檢出率74.4%,A組總陽(yáng)性檢出率高于B組(χ2=5.73,P<0.05),見(jiàn)表2。

表2 總陽(yáng)性檢出率比較[n(%)]

2.3 2組病原體陽(yáng)性檢出率比較:A組陽(yáng)性檢出率前5位病原體依次是流感嗜血桿菌、金黃色葡萄球菌、耐甲氧西林葡萄球菌、大腸埃希氏菌及肺炎支原體;B組陽(yáng)性檢出率前5位病原體依次是肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、肺炎支原體、金黃色葡萄球菌及耐甲氧西林葡萄球菌。A組大腸埃希氏菌陽(yáng)性檢出率高于B組(χ2=9.270,P<0.05),流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌和肺炎支原體的檢出率低于B組(P<0.05),見(jiàn)表3。

表3 2組病原體陽(yáng)性檢出率比較[n(%)]

2.4 感染形式比較:A組單一感染檢出121例(38.3%),混合感染檢出72例(22.8%);B組單一感染檢出63例(31.7%),混合感染檢出85例(42.7%)。A組混合感染陽(yáng)性檢出率顯著低于B組(χ2=22.88,P<0.05),見(jiàn)表4。

表4 感染形式比較[n(%)]

3 討論

隨著兒童年齡的增長(zhǎng),免疫系統(tǒng)也逐漸發(fā)育完善。3歲前兒童免疫系統(tǒng)發(fā)育很差,3歲時(shí)其免疫系統(tǒng)發(fā)育已趨于完善,接近于成人。下呼吸道感染作為全球兒童最常見(jiàn)的疾病之一,具有病原譜廣、人群差異性大等特點(diǎn)。若能及時(shí)對(duì)致病的病原菌種類(lèi)進(jìn)行有效分析,便可對(duì)患兒采取有針對(duì)性的治療方案。

本研究以3歲為年齡分界,利用恒溫?cái)U(kuò)增芯片法對(duì)銀川市不同年齡段呼吸道感染患兒進(jìn)行病原譜檢測(cè)分析。515例下呼吸道感染患兒分泌物樣本的檢測(cè)結(jié)果顯示,≤3歲患兒的總陽(yáng)性檢出率為56.6%,顯著高于>3歲患兒(P<0.05),說(shuō)明≤3歲兒童較>3歲兒童更易發(fā)生下呼吸道感染,這與趙毅梅［8］、楊曉華［9］等的研究結(jié)果一致。造成此差異的原因與低年齡兒童母?jìng)骺贵w逐漸消失,皮膚屏障功能發(fā)育不完善,皮膚黏膜屏障能力弱,體內(nèi)IgG、IgA及IgE水平較低,免疫能力低下等有關(guān),故年齡越小就越容易受到病原菌的侵襲。

病原譜分析顯示,≤3歲患兒易感的前5位病原體依次是流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、耐甲氧西林葡萄球菌及大腸埃希氏菌,>3歲患兒易感的前5位病原體依次是肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、肺炎支原體、金黃色葡萄球菌及耐甲氧西林葡萄球菌?；純焊腥镜牟≡愿锾m氏陰性菌為主,其中≤3歲患兒的大腸埃希氏菌陽(yáng)性檢出率顯著高于>3歲患兒(P<0.05),而流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌和肺炎支原體的陽(yáng)性檢出率則顯著低于>3歲患兒(P<0.05),這與張冰［10］、張金峰［11］、岑敏［12］等的研究結(jié)果基本一致。說(shuō)明≤3歲兒童較>3歲兒童對(duì)大腸埃希氏菌更易感染,而>3歲兒童則較≤3歲兒童對(duì)流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌和肺炎支原體更易感染。隨著年齡的增長(zhǎng),病原菌譜出現(xiàn)了由革蘭氏陰性菌向革蘭氏陽(yáng)性菌和非典型病原體的過(guò)渡,使得處于不同年齡段的下呼吸道感染患兒病原譜構(gòu)成存在較大差異。造成該差異的原因可能是由于兒童在3歲以內(nèi),特別是新生兒時(shí)期,正常菌群尚未很好建立,皮膚黏膜產(chǎn)生的特異性IgM匱乏,導(dǎo)致個(gè)體易受大腸埃希氏菌、肺炎克雷伯菌等腸桿菌科細(xì)菌感染。3歲以上兒童由于來(lái)自母體的抗體IgG逐漸消耗,而自身的抗體生成系統(tǒng)尚未成熟,加之該年齡段開(kāi)始集體生活,使之對(duì)流感嗜血桿菌和肺炎鏈球菌的攜帶率明顯增加,因此易受這些莢膜條件致病菌感染［13］。

感染形式的差異分析顯示,>3歲患兒的混合感染檢出率為42.7%,顯著高于≤3歲患兒(P<0.05)。說(shuō)明>3歲兒童較≤3歲兒童更易發(fā)生混合感染。推測(cè)該現(xiàn)象的原因可能是由于>3歲兒童開(kāi)始進(jìn)入集體生活后接觸病原體種類(lèi)較之前增多,部分機(jī)會(huì)致病菌如流感嗜血桿菌以定植菌的形式存在于體內(nèi),因此檢測(cè)時(shí)往往更易呈現(xiàn)混合感染的趨勢(shì)。

綜上所述,不同年齡階段的兒童下呼吸道感染病原菌分布具有顯著的差異性。病原譜的繪制將幫助臨床醫(yī)生對(duì)實(shí)驗(yàn)室結(jié)果實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確判讀,實(shí)現(xiàn)對(duì)患兒有針對(duì)性的治療。