子癇前期患者不規(guī)則趨化因子表達(dá)及其與血清炎癥因子水平和妊娠結(jié)局的關(guān)系

陳思宇, 白 蘭, 周 宇

(四川省成都市雙流區(qū)第一人民醫(yī)院 醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科, 四川 成都, 610200)

子癇前期(PE)可導(dǎo)致孕婦心臟、腎臟、肝臟等靶器官受損,對(duì)母胎健康造成巨大威脅,是導(dǎo)致不良妊娠結(jié)局發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加的重要疾病之一[1]。目前,臨床尚缺乏治療PE的有效方式,故合理預(yù)測(cè)PE患者的妊娠結(jié)局,對(duì)不良妊娠結(jié)局高風(fēng)險(xiǎn)患者進(jìn)行重點(diǎn)監(jiān)測(cè)和針對(duì)性干預(yù),將明顯改善患者和胎兒的預(yù)后。建立高效的風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)模型是評(píng)估PE患者妊娠結(jié)局的重要方法,但現(xiàn)有預(yù)測(cè)指標(biāo)的整體預(yù)測(cè)價(jià)值有限[2], 因此還需要不斷探索與PE發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的生物標(biāo)志物,從而為建立風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)模型提供新的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。不規(guī)則趨化因子(FKN)是趨化因子CX3C亞家族成員,參與調(diào)節(jié)樹突狀細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞的遷移和黏附[3]。相關(guān)研究[4]顯示, FKN在原發(fā)性高血壓患者血清中呈異常高表達(dá)。另有研究[5]發(fā)現(xiàn), FKN在PE患者血清中的表達(dá)水平高于健康孕婦,且FKN高表達(dá)是PE患者心功能受損的危險(xiǎn)因素之一。目前, FKN與PE患者妊娠結(jié)局關(guān)系的研究較少見, FKN能否作為評(píng)估PE患者妊娠結(jié)局的新型生物標(biāo)志物尚不明確。本研究分析PE患者血清與胎盤組織中FKN表達(dá)情況,并探討FKN與血清炎癥因子和妊娠結(jié)局的關(guān)系,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2020年6月—2022年3月本院收治的PE患者152例作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn): ① 符合第9版《婦產(chǎn)科學(xué)》中PE診斷標(biāo)準(zhǔn)者; ② 在本院分娩,各項(xiàng)臨床資料完整者; ③ 單胎妊娠者。排除標(biāo)準(zhǔn): ① 合并嚴(yán)重心、肝、腎等臟器疾病者; ② 因PE以外的其他原因提前終止妊娠者; ③ 合并感染性疾病、惡性腫瘤、免疫功能疾病者; ④ 人工輔助受孕者; ⑤ 合并妊娠糖尿病等妊娠期特有疾病者。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)(2020-015), 且患者或其家屬均簽署知情同意書。

1.2 分組方法

統(tǒng)計(jì)所有PE患者的妊娠結(jié)局。若患者存在下列情況的1種及以上則納入不良妊娠結(jié)局組[6], 包括子癇、HELLP綜合征、顱內(nèi)疾病、心力衰竭、肺水腫、胎兒宮內(nèi)窘迫、胎盤早剝、胎死宮內(nèi)等; 若患者未出現(xiàn)母兒不良妊娠結(jié)局,則納入正常妊娠結(jié)局組。

1.3 研究方法

抽取所有PE患者入院待產(chǎn)時(shí)的空腹靜脈血5 mL, 使用低溫離心機(jī)高速離心10 min(3 000轉(zhuǎn)/min)后收集上層血清。采用購(gòu)自武漢博士德生物有限公司的酶聯(lián)免疫試劑盒檢測(cè)血清FKN、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平,采用克曼AU5800生化分析儀檢測(cè)超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)水平。

收集所有患者的胎盤組織,常規(guī)石蠟包埋、切片,胎盤組織中FKN表達(dá)情況采用免疫組織化學(xué)法進(jìn)行檢測(cè)。將組織切片置于60 ℃恒溫烤箱進(jìn)行融蠟處理,二甲苯浸泡5 min, 梯度酒精(100%、95%、75%)水化處理,各浸泡5 min。用磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗切片3次, 3 min/次,再用枸櫞酸鹽緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù),煮沸15 min, PBS沖洗3次, 3 min/次。使用山羊血清進(jìn)行封閉,加入一抗(1∶200, 購(gòu)于美國(guó)Abcam公司),將切片置于4 ℃環(huán)境下孵育過(guò)夜。PBS沖洗3次, 3 min/次,辣根酶標(biāo)記免疫球蛋白G聚合物孵育20 min后進(jìn)行DAB顯色,顯色完成后以蘇木素復(fù)染30 s, 梯度酒精脫水、二甲苯透明處理,中性樹膠封片。在鏡下隨機(jī)選取4個(gè)高倍視野,觀察染色細(xì)胞比例和染色強(qiáng)度。染色細(xì)胞比例評(píng)分: >75%、>50%～75%、>25%～50%、5%～25%、<5%分別得4、3、2、1、0分。染色強(qiáng)度評(píng)分: 棕褐色、棕黃色、淺黃色、無(wú)明顯染色分別得3、2、1、0分。每項(xiàng)評(píng)分的結(jié)果均取4個(gè)視野的均值,將染色細(xì)胞比例評(píng)分和染色強(qiáng)度評(píng)分的乘積作為最終免疫組化評(píng)分,若免疫組化評(píng)分≥4分則判定為陽(yáng)性表達(dá), <4分則判定為陰性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 2組患者相關(guān)指標(biāo)比較

2組患者的年齡、孕前體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、孕次、高血壓家族史比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05), 不良妊娠結(jié)局組的舒張壓、收縮壓、胎盤組織FKN陽(yáng)性率和血清TNF-α、血清hs-CRP、血清FKN水平均高于正常妊娠結(jié)局組,妊娠時(shí)間短于正常妊娠結(jié)局組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1、圖1。

表1 2組患者相關(guān)指標(biāo)比較

2.2 PE患者血清FKN表達(dá)與其他指標(biāo)的相關(guān)性分析

相關(guān)性分析顯示, PE患者血清FKN表達(dá)與舒張壓、收縮壓、血清TNF-α、血清hs-CRP水平呈正相關(guān)(P<0.05), 與年齡、孕前BMI、孕次、妊娠時(shí)間無(wú)相關(guān)性(P>0.05), 見表2。

表2 PE患者血清FKN表達(dá)與其他指標(biāo)的相關(guān)性分析

2.3 PE患者不良妊娠結(jié)局的危險(xiǎn)因素分析

將2.1中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的指標(biāo)作為自變量,將PE患者是否發(fā)生不良妊娠結(jié)局作為因變量(發(fā)生不良妊娠結(jié)局=1, 未發(fā)生不良妊娠結(jié)局=0),納入多因素Logistic回歸模型。分析結(jié)果顯示,血清TNF-α高表達(dá)、血清hs-CRP高表達(dá)、血清FKN高表達(dá)、胎盤組織FKN陽(yáng)性均為PE患者不良妊娠結(jié)局的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,妊娠時(shí)間長(zhǎng)是PE患者妊娠結(jié)局的獨(dú)立保護(hù)因素(P<0.05), 見表3。

表3 PE患者不良妊娠結(jié)局影響因素的多因素Logistic回歸分析

2.4 各指標(biāo)對(duì)PE患者不良妊娠結(jié)局的預(yù)測(cè)價(jià)值分析

ROC曲線顯示,血清TNF-α、hs-CRP、FKN和胎盤組織FKN預(yù)測(cè)PE患者不良妊娠結(jié)局的曲線下面積分別為0.615(95%CI: 0.522～0.708)、0.681(95%CI: 0.595～0.767)、0.766(95%CI: 0.690～0.842)和0.702(95%CI: 0.619～0.785), 其中血清FKN和胎盤組織FKN的預(yù)測(cè)價(jià)值較高,曲線下面積均>0.7, 見表4、圖2。

圖2 各指標(biāo)預(yù)測(cè)PE患者不良妊娠結(jié)局的ROC曲線

表4 各指標(biāo)對(duì)PE患者不良妊娠結(jié)局的預(yù)測(cè)價(jià)值

3 討 論

PE是以血壓升高、蛋白尿等為主要臨床癥狀的妊娠期特有疾病,其發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜,至今仍未完全明確[7]?！皟呻A段發(fā)病學(xué)說(shuō)”認(rèn)為, PE的發(fā)生與發(fā)展可分為2個(gè)重要階段: 第1階段,滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲、增殖能力受各類因素的影響明顯降低,引起螺旋小動(dòng)脈重鑄障礙,進(jìn)而出現(xiàn)胎盤血流灌注不足情況,導(dǎo)致大量胎盤因子被分泌,該階段暫無(wú)明顯臨床癥狀[8-9]; 第2階段,在分泌的胎盤因子作用下,機(jī)體出現(xiàn)氧化-抗氧化失衡和炎癥反應(yīng),進(jìn)而損傷血管內(nèi)皮功能,出現(xiàn)一系列臨床癥狀[10-11]?！皟呻A段發(fā)病學(xué)說(shuō)”提示,炎癥反應(yīng)在PE發(fā)展過(guò)程中起著重要促進(jìn)作用,相關(guān)基礎(chǔ)研究[12-13]也發(fā)現(xiàn), PE患者胎盤中存在明顯的炎癥反應(yīng),且經(jīng)典的炎癥信號(hào)通路核因子-κB也處于高度激活狀態(tài)。

FKN基因定位于人染色體16q13片段,分子量為95 kD, 存在膜結(jié)合型和分泌型這2種分子形式,具有豐富的生物學(xué)功能,在惡性腫瘤、心腦血管疾病中均發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用[14]。相關(guān)研究[15-16]發(fā)現(xiàn), PE患者血清和蛻膜組織中FKN水平高于健康孕婦,提示FKN在PE患者中呈異常高表達(dá),可能參與疾病的發(fā)生與發(fā)展。本研究結(jié)果顯示,不良妊娠結(jié)局組的血清FKN水平和胎盤組織FKN陽(yáng)性率均高于正常妊娠結(jié)局組,且血清FKN高表達(dá)、胎盤組織FKN陽(yáng)性均為PE患者不良妊娠結(jié)局的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,表明FKN表達(dá)情況與PE患者妊娠結(jié)局密切相關(guān)。目前, FKN影響PE患者妊娠結(jié)局的具體作用機(jī)制尚不清楚,可能與其調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)有關(guān)。FKN又稱CX3CL1, 其與特異性受體CX3CR1結(jié)合后可對(duì)白細(xì)胞產(chǎn)生趨化和黏附作用,進(jìn)而促進(jìn)炎癥反應(yīng)[17]; 膜結(jié)合型FKN具有黏蛋白樣桿狀結(jié)構(gòu),該結(jié)構(gòu)能進(jìn)一步緊密黏附聚集的白細(xì)胞,可進(jìn)一步放大白細(xì)胞聚集引起的炎癥反應(yīng)[18]。NONN O等[19]研究結(jié)果顯示,胎盤中的FKN可有效促進(jìn)人單核細(xì)胞黏附,增強(qiáng)CD16+單核細(xì)胞亞群的促炎狀態(tài)。本研究結(jié)果顯示,不良妊娠結(jié)局組的血清炎癥因子TNF-α、hs-CRP水平均顯著高于正常妊娠結(jié)局組,且PE患者血清FKN表達(dá)與血清TNF-α、hs-CRP水平均呈正相關(guān),提示FKN可能通過(guò)調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)而參與PE疾病進(jìn)展。炎癥反應(yīng)可促進(jìn)氧化應(yīng)激反應(yīng),兩者共同介導(dǎo)血管內(nèi)皮功能損傷,促進(jìn)PE進(jìn)展,故FKN可能通過(guò)促進(jìn)炎癥反應(yīng)而損傷PE患者的血管內(nèi)皮功能,進(jìn)而加重患者病情,影響妊娠結(jié)局。陳其敬等[20]研究結(jié)果顯示,原發(fā)性高血壓患者血清FKN高表達(dá)與血管內(nèi)皮功能受損密切相關(guān),驗(yàn)證了FKN對(duì)血管內(nèi)皮功能存在不利影響。本研究ROC曲線顯示,血清FKN、胎盤組織FKN預(yù)測(cè)PE患者不良妊娠結(jié)局的曲線下面積分別為0.766(95%CI: 0.690～0.842)、0.702(95%CI: 0.619～0.785), 曲線下面積均大于0.7, 具有較高的預(yù)測(cè)價(jià)值,提示FKN有望成為評(píng)估PE患者妊娠結(jié)局的新型標(biāo)志物。值得注意的是,除了炎癥因子和FKN外,妊娠時(shí)間也與不良妊娠結(jié)局存在密切關(guān)聯(lián),且妊娠時(shí)間長(zhǎng)是PE患者不良妊娠結(jié)局的獨(dú)立保護(hù)因素,提示臨床醫(yī)師在條件允許的情況下應(yīng)盡量延長(zhǎng)PE患者的妊娠時(shí)間,足月時(shí)再考慮終止妊娠。

綜上所述, PE患者血清FKN和胎盤組織FKN均呈高表達(dá),且其表達(dá)水平與血清炎癥因子水平和不良妊娠風(fēng)險(xiǎn)有關(guān),兩者對(duì)PE患者不良妊娠結(jié)局的預(yù)測(cè)價(jià)值均較高。FKN有望成為PE的新型生物標(biāo)志物,但目前相關(guān)研究尚較少, FKN調(diào)控PE發(fā)生與發(fā)展的具體作用機(jī)制還需開展更多的基礎(chǔ)研究加以探討。