circERBB2在卵巢癌中的表達(dá)及作用機(jī)制研究

趙 達(dá), 包利利, 李 波, 俞 巖, 王曉黎

(1. 海南醫(yī)學(xué)院, 海南 海口, 570216; 2. 海南省婦女兒童醫(yī)學(xué)中心 婦科, 海南 ?？? 570100)

卵巢癌是臨床常見(jiàn)的婦科腫瘤,也是婦科腫瘤相關(guān)死亡的5大原因之一[1-2]。早期診斷并治療可提高卵巢癌患者的生存率,故臨床亟需探尋新的診斷與治療靶點(diǎn),以改善卵巢癌患者的預(yù)后。環(huán)狀RNA(circRNA)是一種呈封閉環(huán)狀結(jié)構(gòu)的RNA分子,不受RNA外切酶影響,表達(dá)穩(wěn)定,不易降解[3]。研究[4]表明,由癌癥相關(guān)染色體易位產(chǎn)生的融合circRNA與腫瘤發(fā)生和治療耐藥性有關(guān)。微小RNA(miRNAs)是長(zhǎng)度為19～22個(gè)核苷酸的短鏈RNA,其作為許多細(xì)胞過(guò)程的負(fù)調(diào)節(jié)因子,在癌癥、糖尿病、肥胖癥和心血管疾病等疾病中大量異常表達(dá)[5]。miRNAs通過(guò)與信使RNA(mRNA)3′UTR的特定位點(diǎn)結(jié)合,調(diào)節(jié)動(dòng)物30%的基因,導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄后抑制[6]。miRNAs在細(xì)胞增殖、分化、凋亡等方面的作用已得到證實(shí),且其在發(fā)育中也發(fā)揮作用[7]。研究[8]發(fā)現(xiàn),微小RNA-187-3p(miR-187-3p)在肺癌、腎細(xì)胞癌、前列腺癌、結(jié)直腸癌中表達(dá)下調(diào),提示miR-187-3p在人類(lèi)癌癥中具有抑瘤作用。原癌基因BCL6是轉(zhuǎn)錄主調(diào)節(jié)因子,在分子水平上能夠抑制TP53、CDKN1A和ATR等DNA損傷反應(yīng)基因,以促進(jìn)與轉(zhuǎn)型重組和體細(xì)胞高突變相關(guān)的基因組對(duì)不穩(wěn)定性的耐受性。目前,BCL6在卵巢癌中的作用及其與circERBB2和miR-187-3p的關(guān)系尚未明確。本研究基于臨床樣本分析和體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)等探討circERBB2在卵巢癌中的表達(dá)情況及作用機(jī)制,以期為卵巢癌的預(yù)防及靶向治療提供一定理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 臨床樣本

選取2021年6月—2022年12月海南省婦女兒童醫(yī)學(xué)中心收治的20例卵巢癌患者的卵巢癌組織和癌旁正常組織作為研究樣本,患者均經(jīng)病理檢查和細(xì)胞學(xué)檢查確診卵巢癌。20例患者中,年齡≤55歲4例, >55歲16例; 腫瘤直徑≤3 cm者13例, >3 cm者7例; 國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)分期Ⅰ～Ⅱ期者14例,Ⅲ～Ⅳ期者6例。本研究方案獲得海南省婦女兒童醫(yī)學(xué)中心倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn),且所有患者簽署知情同意書(shū)。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)方法

人正常卵巢細(xì)胞系HOSEpiC和人卵巢癌細(xì)胞系OVCAR-3、SKOV-3、3AO、OV90均購(gòu)自北納生物細(xì)胞公司。在含10%胎牛血清(FBS, 美國(guó)Hyclone公司)的90% RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)HOSEpiC、3AO細(xì)胞; 在含20%FBS的90% RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)OVCAR-3細(xì)胞; 在含10%FBS的90% DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)SKOV-3、OV90細(xì)胞。所有細(xì)胞均放置于37 ℃、5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)。

1.3 GEO數(shù)據(jù)庫(kù)分析

應(yīng)用findcirc和circfinder工具分析來(lái)自GEO數(shù)據(jù)庫(kù)的高通量數(shù)據(jù)(GSE79572數(shù)據(jù)集)。以P<0.05和倍數(shù)變化值>2.0篩選卵巢癌中差異表達(dá)的circRNA, 以P<0.05和倍數(shù)變化值>1.0篩選差異表達(dá)的miRNA?；赥argetscan 7.1軟件和韋恩圖,篩選GSE79572數(shù)據(jù)集中差異表達(dá)基因與預(yù)測(cè)所得miRNA靶向基因的交叉基因。

1.4 實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)

使用TRIZOL試劑(美國(guó)Invitrogen公司)和PrimeScript RT試劑盒(日本Takara公司)提取總RNA, 使用SYBRGreenI試劑盒(日本Takara公司)和LightCycler2.0試劑盒(瑞士Roche公司)進(jìn)行qRT-PCR, 內(nèi)參基因分別為U6和GAPDH, 引物序列見(jiàn)表1, 采用2-△△Ct法分析基因相對(duì)表達(dá)量。

表1 引物序列

1.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染與分組

pcDNA3.1 hsa_circ_0007766(circERBB2)、miR-187-3p模擬物、miR-187-3p抑制劑和陰性對(duì)照(NC)載體(中國(guó)GenePharma公司),si-circERBB2-1、si-circERBB2-2和si-BCL6(美國(guó)Invitrogen公司), si-BCL6、miR-187-3p模擬物和miR-187-3p抑制劑序列見(jiàn)表2。將細(xì)胞按不同轉(zhuǎn)染方法進(jìn)行分組,分別為對(duì)照組(轉(zhuǎn)染NC)、si-circ 1組(轉(zhuǎn)染si-circERBB2-1)、si-circ 2組(轉(zhuǎn)染si-circERBB2-2)、模擬物組(轉(zhuǎn)染miR-187-3p模擬物)、si-BCL6組(轉(zhuǎn)染si-BCL6)、抑制劑組(轉(zhuǎn)染miR-187-3p抑制劑)、si-circ+抑制劑組(轉(zhuǎn)染si-circERBB2-1+miR-187-3p抑制劑)、抑制劑+si-BCL6組(轉(zhuǎn)染miR-187-3p抑制劑+si-BCL6)、p-circ組(轉(zhuǎn)染pcDNA3.1 circERBB),根據(jù)轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine2000(美國(guó)Invitrogen公司)操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。培養(yǎng)24 h后,檢測(cè)各組細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率。

表2 BCL6 siRNA、miR-187-3p模擬物及抑制劑序列

1.6 核糖核酸酶R(RNase R)消化試驗(yàn)

使用circERBB2和GAPDH在20 μL反應(yīng)緩沖液中于37 ℃環(huán)境進(jìn)行RNase R消化反應(yīng)45 min。通過(guò)乙醇沉淀法除去酶和鹽,重復(fù)消化和沉淀反應(yīng)2次。通過(guò)2.0% TAE-Agarose凝膠電泳或2100生物分析儀(Aglient)對(duì)已處理RNA樣品進(jìn)行分析,并與未處理RNase R樣品進(jìn)行比較。所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.7 RNA下拉實(shí)驗(yàn)

使用生物素RNA標(biāo)記混合物(瑞士Roche公司)對(duì)circERBB2-野生型(circ-Probe組)和對(duì)照組(con-Probe組)探針進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄和生物素標(biāo)記,用不含RNase的DNase I(瑞士Roche公司)處理(Input組)并使用RNeasy Mini試劑盒(美國(guó)Qiagen公司)進(jìn)行RNA下拉實(shí)驗(yàn)。將細(xì)胞蛋白提取物(1 mg)與生物素化RNA生物素標(biāo)記的RNA(50 pmol)混合,用鏈霉親和素瓊脂糖珠(美國(guó)Invitrogen公司)孵育,用室溫NaCl/碘化丙啶(PI)洗滌3次。將樣品離心后,提取RNA上清液,進(jìn)行qRT-PCR實(shí)驗(yàn),檢測(cè)circERBB2和miR-187-3p水平。所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.8 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)

將野生型BCL6(BCL6-WT)、突變型BCL6(BCL6-MUT)、miR-187-3p模擬物和模擬物對(duì)照3′UTR插入pGL3載體(美國(guó)Promega公司)合成熒光素酶報(bào)告基因載體的相關(guān)結(jié)合位點(diǎn)。將293T細(xì)胞培養(yǎng)于24孔板,再將miR-187-3p模擬物(miR-對(duì)照組)、模擬物對(duì)照(miR-模擬物組)和BCL6-WT或BCL6-MUT共同轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞,通過(guò)Lipofectamine3000(美國(guó)Life公司)于轉(zhuǎn)染后48 h測(cè)定熒光素酶活性。所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.9 細(xì)胞活力檢測(cè)

采用噻唑藍(lán)(MTT)法測(cè)定轉(zhuǎn)染后48 h的細(xì)胞增殖水平,每個(gè)孔用含100.0 μL新鮮0.5 g/L MTT的無(wú)血清培養(yǎng)基代替轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基。37 ℃孵育4 h后,吸除MTT培養(yǎng)基,并向每孔加入50.0 μL二甲亞砜(DMSO), 37 ℃孵育10 min, 用分光光度儀檢測(cè)455 nm處吸光度。所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.10 細(xì)胞周期檢測(cè)

在細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)中,轉(zhuǎn)染后72 h收集不同的細(xì)胞群進(jìn)行消化,得到細(xì)胞懸液。將細(xì)胞懸液離心,棄上清液,剩余細(xì)胞用預(yù)冷磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌2次,用75%乙醇固定4 h。將固定好的細(xì)胞離心,再用PBS洗滌3次。向固定的細(xì)胞中加入40 μg PI和1 mL RNase染色液(美國(guó)BD生物科學(xué)),于避光區(qū)室溫孵育15 min。染色后,使用FACS Calibur(美國(guó)BD公司)檢測(cè)細(xì)胞周期,并使用FACS Diva(美國(guó)BD公司)分析數(shù)據(jù)。所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.11 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)

采用傷口愈合實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)人卵巢OVCAR-3細(xì)胞活力。將細(xì)胞置于含無(wú)血清培養(yǎng)基的6孔板中,達(dá)到80%～90%的融合度,用200 μL微量移液管進(jìn)行劃痕處理。使用顯微鏡對(duì)不同時(shí)點(diǎn)劃痕愈合情況進(jìn)行拍照檢測(cè)。所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.12 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)

將100 μL Tritrigel(美國(guó)BD Bioscience公司)和400 μL無(wú)血清培養(yǎng)基充分混合,置于Transwell腔室(美國(guó)Corning公司)中(40 μL/室)。將無(wú)血清培養(yǎng)基中0.5×106～2.5×106個(gè)細(xì)胞放入上腔室(每個(gè)腔室200 μL),同時(shí)將含20%FBS的培養(yǎng)基添加至下腔室。培養(yǎng)24～48 h后,用4%多聚甲醛固定細(xì)胞, 0.1%結(jié)晶紫染色。對(duì)每個(gè)小孔進(jìn)行拍照,統(tǒng)計(jì)5～10個(gè)獨(dú)立區(qū)域,計(jì)算統(tǒng)計(jì)平均值。所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 circERBB2、miR-187-3p與BCL6的關(guān)系

本研究對(duì)GSE79572數(shù)據(jù)集進(jìn)行findcirc和circfinder分析發(fā)現(xiàn),卵巢癌中僅有1種共同的差異表達(dá)circRNA呈高表達(dá),即circERBB2, 見(jiàn)圖1A; 基于TargetScan Human 7.1發(fā)現(xiàn)circERBB2靶向的miRNA,即miR-187-3p, 見(jiàn)圖1B; 從TargetScan 7.1中獲得GSE79572數(shù)據(jù)集差異表達(dá)基因與預(yù)測(cè)所得miR-187-3p靶向基因,韋恩圖取交集后得到7個(gè)交叉基因,見(jiàn)圖1C、圖1D; 從TargetScan數(shù)據(jù)庫(kù)獲取circERBB2與miR-187-3p之間、miR-187-3p與BCL6之間的潛在結(jié)合位點(diǎn),見(jiàn)圖1E。

A: 對(duì)GSE79572數(shù)據(jù)集進(jìn)行findcirc和circfinder分析,卵巢癌中僅1種共同的差異表達(dá)circRNA(circERBB2)呈高表達(dá);B: TargetScan Human 7.1分析發(fā)現(xiàn)靶標(biāo)miRNA(miR-187-3p); C: GSE79572數(shù)據(jù)集中差異表達(dá)基因與預(yù)測(cè)所得miR-187-3p靶向基因的韋恩圖; D: 7個(gè)交叉基因列表; E: circERBB2與miR-187-3p、miR-187-3p與BCL6的潛在結(jié)合位點(diǎn)。

2.2 circERBB2、miR-187-3p、BCL6在卵巢癌組織和癌旁組織中的表達(dá)情況

卵巢癌組織中circERBB2、BCL6表達(dá)水平高于癌旁組織, miR-187-3p表達(dá)水平低于癌旁組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 見(jiàn)表3。卵巢癌細(xì)胞系OVCAR-3、SKOV-3、3AO、OV90中circERBB2表達(dá)水平均高于正常卵巢細(xì)胞系HOSEpiC,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 見(jiàn)表4。因OVCAR-3細(xì)胞、SKOV-3細(xì)胞 circERBB2表達(dá)量高,本研究選用OVCAR-3細(xì)胞、SKOV-3細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

表3 circERBB2、miR-187-3p、BCL6在卵巢癌組織和癌旁組織中的表達(dá)情況比較

表4 circERBB2在不同細(xì)胞系中的表達(dá)情況比較

2.3 circERBB2與miR-187-3p、miR-187-3p與BCL6的靶向關(guān)系

RNA下拉實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,con-Probe組、circ-Probe組circERBB2、miR-187-3p表達(dá)水平均低于Input組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 見(jiàn)表5。

表5 RIP下拉實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證circERBB2和miR-187-3p的表達(dá)情況

OVCAR-3細(xì)胞、SKOV-3細(xì)胞中, p-circ組circERBB2表達(dá)水平均高于對(duì)照組, miR-187-3p表達(dá)水平均低于對(duì)照組, si-circ 1組、si-circ 2組circERBB2表達(dá)水平均低于對(duì)照組,miR-187-3p表達(dá)水平均高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 表明上調(diào)circERBB2可以上調(diào)OVCAR-3、SKOV-3細(xì)胞系中circERBB2表達(dá)并下調(diào)miR-187-3p表達(dá),沉默circERBB2可以下調(diào)OVCAR-3、SKOV-3細(xì)胞系中circERBB2表達(dá)并上調(diào)miR-187-3p表達(dá),見(jiàn)表6。

表6 各組circERRBB2、miR-187-3p表達(dá)情況比較

miR-模擬物組BCL6-WT熒光素酶活性低于BCL6-MUT, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 表明miR-187-3p顯著抑制了BCL6-WT的熒光素酶活性,但未抑制BCL6-MUT的熒光素酶活性,見(jiàn)表7。

表7 各組熒光素酶活性比較

OVCAR-3細(xì)胞、SKOV-3細(xì)胞中,模擬物組miR-187-3p表達(dá)水平高于對(duì)照組,BCL6表達(dá)水平低于對(duì)照組,抑制劑組miR-187-3p表達(dá)水平低于對(duì)照組,BCL6表達(dá)水平高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 表明miR-187-3p模擬物和抑制劑可調(diào)節(jié)miR-187-3p和BCL6表達(dá)水平,見(jiàn)表8。

表8 miR-187-3p模擬物和抑制劑對(duì)細(xì)胞miR-187-3p、BCL6表達(dá)的影響

OVCAR-3細(xì)胞、SKOV-3細(xì)胞中, p-circ組BCL6表達(dá)水平高于對(duì)照組, si-circ 1組、si-circ 2組BCL6表達(dá)水平低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),表明過(guò)表達(dá)circERBB2可顯著上調(diào)BCL6表達(dá),沉默circERBB2可顯著下調(diào)BCL6表達(dá),見(jiàn)表9。

表9 過(guò)表達(dá)和沉默circERBB2對(duì)BCL6表達(dá)的影響

2.4 抑制circERBB2、過(guò)表達(dá)miR-187-3p、抑制BCL6對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖、侵襲、遷移和細(xì)胞周期的影響

OVCAR-3細(xì)胞、SKOV-3細(xì)胞中, si-circ組、模擬物組、si-BCL6組G0/G1期細(xì)胞占比均高于對(duì)照組,S期細(xì)胞占比均低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05); SKOV-3細(xì)胞中,si-circ組、模擬物組、si-BCL6組G2/M期細(xì)胞占比低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 見(jiàn)表10。由此表明,抑制circERBB2、過(guò)表達(dá)miR-187-3p和抑制BCL6均能夠抑制卵巢癌細(xì)胞增殖。細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí), si-circERBB2、miR-187-3p模擬物和si-BCL6阻斷了G1期細(xì)胞周期,見(jiàn)圖2。

表10 各組細(xì)胞周期情況 %

劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示, OVCAR-3細(xì)胞、SKOV-3細(xì)胞中, si-circ組、模擬物組、si-BCL6組的劃痕愈合率均低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), si-circ+抑制劑組、抑制劑+si-BCL6組的劃痕愈合率與對(duì)照組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05), 表明si-circERBB2、miR-187-3p模擬物和si-BCL6可削弱OVCAR-3細(xì)胞、SKOV-3細(xì)胞遷移能力,而miR-187-3p抑制劑可恢復(fù)由si-circERBB2和si-BCL6引起的細(xì)胞遷移能力下降,見(jiàn)表11、圖3A。

表11 各組OVCAR-3細(xì)胞和SKOV-3細(xì)胞的劃痕愈合率比較 %

Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示, OVCAR-3細(xì)胞、SKOV-3細(xì)胞中, si-circ組、模擬物組、si-BCL6組的侵襲細(xì)胞數(shù)量均少于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), si-circ+抑制劑組、抑制劑+si-BCL6組的侵襲細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05), 表明si-circERBB2、miR-187-3p模擬物和si-BCL6可顯著降低卵巢癌細(xì)胞的侵襲能力,抑制miR-187-3p則可恢復(fù)由si-circERBB2和si-BCL6引起的細(xì)胞侵襲能力降低,見(jiàn)表12、圖3B。

表12 各組OVCAR-3細(xì)胞和SKOV-3細(xì)胞的侵襲細(xì)胞數(shù)量比較 個(gè)

3 討 論

卵巢癌是一種多亞型的異質(zhì)性疾病,其中90%為上皮性腫瘤,間質(zhì)細(xì)胞腫瘤和生殖細(xì)胞腫瘤則僅占少數(shù)[9-10]。上皮性卵巢癌是最致命的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤,早期診斷可提高患者的生存率[11-12]。研究[13]表明, circRNA對(duì)細(xì)胞凋亡、細(xì)胞增殖、癌癥發(fā)生和發(fā)育、衰老等過(guò)程具有重要的調(diào)控作用。在健康組織和病變組織的大多數(shù)細(xì)胞過(guò)程中,一些circRNA能夠通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性吸附miRNA而發(fā)揮作用[14-15]。本研究基于數(shù)據(jù)庫(kù)分析在卵巢癌中發(fā)現(xiàn)circERBB2、BCL6和miR-187-3p,并驗(yàn)證了三者間存在的靶向關(guān)系,進(jìn)一步開(kāi)展各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn), circERBB2可通過(guò)靶向miR-187-3p吸附,促進(jìn)原癌基因BCL6表達(dá),調(diào)控卵巢癌的發(fā)展。

圖2 各處理組流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期結(jié)果

本研究結(jié)果顯示, circERBB2在卵巢癌中表達(dá)較高,且其能通過(guò)靶向miR-187-3p發(fā)揮調(diào)控腫瘤進(jìn)程的作用。circRNA廣泛存在于哺乳動(dòng)物細(xì)胞中,通過(guò)吸附miRNA或與其他分子相互作用,在轉(zhuǎn)錄時(shí)或轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)基因表達(dá)水平[16]。本研究還發(fā)現(xiàn), circERBB2與miR-187-3p之間,miR-187-3p與BCL6之間存在潛在結(jié)合位點(diǎn)。本研究發(fā)現(xiàn), circERBB2和BCL6在卵巢癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平較高, miR-187-3p在卵巢癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平較低。既往研究[17]發(fā)現(xiàn),長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNA)和circRNA的生物學(xué)功能機(jī)制使其更傾向于作為上游調(diào)節(jié)物質(zhì)調(diào)節(jié)miRNA表達(dá),進(jìn)而調(diào)控下游基因發(fā)揮作用。

本研究發(fā)現(xiàn), circERBB2與miR-187-3p具有靶向關(guān)系,且p-circERBB2可以上調(diào)circERBB2表達(dá)、下調(diào)miR-187-3p表達(dá),此外miR-187-3p對(duì)BCL6-WT 3′UTR的熒光素酶活性有顯著抑制作用,但對(duì)BCL6-MUT的熒光素酶活性無(wú)顯著抑制作用。miRNA主要通過(guò)阻斷靶基因表達(dá)而介導(dǎo)其在動(dòng)物細(xì)胞中的生物學(xué)功能,本研究搜索不同數(shù)據(jù)庫(kù)后發(fā)現(xiàn)miR-187-3p的預(yù)測(cè)靶標(biāo)基因是BCL6[18]。本研究還發(fā)現(xiàn), miR-187-3p模擬物和抑制劑可調(diào)節(jié)miR-187-3p和BCL6表達(dá),而過(guò)表達(dá)circERBB2可顯著上調(diào)BCL6表達(dá)。由于復(fù)雜的結(jié)構(gòu)重排,BCL6基因與盲肌樣蛋白1(MBNL1)融合[19]。BCL6在免疫反應(yīng)中起著重要作用,是炎癥的負(fù)性調(diào)節(jié)因子。本研究結(jié)果顯示, si-circERBB2、miR-187-3p模擬物和si-BCL6可抑制細(xì)胞增殖,阻滯G1期細(xì)胞周期,抑制細(xì)胞遷移能力和侵襲能力。研究[18]顯示,肺癌細(xì)胞株A549和SPC-A-1中miR-187-3p能夠明顯抑制細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移進(jìn)程。此外, miR-187-3p的生長(zhǎng)抑制作用除了抑制細(xì)胞增殖外,還有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

A: 各處理組OVCAR-3和SKOV-3細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果; B: 各處理組OVCAR-3和SKOV-3細(xì)胞Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果。圖3 OVCAR-3、SKOV-3細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果

本研究通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)對(duì)circERBB2、BCL6、miR-187-3p三者的調(diào)控關(guān)系進(jìn)行初步分析,但仍存在一定局限性,例如僅探討了circERBB2通過(guò)靶向吸附miR-187-3p促進(jìn)原癌基因BCL6表達(dá)進(jìn)而調(diào)節(jié)卵巢癌過(guò)程,對(duì)circBBB2產(chǎn)生這種效應(yīng)的特殊機(jī)制則未深入研究,未來(lái)還需進(jìn)一步深入探討。

綜上所述,本研究基于臨床樣本分析、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)等發(fā)現(xiàn)circERBB2能夠通過(guò)靶向吸附miR-187-3p促進(jìn)原癌基因BCL6表達(dá),從而調(diào)控卵巢癌過(guò)程,這為未來(lái)早期診斷標(biāo)志物的提出及卵巢癌的靶向治療等提供了一定參考依據(jù)。