動(dòng)物源性食品中地塞米松的檢測(cè)相關(guān)研究

王冰聰，曲婧?jiǎn)?，李天雨，?瀟，李 丹，侯 宇

（吉林省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院，吉林長(zhǎng)春 130000）

在動(dòng)物養(yǎng)殖領(lǐng)域，時(shí)常會(huì)應(yīng)用到地塞米松，實(shí)際應(yīng)用過(guò)程如果用量不合理則會(huì)引發(fā)相關(guān)食品內(nèi)藥物殘留超標(biāo)的問(wèn)題，危及食品安全。對(duì)于動(dòng)物源性食品，現(xiàn)下有多種檢測(cè)方法可檢測(cè)其中殘留的地塞米松，主要包含儀器分析法、液相色譜法等。

1 地塞米松簡(jiǎn)析

地塞米松也被稱(chēng)為氟美松，隸屬甾體類(lèi)化合物的范疇，在獸醫(yī)臨床活動(dòng)中以醋酸地塞米松與地塞米松磷酸鈉的應(yīng)用為主，其中醋酸地塞米松呈白色結(jié)晶，遇乙醇或者氯仿發(fā)生輕微溶解，遇乙醚會(huì)進(jìn)一步溶解，遇水不溶解，通常將其制作成片劑。而地塞米松磷酸鈉以微黃色粉末的形式存在，遇水或者甲醇發(fā)生溶解，遇到丙酮和乙醚基本上不溶解，一般將其制作成注射劑。地塞米松具有抗炎和抗過(guò)敏性，主要用在母畜代謝病癥中，也可與抗生素一起應(yīng)用到感染性疾病中。因?yàn)樗艽龠M(jìn)飼料轉(zhuǎn)化，加快畜禽生長(zhǎng)，所以在畜牧生產(chǎn)中得到了廣泛應(yīng)用。但如果用量過(guò)度或者不規(guī)范用藥，則會(huì)引發(fā)水腫和肌肉萎縮等病癥，還存在藥物殘留的隱患。雖然此類(lèi)藥物在肉制品中殘留較低，但長(zhǎng)時(shí)間食用也會(huì)出現(xiàn)超標(biāo)的問(wèn)題，并會(huì)引發(fā)人體激素代謝混亂和肥胖等問(wèn)題，出現(xiàn)蓄積性毒性，無(wú)論對(duì)人體健康，還是生態(tài)環(huán)境都會(huì)產(chǎn)生一定的危害。

2 檢測(cè)技術(shù)研究

2.1 酶聯(lián)免疫法

酶聯(lián)免疫法是把抗原或者抗體融入特定固相載體表面，保證免疫活性，把抗體、抗原與某種酶聯(lián)結(jié)成酶標(biāo)抗體或抗原，再添加樣品，進(jìn)行免疫反應(yīng)，隨后添加酶反應(yīng)底物，停止反應(yīng)，依照顯色反應(yīng)結(jié)果并利用分光光度計(jì)展開(kāi)分析。該方法具有較高的靈敏性和特異性，耗時(shí)短、樣品檢測(cè)成本經(jīng)濟(jì)、預(yù)處理程序簡(jiǎn)單，比較適合應(yīng)用在批量樣品的初篩工作中。此方法包含雙抗體夾心法、間接法和競(jìng)爭(zhēng)法這幾種類(lèi)型，在檢測(cè)大分子抗原與抗體時(shí)會(huì)應(yīng)用到前兩種方法，而競(jìng)爭(zhēng)法需根據(jù)實(shí)驗(yàn)步驟分為直接競(jìng)爭(zhēng)和間接競(jìng)爭(zhēng)兩種，主要用來(lái)檢測(cè)小分子抗原，在食品安全檢測(cè)中應(yīng)用最多。

最早在1998 年，CERNI 等提出一種高效的提取方法，通過(guò)酶聯(lián)免疫法檢測(cè)牛肝中的地塞米松，其回收率達(dá)到130%，檢出限與定量限分別為1.43 μg·kg-1、2.09 μg·kg-1。VDOVENKO 等[1]研 究出一種利用過(guò)氧化酶檢測(cè)牛奶中地塞米松含量的策略，將25%的甲醇添加到牛奶中，通過(guò)離心方法加以處理，規(guī)避了基質(zhì)效應(yīng)，由此檢測(cè)的IC50為0.9 ng·mL-1，回收率為120%左右。羅曉琴等[2]提出的間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫法在雞肉檢測(cè)樣本中的最低檢測(cè)限達(dá)到了0.1 μg·kg-1，變異系數(shù)在10%，該方法具有較高的靈敏性和準(zhǔn)確度，前處理程序簡(jiǎn)單，可達(dá)到獸藥殘留檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。WANG 等[3]研制出地塞米松半抗原與多克隆抗體，提出了間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免吸附法，用該方法檢測(cè)雞組織，IC50為0.061 ng·mL-1，檢出限為0.015 μg·kg-1，回收率處于90%左右。雞肉與雞肝內(nèi)的地塞米松檢出限對(duì)應(yīng)為0.3 μg·kg-1、0.5 μg·kg-1，該方法具有較高的靈敏性和精密性，但也存在一定的不足，缺少特異性，且抗體在地塞米松類(lèi)似物中存在交叉反應(yīng)。通過(guò)間接競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)地塞米松殘留，具有較高的靈敏性和精確性，且用時(shí)短，檢測(cè)樣本量較大，比較適合應(yīng)用于大量樣本檢測(cè)中，是現(xiàn)下較為普遍的獸藥殘留檢測(cè)方法。

2.2 免疫層析法

免疫層析法建立在20 世紀(jì)末期，融入了免疫技術(shù)與色譜層析技術(shù)，是一種全新的檢測(cè)技術(shù)手段，它是以抗原抗體特性免疫反應(yīng)為主。在層析環(huán)節(jié)，抗體和待測(cè)物相互結(jié)合變成復(fù)合物，借助毛細(xì)作用力完成層析，再被抗體或者抗原加以捕獲，一點(diǎn)點(diǎn)聚集，借助肉眼或者儀器進(jìn)行觀察，完成定量檢測(cè)。免疫層析法可進(jìn)行單人份檢測(cè)，具有對(duì)操作人員要求不高、檢測(cè)高效、成本低以及應(yīng)用廣泛等優(yōu)點(diǎn)。

WANG 等[4]研制出了抗地塞米松單克隆抗體，這一抗體具有較強(qiáng)的特異性，其IC50為0.095 ng·mL-1，并在此基礎(chǔ)上提出免疫層析膠體金試紙條，它在牛奶中的視覺(jué)臨界值為0.5，一次檢測(cè)的時(shí)間在10 min。ZHANG 等[5]提出以上轉(zhuǎn)換發(fā)光微球?yàn)榛A(chǔ)的免疫層析法，可用于高效、全面檢測(cè)動(dòng)物組織內(nèi)部的地塞米松，IC50值為0.58 ng·mL-1，檢出限在0.3 μg·kg-1，平均回收率為84.5%，還可使用手持讀取儀在現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行檢測(cè)。

免疫檢測(cè)技術(shù)在人類(lèi)醫(yī)學(xué)和食品安全等領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。在早期，免疫層析技術(shù)通常借助膠體金顯色原理完成定性檢測(cè)，而最近10 年，熒光材料與檢測(cè)儀得到了進(jìn)一步發(fā)展，依托免疫層析平臺(tái)形成的定量檢測(cè)產(chǎn)品已達(dá)到了產(chǎn)業(yè)化的規(guī)模。

2.3 氣相色譜法

氣相色譜主要以氣體充當(dāng)流動(dòng)相，載氣即為氣體流動(dòng)相，通過(guò)加熱氣化處理注入樣口中的物質(zhì)，通過(guò)載氣向色譜柱轉(zhuǎn)送進(jìn)行分離，之后不斷被檢出。氣相色譜主要用來(lái)分析分子量小、具有揮發(fā)性、不易分解的物質(zhì)，如果分子量大可利用不同的處理手段將其變成易于揮發(fā)的化合物加以測(cè)定。地塞米松本質(zhì)上是一種糖皮質(zhì)激素，由于缺少揮發(fā)性，在選用氣相色譜法進(jìn)行檢測(cè)時(shí)應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)难苌磻?yīng)，為此，樣品前處理較為煩瑣。在早期，研究者主要利用OV-17 柱來(lái)檢測(cè)糖皮質(zhì)激素，可檢測(cè)出一定量的三甲基硅烷衍生物。氣相色譜具有一定的靈敏性，且符合獸藥殘留標(biāo)準(zhǔn)，但卻無(wú)法全面分解出痕量獸藥殘留情況。

2.4 高效液相色譜法

高效液相色譜是當(dāng)前普遍應(yīng)用的分離分析技術(shù)，它借助高壓輸液泵把規(guī)定流動(dòng)相轉(zhuǎn)入含固定相的色譜柱內(nèi)，因柱內(nèi)各成分于兩相中表現(xiàn)出不同的分配系數(shù)差異，由此得以分離，經(jīng)由檢測(cè)器完成檢驗(yàn)。此方法適合應(yīng)用于不易揮發(fā)的、熱不穩(wěn)定化合物。在糖皮質(zhì)激素檢測(cè)中，一般選用含紫外檢測(cè)器的色譜儀，此類(lèi)色譜儀具有較高的選擇性與靈敏性。

2.5 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（Gas Chromatography-Mass Spectrometry，GC-MS）是把GC 與MS 經(jīng)由接口相互連接，GC 對(duì)復(fù)雜混合物進(jìn)行分離，變成單組分以后流向MS，MS 則是把位于電場(chǎng)與磁場(chǎng)內(nèi)不斷運(yùn)動(dòng)的離子依托質(zhì)荷比相互分離隨后檢測(cè)的一種方法。色譜法無(wú)法準(zhǔn)確判斷分析物，也不能有效鑒定內(nèi)部結(jié)構(gòu)，但與質(zhì)譜法聯(lián)用可有效解決上述問(wèn)題。近年來(lái)，隨著色譜和質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的問(wèn)世，很多研究人員開(kāi)始嘗試?yán)肎C-MS 檢測(cè)動(dòng)物源性食品內(nèi)部的甾體激素殘留情況，此種方法具有良好的靈敏性。

2.6 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

液相色譜-質(zhì)譜于液相色譜內(nèi)分離，離子化處理后經(jīng)由質(zhì)譜的質(zhì)量分析器把離子碎片依托質(zhì)量數(shù)分開(kāi)，再利用檢測(cè)器獲得質(zhì)譜圖。該方法具有優(yōu)良的選擇性與較高的靈敏性，可全面剖析復(fù)雜樣品基質(zhì)內(nèi)部的痕量組分，并可準(zhǔn)確辨識(shí)糖皮質(zhì)激素內(nèi)部的差向異構(gòu)體。DRAISCI 等[6]利用加速溶劑萃取法可有效提取牛肝臟內(nèi)部的倍他米松與地塞米松，經(jīng)由液相色譜、質(zhì)譜聯(lián)用法進(jìn)行檢測(cè)，最低定量限為10.3 μg·kg-1，回收率為75%。ANTIGNAC 等[7]利用C18固相萃取柱進(jìn)行濃縮與凈化處理，利用此法可檢測(cè)出牛肉、尿液、毛發(fā)內(nèi)的倍他米松與地塞米松，在肉品和尿液中殘留最低檢測(cè)限是0.05 μg·kg-1，在毛發(fā)中的則是6 μg·kg-1，回收率在50%。

檢測(cè)牛奶樣品時(shí)，因內(nèi)部含有大量的蛋白質(zhì)與脂肪，整體目標(biāo)化合物含量不高，非常容易遭受干擾，因此，進(jìn)行前處理十分關(guān)鍵。任宏彬等[8]在使用該法檢測(cè)牛奶中的地塞米松時(shí)，利用固相萃取法檢測(cè)樣品，并改進(jìn)色譜條件，其檢出限與定量限分別為0.08 μg·kg-1、0.25 μg·kg-1，對(duì)應(yīng)回收率在80%左右。

3 展望

綜上所述，酶聯(lián)免疫層析法的靈敏性高、特異性突出、成本低廉，但實(shí)際操作離不開(kāi)專(zhuān)業(yè)人員，耗用時(shí)間較長(zhǎng)、程序復(fù)雜，且對(duì)樣本數(shù)量還有一定的要求，否則將會(huì)造成無(wú)形的浪費(fèi)，通常應(yīng)用于中心實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)中。生物技術(shù)的大力發(fā)展與食品安全關(guān)注度的提升加快了地塞米松免疫檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展進(jìn)程，從理論層面來(lái)說(shuō)，只要具有地塞米松半抗原與抗體，便能開(kāi)發(fā)出集免疫層析和酶聯(lián)免疫等于一身的免疫檢測(cè)法。從免疫層析的角度來(lái)說(shuō)，因近年涌現(xiàn)出不同的標(biāo)記物，可進(jìn)一步提升檢測(cè)結(jié)果的靈敏性，原有的膠體金或者微球免疫熒光可達(dá)到各國(guó)在食品中提出的地塞米松檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，在未來(lái)，將重點(diǎn)探索前處理簡(jiǎn)化問(wèn)題，進(jìn)一步增加檢測(cè)方法的便捷性和高效性。而氣相色譜法需要在前期采用衍生化處理，前處理相對(duì)復(fù)雜，實(shí)際應(yīng)用較少。近年來(lái)，隨著聯(lián)用技術(shù)水平的提升，液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)得到了高度應(yīng)用，無(wú)論是液相色譜、質(zhì)譜聯(lián)用還是超高效液相色譜、串聯(lián)質(zhì)譜法都整合了高分離能力、較強(qiáng)的選擇性、突出的靈敏性等特點(diǎn)，大大優(yōu)化了樣品分析工作，現(xiàn)下在藥物、食品和環(huán)境等不同領(lǐng)域得到了高度應(yīng)用，且在法定動(dòng)物源性食品中的應(yīng)用也較多。動(dòng)物源性食品內(nèi)部的地塞米松殘留不是很多，其本質(zhì)是糖皮質(zhì)激素，實(shí)際檢測(cè)中也存在大量的內(nèi)源性干擾物質(zhì)，基質(zhì)復(fù)雜不便分離，會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，降低儀器的可用性。因此，在測(cè)定前通常會(huì)借助不同的凈化處理手段進(jìn)行處理，以富集檢測(cè)物，提升檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，然而樣品前處理大多較為復(fù)雜，儀器造價(jià)偏高，且離不開(kāi)專(zhuān)業(yè)人員，基于以上因素制約了其在基層范圍的推廣，影響了高通量檢測(cè)。

4 結(jié)語(yǔ)

眾所周知，獸藥殘留情況關(guān)乎著動(dòng)物源性食品最終的安全，而檢測(cè)技術(shù)是維系食品安全的重要支撐，在社會(huì)生產(chǎn)生活中應(yīng)加強(qiáng)在地塞米松殘留量上的檢測(cè)，并健全相關(guān)法律體系，加大安全監(jiān)管力度，從養(yǎng)殖源頭著手進(jìn)行控制與規(guī)范，遵循休藥期，切實(shí)保障食品安全。