薏仁米中鄰苯二甲酸酯安全性評(píng)價(jià)

王顯貴 吳小毛 楊曉鳳

摘 要：采用氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法對(duì)貴州不同產(chǎn)區(qū)的123個(gè)薏仁米樣品進(jìn)行了18種鄰苯二甲酸酯（Phthalic Acid Ester，PAEs）含量檢測(cè)，結(jié)果顯示18種PAEs在123個(gè)薏仁米樣品中均未檢出，表明12個(gè)薏仁米產(chǎn)區(qū)的薏仁米樣品均未受到PAEs污染，薏仁米中PAEs健康風(fēng)險(xiǎn)均在可接受范圍內(nèi)。

關(guān)鍵詞：薏仁米；鄰苯二甲酸酯；安全性評(píng)價(jià)

Abstract： A gas chromatography-triple quadrupole mass spectrometry method was used to detect the content of 18 phthalic acid ester （PAEs） in 123 samples of coix seeds from different production areas in Guizhou. The results showed that none of the 18 PAEs were detected in the 123 samples， indicating that none of the 12 samples from coix seeds production areas were contaminated with PAEs， and the health risks of PAEs in coix seeds were within an acceptable range.

Keywords： coix seed; phthalic acid ester; safety evaluation

鄰苯二甲酸酯（Phthalic Acid Ester，PAEs）廣泛用于塑料制品、食品包裝材料、醫(yī)療制品等行業(yè)，主要作用是增加產(chǎn)品的強(qiáng)度和柔韌度，PAEs使用率占塑化劑市場(chǎng)的88%[1]。目前，在國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究中發(fā)現(xiàn)，土壤、水體、植物和水生生物中都檢出了PAEs，農(nóng)作物根系吸收或吸附殘留于土壤中的鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯后到達(dá)木質(zhì)部，累積于植物莖或葉部，會(huì)對(duì)人體造成危害。薏仁米作為藥食兩用食物，深受廣大消費(fèi)者喜愛。近年來，農(nóng)戶在種植薏仁米過程中，習(xí)慣用薄膜覆蓋來保溫、保濕，增加薏仁米的產(chǎn)量，地膜的大量使用是否會(huì)對(duì)薏仁米種植基地造成污染，薏仁米在生長(zhǎng)過程中是否吸收了PAEs，關(guān)于這方面的研究，暫時(shí)沒有報(bào)道。本文采用氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法（Gas Chromatography-Triple Quadrupole Mass Spectrometry，GC-MS/MS）首次對(duì)薏仁米中18種PAEs殘留情況進(jìn)行了檢測(cè)，為評(píng)估貴州薏仁米安全性提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，同時(shí)通過檢測(cè)數(shù)據(jù)，對(duì)判斷貴州薏仁米是否受到PAEs污染提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 樣品采集與制備

按照梅花點(diǎn)法對(duì)貴州薏仁米產(chǎn)區(qū)薏仁米進(jìn)行多點(diǎn)取樣，每個(gè)樣品采樣3 kg薏仁谷，每個(gè)采樣地塊5個(gè)分點(diǎn)，然后將采集的樣品混均成為一個(gè)混合樣。采樣主要在貴州省薏仁米產(chǎn)區(qū)盤州市（保田鎮(zhèn)上保田村、打碓窩村）、安龍縣（普坪鎮(zhèn)、龍山鎮(zhèn)、灑雨鎮(zhèn)、篤山鎮(zhèn)和海子鎮(zhèn)）、普安縣（青山鎮(zhèn)、新店鎮(zhèn)）、晴隆縣（紫馬鄉(xiāng)、碧痕鎮(zhèn)、大廠鎮(zhèn)、安谷鄉(xiāng)和沙子鎮(zhèn)）、興仁市（17個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)街道）、興義市義龍新區(qū)（清水河鎮(zhèn)、烏沙鎮(zhèn)、威舍鎮(zhèn)、新橋鎮(zhèn)、雨樟鎮(zhèn)和龍廣鎮(zhèn)）、貞豐縣（北盤江鎮(zhèn)、龍場(chǎng)鎮(zhèn)、小屯鎮(zhèn)、長(zhǎng)田鎮(zhèn)）、紫云縣（板當(dāng)鎮(zhèn)）、關(guān)嶺縣（斷橋鎮(zhèn)、永寧鎮(zhèn)）、普定縣（化處鎮(zhèn)）、遵義市正安縣（中觀鎮(zhèn)晏溪村）等地，采集樣品時(shí)標(biāo)明縣（市）村，經(jīng)緯度坐標(biāo)，經(jīng)緯度用帶小數(shù)點(diǎn)經(jīng)緯度表示，選擇WGS2000坐標(biāo)系，采用十進(jìn)制，精確到小數(shù)點(diǎn)后6位；樣品采集后，曬干，用脫殼機(jī)將薏仁米去殼，磨細(xì)后過40目尼龍篩，分裝備用。

1.2 試劑與儀器

正己烷（≥99.9%，色譜純），賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；水為二級(jí)水；18種PAEs，德國(guó)Dr. Ehrenstorfer公司。

TSQ8000氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，美國(guó)賽默飛世爾科技公司；ATX 224R電子天平，島津公司；朗賦HT2500多管旋渦混合儀，上海朗賦實(shí)業(yè)有限公司；CQ-500A-DST超聲波清洗儀器，上海躍進(jìn)醫(yī)用光學(xué)器械廠。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

1 000 μg·mL-1鄰苯二甲酸二烯丙酯（Diallyl Phthalate，DAP）標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取DAP 0.025 g（精確到0.000 1 g）于25 mL容量瓶中，用正己烷溶解并定容至25 mL。1 000 μg·mL-1鄰苯二甲酸二異壬酯（Diisononyl Ortho-Phthalate，DINP）標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取DINP?0.025 g（精確到0.000 1 g）于25 mL容量瓶中，用正己烷溶解并定容至25 mL。

17種PAEs標(biāo)準(zhǔn)中間液（10 μg·mL-1）：分別吸取16種PAEs標(biāo)準(zhǔn)品（1 000 μg·mL-1）和DAP標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1 000 μg·mL-1）各1 mL于100 mL容量瓶中，用正己烷定容至100 mL。

1.4 樣品前處理

樣品前處理參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中鄰苯二甲酸酯的測(cè)定》（GB 5009.271—2016）[2]固態(tài)試樣5.2.3.1和SPE凈化方法進(jìn)行。

1.5 檢測(cè)條件

1.5.1 氣相色譜條件

色譜柱：HP-5 MS（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度：60～300 ℃；載氣：氦氣（純度99.999%）；采用程序升溫，初始溫度為60 ℃，以30 ℃·min-1升至200 ℃，再以5 ℃·min-1升至300 ℃，保持5 min；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量：2 μL。

1.5.2 質(zhì)譜條件

電子轟擊離子源；離子源溫度：300 ℃；傳輸線溫度：300 ℃；電離能量：70 eV；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式。具體質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)見表1。

1.6 評(píng)價(jià)方法

采用美國(guó)研究委員會(huì)（National Research Council，

NRC）推薦的危害指數(shù)法（Hazard Index，HI）分析薏仁米中PAEs類化合物的攝入風(fēng)險(xiǎn)[3]。HI數(shù)值表示食用風(fēng)險(xiǎn)大小，當(dāng)HI≥1，表明PAEs暴露可能存在健康風(fēng)險(xiǎn)，數(shù)值越大，風(fēng)險(xiǎn)就越大；當(dāng)HI＜1時(shí)，表明PAEs的暴露水平屬于相對(duì)安全范圍內(nèi)。本研究通過以下公式對(duì)攝入薏仁米的健康風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行分析。

式中：C是薏仁米樣品中PAEs的含量，mg·kg-1；M為薏仁米膳食攝入量，g·d-1；bw為成年人的平均體重，kg；RfD為PAEs攝入?yún)⒖紕┝?，mg·kg-1·d-1。

美國(guó)環(huán)境保護(hù)署（U.S. Environmental Protection Agency，EPA）提出，按照成年人平均體重60 kg計(jì)，每人每天攝入的PAEs不得高于1.2 mg，依據(jù)美國(guó)環(huán)境保護(hù)署公布的參考劑量可知，DBP、DEHP、DIBP的RfD值分別為0.1 mg·kg-1·d-1、0.02 mg·kg-1·d-1、0.8 mg·kg-1·d-1 [4-5]。根據(jù)中國(guó)居民營(yíng)養(yǎng)與健康狀況調(diào)查報(bào)告，成年人的平均體重按60 kg計(jì)，根據(jù)對(duì)消費(fèi)者的調(diào)查，薏仁米每日平均消費(fèi)量為31.1 g·d-1，每日最高消費(fèi)量57.3 g·d-1。

2 結(jié)果與分析

2.1 18種PEAs總離子流色譜圖

取DNP和DNIP濃度為2.5 μg·mL-1、其余16種濃度為0.25 μg·mL-1的PAEs標(biāo)準(zhǔn)溶液配制成18種PAEs標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照檢測(cè)條件進(jìn)行全掃描，得到18種PAEs化合物標(biāo)樣總離子流色譜圖，見圖1；采取同樣的檢測(cè)條件進(jìn)行全掃描，得到空白樣品總離子流色譜圖（未添加PAEs標(biāo)準(zhǔn)品），見圖2；樣品添加PAEs混合加標(biāo)溶液（0.25 μg·mL-1+2.5 μg·mL-1）總離子流色譜圖詳見圖3。18種PAEs均實(shí)現(xiàn)了良好的分離，符合檢測(cè)條件。

2.2 方法的線性范圍、相關(guān)系數(shù)及定量限

準(zhǔn)確吸取17種PAEs標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（10 μg·mL-1），用正己烷逐級(jí)稀釋，配制成濃度為0 μg·mL-1、0.02 μg·mL-1、0.05 μg·mL-1、0.10 μg·mL-1、0.20 μg·mL-1、0.50 μg·mL-1和1.00 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液；準(zhǔn)確吸取DINP標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1 000 μg·mL-1），用正己烷逐級(jí)稀釋，配制成濃度為0 μg·mL-1、0.5 μg·mL-1、1.0 μg·mL-1、2.5 μg·mL-1、5.0 μg·mL-1、10.0 μg·mL-1和20.0 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。測(cè)定相應(yīng)PAEs的色譜峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。由表2可知，18種PAEs在濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系好，相關(guān)系數(shù)均在0.999 0～0.999 8，能夠滿足薏仁米中PAEs的檢測(cè)需求。DINP的方法檢出限為3 mg·kg-1，DBP的方法檢出限為0.1 mg·kg-1，其余化合物的方法檢出限為0.18 mg·kg-1；DINP定量限為9.0 mg·kg-1，DBP定量限為0.3 mg·kg-1，其余化合物定量限為0.5 mg·kg-1。

2.3 方法的回收率和精密度

在薏仁米空白樣品中添加3個(gè)不同濃度水平的PAEs進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，每個(gè)添加水平重復(fù)5次，從而計(jì)算18種PAEs的平均添加回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。由表3、表4可知，DMP等16種PAEs的平均添加回收率在85.6%～110.1%，RSD在1.7%～9.8%；DIBP平均添加回收率在102.7%～109.2%，RSD在2.7%～6.5%；DINP平均添加回收率在95.9%～102.5%，RSD在2.5%～6.3%；該分析方法準(zhǔn)確性和精密度滿足薏仁米中PAEs殘留分析的要求。

2.4 薏仁米中PAEs殘留檢出情況

對(duì)采自貴州12個(gè)薏仁米產(chǎn)區(qū)的123個(gè)薏仁米樣品中18種PAEs含量進(jìn)行檢測(cè)分析，結(jié)果表明，123個(gè)薏仁米樣品均未檢出18種PAEs。

2.5 薏仁米中PAEs膳食暴露風(fēng)險(xiǎn)分析

采用美國(guó)環(huán)保局公布的PAEs毒理學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，由于123個(gè)薏仁米樣品中18種PAEs均未檢出，HI值小于1，表明薏仁米中PAEs健康風(fēng)險(xiǎn)在可接受范圍內(nèi)。

3 結(jié)論

通過對(duì)氣相條件和質(zhì)譜條件的優(yōu)化，建立了薏仁米中18種PAEs的GC-MS/MS檢測(cè)方法。優(yōu)化條件后，18種PAEs得到了很好的分離，具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)大于0.999，回收率在85.6%～110.1%，RSD均小于10%。采用該方法對(duì)123個(gè)薏仁米樣品中PAEs含量進(jìn)行了測(cè)定，并通過暴露風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估食用當(dāng)?shù)胤N植的薏仁米對(duì)人體健康的風(fēng)險(xiǎn)。結(jié)果表明，123個(gè)薏仁米樣品中18種PAEs均未檢出，貴州省12個(gè)薏仁米產(chǎn)區(qū)生產(chǎn)的薏仁米均未受到PAEs污染，廣大消費(fèi)者可以安全、放心食用。

參考文獻(xiàn)

[1]阿丹，溫思達(dá)，陳敏玲，等.增塑劑在農(nóng)業(yè)環(huán)境中的來源、遷移轉(zhuǎn)化和生物修復(fù)研究綜述[J].生態(tài)科學(xué)，2021，40（4）：249-256.

[2]國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中鄰苯二甲酸酯的測(cè)定：GB 5009.271—2016[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2016.

[3]DIANA A，DIMITRA V.Alkylphenols and phthalates in bottled waters[J].Journal of Hazardous Materials，2011，185（1）：281-286.

[4]曹國(guó)洲，肖道清，朱曉艷.食品接觸制品中鄰苯二甲酸酯類增塑劑的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估[J].食品科學(xué)，2010，31（5）：325-327.

[5]BENSON R.Hazard to the developing male reproductive system from cumulative exposure to phthalate esters—dibutyl phthalate， diisobutyl phthalate， butylbenzyl phthalate， diethylhexyl phthalate， dipentyl phthalate， and diisononyl phthalate[J].Regulatory Toxicology and Pharmacology，2009，53（2）：90-101.