學(xué)齡前珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶者外周血淋巴細(xì)胞亞群比例分析*

孔義華,王顯河,師海瑞,吳秋陽(yáng),吳治平,歐 陽(yáng),鄒遠(yuǎn)芹

貴州醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院:1.檢驗(yàn)科;2.口腔科,貴州凱里 556000

珠蛋白生成障礙性貧血(簡(jiǎn)稱地貧)是一種遺傳性溶血性疾病,在我國(guó)南方特別是廣西最為高發(fā),好發(fā)于嬰幼兒?？刹捎醚t蛋白電泳等血液學(xué)常規(guī)手段檢出中間型和重型地貧,但無(wú)癥狀地貧基因攜帶者通常在日常生活和工作中很難被發(fā)現(xiàn)[1-3],這部分患兒多以感染、發(fā)燒等癥狀入院就診,這些癥狀極易誘發(fā)急性溶血發(fā)作,導(dǎo)致患兒生長(zhǎng)發(fā)育受影響[4-6]。地貧的發(fā)生、轉(zhuǎn)歸與免疫功能密切相關(guān),故監(jiān)測(cè)學(xué)齡前兒童地貧基因攜帶者的免疫功能是否存在異常就顯得尤為重要,加之有癥狀的患兒需反復(fù)、長(zhǎng)期輸血維持生命,可能造成患兒免疫功能異常,但這方面鮮有報(bào)道。目前臨床評(píng)價(jià)機(jī)體免疫功能是否異常,主要是通過(guò)觀察其淋巴細(xì)胞亞群水平?；诖?本研究探討了學(xué)齡前地貧基因攜帶者外周血淋巴細(xì)胞亞群水平變化。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院2020年1月至2022年1月學(xué)齡前地貧基因攜帶者29例作為研究組,其中男17例,女12例;年齡1～5歲,平均(2.72±1.49)歲。另選擇本院同期學(xué)齡前非地貧基因攜帶者30例作為對(duì)照組,其中男21例,女9例;年齡3個(gè)月至5歲,平均(2.36±1.38)歲。研究組納入標(biāo)準(zhǔn): (1)年齡≤6歲 ;(2)確診為攜帶地貧基因(包括輸血治療患兒);(3)β地貧基因CD41-42、CD43、IVS-II-654、CD17、CD14-15、-28、-29、-30、-32、CD71-72、βE、IVS1-1、CD27-28、CAP、Int、CD31、IVS1-5檢出為陽(yáng)性;(4)α地貧基因--SEA、- α3.7、- α4.2、CS、QS、WS檢測(cè)為陽(yáng)性。排除標(biāo)準(zhǔn):除攜帶地貧基因外合并其他疾病。兩組患兒性別、年齡比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),有可比性。

1.2方法 (1)分別向已編號(hào)的流式管中加入 50 μL 充分混勻的抗凝全血。(2)加入20 μL CD3+/CD8+/CD45+/CD4+/CD16+/CD56+/CD19+,渦旋混勻,室溫避光放置 15～20 min。流式細(xì)胞儀-6色試劑(BD生物科技有限公司)包括小鼠抗人CD3-FITC、小鼠抗人CD4-PE-Cy7、小鼠抗人CD8-APC-Cy7、小鼠抗人CD45-PerCP、小鼠抗人CD19-APC。(3)溶血: FACS Lysing Solution(按說(shuō)明書進(jìn)行原液10倍純凈水稀釋后使用)稀釋的溶血素每管加450 μL混勻后避光室溫放置,溶血15 min。(4)24 h內(nèi)上機(jī)用 FACSCanto Clinical 軟件獲取 2 500 個(gè)淋巴細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè),上機(jī)前應(yīng)充分混勻。

1.3觀察指標(biāo) (1)觀察兩組T淋巴細(xì)胞亞群比例;(2)觀察兩組自然殺傷(NK)細(xì)胞比例;(3)觀察兩組B淋巴細(xì)胞比例。

2 結(jié) 果

2.1兩組T淋巴細(xì)胞亞群比例比較 兩組CD3+T淋巴細(xì)胞比例比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);研究組CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞比例和CD4+/CD8+比值低于對(duì)照組,而CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞比例高于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組T淋巴細(xì)胞亞群比例比較

2.2兩組CD16+CD56+NK細(xì)胞、CD19+B淋巴細(xì)胞比例比較 研究組CD16+CD56+NK細(xì)胞比例低于對(duì)照組(P<0.05);研究組CD19+B淋巴細(xì)胞比例高于對(duì)照組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組CD16+CD56+ NK細(xì)胞、CD19+B淋巴細(xì)胞比例比較

3 討 論

地貧是世界范圍內(nèi)較常見的常染色體隱性單基因遺傳病,已被世界衛(wèi)生組織列為危害人類健康的6種常見病之一,其主要是珠蛋白基因異常導(dǎo)致血紅蛋白中的一種或幾種珠蛋白肽鏈合成減少或不能合成,使血紅蛋白的α鏈和β鏈蛋白比例失衡,導(dǎo)致急、慢性進(jìn)行性溶血性貧血,嚴(yán)重影響患兒身心健康[7-13]。有癥狀的地貧患兒需定期輸血維持生命,但長(zhǎng)期輸血會(huì)造成患兒體內(nèi)鐵超負(fù)荷,損害免疫系統(tǒng),如降低補(bǔ)體系統(tǒng)活性、抑制中性粒細(xì)胞的吞噬作用等[14-17]。而這種疾病不僅造成患兒貧血、黃疸及生長(zhǎng)遲緩等,甚至?xí)a(chǎn)生肝脾腫大、髓外造血等嚴(yán)重并發(fā)癥,嚴(yán)重者甚至致死或致殘。同時(shí)患兒多次輸血治療,機(jī)體受抗原反復(fù)剌激后,免疫細(xì)胞處于疲憊狀態(tài),易出現(xiàn)免疫反應(yīng)異常,引起反復(fù)感染等。因此,檢測(cè)淋巴細(xì)胞亞群比例評(píng)估有癥狀和無(wú)癥狀地貧基因攜帶者的免疫狀態(tài)就顯得尤為重要。

淋巴細(xì)胞亞群作為機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要組成部分,參與機(jī)體的體液免疫與細(xì)胞免疫反應(yīng)。淋巴細(xì)胞亞群比例主要用于評(píng)估機(jī)體的免疫狀態(tài),淋巴細(xì)胞總數(shù)與疾病發(fā)生及免疫功能強(qiáng)弱有關(guān)。正常情況下,淋巴細(xì)胞亞群比例在周圍組織中相對(duì)穩(wěn)定,但若機(jī)體出現(xiàn)免疫狀態(tài)變化,則會(huì)導(dǎo)致淋巴細(xì)胞亞群比例隨之發(fā)生相應(yīng)變化[18]。

檢測(cè)淋巴細(xì)胞亞群比例是檢測(cè)淋巴細(xì)胞中的CD3+T淋巴細(xì)胞(包含CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞和CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞)、CD19+B、CD16+56+NK 3類細(xì)胞亞群水平。目前有關(guān)學(xué)齡前地貧基因攜帶者淋巴細(xì)胞亞群比例及免疫狀態(tài)評(píng)估的研究較少見。有研究發(fā)現(xiàn),成人的地貧患者與健康對(duì)照組相比,其CD3+T淋巴細(xì)胞比例、CD4+T淋巴細(xì)胞比例、CD4+/CD8+比值顯著低于對(duì)照組[19],而本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)學(xué)齡前地貧患兒CD3+T淋巴細(xì)胞比例與對(duì)照組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞和CD19+B淋巴細(xì)胞比例高于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。這可能與患兒長(zhǎng)期免疫系統(tǒng)功能降低,易受到外來(lái)病原體感染,進(jìn)而刺激B淋巴細(xì)胞和CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞增殖分化,其中CD19+B淋巴細(xì)胞增殖分化產(chǎn)生較多免疫球蛋白抵御感染。

本研究結(jié)果顯示,CD16+CD56+NK細(xì)胞、CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞比例和CD4+/CD8+比值低于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),提示學(xué)齡前攜帶地貧基因患兒的免疫功能降低,可能是地貧患兒反復(fù)感染的原因之一。

檢測(cè)學(xué)齡前地貧基因攜帶者淋巴細(xì)胞亞群比例可以動(dòng)態(tài)掌握其免疫狀態(tài),并及時(shí)調(diào)整患兒抗感染及營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充方案,避免患兒因反復(fù)感染和免疫力低下造成生長(zhǎng)遲緩及臟器受損等。

綜上所述,學(xué)齡前地貧基因攜帶者外周血淋巴細(xì)胞亞群比例與健康兒童之間存在明顯差異,表明學(xué)齡前地貧基因攜帶者的免疫功能存在紊亂。臨床加強(qiáng)對(duì)CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞和CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞、CD16+56+NK、CD19+B淋巴細(xì)胞比例的檢測(cè),監(jiān)測(cè)其比例變化,有利于及時(shí)評(píng)估患兒免疫狀況并進(jìn)行有針對(duì)性的干預(yù)治療,對(duì)降低患兒的感染風(fēng)險(xiǎn)、提高其生存質(zhì)量意義重大。