長莖葡萄蕨藻水提物體外抗氧化活性和對人肝細胞L02氧化損傷的保護作用

林香，任天宇，周梅蘭，高瑞麗，鄒雄，劉忠群，肖曄，謝曦，王蓉，宋彥廷，胡文婷*

（1.海南大學藥學院，熱帶生物資源教育部重點實驗室,海南海口 570228）（2.中國水產(chǎn)科學研究院東海水產(chǎn)研究所，上海 200090）

當機體受到外源性或內源性氧化物質的刺激時，自由基產(chǎn)生和清除的動態(tài)平衡就會遭到破壞，從而引起活性氧（ROS）堆積[1]。過量富集的ROS攻擊細胞中的蛋白質、脂質和DNA等大分子物質，產(chǎn)生細胞毒性，造成氧化損傷[2]。外源性補充抗氧化劑可以幫助有效清除多余的自由基，預防或減緩ROS引起的氧化應激造成的傷害。據(jù)報道，多種合成抗氧化劑具有一定的潛在毒性和致癌作用，因此尋找天然來源的抗氧化劑受到研究者越來越多的關注[3-6]。海藻中生物活性化合物豐富，是獲得天然抗氧化物質的重要來源之一[7]。長莖葡萄蕨藻（Caulerpa lentillifera）屬于綠藻門中蕨藻屬，是一種高蛋白、高膳食纖維、低脂肪、低熱能，且富含礦物質的天然優(yōu)質藻類食品[8,9]。目前，在我國的福建、海南等地，長莖葡萄蕨藻人工養(yǎng)殖處于逐步推廣階段[10,11]。長莖葡萄蕨藻在原產(chǎn)地日本民間被稱作“長壽藻”，成分分析表明其含有豐富的多糖、酚類、不飽和脂肪酸及蕨藻紅素、β-胡蘿卜素等抗衰老和抗氧化物質[12,13]?，F(xiàn)代藥理作用研究顯示，長莖葡萄蕨藻對多種與氧化應激密切相關的疾病，如炎癥、心血管疾病、糖尿病、肥胖癥，均有潛在的治療作用，能夠提高機體抗氧化水平，是極具開發(fā)潛力的藥食兼用藻類資源[14,15]。然而，針對長莖葡萄蕨藻的抗氧化活性及氧化應激損傷保護效應的研究仍鮮有報道，有待對其深入研究。

肝臟是人體重要的代謝器官，肝細胞中含有大量的線粒體，受到氧化應激容易形成過量的ROS堆積，使細胞遭到嚴重的氧化損傷[16,17]。近年來許多研究表明，氧化應激可能是多種肝病，包括脂肪肝、肝炎、肝纖維化和肝癌等共同發(fā)病機制[18]。阻斷氧化應激是緩解肝臟疾病發(fā)生的有效途徑之一。H2O2是生物體內最常見的活性氧分子，易透過細胞膜與細胞內鐵離子結合產(chǎn)生高活性的自由基，從而誘導細胞產(chǎn)生過量的ROS，而且易于獲得，是氧化應激模型中最常用的氧化劑之一[19]。本研究測定了長莖葡萄蕨藻水提物（CLE）中總多糖、總三萜、總多酚和總黃酮含量[20-22]，考察CLE對自由基的清除作用，并采用H2O2誘導L02人肝細胞構建氧化損傷模型，從細胞水平探討CLE緩解氧化應激的能力，為長莖葡萄蕨藻用于干預氧化應激相關疾病以及功能性食品開發(fā)提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

CPY-180二氧化碳培養(yǎng)箱，天津萊玻特瑞儀器設備有限公司；AE31AEFL-INV倒置熒光顯微鏡，廈門麥克奧迪實業(yè)集團有限公司；MultiskanFC酶標儀，美國BiotekIntruments；Centrifuge 5430R低溫高速離心機，德國Eppendorf；MaXterile47高壓滅菌鍋，日本Hirayama；UV1800紫外可見分光光度計，翱藝儀器有限公司；FJ200-S高速分散勻質機，星源科技有限公司。

RPMI1640培養(yǎng)液，上海碧艾；胎牛血清，上海煊翎；CCK-8試劑盒、0.25%胰蛋白酶消化液、青鏈霉素混合液，武漢賽維爾；BCA蛋白濃度測定試劑盒，Biosharp；還原型谷胱甘肽（GSH）檢測試劑盒、丙二醛（MDA）檢測試劑盒、乳酸脫氫酶（LDH）檢測試劑盒、谷丙轉氨酶（ALT）檢測試劑盒、谷草轉氨酶（AST）檢測試劑盒，南京建成；活性氧ROS檢測熒光探針DHE，江蘇凱基生物；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 樣品與細胞株

正常人肝L02細胞，海南大學藥學院生化藥物實驗室保存。

長莖葡萄蕨藻，由海南文昌龍樓淇水灣養(yǎng)殖場提供。取新鮮的長莖葡萄蕨藻用流水沖洗，除去其他雜質，濾干。以1:1（g/mL）的比例加入純水，高速分散勻質機破碎，室溫放置2 h，4 ℃靜置過夜，雙層紗布過濾，6 000 r/min離心20 min，上清通過截留分子量為1 000 u的透析袋，凍干，即得長莖葡萄蕨藻水提物干粉，放入-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 CLE中總多糖、總三萜、總多酚及總黃酮含量測定

1.3.1 總多糖含量測定

以葡萄糖為標準品，采用蒽酮-硫酸法[23]測定CLE中總多糖含量，在0.01～0.06 mg/mL濃度范圍內呈現(xiàn)較好的線性關系，獲得標準曲線方程：Y=9.205 7X+0.133 5（R2=0.991）。結果換算為每克干基中所含的多糖相當于葡萄糖的毫克數(shù)。

1.3.2 總三萜含量測定

以齊墩果酸為標準品，采用香草醛-濃硫酸法[24]測定CLE中總三萜含量，在0.004 6～0.092 mg/mL濃度范圍內呈現(xiàn)較好的線性關系，獲得標準曲線方程：Y=4.759 9X+0.220 1（R2=0.992 1）。結果換算為每克干基中所含的三萜相當于齊墩果酸的毫克數(shù)。

1.3.3 總多酚含量測定

以沒食子酸為標準品，采用福林-酚法[25]測定CLE中總多酚含量，在0.012～0.192 mg/mL濃度范圍內呈現(xiàn)較好的線性關系，獲得標準曲線方程：Y=4.77 6X+0.066 7（R2=0.999 8）。其中Y為吸光度，X為濃度，結果換算為每克干基中所含的多酚相當于沒食子酸的毫克數(shù)。

1.3.4 總黃酮含量測定

以蘆丁為標準品，采用亞硝酸鈉-硝酸鋁法[26]測定CLE中總黃酮含量，在0.08～0.48 mg/mL濃度范圍內呈現(xiàn)較好的線性關系，獲得標準曲線方程：Y=1.338 5X+0.001 9（R2=0.999 3）。結果換算為每克干基中所含的黃酮相當于蘆丁的毫克數(shù)。

1.4 抗氧化活性檢測

1.4.1 超氧陰離子自由基清除能力測定

在Chen等[27]的方法基礎上略作修改。在3 mL 50 mmol/L的Tris-HCl緩沖液（pH值8.4）中加入0.2 mL樣品，25 ℃反應10 min，在相同溫度下，加入12 μL預熱的30 mmol/L鄰苯三酚溶液反應4 min，然后快速在320 nm波長處測定吸光度記為A1；以蒸餾水代替樣品，測定吸光度記為A2；Tris-HCl緩沖液記為A0。以同濃度抗壞血酸（Vc）溶液作為陽性對照。清除率按公式（1）計算。

式中：

C1——超氧陰離子清除率，%；

A0——Tris-HCl緩沖液在320 nm波長處的吸光度；

A1——樣品在320 nm波長處的吸光度；

A2——以蒸餾水代替樣品在320 nm波長處的吸光度。

1.4.2 羥自由基清除能力測定

羥自由基清除的測定參考Li等[28]和朱月等[29]的方法并稍作改進。取不同濃度的樣品溶液1 mL，分別加入1 mL硫酸亞鐵（6 mmol/L），1 mL水楊酸-無水乙醇（6 mmol/L），1 mL H2O2（6 mmol/L），渦旋混勻，37 ℃恒溫水浴15 min，測定510 nm吸光度，記為A1；以蒸餾水代替樣品，測定吸光度記為A0；以蒸餾水代替水楊酸-無水乙醇，測定吸光度記為A2。以Vc作為陽性對照，對羥自由基清除率按公式（2）計算。

式中：

C2——羥自由基清除率，%；

A3——以蒸餾水代替樣品在510 nm處測定的吸光度；

A4——樣品在510 nm處測定的吸光度；

A5——以蒸餾水代替水楊酸-無水乙醇在510 nm處測定的吸光度。

1.5 CLE對氧化損傷細胞增殖的影響

1.5.1 不同濃度CLE對L02細胞存活率的影響

將處于對數(shù)生長期的L02細胞，用胰酶消化后加入1640培養(yǎng)基，倒置顯微鏡下計數(shù)，調節(jié)細胞個數(shù)為每孔5×103個接種于96孔板，在含有5% CO2的37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，棄細胞培養(yǎng)液，加入含有5%血清1640培養(yǎng)基配制的不同濃度的CLE（0.0、22.5、45.0、90.0、180.0 μg/mL），培養(yǎng)8 h后去掉上清液，

采用CCK8方法檢測細胞存活率。

1.5.2 H2O2誘導L02細胞氧化損傷模型的建立

取對數(shù)生長期的L02細胞，胰酶消化后以每孔5×103個的濃度，接種于96孔板中培養(yǎng)24 h，棄細胞培養(yǎng)液，加入用含有5%血清的1640培養(yǎng)基配置的H2O2溶液，終濃度分別為 0（空白組）、200、400、600、800、1 000 μmol/L。繼續(xù)培養(yǎng)8 h，采用CCK8法檢測細胞存活率，確定H2O2的最適濃度。

1.5.3 CLE對氧化損傷L02細胞的保護作用

取對數(shù)期L02細胞調整濃度至每孔5×103個，每孔100 μL接種于96孔板。隨機分為5組，包括對照組、H2O2組（400 μmol/L）、H2O2+22.5 μg/mL CLE組、H2O2+45.0 μg/mL CLE組和H2O2+90.0 μg/mL CLE組。待細胞貼壁后，用5%血清的1640培養(yǎng)基配制不同濃度的藥物。對照組添加含有5%血清的1640培養(yǎng)基，H2O2培養(yǎng)組加入含有400 μmol/L H2O2的培養(yǎng)基，H2O2+CLE組用400 μmol/L H2O2與不同質量濃度的CLE（22.5、45.0、90.0 μg/mL）同時處理細胞，繼續(xù)培養(yǎng)8 h，采用CCK8法檢測細胞存活率。

1.6 CCK8法檢測細胞存活率

在相同條件處理下設置空白組、對照組和實驗組，將96孔板中各組培養(yǎng)的細胞上清液去掉?？瞻捉M、對照組和實驗組加入用含有5%血清的1640培養(yǎng)基100 μL（含有10%的CCK8溶液），在含有5% CO2的37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中放置2 h，在450 nm處測量各組吸光度，其中空白組的吸光度值記為OD0，實驗組記為OD1，對照組記為OD2，細胞存活率按公式（3）計算。

式中：

L——細胞存活率，%；

OD0——空白組在450 nm處的吸光度值；

OD1——實驗組在450 nm處的吸光度值；

OD2——對照組在450 nm處的吸光度值。

1.7 細胞上清液中LDH、AST、ALT水平檢測

采用試劑盒對細胞泄露的LDH、AST、ALT進行檢測。設置對照組、H2O2培養(yǎng)組（400 μmol/L）、H2O2+低濃度CLE組（22.5 μg/mL）、H2O2+高濃度CLE組（45.0 μg/mL）和CLE（45.0 μg/mL）組，將L02細胞接種于6孔板中，待細胞貼壁之后給藥處理細胞后培養(yǎng)8 h，收集細胞培養(yǎng)液，按照試劑盒的說明檢測。

1.8 細胞內ROS含量的測定

將L02細胞接種于6孔板中，待細胞貼壁之后按照1.7節(jié)分組給藥處理細胞后，去除培養(yǎng)液，用PBS清洗L02細胞，按照試劑盒說明，加入用無血清的1640培養(yǎng)液稀釋的DHE熒光探針，37 ℃孵育30 min，PBS清洗3次，熒光顯微鏡下觀察拍照，用ImageJ軟件分析各組細胞的熒光強度，以對照組計算相對熒光強度。

1.9 細胞內MDA、GSH水平檢測

將L02細胞接種于6孔板中，按1.7節(jié)給細胞分組和給藥后收集細胞，按照試劑盒說明進行檢測，BCA法蛋白定量。

1.10 數(shù)據(jù)處理

實驗數(shù)據(jù)采用Prism 9.3.0軟件進行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)表示為平均值（mean）±標準差（SD），多樣本間采用one way-ANOVA進行單因素方差分析，進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果與討論

2.1 CLE中總多糖、總三萜、總多酚及總黃酮含量

由表1可知，CLE中總多糖的含量最高，為205.01 mg/g，其次是總三萜和總多酚，并且含有一定的總黃酮成分。已有較多研究表明，海藻中富含多糖、萜類和酚類等活性物質，是其作為自由基清除劑發(fā)揮作用以及預防生物體氧化損傷的物質基礎[30]。Jesumani等[31]從馬尾藻中提取得到的多糖和多酚，均具清除羥自由基作用。梁惠等[32]研究表明凹頂藻萜提取物表明具有較強的抗氧化活性，可有效阻止脂質過氧化反應，提高機體抗氧化能力。李靜等[33]從大葉藻提取得到的大葉藻黃酮可有效清除羥自由基。另外，有研究表明，以乙醇為溶劑對冷凍干燥后的長莖葡萄蕨藻進行提取，獲得的醇提物總酚含量為2.04 mg/g[34]，黃酮類化合物的含量為4.93 mg/g[35]。本研究以水為溶劑獲得的提取物中含有豐富的水溶性多糖成分和一定的萜類物質，而且總多酚（27.02 mg/g）和總黃酮（15.72 mg/g）的含量均高于醇提物。

表1 CLE中總多糖、總三萜、總多酚及總黃酮含量Table 1 Contents of total polysaccharides, total triterpenes,total phenols and total flavonoids of CLE

2.2 CLE的抗氧化活性

生物體內的氧自由基是含有不成對電子的原子或基團，其中最主要、最具破壞性的是羥自由基和超氧陰離子自由基。在生物系統(tǒng)中，酶的正常催化過程或氧化壓力下產(chǎn)生的超氧陰離子自由基是自由基連鎖反應的啟動者，促使其他類型自由基的形成，引發(fā)各種生理和病理過程，如衰老、癌變等[36]。羥自由基是氧自由基中最活潑的自由基，去除羥自由基對于防止機體內蛋白質、DNA和核酸等化合物的損傷至關重要。自由基清除劑可以保護細胞免受或減緩自由基引發(fā)的氧化損傷。由圖1可知，CLE具有清除超氧陰離子和羥自由基的能力，當質量濃度為0.5 mg/mL時的清除能力均強于相同濃度的Vc。在0.5～3.0 mg/mL的范圍內，CLE對超氧陰離子和羥自由基的清除能力隨著濃度的增加逐漸增強，在1.0～3.0 mg/mL的質量濃度范圍內清除能力低于Vc。當質量濃度為3.0 mg/mL時，CLE對超氧陰離子和羥自由基清除率分別達到69.30%和77.05%。通過曲線擬合得到CLE對超氧陰離子和羥自由基的IC50值分別為0.94、2.20 mg/mL。陳琳琳等[37]以不同方法從長松藻、鐵釘菜和鼠尾藻獲得的提取物對羥自由基具有明顯的清除作用。邵海艷等[38]研究了總狀蕨藻水溶性成分的抗氧化活性，當質量濃度為3 mg/mL時對羥自由基的清除率為70.86%。Fauziee等[39]從喇叭藻提取得到褐藻糖膠，質量濃度為2 mg/mL時對超氧陰離子和羥自由清除率分別是8.9%和53.4%。本研究以長莖葡萄蕨藻水提物為研究對象，發(fā)現(xiàn)其在低濃度下即對羥自由基和超氧陰離子均表現(xiàn)出良好的清除能力。長莖葡萄蕨藻有較強的抗氧化活性，具有開發(fā)成天然抗氧化產(chǎn)品的潛力。

圖1 CLE對超氧陰離子（a）和羥自由基（b）的清除能力Fig.1 The scavenging capacity of CLE for superoxide anion (a)and hydroxyl radical (b)

2.3 不同濃度的CLE對L02細胞存活率影響

采用CCK8法研究CLE對L02細胞增殖率的影響，結果見圖2。在CLE質量濃度為0.0～180.0 μg/mL范圍內，其細胞存活率與對照組相比均無顯著性差異（P＞0.05）。結果表明當CLE的質量濃度低于180.0 μg/mL時不影響L02細胞的增殖，對細胞無毒性。

圖2 CLE對L02細胞存活率的影響Fig.2 Effects of CLE on the survival rate of L02 cells

2.4 CLE對H2O2誘導L02細胞氧化損傷的影響

以0～1 000 μmol/L不同濃度的H2O2處理L02細胞8 h，結果如圖3所示，隨著H2O2濃度的升高，細胞活力逐漸下降。當H2O2濃度為400 μmol/L時細胞存活率顯著降低，細胞存活率為51.67%（P＜0.01）。當濃度達到1 000 μmol/L時，L02細胞的存活率僅為26.33%（P＜0.01）。H2O2濃度過高時會對細胞造成不可逆轉的損傷，不利于藥物干預對其進行修復。因此，選擇濃度400 μmol/L為H2O2誘導L02細胞氧化損傷的最佳濃度。

圖3 H2O2處理對L02細胞存活率的影響Fig.3 The effect of H2O2 treatment on the survival rate of L02 cells

CLE對L02細胞氧化損傷的保護作用如圖4。與對照組相比，H2O2培養(yǎng)組的存活率顯著降低，其存活率為49.81%（P＜0.01）；在經(jīng)過22.5 μg/mL、45.0 μg/mL和90.0 μg/mL的CLE干預之后，L02細胞存活率均有不同程度地回升，分別為60.87%、69.90%和62.50%，質量濃度為45.0 μg/mL的CLE對L02細胞氧化損傷保護能力最強，細胞存活率與模型組相比顯著提升。當再繼續(xù)加大CLE的質量濃度至90 μg/mL時，對氧化損傷的L02細胞保護作用略有降低?？赡苁怯捎谠炷：笾录毎軗p，此時過多的外源物質對細胞造成較大負擔，導致存活率出現(xiàn)下降[40]。吳偉等[41]采用H2O2致細胞氧化損傷后，低濃度枸杞多糖的保護效果優(yōu)于高濃度的枸杞多糖。梁曾恩妮等[42]研究表明圣草次苷對H2O2致HUVEC細胞氧化損傷的保護作用未表現(xiàn)出劑量關系，隨著圣草次苷濃度的增大，保護作用有所降低。故而采用22.5 μg/mL和45.0 μg/mL的CLE作為干預濃度進行后續(xù)實驗。

圖4 CLE對H2O2損傷L02細胞存活率的影響Fig.4 Effects of CLE on the survival rate of H2O2-injured L02 cells

2.5 CLE對氧化損傷L02細胞培養(yǎng)上清中LDH、AST、ALT活性的影響

當細胞受到氧化應激、炎癥等因素影響時，細胞膜被破壞，細胞內的酶類物質大量釋放到體液中，使細胞外LDH、AST、ALT水平急劇升高[43]。由圖5可見，與對照組相比，經(jīng)H2O2處理后，LDH活力升高至158.77%，AST和ALT活力分別升高至197.54%和328.34%（P＜0.01）。使用22.5 μg/mL和45.0 μg/mL CLE干預后，L02細胞培養(yǎng)上清中的LDH活力降低到81.14%（P＜0.05）和51.16%（P＜0.01）；AST活力降到53.94%和45.64%（P＜0.01），ALT活力降到43.95%和34.41%（P＜0.01）。細胞培養(yǎng)上清中的LDH、AST、ALT釋放量可反映出細胞氧化損傷程度。鄭峰等[44]建立H2O2誘導L02細胞氧化損傷模型，H2O2組細胞上清液中LDH、AST、AST顯著升高，大豆異黃酮處理后，活性水平顯著降低。在王倩等[45]的研究中發(fā)現(xiàn)番茄紅素能顯著降低H2O2誘導L02細胞培養(yǎng)上清中LDH、AST、AST酶活性。本實驗結果與上述研究類似，H2O2誘導的模型組LDH、AST、ALT漏出明顯增多，CLE干預后均出現(xiàn)顯著降低，說明CLE可以緩解H2O2引起的肝細胞氧化損傷。

圖5 CLE對H2O2培養(yǎng)條件下L02細胞培養(yǎng)上清中LDH（a）、AST（b）、ALT（c）水平的影響Fig.5 Effects of CLE on LDH (a), AST (b) and ALT (c) levels in the supernatant of L02 cells cultured with H2O2

2.6 CLE對H2O2誘導L02細胞內ROS、MDA和GSH含量的影響

ROS是生物有氧代謝過程中產(chǎn)生的一種中間產(chǎn)物，在機體內發(fā)揮著重要作用。細胞內抗氧化系統(tǒng)通過清除氧自由基或抑制細胞氧化過程，從而保持ROS的平衡[46]。ROS作為一種常見的細胞氧化損傷標志性因子，常用來判斷外源性物質對機體的影響情況[47]。由圖6可見，加入H2O2刺激的細胞熒光明顯增強，熒光強度是正常組的2.50倍。經(jīng)CLE孵育后的細胞，分別降為模型組的68.97%、63.23%（P＜0.01），說明CLE可以抑制H2O2誘導L02細胞中ROS的產(chǎn)生。

圖6 CLE對L02細胞內ROS含量的影響Fig.6 Effects of CLE on intracellular ROS content in L02 cells

CLE對L02細胞內MDA、GSH含量的影響如圖7。H2O2誘導氧化損傷組的細胞內GSH水平明顯降低，MDA含量明顯升高，與對照組相比均有顯著性差異（P＜0.01）。與H2O2的誘導氧化損傷組相比，22.5 μg/mL和45.0 μg/mL CLE組的MDA分別降至84.71%（P＞0.05）和63.20%（P＜0.01）；細胞內的GSH含量顯著增加，分別是模型組GSH含量的1.45和1.64倍（P＜0.01）。MDA作為體內脂質過氧化的標志性產(chǎn)物，其含量的高低反應出機體受到氧化損傷程度[48]。GSH是細胞內重要的非酶類抗氧化物質，具有清除自由基、降低ROS水平和阻斷組織氧化損傷等多種生理功能[49]。細胞內MDA和GSH的水平可以反應細胞所處的氧化還原狀態(tài)。杜毅超等[50]研究發(fā)現(xiàn)芹菜素顯著降低L02細胞內ROS和MDA含量。在Ou等[51]的研究中，C-藻藍蛋白干預能夠降低四氯化碳誘導L02細胞氧化損傷產(chǎn)生的ROS以及MDA水平，提高GSH含量，發(fā)揮保護細胞的作用。本研究中，CLE干預顯著提高L02細胞內具有還原能力的GSH含量，有效清除過多的ROS，并阻止細胞內脂質過氧化，從而緩解氧化應激、保護細胞免受氧化損傷。

圖7 CLE對H2O2培養(yǎng)條件下L02細胞MDA（a）、GSH（b）含量的影響Fig.7 Effects of CLE on MDA (a) and GSH (b) content of L02 cells under H2O2 culture

3 結論

CLE中含有豐富的多糖、萜類、多酚和黃酮類活性成分，在體外對超氧陰離子和羥自由基均有一定的清除作用。CLE在質量濃度為0.0～180.0 μg/mL的范圍內，對正常的L02細胞活力無影響。對受到H2O2誘導產(chǎn)生氧化應激損傷的L02細胞，CLE能夠顯著提高細胞生存率。CLE使H2O2培養(yǎng)條件下的細胞培養(yǎng)液上清中LDH、AST、ALT活性顯著降低，提示CLE處理能夠改善氧化損傷導致的細胞膜通透性改變、減少酶類漏出。同時，CLE處理組細胞內的ROS顯著減少，GSH含量顯著增加，MDA含量顯著降低，表明CLE能夠增強細胞抗氧化防御能力、降低細胞脂質過氧化水平，減輕ROS生成增多引起的L02細胞損傷。

綜合以上結果，CLE有較好的抗氧化能力，可增加L02細胞內非酶類抗氧化物質水平并抑制脂質過氧化反應導致的膜系統(tǒng)損傷，增強細胞對氧化應激的耐受能力。本研究結果展現(xiàn)了以水為溶劑獲得的長莖葡萄蕨藻提取物具有良好的抗氧化效果，為進一步探索其抑制氧化應激的作用機制奠定了理論基礎，為后續(xù)長莖葡萄蕨藻抗氧化功能產(chǎn)品的開發(fā)提供參考依據(jù)。