兒童和成人髓母細(xì)胞瘤免疫組織化學(xué)對比分析

徐欣,張國臣,夏慶欣,劉曉萌,王翦,陳忠平

(1.鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院/河南省腫瘤醫(yī)院 a.神經(jīng)外科;b.病理科,河南 鄭州 450008;2.中山大學(xué)腫瘤防治中心 神經(jīng)外科/神經(jīng)腫瘤科,廣東 廣州 510060)

髓母細(xì)胞瘤(medulloblastoma,MB)是原發(fā)于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一種惡性程度極高的神經(jīng)上皮性腫瘤,由于腫瘤細(xì)胞形態(tài)很像胚胎時期的髓母細(xì)胞而得名,是一種胚胎殘余細(xì)胞性腫瘤,兒童和成人均可發(fā)病,兒童多見,目前影響MB發(fā)病年齡的機(jī)制尚不明確[1]。本文回顧性分析MB患者的病理免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry,IHC)結(jié)果,旨在初步探索影響MB發(fā)病年齡的因素,現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源

收集鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院神經(jīng)外科和中山大學(xué)腫瘤防治中心神經(jīng)外科/神經(jīng)腫瘤科2014年1月至2022年6月手術(shù)切除經(jīng)病理證實的76例MB患者,男50例,女26例,年齡1～49[12(8.25,22.50)]歲。根據(jù)WHO中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤[2]分類分級:經(jīng)典型41例,促纖維增生/結(jié)節(jié)型14例,廣泛結(jié)節(jié)型8例,大細(xì)胞/間變型10例,非定類3例,均為WHO Ⅳ級。病理類型非定類。

1.2 分組

以18周歲為界分為兒童組(50例)和成人組(26例),見表1。兩組年齡差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),符合以年齡分組的實際;兩組腫瘤部位之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),為了排除腫瘤部位對兩組IHC比較的影響,進(jìn)一步將患者分為兒童中線組(47例)、兒童非中線組(3例)、成人中線組(15例)、成人非中線組(11例),使數(shù)據(jù)具有可比性。

表1 兒童和成人MB患者一般資料分析

1.3 IHC項目

由于每例患者IHC項目不完全相同,結(jié)合文獻(xiàn)[3-4]選取以下IHC指標(biāo)進(jìn)行分析:上皮膜抗原(epithelial membrane antigen,EMA)、細(xì)胞角蛋白(cytokeratin,CK)、突觸素(synapsin,Syn)、嗜鉻素A(chromogranin A,CgA)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)、神經(jīng)元核抗原(neuronal nuclear antigen,NeuN)、少突膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子-2(oligodendrocyte transcription factor-2,Oligo-2)、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、S-100蛋白,以上試劑購自丹麥Dako公司;CD99、CD34、p53基因購自北京中杉金橋公司。

1.4 IHC檢測

所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛固定,常規(guī)脫水,石蠟包埋,4 μm厚切片,行EnVision二步法IHC染色,實驗步驟按試劑盒說明書進(jìn)行,設(shè)陽性和陰性對照,染色完成后,用酒精進(jìn)行脫水、清洗,二甲苯透明,以中性樹膠和蓋玻片封片。

1.5 判斷標(biāo)準(zhǔn)

在光學(xué)顯微鏡高倍視野下尋找對應(yīng)IHC陽性細(xì)胞,隨機(jī)選取5個高倍視野分別計算陽性細(xì)胞占比,以5個占比的平均值作最終判斷。陽性細(xì)胞占比<10%定義為陰性,占比≥10%為陽性。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

兒童中線組和成人中線組、兒童非中線組和成人非中線組所有IHC指標(biāo)之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 兒童和成人MB患者IHC對比分析

3 討論

MB最早是由Bailey和Cushing于1925年命名的一種專指幕下的惡性神經(jīng)上皮腫瘤,屬于原始神經(jīng)外胚層腫瘤,兒童患者占全部MB的70%左右,男性多見,本研究兒童患者占65.8%,男女比例約為1.92∶1,與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)相符。通過數(shù)據(jù)產(chǎn)生一些疑問:同為MB,為何發(fā)病年齡可以從幾月齡至成年?影響MB發(fā)病年齡的因素是什么?兒童和成人MB之間的差異是什么?如果能找到一個突破點將兒童MB患者發(fā)病年齡延遲至成年,或?qū)O大改善MB患者的預(yù)后。

本研究從最基礎(chǔ)的MB的IHC結(jié)果進(jìn)行探討,分析兒童和成人MB組織學(xué)之間的差異性,文獻(xiàn)中探討MB患者IHC指標(biāo)表達(dá)意義的研究并不少見,但是比較兒童和成人之間差異的文獻(xiàn)不多。

EMA是上皮細(xì)胞分泌的一種乳脂小球膜糖蛋白,廣泛存在于人體各種上皮細(xì)胞中;CK是角質(zhì)細(xì)胞中的一種骨架蛋白,主要分布于上皮細(xì)胞,與上皮細(xì)胞的增殖分化有關(guān)。雖然MB普遍被認(rèn)為是一種神經(jīng)上皮性腫瘤,但是上皮細(xì)胞IHC指標(biāo)EMA和CK陽性率卻很低,分別為1.81%(1/55)和5.26%(3/57),兒童和成人之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義,具體原因和機(jī)制暫不明確。

Syn是一種與突觸囊泡相連的突觸前酸性轉(zhuǎn)膜蛋白,具有特異性,可在大多數(shù)神經(jīng)源性和神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤中表達(dá);CgA是一組存在于嗜鉻細(xì)胞分泌顆粒中的可溶性酸性蛋白,常用來標(biāo)記各種神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞及其來源的腫瘤,確切功能仍不十分清楚;NSE是參與糖酵解途徑的烯醇化酶中的一種,廣泛存在于神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi),對神經(jīng)元具有營養(yǎng)和保護(hù)功能,在MB中Syn比CgA更敏感,比NSE更特異。苗娜等[5]研究85例MB患者病理發(fā)現(xiàn)Syn陽性率達(dá)64%,馬海涵等[6]報道NSE在成人小腦MB中大部分呈強(qiáng)陽性。本研究Syn、CgA、NSE陽性率分別為95.95%(71/74)、43.14%(22/51)、96.88%(62/64),高于文獻(xiàn)報道。另外,NeuN是一種可溶性核蛋白,主要表達(dá)于發(fā)育成熟的神經(jīng)細(xì)胞和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)內(nèi),本研究NeuN陽性率為66.67%(22/33)。從神經(jīng)內(nèi)分泌IHC指標(biāo)可以看出,MB被認(rèn)為是神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的說法合乎規(guī)范。但是各組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義,并不能解釋MB患者發(fā)病年齡的差異性。

CD99是一種細(xì)胞黏附因子,其功能尚未完全了解,張鵬等[7-8]報道CD99在MB的陽性率為57.94%(62/107),CD99的表達(dá)與MB預(yù)后負(fù)相關(guān),并推測CD99有可能成為治療MB的一個新靶點,但是CD99與患者性別、年齡、腫瘤的組織學(xué)分型和分子分型均無相關(guān)性。另一種細(xì)胞黏附因子CD34,可以選擇性地表達(dá)于人類及其他哺乳動物造血干/祖細(xì)胞表面,并隨細(xì)胞的成熟逐漸減弱至消失[9]。本研究中CD99陽性率為73.17%(30/41),CD34陽性率為71.43%(25/35),且兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義?？梢奀D99和CD34陽性率均較高,兩者陽性率極為接近,MB的發(fā)生發(fā)展可能與兩者未隨細(xì)胞的成熟逐漸消失有關(guān),且兩者可能起協(xié)同作用,但是具體機(jī)制目前尚不清楚。S-100蛋白是一種酸性鈣結(jié)合蛋白,主要存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)各部星狀神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的胞液中,因在飽和硫酸銨中100%溶解而得名[10],Yilmaz等[11]發(fā)現(xiàn)S-100蛋白在后顱窩MB和室管膜瘤中的陽性率為43%,且兩種腫瘤間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。本研究S-100蛋白陽性率為55.88%(38/68),各組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義,可以認(rèn)為S-100蛋白在成人MB中的作用與兒童MB相似,機(jī)制亦不明確。Oligo-2主要在少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞早期定向分化中起重要作用,確切作用及調(diào)控機(jī)制尚不清楚[12]。李濤等[13]報道兒童后顱窩MB中Oligo-2表達(dá)陽性率為66.6%(74/111),但未進(jìn)行后續(xù)分析,本研究Oligo-2表達(dá)陽性率為55.88%(12/28),各組差異無統(tǒng)計學(xué)意義,Oligo-2在MB患者發(fā)生發(fā)展中的作用有待進(jìn)一步研究。GFAP主要分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞,參與細(xì)胞骨架的構(gòu)成并維持其張力強(qiáng)度。p53基因為人體抑癌基因,野生型促使癌細(xì)胞凋亡,從而防止癌變,p53的突變型會提高癌變。本研究兩者陽性率分別為66.67%(50/75)、50.00%(13/26),各組差異無統(tǒng)計學(xué)意義,GFAP在MB的發(fā)生發(fā)展中作用不詳,而p53基因突變可能在非中線MB患者中起作用,機(jī)制不詳。

4 結(jié)論

目前常見的IHC指標(biāo)在MB中均未見明顯差異,從IHC角度不能解釋兒童和成人MB患者發(fā)病年齡的差別,影響MB發(fā)病年齡的原因目前仍不確定。不過,隨著MB分子分型研究的進(jìn)一步成熟[14],未來一定會發(fā)現(xiàn)影響MB發(fā)病年齡的突破點,并針對性研發(fā)治療方案,從而延緩MB患者尤其是兒童患者的發(fā)病年齡,爭取更好的預(yù)后。