扶桑綿粉蚧蟲生真菌FE-1 菌株的鑒定及其毒力測(cè)定

畢可可，鄧嘉茹，張勁藹，孫龍華

（廣州市林業(yè)和園林科學(xué)研究院/廣州市生態(tài)園林科技協(xié)同創(chuàng)新中心，廣東 廣州 510405）

【研究意義】扶桑綿粉蚧(Phenacoccus solenoposis)起源于北美洲，是一種擴(kuò)繁速度快、寄主范圍廣、適應(yīng)能力強(qiáng)的世界性入侵昆蟲［1］。截至 2021 年，它已蔓延至除南極洲外其他各大洲超過(guò)43 個(gè)國(guó)家和地區(qū)［2］，并且還在不斷擴(kuò)張。我國(guó)自 2008 年［3］首次發(fā)現(xiàn)扶桑綿粉蚧至2022 年07 月，已有14 個(gè)省的 125 個(gè)縣（區(qū)、市）記錄了扶桑綿粉蚧的出現(xiàn)［4］，共有 166 種寄主植物被報(bào)道［5］，對(duì)我國(guó)棉花產(chǎn)業(yè)、蔬菜和園林植物種植均帶來(lái)較大的經(jīng)濟(jì)損失［6-8］。目前，針對(duì)扶桑綿粉蚧的防治，仍以化學(xué)防治為主，常用的化學(xué)藥劑主要有毒死蜱、吡蟲啉、啶蟲脒、呋蟲胺和螺蟲乙酯等［9-12］。由于扶桑綿粉蚧具有繁殖力強(qiáng)、世代重疊、抗藥性強(qiáng)及體背具有蠟殼等特點(diǎn)［13］，使其生態(tài)優(yōu)勢(shì)明顯，在化學(xué)防治上難以取得突破，甚至引起的環(huán)境問(wèn)題也日益凸顯。蟲生真菌是一類可以主動(dòng)穿透昆蟲蠟泌層和角質(zhì)層進(jìn)入昆蟲體腔的真菌［14］，其具有生產(chǎn)成本較低、產(chǎn)孢量大且對(duì)環(huán)境友好等特點(diǎn)，是具有較好應(yīng)用前景的生物防治手段之一［15］。因此，挖掘具有應(yīng)用前景的扶桑綿粉蚧蟲生真菌資源，對(duì)扶桑綿粉蚧綠色防治發(fā)展具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】目前世界上記載的蟲生真菌約100 屬1 000 多種，我國(guó)已發(fā)現(xiàn)的蟲生真菌涉及40 多屬400 多種［16］。國(guó)內(nèi)外針對(duì)扶桑綿粉蚧蟲生真菌的研究仍較少，主要集中在早期開發(fā)真菌的致病力測(cè)定及資源挖掘等。Ujjan［17］測(cè)定了從野外采集和機(jī)構(gòu)購(gòu)買的共36 個(gè)菌株對(duì)扶桑綿粉蚧不同蟲齡的致病力，篩選出7 個(gè)毒力較強(qiáng)的菌株，種類分別有金龜子綠僵菌（Metarrhizium anisopliae）、淡紫紫孢霉（Purpureocillium lilacinum）、玫煙棒束孢（Isariafarinosa）、球孢白僵菌（Beauvaria bassiana）和蠟蚧輪枝菌（Lecanicillium lecani）；Ujjan 等［18］在室內(nèi)篩選出對(duì)扶桑綿粉蚧致病力最強(qiáng)的金龜子綠僵菌菌株P(guān)DRL526，且發(fā)現(xiàn)其與化學(xué)農(nóng)藥吡蟲啉聯(lián)合殺蟲時(shí)的兼容效果最好。Khanzada 等［19］在室內(nèi)對(duì)比評(píng)估了5 種常見蟲生真菌對(duì)扶桑綿粉蚧的致病效果，發(fā)現(xiàn)玫煙棒束孢的致病效果最好。Nawaz 等［20］在室內(nèi)測(cè)定了球孢白僵菌（Bb-01、Bb-08）、金龜子綠僵菌（Ma-11.1、Ma-2.1）和玫煙棒束孢（If-2.3、If-02）對(duì)扶桑綿粉蚧2 齡若蟲的致病力，發(fā)現(xiàn)球孢白僵菌Bb-08 的毒力最強(qiáng)。王震杰等［21］從扶桑綿粉蚧中分離得到了5種真菌，回接后的最高侵染率為66.7%，其中 4種屬于子囊菌門（Ascomycota）真菌，它們與扶桑綿粉蚧的關(guān)系可能為寄生或共生關(guān)系，而另外一種是擔(dān)子菌門（Basidiomycota）真菌。袁盛勇等［22-23］在室內(nèi)分別測(cè)定了球孢白僵菌Bb1287 和蠟蚧輪枝菌MZ041024 對(duì)扶桑綿粉蚧不同蟲齡的致病力，發(fā)現(xiàn)該兩種菌株對(duì)扶桑綿粉蚧若蟲和成長(zhǎng)均有較強(qiáng)的毒力。昆蟲表皮是蟲生真菌侵染過(guò)程的第一道屏障，由于蟲生真菌接觸至寄主昆蟲體表后，需要在一定的溫度和濕度下，經(jīng)過(guò)一定的時(shí)間才能侵入，因此，蟲生真菌是否侵染成功，與分生孢子在宿主體表的侵染過(guò)程密切相關(guān)［24］。蟲生真菌侵染過(guò)程包含孢子附著在宿主體表、孢子萌發(fā)形成芽管、形成膨大附著胞穿透體壁和菌絲在宿主體內(nèi)增殖4 個(gè)階段［25］。利用掃描電鏡技術(shù)可以清晰地觀察到分生孢子的侵染方式，是判斷蟲生真菌侵染能力的常用手段［26-27］?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前，可用于防控扶桑綿粉蚧的蟲生真菌資源較少，具有生防潛力的菌株不足。因此，從扶桑綿粉蚧中挖掘致病力強(qiáng)病的蟲生真菌資源，可為扶桑綿粉蚧的生物防控提供指導(dǎo)。【擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題】本研究于 2018 年 9 月，在上海普陀區(qū)采集到扶桑綿粉蚧僵蟲，分離到一株蟲生真菌菌株，結(jié)合形態(tài)學(xué)和分子系統(tǒng)學(xué)分析明確該菌株的分類地位。利用掃描電鏡技術(shù)，觀察菌株對(duì)扶桑綿粉蚧的侵染方式，明確其侵染能力。通過(guò)毒力測(cè)定，研究該菌株的生防潛力和應(yīng)用前景，為挖掘更加安全、有效、持久控制的生物防治方法提供研究材料。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試材料為2018 年9 月采集自上海普陀區(qū)扶桑樹枝上的扶桑綿粉蚧僵蟲。

供試蟲源：毒力測(cè)定所需健康的扶桑綿粉蚧來(lái)自廣州市林業(yè)和園林科學(xué)研究院植物保護(hù)研究所，在溫室大棚馬鈴薯葉片上常年繼代飼養(yǎng)。

供試培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基購(gòu)自環(huán)凱微生物科技有限公司，按照使用說(shuō)明配制，置于高壓滅菌鍋121℃滅菌15 min，備用。

主要試劑：dNTP、Phanta Max Super-Fidelity DNA 聚合酶等PCR 反應(yīng)相關(guān)試劑購(gòu)自南京諾唯贊生物技術(shù)有限公司；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。pEASY-T1 載體，購(gòu)自北京全式金生物技術(shù)有限公司；所用引物由擎科新業(yè)生物技術(shù)有限公司（北京）合成。

1.2 菌株分離純化

將扶桑綿粉蚧僵蟲置于75%乙醇中浸泡30 s，再經(jīng)0.02% 次氯酸鈉浸泡1 min 后，用無(wú)菌水沖洗3 次，無(wú)菌濾紙吸干蟲體表面水分，置于PDA平板上28℃培養(yǎng)。待長(zhǎng)出菌絲或菌落后，挑取具有真菌菌落特征的單菌落進(jìn)行PDA 平板續(xù)代培養(yǎng)獲得真菌純培養(yǎng)物。然后進(jìn)行單胞分離得到純化菌株，記為FE-1，并接種于斜面試管，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 菌株鑒定

1.3.1形態(tài)鑒定 從純化FE-1 菌株的單菌落中取直徑為5 mm 的菌餅接在PDA 平板中央，同時(shí)將滅菌后的蓋玻片平放于菌餅，28 ℃培養(yǎng)7 d，每日觀察菌落生長(zhǎng)情況，記錄菌落顏色和形態(tài)；待菌絲覆蓋1/2 蓋玻片面積后，取蓋玻片置于光學(xué)顯微鏡下觀察菌絲和孢子形態(tài)。參照《真菌鑒定手冊(cè)》［28］進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定。

1.3.2分子鑒定 利用SDS 法提取菌株基因組DNA，參照 White 等［28］設(shè)計(jì)的通用引物ITS4（5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'）和 ITS5（5'-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3'）進(jìn)行rDNA ITS序列的擴(kuò)增與測(cè)定。50 μL PCR 反應(yīng)體系，dNTP混合物1 μL、Phanta Max Super-Fidelity DNA 聚合酶1 μL、上下游引物各1 μL，2×Phanta Max Buffer 25 μL 和DNA 模板1 μL，ddH2O 補(bǔ)足至50 μL 。PCR 擴(kuò)增條件：95 ℃預(yù)變性3 min；95 ℃下變性15 s，55℃退火30 s，72 ℃延伸1 min；34 個(gè)循環(huán)，最后72 ℃延伸5 min。擴(kuò)增產(chǎn)物用2%的瓊脂凝膠電泳檢測(cè)DNA 片段。用膠回收試劑盒對(duì)PCR 產(chǎn)物進(jìn)行回收，并將PCR 產(chǎn)物連接克隆在pEASY-T1 載體上，將陽(yáng)性克隆產(chǎn)物送至擎科新業(yè)生物技術(shù)有限公司測(cè)序。利用NCBI BLAST 對(duì)所測(cè)序列進(jìn)行比對(duì)分析，用Mega 7.0 軟件Clustal X 方法進(jìn)行多序列比對(duì)，以鄰接法（Neighbor joining method）構(gòu)建分子系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.4 菌株侵染方式

1.4.1菌株前處理 采用浸蟲法［30］，將含0.02%吐溫-80 的孢子懸浮液（濃度為1×107CFU/mL）接種到扶桑綿粉蚧雌成蟲，共接種5 頭，晾干后，置于1%水瓊脂板上，用無(wú)菌蒸餾水處理扶桑綿粉蚧作為對(duì)照。樣品培養(yǎng)2～3 d 后可見清晰的菌絲侵染蟲體表面即可用2.5%戊二醛4 ℃過(guò)夜固定，待脫水干燥。

1.4.2SEM 掃描電鏡觀察 將已過(guò)夜固定的扶桑綿粉蚧按以下方式進(jìn)行脫水干燥：0.1 mol/L 的磷酸緩沖液沖洗3 次，每次10 min，蒸餾水沖洗3次后，再依次用70%、80%、90%、100%乙醇脫水（每次5 min），然后用液態(tài)二氧化碳代替乙醇，利用EMS 850 臨界點(diǎn)干燥儀（美國(guó)Electron Microscopy Sciences 公司）將樣品干燥。最后將樣品安裝在短柱上，噴金后，即可在SEM（S-3000N掃描電子顯微鏡，日本日立公司）上觀察。

1.5 毒力測(cè)定

采用鄧嘉茹等［30］浸蟲法進(jìn)行回接試驗(yàn)和生物學(xué)測(cè)定。將供試菌株接種于PDA 平板上培養(yǎng)，待平板長(zhǎng)滿分生孢子后，用含0.02%吐溫-80 的無(wú)菌水洗脫分生孢子，搖勻后用雙層紗布過(guò)濾，用血球計(jì)數(shù)板在生物顯微鏡下計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)初始濃度，再用含 0.05% 吐溫-80 的無(wú)菌水稀釋至終濃度分別為1×104、1×105、1×106、1×107、1×108CFU/mL，待用。

各取30 頭健康的扶桑綿粉蚧雌成蟲置于直徑9 cm 的培養(yǎng)皿內(nèi)，分別用小型噴霧器將上述提前配制的不同濃度的1 mL 孢子懸浮液噴至蟲體，浸泡20 s，使孢子液與雌成蟲充分接觸，然后將其挑至扶桑葉片背面，晾干。帶有扶桑葉片的枝條用浸水花泥保濕，置于28 ℃人工氣候培養(yǎng)箱（RH 90%以上，12 L∶12 D）培養(yǎng)，以噴施0.02%吐溫-80 無(wú)菌水為空白對(duì)照。每組設(shè)3 次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30 頭蟲。在菌株接種后2 d 開始觀察并統(tǒng)計(jì)菌株對(duì)扶桑綿粉蚧雌成蟲的侵染和致死情況，計(jì)算校正死亡率。

校正死亡率=（處理組死亡率-對(duì)照組死亡率）/（1-對(duì)照組死亡率）×100%。

1.6 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行Probit回歸分析，得到回歸方程，得出致死中濃度（LC50）和致死中時(shí)間（LT50）。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株FE-1 的分離純化

從上海市普陀區(qū)一株扶桑枝條上采集獲得扶桑綿粉蚧僵蟲，置于體式顯微鏡觀察（圖1A）。采用組織分離法，從扶桑綿粉蚧僵蟲組織中分離出一個(gè)真菌菌落，經(jīng)PDA 平板傳代培養(yǎng)，得到一株真菌純培養(yǎng)物。進(jìn)一步對(duì)真菌純培養(yǎng)物進(jìn)行單胞分離，純化獲得菌株FE-1（圖1B）。菌株FE-1 菌落正面呈橙白色，菌絲棉絮狀，菌落背面后期呈橙黃色。

圖1 扶桑綿粉蚧僵蟲（A）和純化的FE-1 菌株菌落（B）形態(tài)Fig.1 The diseased P.solenoposis (A)and colony morphology of the purified strain FE-1(B)

2.2 菌株FE-1 的鑒定

2.2.1菌株FE-1 的形態(tài)學(xué)特征 將菌株FE-1置于PDA 培養(yǎng)基28 ℃條件下，培養(yǎng)5 d 后，菌落直徑50～60 mm 之間。經(jīng)光學(xué)顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)孢子形態(tài)呈兩種類型，小型孢子卵形或長(zhǎng)圓形，1～2 個(gè)橫隔（圖2A）；大型孢子長(zhǎng)柱形或鐮刀形，微彎，有較多橫隔（圖2B）；分生孢子梗單生或叢生，菌絲無(wú)色有隔，細(xì)長(zhǎng)分枝（圖2C）。結(jié)合上述菌落形態(tài)和孢子形狀，發(fā)現(xiàn)其與鐮刀菌屬（Fusarium）形態(tài)特征一致。

圖2 菌株FE-1 的形態(tài)學(xué)特征Fig.2 Morphological traits of strain FE-1

2.2.2菌株FE-1 的系統(tǒng)發(fā)育樹分析 以ITS4 和ITS5 為引物，F(xiàn)E-1 菌株基因組DNA 為模板進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，獲得大小約600 bp 的目的片段。將PCR 產(chǎn)物克隆到pEASY-T1 載體后送去測(cè)序，在NCBI BLAST 對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)其與鐮刀菌屬的木賊鐮刀菌（Fusarium equiseti）的rDNA ITS 序列相似性達(dá)99%；系統(tǒng)發(fā)育樹顯示，菌株FE-1 的rDNA ITS 序列與鐮刀菌屬的木賊鐮刀菌（序列編號(hào)為MH581383、MH581300、MH574897、MH567074等）聚在同一分枝上（圖3）。因此，結(jié)合上述培養(yǎng)特征、形態(tài)特征以及rDNA ITS 序列分析結(jié)果，鑒定菌株FE-1 為木賊鐮刀菌。

圖3 基于rDNA ITS 序列構(gòu)建的菌株FE-1 系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.3 Phylogenetic tree of strain FE-1 constructed based on rDNA-ITS sequences

2.3 菌株FE-1 的侵染方式

通過(guò)SEM 掃描電鏡，探究菌株FE-1 對(duì)扶桑綿粉蚧的侵染方式，結(jié)果顯示菌株FE-1 的分生孢子先在扶桑綿粉蚧表皮處萌發(fā)形成芽管后水平生長(zhǎng)，在適合的接觸表皮處形成膨大的附著孢，進(jìn)一步侵染進(jìn)入昆蟲體腔（圖4）。表明菌株FE-1 對(duì)扶桑綿粉蚧具有侵染能力。

圖4 菌株FE-1 在扶桑綿粉蚧表皮上的侵染模式Fig.4 Infection mode of strain FE-1 on the epidermis of P.solenoposis

2.4 菌株FE-1 的毒力測(cè)定

2.4.1菌株FE-1 回接扶桑綿粉蚧 回接試驗(yàn)結(jié)果表明，扶桑綿粉蚧可被菌株FE-1 侵染。在侵染初期，接種后1 d，扶桑綿粉蚧的取食行為、蟲體外部形態(tài)與健康扶桑綿粉蚧無(wú)差別。接種后2 d，扶桑綿粉蚧爬行逐漸緩慢，足部各關(guān)節(jié)以及背板等處長(zhǎng)出少量白色菌絲（圖5A）；接種后3 d，扶桑綿粉蚧蟲體表面出現(xiàn)大量菌絲，開始出現(xiàn)僵蟲（圖5B）；接種后4 d，扶桑綿粉蚧被菌絲包裹死亡，蟲體干癟（圖5C），并產(chǎn)生大量分生孢子。以上結(jié)果表明菌株FE-1 對(duì)扶桑綿粉蚧具有致死性。

圖5 扶桑綿粉蚧感染菌株FE-1 后的動(dòng)態(tài)癥狀Fig.5 Dynamic symptom of P.solenopsis infected with strain FE-1

2.4.2菌株FE-1 對(duì)扶桑綿粉蚧室內(nèi)毒力測(cè)定 不同濃度的菌株FE-1 孢子懸浮液對(duì)扶桑綿粉蚧雌成蟲的致病力如圖6 所示。隨著濃度的增大，致病力逐漸增強(qiáng)，當(dāng)孢子濃度為 1×108CFU/mL 時(shí)，接種7 d 后扶桑綿粉蚧雌成蟲的校正死亡率為87.50（±1.79）%。從菌株FE-1 對(duì)扶桑綿粉蚧雌成蟲的致死中時(shí)間LT50的結(jié)果看，隨著分生孢子濃度的增加，致死中時(shí)間逐漸遞減（表1）；當(dāng)孢子濃度為 1×108CFU/mL 時(shí)，致死中時(shí)間LT50最短、為3.32 d。從菌株FE-1 對(duì)扶桑綿粉蚧雌成蟲的致死中濃度LC50的結(jié)果看，隨著接種時(shí)間的延長(zhǎng)，菌株FE-1 對(duì)扶桑綿粉蚧雌成蟲的致死中濃度LC50遞減（表2）；接種7 d后的致死中濃度LC50最低、為1.8×105CFU/mL。以上結(jié)果表明菌株FE-1 對(duì)扶桑綿粉蚧雌成蟲具有一定的室內(nèi)毒力。

表1 菌株FE-1 對(duì)扶桑綿粉蚧雌成蟲的LT50 和回歸方程Table 1 LT50 and regression equations of P.solenopsis female adults infected with strain FE-1

表2 菌株FE-1對(duì)扶桑綿粉蚧雌成蟲的LC50和回歸方程Table 2 TheLC50andregressionequations ofP.solenopsis femaleadults inf ected withstrainFE-1

圖6 不同濃度菌株FE-1 孢子懸浮液對(duì)扶桑綿粉蚧雌成蟲的校正死亡率Fig.6 Corrected morality of P.solenopsis female adults infected with strain FE-1 under different concentrations of spore suspension

3 討論

通常，來(lái)自原寄主的病原真菌比來(lái)自其他寄主的病原真菌對(duì)防治對(duì)象具有更高的毒力或更加專一的作用［31］，這對(duì)于挖掘扶桑綿粉蚧高致病力蟲生真菌資源起到關(guān)鍵的作用。本研究從扶桑綿粉蚧僵蟲中分離得到一株蟲生真菌，綜合培養(yǎng)形狀、形態(tài)學(xué)和系統(tǒng)發(fā)育樹分析，確定該真菌為木賊鐮刀菌。鐮刀菌屬真菌多為植物病原、昆蟲病原以及人類致病菌。近年來(lái)，學(xué)者們發(fā)現(xiàn)部分鐮刀菌屬真菌對(duì)昆蟲具有強(qiáng)致病性，而對(duì)寄主植物不致?。?2］；Sharma 等［33］討論了昆蟲與鐮刀菌之間的致病與互惠關(guān)系，重點(diǎn)是在野外條件下證明昆蟲自然致病的研究；Santos 等［34］發(fā)現(xiàn)至少有30 種273 株鐮刀菌為昆蟲致病菌。因此，鐮刀菌是蟲生真菌的重要組成部分［35］，且寄主非常廣泛，包括鞘翅目（Coleoptera）、雙翅目（Diptera）、半翅目（Hemiptera）、膜翅目（Hymenoptera）和鱗翅目（Lepidoptera）［36］。而木賊鐮刀菌是一種常見的鐮刀菌類，目前國(guó)內(nèi)外針對(duì)木賊鐮刀菌作為蟲生真菌對(duì)害蟲的致病作用研究已有不少報(bào)道，如柳毒蛾（Leuccma cancliae）［37］、小麥莖葉蜂（Cephus cinctus）［38］、褐飛虱（Nilaparvata lugens）［33］、桃蚜（Myzus persicae）［39］，但未見對(duì)扶桑綿粉蚧致病性研究的報(bào)道。菌株在環(huán)境中的持久性是選擇其作為候選菌株制備微生物制劑的重要因素［40］，而昆蟲病原性鐮刀菌類作為兼性病原體，在野外可能具有良好的生存潛力；此外，在自然中觀察到鐮刀菌類具高遺傳變異的特點(diǎn)［41-42］，擴(kuò)大了菌株使用范圍，有利于挖掘更多毒力強(qiáng)的菌株；還有一些鐮刀菌種類是菌株復(fù)合體，例如赤霉病菌-木賊種復(fù)合體（Fusarium incarnatum-equiseti）［43］、茄腐皮鐮孢（F.solani）［44］、因其在昆蟲致病相互作用中表現(xiàn)出高致病力，近年來(lái)也受到越來(lái)越多的關(guān)注。由此可見，鐮刀菌因其生防潛力而備受青睞。

昆蟲表皮是抵御病原真菌侵染的第一道屏障，判斷蟲生真菌是否對(duì)宿主有侵染能力，需要觀察其是否能夠形成膨大的附著孢穿透寄主體壁［25］。本研究通過(guò)掃描電鏡技術(shù)，觀察菌株FE-1 對(duì)扶桑綿粉蚧的侵染方式，發(fā)現(xiàn)菌株FE-1可以在扶桑綿粉蚧特定接觸表皮處形成膨大的附著孢，進(jìn)一步進(jìn)入昆蟲體腔。Leger 等［45］研究發(fā)現(xiàn)蟲生真菌是依靠附著孢的膨壓所產(chǎn)生的機(jī)械壓力和所分泌的體壁降解酶的共同作用，進(jìn)一步穿透扶桑綿粉蚧體壁，這與本研究觀察到菌株FE-1的侵染方式是相一致的。因此，本研究從微觀上驗(yàn)證了菌株FE-1 對(duì)扶桑綿粉蚧具有侵染能力。

進(jìn)一步通過(guò)室內(nèi)毒力測(cè)定發(fā)現(xiàn)，菌株 FE-1對(duì)扶桑綿粉蚧雌成蟲具有較高的致病力，隨著分生孢子濃度的增大，致病力逐漸增強(qiáng)，孢子濃度為 1×108CFU/mL 時(shí)，接種后7 d，扶桑綿粉蚧雌成蟲的校正死亡率為87.50（±1.79）%，LC50為1.8×105CFU/mL，與趙雪怡等［39］利用木賊鐮刀菌防治桃蚜（Myzus persicae）的致病力結(jié)果相近。表明在室內(nèi)實(shí)驗(yàn)室條件下，菌株FE-1 對(duì)扶桑綿粉蚧雌成蟲具有一定的生防潛力，下一步還需對(duì)其野外防治效果進(jìn)行相關(guān)研究，以明確其在自然環(huán)境下對(duì)扶桑綿粉蚧的防治效果。

將鐮刀菌類用于生物防治中也受到了一些因素的限制，如產(chǎn)生致癌的霉菌毒素、大量釋放植物病原到自然環(huán)境中［46］。從某種程度上來(lái)說(shuō)，鐮刀菌屬的應(yīng)用仍存在很多爭(zhēng)議，認(rèn)為其存在應(yīng)用真菌的安全性，對(duì)昆蟲寄主植物或其他植物存在潛在的風(fēng)險(xiǎn)，并且真菌的特異性在不同屬、屬內(nèi)甚至一個(gè)種的菌株之間差異很大［35］。因此，在考慮利用鐮刀菌株防治昆蟲之前，應(yīng)對(duì)其宿主特異性進(jìn)行研究，確定其對(duì)寄主植物或其他植物的安全性。本研究分離得到的木賊鐮刀菌，對(duì)扶桑綿粉蚧具有較高的毒力，且對(duì)扶桑綿粉蚧的寄主植物扶桑沒(méi)有致病能力，但對(duì)其他寄主植物是否有致病力還需要進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

本研究從扶桑綿粉蚧僵蟲中分離得到菌株FE-1，經(jīng)純化及鑒定確定其為木賊鐮刀菌。掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)菌株FE-1 可在扶桑綿粉蚧體壁產(chǎn)生膨脹的附著孢來(lái)進(jìn)入昆蟲體腔，表明該菌株對(duì)扶桑綿粉蚧具有侵染能力。回接結(jié)果也表明菌株 FE-1 可逐步侵染扶桑綿粉蚧致死。室內(nèi)毒力測(cè)定發(fā)現(xiàn)，分生孢子濃度、接種后時(shí)間與校正死亡率呈正相關(guān)；孢子濃度為 1×108CFU/mL 時(shí)，LT50為3.32 d，在接種后7 d，扶桑綿粉蚧雌成蟲的校正死亡率為87.50（±1.79）%；接種后7d，LC50為1.8×105CFU/mL。綜上所述，木賊鐮刀菌FE-1 對(duì)扶桑綿粉蚧雌成蟲有較好的致病效果，極具生防潛力。