云南木姜子醇提物抑菌活性及其穩(wěn)定性研究

陳 聰，薛橋麗 ，胡永金，魏美娟，陳中愛

（1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院，云南昆明 650201；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)編輯部，云南昆明 650201）

隨著人口的急速擴(kuò)增，保證大批量食品供給中的食品安全成為了現(xiàn)代社會(huì)的主要挑戰(zhàn)之一[1]。食源性致病菌污染是影響食品安全和引發(fā)公共衛(wèi)生事件的潛在威脅因素[2]。其中金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）為典型革蘭氏陽性菌，是引起食品污染和食物中毒的重要和常見細(xì)菌之一[3]，其引發(fā)的食源性疾病成為食品行業(yè)的主要挑戰(zhàn)。S.aureus引發(fā)的疾病常發(fā)于春夏季，會(huì)引發(fā)傷口化膿，嚴(yán)重的會(huì)引起肺炎、心包炎等炎癥等[4]。大腸桿菌（Escherichia coli）是典型的革蘭氏陰性菌，在自然環(huán)境中廣泛存在，傳播途徑較廣[5]。常通過污染肉、奶、蔬菜等食品導(dǎo)致人體感染[6]，會(huì)引起嘔吐、輕度發(fā)燒、腸道感染、腹瀉等[7]。因此，控制金黃色葡萄球菌、大腸桿菌在食品中的污染具有重要意義。

研究表明，革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌能被植物提取物有效抑制，植物提取物擁有與抗生素相似的抑菌作用機(jī)制[8-9]。目前國內(nèi)外對(duì)植物提取物的研究非常活躍，篩選對(duì)食品腐敗菌和致病菌具有抑菌效果的植物提取物，并對(duì)其活性成分提取、分離鑒定，抑菌機(jī)理探索以及應(yīng)用研究逐漸成為生鮮農(nóng)產(chǎn)品防腐保鮮領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。

木姜子（Litsea pungensHemsl.）為樟科，樟屬落葉小喬木，別名山姜子、木香子、木樟子、山蒼子以及山胡椒等[10]。中醫(yī)藥上又名畢澄茄[11]，是我國珍貴芳香油料植物[12]，大多分布在華南和西南北緯18°～34°之間的安徽、浙江、福建、云南、四川和西藏等省，其中云南種類最多（37 種），主要產(chǎn)高山木姜子、近輪葉木姜子、毛葉木姜子等[13-14]，其果實(shí)不僅可以入藥[15]，還可以用作烹飪調(diào)味品，對(duì)胃寒嘔吐、風(fēng)濕骨痛等疾病有較好的治療效果[16]，果實(shí)中還含有大量精油，主要成分是檸檬醛，占60%～80%，具有新鮮檸檬果香[17]。該屬植物含有豐富的化學(xué)成分，主要有生物堿類、黃酮類、甾體、木脂素、內(nèi)酯、揮發(fā)油等[18-19]。現(xiàn)階段大量研究對(duì)象為木姜子精油（Litsea cubebaessential oil，LCEO），且證明其具有抑菌效果、抗氧化性和對(duì)生物的趨避性等天然特性[20]，LCEO 被證明可以破壞細(xì)菌細(xì)胞結(jié)構(gòu)的完整性和細(xì)胞膜通透性，從而導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)有機(jī)物的滲漏[21]。對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、黃曲霉素等具有明顯的抑制作用[22-23]。在食品保鮮領(lǐng)域具有潛在應(yīng)用價(jià)值[20]，在食品工業(yè)領(lǐng)域可作為食品防腐劑[15]。但是目前僅僅研究了95%乙醇木姜子提取物對(duì)燕麥鐮刀菌（Fusarium avenaceum）、煙草赤星病菌（Alternaria alternata）、石榴枯萎病菌（Ceratocystis fimberiata）三種植物病原菌均有抑制效果[24]，對(duì)抑制食源性致病菌沒有相關(guān)研究。

因此，本研究以云南木姜子為原材料，通過不同濃度乙醇提取制備EELC，并對(duì)EELC 對(duì)S.aureus、E.coli抑菌活性及其穩(wěn)定性進(jìn)行研究，為其開發(fā)成高效、無毒、穩(wěn)定的天然防腐、保鮮劑提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

云南木姜子 2021 年8 月采自云南省臨滄市；大腸桿菌（E.coli）、金黃色葡萄球菌（S.aureus） 云南省高校食品微生物資源與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；氫氧化鈉、鹽酸、乙醇、吐溫80、2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC） 分析純，北京索萊寶科技有限公司；LB 肉湯培養(yǎng)基、LB 瓊脂培養(yǎng)基 廣東環(huán)凱生物科技有限公司。

GZX-GH01-3-BS 電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司；RE-5205 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠；MS3 渦旋震蕩儀 德國ika 公司；DC-3010 恒溫水浴鍋 寧波新芝生物科技有限公司；ST3100 pH 計(jì) 奧豪斯國際貿(mào)易（上海）有限公司；Spectra Max iD5 光柵型多功能酶標(biāo)儀 賽默飛世爾有限公司；UV-6100 紫外-可見分光光度計(jì) 上海美譜達(dá)儀器有限公司；SW-CJ-1F 超凈工作臺(tái) 蘇凈集團(tuán)蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 EELC 的制備 根據(jù)文獻(xiàn)[24-25]方法并加以分析改進(jìn)，云南木姜子鮮果室溫自然晾干10 d，再轉(zhuǎn)于電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)烘干、粉碎過40 目篩密閉保存?zhèn)溆谩?zhǔn)確稱取10 g 云南木姜子粉末按1:10料液比分別加入純水、55%乙醇、75%乙醇、95%乙醇以及無水乙醇30 ℃浸泡2 h，合并2 次過濾的濾液，將濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀45 ℃濃縮至提取溶劑揮發(fā)完全即得提取物，置于-20 ℃冰箱中密閉冷凍備用。用無菌水按試管二倍稀釋法稀釋成濃度為20 mg/mL 的EELC 稀釋液備用，EELC 得率按下式計(jì)算。

1.2.2 培養(yǎng)基的制備 LB 肉湯培養(yǎng)基：2.1 g LB 肉湯粉加入至100 mL 蒸餾水中溶解混勻；LB 瓊脂培養(yǎng)基：3.6 g LB 瓊脂粉加入至100 mL 蒸餾水中溶解混勻；121 ℃高壓蒸汽滅菌20 min。

1.2.3 菌株的活化 將金黃色葡萄球菌、大腸桿菌接種到裝有5 mLLB 肉湯培養(yǎng)基的試管中，37±1 ℃培養(yǎng)12～18 h。用接種環(huán)挑取菌懸液以劃線法接種到LB 瓊脂固體平板上，37±1 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24 h，然后從平板中挑取單菌落接種在LB 瓊脂培養(yǎng)基試管斜面內(nèi)，37±1 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24 h，后將試管斜面貯存于4 ℃冰箱內(nèi)作為保存菌備用，保存期不超過一個(gè)月，每月傳代一次，傳代次數(shù)不超過10 代[26]。

1.2.4 菌懸液的制備 用接種環(huán)取保存菌，以劃線法接種到LB 固體平板上，37±1 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h，LB 固體平板在4 ℃條件下保存，1 周內(nèi)使用。用接種環(huán)挑取LB 固體平板上單菌落接種在100 mL LB 肉湯培養(yǎng)基內(nèi)，37±1 ℃培養(yǎng)12～18 h。采用麥?zhǔn)媳葷岱?，使用LB 肉湯培養(yǎng)基調(diào)整菌液濃度至1×108～5×108CFU/mL，并以此作為后續(xù)試驗(yàn)菌懸液，菌懸液在4 ℃條件下保存，4 h 內(nèi)使用[26]。

1.3 不同乙醇濃度EELC 對(duì)S.aureus、E.coil 抑菌活性分析

1.3.1 抑菌活性測(cè)定 采用KB 紙片法[26]測(cè)定不同乙醇濃度EELC 對(duì)S.aureus、E.coil的抑菌活性。取1.2 中的菌懸液用冷卻至55 ℃左右的LB 瓊脂培養(yǎng)基按1:10（菌懸液25 mL：LB 瓊脂培養(yǎng)基225 mL）的比例稀釋，充分混勻后取20～30 mL 于無菌平板中，輕輕搖動(dòng)平板使菌液均勻鋪平，待其凝固后制成檢測(cè)平板備用。將浸泡濃度為20 mg/mL EELC 稀釋液的6 mm 飽和濾紙片晾干，然后貼在檢測(cè)平板表面，一個(gè)平板貼3 個(gè)濾紙片，倒置于37±1 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，利用游標(biāo)卡尺十字交叉法測(cè)量抑菌圈大小，以無菌水作對(duì)照。

1.3.2 最小抑菌濃度（MIC）的測(cè)定 利用2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）法[27]測(cè)定EELC 對(duì)S.aureus、E.coil的MIC。將100 μL 濃度為108CFU/ mL 的菌液加入96 孔板中，再加入100 μL 不同濃度的EELC，使醇提物的最終濃度分別達(dá)到10、5、2.5、1.25、0.6、0.3、0.15、0.07、0.04、0.02、0.01 mg/mL，以不加樣的菌懸液作為對(duì)照，不加樣以及不加菌懸液的液體培養(yǎng)基為未處理組，培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h 后加入20 μL 0.2% TTC 溶液，避光培養(yǎng)4 h 后，觀察顏色確定MIC，每個(gè)處理均設(shè)置3 次重復(fù)。

1.4 EELC 穩(wěn)定性分析

1.4.1 EELC 抑菌穩(wěn)定性的測(cè)定 采用1.5×106CFU/mLE.coil、S.aureus為指示菌、終濃度為2MIC EELC溶液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。其中未處理組為未經(jīng)處理的EELC與菌懸液等體積混合；對(duì)照組為不加EELC 的菌懸液。設(shè)置3 次平行實(shí)驗(yàn)，采用96 孔板法檢測(cè)不同條件對(duì)EELC 抑菌活性的影響[28-29]。

1.4.2 溫度對(duì)EELC 抑菌活性的影響 將篩選出抑菌活性最佳EELC 分別在20、40、60、80、100 ℃的水浴中處理30 min，以不加樣組作為對(duì)照，以S.aureus、E.coil為指示菌，每組試驗(yàn)設(shè)3 個(gè)重復(fù)，采用96 孔板法分別檢測(cè)不同溫度對(duì)EELC 抑菌活性的影響[28-29]。

1.4.3 熱處理時(shí)間對(duì)EELC 抑菌活性的影響 將篩選出抑菌活性最佳EELC 以及在最佳溫度分別水浴處理1、2、3、4、5 h。以不加樣組作為對(duì)照，以S.aureus、E.coil為指示菌，每組試驗(yàn)設(shè)3 個(gè)重復(fù)，采用96 孔板法分別檢測(cè)不同熱處理時(shí)間對(duì)EELC 抑菌活性的影響[28-29]。

1.4.4 pH 對(duì)EELC 抑菌活性的影響 分別用1 mol/L的鹽酸和1 mol/L 氫氧化鈉溶液將篩選出抑菌活性最佳EELC 的pH 調(diào)為4.0、6.0、8.0、10.0，以不加樣組作為對(duì)照，以S.aureus、E.coil為指示菌，每組試驗(yàn)設(shè)3 個(gè)重復(fù)，采用96 孔法分別檢測(cè)pH 對(duì)EELC 抑菌活性的影響[28-29]。

1.4.5 紫外線照射對(duì)EELC 抑菌活性的影響 將篩選出抑菌活性最佳EELC 敞開放置在30 W 紫外燈光下，分別照射10、20、30、40、50、60 min，以不加樣組作為對(duì)照，以S.aureus、E.coil為指示菌，每組試驗(yàn)3 個(gè)重復(fù)，采用96 孔法分別檢測(cè)紫外線對(duì)EELC抑菌活性的影響[28-29]。

1.5 數(shù)據(jù)處理

所有試驗(yàn)均重復(fù)3 次，采用Excel 進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)；使用SPSS 19.0 的單因素方差分析中的鄧肯氏多重比較進(jìn)行顯著性差異分析，以P＜0.05 為差異顯著；P＜0.01，表明具有極顯著性差異；用Origin 9.0 軟件繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度乙醇EELC 得率的測(cè)定

為選擇一種較好的提取溶劑，本研究分別用純水、55%、75%、95%和無水乙醇對(duì)云南木姜子進(jìn)行提取來做抑菌效果的實(shí)驗(yàn)。從圖1 可以看出，使用純水、55%乙醇、75%乙醇、95%乙醇和無水乙醇作為云南木姜子的提取溶劑，它們的提取效率并不相同。95%乙醇的得率最高，為44.28%，而純水的得率最低，只有7.25%。一般剛采摘的木姜子中含油量有4%～7%，干果中的油含量大約為1%～3%[30]。因此EELC 比木姜子精油提取量大且工藝較為簡單。

圖1 不同濃度乙醇EELC 得率Fig.1 Yield of EELC with different concentrations of ethanol

圖2 云南木姜子醇提物對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌抑菌效果Fig.2 Antibacterial effect of alcohol extract of EELC on Staphylococcus aureus and Escherichia coli

2.2 不同濃度乙醇EELC 對(duì)S.aureus、E.coil 抑菌活性

采用KB 紙片法研究不同濃度乙醇EELC 抑菌活性對(duì)S.aureus、E.coil抑菌活性，結(jié)果見表1，與對(duì)照組相比純水提取物對(duì)S.aureus、E.coil均無抑制作用。其他四種不同提取溶劑提取物均有明顯抑菌效果，但抑菌圈大小并不相同，其中55% EELC 對(duì)S.aureus抑制效果最好，其抑菌圈為18.25±0.26 mm；75% EELC 對(duì)E.coil抑菌效果最好，抑菌圈為17.81±0.71 mm。

表1 EELC 對(duì) 2 種受試菌的抑菌圈結(jié)果（醇提物濃度20 mg/ml）Table 1 Inhibition zone of EELC on two tested bacteria (ethanol extract concentration 20 mg/ml)

2.3 不同乙醇濃度EELC 對(duì)S.aureus、E.coil 最小抑菌濃度（MIC）

如表2、3 所示，與未處理組相比可以看出，純水提取物對(duì)S.aureus和E.coil均無抑制作用，55%、75%、95%、無水乙醇提取物對(duì)S.aureus、E.coil均有不同程度抑菌效果。其中55% EELC 對(duì)S.aureus抑制作用最佳，其最小抑菌濃度（MIC）為19 μg/mL；75% EELC 對(duì)E.coil抑制作用最佳，其最小抑菌濃度（MIC）為819 μg/mL。且EELC 濃度越高，抑菌效果越強(qiáng)。結(jié)果表明云南木姜子的主要抑菌成分溶于乙醇，在水中的溶解度很小。木姜子精油中主體抑菌成分為檸檬醛難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑乙醇[11]；據(jù)研究5%木姜子精油在含有S.aureus和枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)基中有抑菌圈生成，而在含有E.coil的培養(yǎng)基中未出現(xiàn)抑菌圈[30]，同樣55% EELC 對(duì)S.aureus抑菌作用濃度低于75% EELC 對(duì)E.coil的抑菌作用濃度，因此推測(cè)EELC 中主體抑菌成分可能與精油類似。由于S.aureus和E.coil為不同性質(zhì)的兩種菌，細(xì)胞結(jié)構(gòu)并不相同，因此55%、75% EELC 抑菌主體成分是否一致，還需進(jìn)一步鑒定探究。

表2 EELC 對(duì)金黃色葡萄球菌最小抑菌濃度MICTable 2 Minimal inhibitory concentration MIC of EELC against S. aureus

結(jié)合提取率、抑菌圈和MIC 實(shí)驗(yàn)結(jié)果綜合分析，后續(xù)試驗(yàn)以55%、75% EELC 為試驗(yàn)材料分別對(duì)S.aureus 與E.coil進(jìn)行抑菌穩(wěn)定性試驗(yàn)。

表3 EELC 對(duì)大腸桿菌最小抑菌濃度MICTable 3 Minimal inhibitory concentration MIC of EELC against E.coil

2.4 EELC 抑菌穩(wěn)定性研究

2.4.1 溫度對(duì)EELC 抑菌活性的影響 以S.aureus與E.coil的OD600值為指標(biāo)來判斷EELC 的抑菌活性，吸光度值越低，其抑菌活性越強(qiáng)[28]，結(jié)果如圖3所示，55% EELC 對(duì)S.aureus實(shí)驗(yàn)組與未處理組相比較，20～60 ℃處理30 min，其抑菌活性相對(duì)穩(wěn)定；在40 ℃處理時(shí)OD600為0.1108，抑制效果最好，因此選取該溫度進(jìn)行熱處理時(shí)間抑菌穩(wěn)定性試驗(yàn)。80～100 ℃處理30 min，抑菌活性下降較為明顯，但與對(duì)照組相比，其他組均具有顯著的抑菌活性（P＜0.05）。表明55% EELC 具有較好的熱穩(wěn)定性。

圖3 不同溫度EELC 對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌活性的影響Fig.3 Effect of EELC at different temperatures on the antibacterial activity of S. aureus

圖4 不同溫度EELC 對(duì)大腸桿菌抑菌活性的影響Fig.4 Effect of EELC at different temperatures on the antibacterial activity of E.coil

不同溫度處理75% EELC 對(duì)E.coil抑菌活性結(jié)果如圖2 所示，與未處理組對(duì)比，在100 ℃處理時(shí)抑菌活性保持最高，因此選取該溫度進(jìn)行熱處理時(shí)間抑菌穩(wěn)定性試驗(yàn)。但與未處理組相比，75% EELC 經(jīng)不同溫度處理后，與未處理組相比其抑菌活性沒有顯著差異（P＞0.05），表明75% EELC 具有較好的熱穩(wěn)定性。

結(jié)合OD600與抑菌活性保持率可以看出，55%EELC 對(duì)S.aureus與75% EELC 對(duì)E.coil在相同溫度處理?xiàng)l件下，展現(xiàn)出不同程度抑制效果，但綜合來看均具有良好的熱穩(wěn)定性，100 ℃下處理30 min 均保持較好的抑菌活性。木姜子屬的植物種類眾多，但成分都比較類似，果實(shí)中往往富含揮發(fā)油、生物堿、黃酮類、γ-丁內(nèi)酯類和萜類化合物，尤其是單萜和倍半萜是該屬植物中豐富的生物活性成分[31]。單萜的沸點(diǎn)比倍半萜低，并且單萜和倍半萜隨分子量和雙鍵的增加，功能基的增多，熔點(diǎn)和沸點(diǎn)相應(yīng)增高，在高溫下不易分解[32]，分析55%、75% EELC 具有良好的熱穩(wěn)定性與這些物質(zhì)有關(guān)，具體原因有待進(jìn)一步研究。

2.4.2 熱處理時(shí)間對(duì)EELC 抑菌活性的影響55%、75% EELC 分別在40 和100℃處理1～5 h 抑菌活性結(jié)果如圖5～圖6 所示，與對(duì)照組相比，在不同時(shí)間處理下，55% EELC 對(duì)S.aureus、75% EELC 對(duì)E.coil的抑菌活性具有顯著差異（P＜0.05）；與未處理組相比抑菌活性會(huì)有所降低，但沒有顯著差異（P＞0.05）。試驗(yàn)結(jié)果表明，S.aureus、E.coil隨著時(shí)間處理的增長OD600大小有所變化，但是變化幅度較小，抑菌效果相對(duì)穩(wěn)定。2.4.1 中提到木姜子屬含量高的活性物質(zhì)熔沸點(diǎn)較高[31-32]，在適應(yīng)溫度中較穩(wěn)定。因此，可能是處理時(shí)間并未使55%、75% EELC抑菌成分受到影響，其仍然對(duì)微生物生長還具有抑制作用。

圖5 不同熱處理時(shí)間EELC 對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌活性的影響Fig.5 Effect of EELC at different heat treatment times on the antibacterial activity of S. aureus

圖6 不同熱處理時(shí)間EELC 對(duì)大腸桿菌抑菌活性的影響Fig.6 Effect of EELC at different heat treatment times on the antibacterial activity of E.coil

2.4.3 pH 對(duì)EELC 抑菌活性的影響 如圖6 所示，隨著pH 的升高或者降低，與未處理組相比，55%EELC pH 為4 時(shí)抑菌活性差異顯著（P＜0.05），pH 為6～10 時(shí)抑菌活性沒有顯著差異（P＞0.05）。如圖7 所示，75% EELC 經(jīng)pH 4～8 處理后，與未處理組相比，抑菌活性有所下降，但與對(duì)照組相比，其抑菌活性差異顯著（P＜0.05），具有明顯的抑菌效果；pH 為10時(shí)與未處理組相比，抑菌活性沒有顯著差異（P＞0.05）。

圖7 不同pH EELC 對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌活性的影響Fig.7 Effect of EELC at different pH on the antibacterial activity of S.aureus

圖8 不同pH EELC 對(duì)大腸桿菌抑菌活性的影響Fig.8 Effect of EELC at different pH on the antibacterial activity of E.coil

綜上所述，酸性條件下更能影響55%、75%乙醇EELC 抑制受試菌的生長，pH 為10 時(shí)其抑菌活性保持率較其他處理組高；可以看出兩者均在強(qiáng)堿條件下抑菌活性更好，研究表明木姜子揮發(fā)油具有良好的抑菌活性，且其α-檸檬醛和β-檸檬醛的含量接近70%，說明木姜子揮發(fā)油雖然化學(xué)成分復(fù)雜，但含量高的成分不多，主要成分為檸檬醛[31]。檸檬醛在堿性條件下能樹脂化，但不改變其性質(zhì)，在強(qiáng)酸性作用下能環(huán)化生成用于配制油漆稀釋劑的對(duì)異丙基甲苯[33]。由此55%、75% EELC 可能也含有檸檬醛，因此在酸性條件下抑菌活性有所下降是其抑菌成分受到H＋的破壞，結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，從而影響其抑菌性能。但55%、75% EELC 在pH 改變的條件下，與對(duì)照組相比，抑菌活性顯著（P＜0.05），說明兩者具有良好酸堿穩(wěn)定性。

2.4.4 紫外線照射對(duì)EELC 抑菌活性的影響 55%乙醇EELC 經(jīng)30W 紫外線處理10～60 min 后，抑菌活性相對(duì)穩(wěn)定，結(jié)果如圖9 所示，實(shí)驗(yàn)組與未處理組比較其抑菌活性沒有顯著差異（P＞0.05）。結(jié)合圖10，75%乙醇EELC 經(jīng)紫外線處理30～60 min 后抑菌活性會(huì)有所下降，但與對(duì)照組對(duì)比，抑菌活性差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），對(duì)E.coil仍有抑制效果。說明55%、75%乙醇EELC 中的活性物質(zhì)能夠?qū)棺贤饩€的破壞,保證其在自然環(huán)境中也能發(fā)揮較好的抑菌活性。

圖9 紫外線處理EELC 對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌活性的影響Fig.9 Effect of UV-treated EELC on the antibacterial activity of S. aureus

圖10 紫外線處理EELC 對(duì)大腸桿菌抑菌活性的影響Fig.10 Effect of UV-treated EELC on the antibacterial activity of E.coil

3 結(jié)論

木姜子在云南有豐富的資源可利用，大多數(shù)作為調(diào)味品，群眾基礎(chǔ)好，但云南木姜子的利用還處于初步階段，基本上都沒有對(duì)其進(jìn)行精細(xì)加工應(yīng)用。木姜子已被證明富含抑菌、抗氧化的活性物質(zhì)，但未能將其運(yùn)用到食品保鮮、防腐方面。因此，本研究通過采用不同濃度乙醇進(jìn)行提取制備不同濃度乙醇EELC，以S.aureus、E.coil為指示菌，探討不同濃度乙醇EELC 是否具有抗菌作用及抗菌穩(wěn)定性。結(jié)果顯示，EELC 提取率較木姜子精油高且提取工藝簡單，更加便于應(yīng)用；純水提取物無抑菌活性，說明云南木姜子抑菌活性物質(zhì)主要溶于乙醇，并且55%、75%EELC 分別對(duì)S.aureus、E.coil具有良好的抑制作用且作用濃度較低，其MIC 分別為19、819 μg/mL；抑菌穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明，兩者分別對(duì)S.aureus、E.coil在經(jīng)過不同溫度、熱處理時(shí)間、pH、紫外線照射時(shí)間處理下，與對(duì)照組相比，抑菌活性均具有顯著差異（P＜0.05），總體上，55%、75% EELC 表現(xiàn)出了良好的體外抑菌活性和穩(wěn)定性。

本研究為云南木姜子抑菌活性物質(zhì)的分離純化、抑菌機(jī)理的研究了提供了數(shù)據(jù)支撐。在后續(xù)研究中，課題組將進(jìn)一步探討其抑菌機(jī)理和安全性評(píng)價(jià)，進(jìn)一步開發(fā)兩者在食品防腐和保鮮中的應(yīng)用，為云南木姜子資源綜合利用奠定理論基礎(chǔ)。