聯(lián)合UPLC-QTOF-MS與HS-SPME-GC-MS 測(cè)定贛南臍橙果肉化學(xué)成分

劉渝辰，余迎利,，甘思逸，劉宇鑫，金汝生，蔡新送，葉詠虹，毛雪金,，王遠(yuǎn)興,,

（1.南昌大學(xué) 食品科學(xué)與資源挖掘全國(guó)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330047；2.南昌大學(xué)食品學(xué)院，江西 南昌 330047）

臍橙是世界農(nóng)業(yè)與經(jīng)濟(jì)領(lǐng)域最重要的水果作物 之一[1]，它含有許多必需的維生素、氨基酸、類(lèi)黃酮、酚酸和植物化學(xué)物質(zhì)[2]。臍橙具有抗氧化、抗癌、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗過(guò)敏、預(yù)防和治療心血管疾病、免疫、抗菌等多種功能[3]。具有生物活性的黃酮類(lèi)化合物有利于身體組織的生長(zhǎng)、發(fā)育和修復(fù)[4]。它們具有不同的生物學(xué)特性（抗菌、抗炎、抗氧化、增強(qiáng)免疫、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝和保護(hù)腸道健康）[5]。據(jù)報(bào)道，臍橙具有多種生物活性，包括抗氧化[6-7]、抗糖尿病的潛力[8]。

贛南臍橙是一種營(yíng)養(yǎng)豐富的水果，產(chǎn)自中國(guó)中部的江西省贛州市。贛南特有的富硒紅壤土層深厚，土壤呈酸性富含微量稀土元素，有利于糖的積累和香氣的形成[9-10]。贛南氣候?qū)賮啛釒駶?rùn)季風(fēng)氣候，具有日照充足、降水充足、晝夜溫差大等優(yōu)點(diǎn)。氣候有利于臍橙的生長(zhǎng)[11]。贛南臍橙是贛南地區(qū)的受保護(hù)地理標(biāo)志產(chǎn)品，它還含有以橙皮苷和柚皮素為主的黃酮類(lèi)化合物和氨基酸、類(lèi)胡蘿卜素[12]。贛南臍橙和柚子、檸檬等水果類(lèi)似，含有多種抗氧化分子例如多酚、抗壞血酸，這些抗氧化分子可以抑制自由基對(duì)人體的有害影響，柑橘中黃酮類(lèi)化合物蘆丁、橙皮苷、柚皮素、柚皮苷和類(lèi)檸檬苦素是身體組織生長(zhǎng)、發(fā)育和修復(fù)所必需的[13-14]。它是一種重要的柑橘類(lèi)水果，食用具有促進(jìn)健康和保護(hù)腸道健康的優(yōu)點(diǎn)。臍橙中含有橙皮苷、蘆丁、柚皮苷等黃酮類(lèi)化合物，在中藥中具有清熱去火的效果，橙皮苷能擴(kuò)展支氣管，具有清熱化痰、疏郁理氣、抗炎和抗過(guò)敏的功效，蘆丁對(duì)高糖高脂飲食導(dǎo)致的小鼠腎臟損害具有保護(hù)作用[15-20]。

到目前為止，贛南臍橙化學(xué)成分的研究并不充分，采用多種類(lèi)型分析方法全面檢測(cè)其化學(xué)成分，對(duì)于贛南臍橙的質(zhì)量分析和控制十分有利，故本研究聯(lián)合超高效液相色譜-四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜（ultrahigh performance liquid chromatography-quadrupole timeof-flight mass spectrometry，UPLC-QTOF-MS）技術(shù)與頂空固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜（headspace solid-phase microextraction-gas chromatography-mass spectrometry，HS-SPME-GC-MS）聯(lián)用技術(shù)填補(bǔ)贛南臍橙中的揮發(fā)性和非揮發(fā)性化學(xué)成分的空缺，有助于未來(lái)贛南臍橙成分的進(jìn)一步提取和利用研究。因此，采用UPLC-QTOF-MS、HS-SPME-GC-MS具有十分顯著的優(yōu)勢(shì)，二者具有高分辨率、高靈敏度、全掃描等優(yōu)點(diǎn)。它已被廣泛應(yīng)用于各種食品中化學(xué)成分的表征和鑒定[21]，該技術(shù)已成功用于多個(gè)領(lǐng)域的非揮發(fā)性化合物的定性和定量分析，如大鼠血漿、紅酒、青錢(qián)柳和綠茶的測(cè)定[22-25]，該技術(shù)在食品檢測(cè)領(lǐng)域具有廣闊的發(fā)展前景。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

2021年12月采摘成熟贛南紐荷爾臍橙，所有樣品均采自江西省贛州市4 個(gè)主要產(chǎn)區(qū)的4 個(gè)果園，海拔高度均為200～250 m區(qū)間，果樹(shù)樹(shù)齡均為12 a。以贛南地區(qū)瑞金鵬飛果業(yè)（E 115°51′36″，N 25°49′48″）、信豐縣寶利果業(yè)（E 114°56′24″，N 25°20′24″）、安遠(yuǎn)仟唐農(nóng)業(yè)（E 115°22′12″，N 25°9′）、南康區(qū)俊萍果業(yè)（E 114°47′24″，N 25°30′36″），以4 個(gè)贛南臍橙協(xié)會(huì)認(rèn)證果園的商品成熟臍橙為原料，每個(gè)果園選取20～30 個(gè)正宗原橙樣品進(jìn)行分析。

甲醇（色譜級(jí)）德國(guó)Merck公司；蒸餾水 美國(guó)Watson公司；甲酸（LC-MS級(jí)）美國(guó)ROE Scientific INC公司；正構(gòu)烷烴標(biāo)品混合物（C7～C40）德國(guó)Sigma-Aldrich公司。

1.2 儀器與設(shè)備

1290 UPLC-6538 QTOF-MS（配有MassHunter Qualitative Analysis和MassHunter Mass Profiler數(shù)據(jù)處理軟件）、7890A氣相色譜儀-7000三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀 美國(guó)Agilent公司；57330-U SPME萃取手柄、50/30 μm DVB/CAR/PDMS萃取頭 美國(guó)Sigma公司；AL104電子天平 瑞士Mettler Toledo公司；TDL-5-A離心機(jī) 北京東方精華苑科技有限公司；KQ5200E超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司；HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋 常州國(guó)華電器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 GC-MS檢測(cè)

在贛南4 個(gè)縣典型臍橙產(chǎn)區(qū)，采集成熟臍橙為研究對(duì)象，在果園中隨機(jī)抽取。用榨汁機(jī)提取臍橙可食用果肉樣品，稱(chēng)取3 g果肉樣品于20 mL頂空萃取瓶中，將頂空萃取瓶置于50 ℃水浴鍋中平衡30 min，再將萃取頭插入頂空萃取瓶中萃取吸附25 min。然后用GC-MS萃取5 min。采用GC-MS對(duì)臍橙的揮發(fā)性成分進(jìn)行測(cè)定。

GC條件：HP-5MS毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm，0.25 mm）；載氣為氦氣，流量為1 mL/min；分流比為5∶1，進(jìn)樣量1 μL；升溫程序：初始溫度35 ℃，保持5 min，以6 ℃/min升溫到60 ℃，保持20 min；以3 ℃/min升溫到140 ℃，維持1 min；以5 ℃/min升至250 ℃，維持3 min，總分析時(shí)間62.83 min。

MS條件：電子電離源；電子能量70 eV；傳輸線溫度275 ℃；離子源溫度230 ℃；母離子m/z285；激活電壓1.5 V；質(zhì)量掃描范圍m/z50～450。

1.3.2 UPLC-MS檢測(cè)

采收的果實(shí)立即運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室凍干后，將這些樣品磨成細(xì)粉過(guò)篩，放入-20 ℃的冰柜中保存，直至使用。使用時(shí)稱(chēng)取1 g凍干粉，將凍干粉與15 mL萃取劑（80%甲醇）充分混合，30 ℃超聲提取30 min，再使用 4500 r/min離心10 min，收集上清液，重復(fù)3 次，最后將上清液使用80%甲醇溶液定容到50 mL容量瓶中，用0.22 μm PTFE的濾膜過(guò)濾，裝入進(jìn)樣瓶，用于上機(jī)分析。相同產(chǎn)地臍橙設(shè)8 個(gè)生物重復(fù)。

UPLC條件：Zorbax Eclipse Plus C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；柱溫25 ℃；流動(dòng)相A為0.1%甲酸溶液，流動(dòng)相B為甲醇含0.1%甲酸。梯度洗脫程序：0～12 min，97%～70% A，3%～30% B；12～27 min，70%～22% A，30%～78% B；27～32 min，22%～5% A，78%～95% B；32～37 min，22%～97% A，78%～3% B；流動(dòng)相流速0.3 mL/min；進(jìn)樣量5.0 μL。

MS條件：正、負(fù)離子模式；電噴霧離子源；質(zhì)量掃描范圍m/z100～1500；碰撞氣：氮?dú)?；毛?xì)管電壓3500 V；碰撞電壓125 V；碰撞能10～50 eV；干燥氣流速11.0 L/min；干燥氣（N2）溫度325 ℃；霧化氣壓力40 psi；八極桿射頻電壓750 V；離子掃描范圍m/z100～1500；二級(jí)碰撞能10～50 eV；參比離子：負(fù)離子，m/z112.9856、1033.9881；正離子m/z121.0509、922.0098。

1.3.3 保留指數(shù)計(jì)算

各組分的保留指數(shù)（retention index，RI）計(jì)算以正構(gòu)烷烴標(biāo)定混合物為基礎(chǔ)，利用Kovats方程計(jì)算：

式中：tx為待測(cè)組分的保留時(shí)間/min；n和n＋1分別表示正構(gòu)烷烴的碳原子數(shù)；其中tn＜tx＜tn＋1。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及圖表繪制

采用安捷倫MassHunter B.07.00采集軟件進(jìn)行所有的操作、采集和數(shù)據(jù)分析。通過(guò)在METLIN（http://metlin.scripps.edu/）、Chemspider（https://www.chemspider.com/）、Food Database（http://foodb.ca/）、MassBank（http://www.massbank.jp/）等數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行物質(zhì)檢索，鑒定非揮發(fā)性化合物。Venn圖和總離子流圖使用https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html在線網(wǎng)站以及Origin2021繪圖軟件制作。揮發(fā)性有機(jī)化合物鑒定采用NIST 17 MS Library進(jìn)行，使用NIST 17數(shù)據(jù)庫(kù)通過(guò)比較質(zhì)譜信息與已發(fā)表文獻(xiàn)RI識(shí)別未知化合物。

2 結(jié)果與分析

2.1 GC-MS測(cè)定結(jié)果

2.1.1 主要揮發(fā)性成分

萜類(lèi)化合物是柑橘類(lèi)植物精油的主要香味成分。GC-MS分析發(fā)現(xiàn)，臍橙中含量最高的萜類(lèi)化合物為α-蒎烯、β-月桂烯、D-檸檬烯和芳樟醇。α-蒎烯是合成香料的重要成分[26]，β-月桂烯呈無(wú)色或淡黃色液體，具有淡淡的香脂香氣，存在于紅茶、磚茶、沱茶等發(fā)酵后茶中，發(fā)酵后含量增加[27]。D-檸檬烯作為檸檬精油的成分之一，具有預(yù)防皮膚癌、預(yù)防胃癌增生和促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡的作用[28]，芳樟醇是一種天然的單萜化合物，存在于香菜等植物中，具有抗腫瘤和抗心臟毒性作用[29]。

醇類(lèi)的含量在香味成分中起著重要作用。在檢測(cè)到的97 種揮發(fā)性化合物中，醇類(lèi)含量較高，具有綠葉、青草和水果味，多汁的細(xì)微差別，醇類(lèi)揮發(fā)性化合物是在水果生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中通過(guò)一系列酶促反應(yīng)形成的。3-己烯-1-醇是一種在許多新鮮水果和蔬菜中發(fā)現(xiàn)的綠色草化合物，被廣泛用作加工食品的添加劑風(fēng)味劑[30]，1-癸醇是一種透明無(wú)色液體，具有甜花香味，與香茅醇和鳶尾根油的混合物類(lèi)似，常用于制造精油[31]?？傮w而言，醛類(lèi)比萜類(lèi)具有更好的抗菌活性。已有研究表明，適量的己醛可以延長(zhǎng)柑橘果實(shí)的貯藏時(shí)間[32]，壬醛可以抑制柑橘中酸腐菌的生長(zhǎng)速度[33]。2-十一烯醛有一種類(lèi)似柑橘皮的蠟狀、略帶肥皂味的香氣，廣泛存在于新鮮水果和蔬菜中。3-隱品酮在稀釋時(shí)具有強(qiáng)烈的香料以及草本植物香氣。3-辛酮有蘑菇、奶酪和發(fā)霉的水果的細(xì)微差別，而1-辛烯-3-酮具有強(qiáng)烈的奶油、泥土、蘑菇與魚(yú)和植物香氣。這些化合物是臍橙果肉風(fēng)味重要的組成成分，許多揮發(fā)性化合物在臍橙皮和橙汁研究中鮮見(jiàn)報(bào)道，本研究使贛南臍橙揮發(fā)性成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)更詳實(shí)。

2.1.2 揮發(fā)性組分差異

如圖1、2和表1所示，安遠(yuǎn)組特有的揮發(fā)性組分有6 個(gè)：香茅醇（44）、對(duì)-1-烯-9-醛（57）、反-香芹醇（59）、紫蘇醇（68）、橙花醇乙酸酯（72）、β-古巴烯（78）；南康組特有的揮發(fā)性組分有7 個(gè)：安息香醛（12）、己酸乙酯（21）、反式-2-己烯酸（27）、3-羥基己酸甲酯（29）、辛酸甲酯（41）、2,6-二甲基-3,7-辛二烯-2,6-二醇（49）、別香橙烯（84）；瑞金組特有的揮發(fā)性組分有5 個(gè)：3-辛酮（17）、反式-2-壬烯-1-醇（45）、2,4-壬二烯醛（56）、γ-桉葉烯（85）、廣藿香奧醇（95）；信豐組特有的揮發(fā)性組分有6 個(gè)：1-辛烯-3-酮（15）、丁酸丁酯（20）、4-異丙烯基甲苯（35）、隱品酮（48）、香茅醇（61）、β-瑟林烯（80）；安遠(yuǎn)、南康、瑞金、信豐4 組的共同揮發(fā)性組分有36 個(gè)。

圖1 采用HS-SPME-GC-MS方法檢測(cè)臍橙果肉總離子流圖Fig.1 Total ion current chromatograms of volatile components of navel oranges identified by HS-SPME-GC-MS

圖2 采用HS-SPME-GC-MS方法得到臍橙揮發(fā)性成分Venn圖Fig.2 Venn diagram of volatile components of navel oranges identified by HS-SPME-GC-MS

2.2 LC-MS檢測(cè)結(jié)果

2.2.1 有機(jī)酸類(lèi)

有機(jī)酸在柑橘類(lèi)水果中廣泛分布，國(guó)外研究表明食用含有機(jī)酸的柑橘水果有益人體健康[34]。有機(jī)酸在植物生長(zhǎng)的所有階段都發(fā)揮著重要作用，影響著植物的中樞代謝，如線粒體呼吸代謝[35]和細(xì)胞氧化還原代謝[36]。在贛南臍橙果肉中鑒定出20 種有機(jī)酸，在負(fù)離子模式下檢測(cè)到質(zhì)譜準(zhǔn)分子離子峰為m/z117.0189 [M-H]-，以及二級(jí)質(zhì)譜中碎片離子為m/z99.0093 [M-H-H2O]-、73.0303 [M-H-CO2]-、55.0187 [M-H-HCOOHH2O]-，結(jié)合數(shù)據(jù)庫(kù)及文獻(xiàn)[37]數(shù)據(jù)比對(duì)，最終鑒定該化合物為琥珀酸（25）[37]。負(fù)離子模式下，在m/z133.0159處出現(xiàn)準(zhǔn)分子離子峰，保留時(shí)間為1.133 min，而m/z115.0053是由于失水而形成的。m/z133.0159的碎片離子去除一分子CO2得到m/z89.0245的碎片離子。m/z71.0140的碎片離子由準(zhǔn)分子離子形成去除一分子[HCOOH]-殘基碎片，隨后脫一分子水，再?gòu)姆肿拥氖Ｓ嗖糠诌w移2 個(gè)氫而產(chǎn)生，這些化合物碎裂模式的產(chǎn)生都包含水分子的中性損失。m/z133.0159的碎片離子去除C2H2O3得到m/z59.0140的碎片離子，通過(guò)比較文獻(xiàn)[38]中化合物的質(zhì)譜碎片斷裂模式，該化合物被鑒定為D-(＋)-蘋(píng)果酸（14）。同時(shí)，通過(guò)查閱代謝物數(shù)據(jù)庫(kù)、質(zhì)譜數(shù)據(jù)網(wǎng)站和相關(guān)文獻(xiàn)[38]，鑒定出檸檬酸（21）和脫落酸（91）等具有相似裂解模式的有機(jī)酸，裂解途徑如圖3 所示。負(fù)離子模式下，在保留時(shí)間為1.813 min 時(shí)，化合物21在m/z147.0314處出現(xiàn)準(zhǔn)分子離子峰，推測(cè)分子式為C5H8O5。次級(jí)碎片離子主要分布在m/z129.0202、103.0398、87.0097和77.9222，其中m/z103.0398的碎片離子是由[C5H8O5]-丟失一分子[CO2]-形成的。m/z129.0202是由母離子去除H2O分子形成的碎片離子，而m/z87.0097是由母離子失去[HCOOH]-形成的，初步鑒定為檸檬酸（21）。VC（17）的母離子為m/z175.0210 [M-H]-，失去C2H5O2生成m/z115.0048，或持續(xù)失去C3H4O3生成m/z87.0100?；衔?10在m/z為187.0968時(shí)顯示[M-H]-離子?；衔?10的質(zhì)譜在m/z125.0963 [M-H-H2OCO2]-、97.0659 [M-H-H2O-CO-CO2]-處出現(xiàn)了特征碎片離子，初步鑒定化合物110為壬二酸（110）[38]。

圖3 脫落酸（A）、檸檬酸（B）、D-()-蘋(píng)果酸（C）的 MS/MS裂解途徑Fig.3 Possible MS/MS fragmentation patterns of abscisic acid (A),citric acid (B) and D-(+)-malic acid (C)

化合物91在m/z263.128 [M-H]-時(shí)表現(xiàn)為準(zhǔn)分子離子峰主片段，對(duì)應(yīng)分子式為C15H20O4，在m/z219.137 [M-H-CO2]-時(shí)為主碎片離子，結(jié)合文獻(xiàn)[39]及數(shù)據(jù)庫(kù)鑒定化合物91為脫落酸。脫落酸是一種具有生長(zhǎng)調(diào)節(jié)作用的植物激素，可促進(jìn)葉片休眠、老化和脫落[39]?；衔?8負(fù)離子模式下m/z341.0859 [M-H]?碎片離子在m/z179.0339出現(xiàn)，對(duì)應(yīng)基團(tuán)為咖啡?；?，結(jié)合文獻(xiàn)[40]以及在m/z135.0454處出現(xiàn)CO2丟失的特征離子，鑒定為咖啡酸己糖苷（58）[40]。

在正離子模式下，檢測(cè)二級(jí)質(zhì)譜中在保留時(shí)間0.873 min存在m/z175.1191 [M＋H]＋、158.0920 [M＋H-NH3]＋、130.0972 [M＋H-NH3-CO]＋、116.0707 [M＋H-CH5N3]＋、70.0653 [M＋H-CH5N3-CH2O2]＋、60.0557 [M＋H-NH3-CO-C2H4N3]＋等裂解碎片，結(jié)合文獻(xiàn)[37]并且根據(jù)化合物的確切分子質(zhì)量和裂解方式，推斷化合物為L(zhǎng)-精氨酸（1），分子式為C6H14N4O2。同理結(jié)合文獻(xiàn)[40]，0.979 min觀察到m/z為98.0624 [M＋H-H2O]＋和70.0654 [M＋H-HCOOH]＋的特征碎片離子，最終推斷為L(zhǎng)-脯氨酸（6）[41]。

2.2.2 黃酮及糖苷類(lèi)

黃酮類(lèi)化合物存在于多種柑橘類(lèi)水果、漿果等水果中，在調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)發(fā)育中發(fā)揮重要作用，賦予植物細(xì)胞豐富的色彩[42]。最新報(bào)道表明，黃酮類(lèi)化合物也可以作為一種有效的抗癌劑應(yīng)用于保健食品行業(yè)中[43]。黃酮的主要斷裂模式包括損失一系列中性小分子，如H2O、CH3、CO2、CO和Retro-Diels-Alder裂解產(chǎn)生碎片片段離子[43]。在保留時(shí)間為15.474 min時(shí)，在m/z561.1509、451.1246、199.1059、331.0799、289.0700、129.0565、85.0286處檢測(cè)到豐度較高的產(chǎn)物離子，鑒定為圣草次苷（93）。以4′,5,6,7-四甲氧基黃酮（123）為例，該化合物在測(cè)試樣品中的保留時(shí)間為25.172 min，根據(jù)一級(jí)質(zhì)譜離子峰為m/z343.1175 [M＋H]＋，推測(cè)出分子式為C19H18O6。碎片離子分別為m/z327.0878 [M＋H-CH4]＋、313.0725 [M＋H-C2H6]＋、309.0771 [M＋ H-CH4-H2O]＋、299.0919 [M＋H-CH4-H2O]＋、285.0759 [M＋H-C2H6-CO]＋、253.0843 [M＋H-2·CH3-C9H8O]＋、181.0144 [M＋H-2·CH3-C9H8O]＋、153.0189 [M＋H-2·CH3-C9H8O-CO]＋和135.0442 [M＋H-·OCH3-C10H9O3]＋。結(jié)合質(zhì)譜裂解規(guī)律以及相關(guān)文獻(xiàn)[44]佐證和在線網(wǎng)站數(shù)據(jù)庫(kù)，最終鑒定該化合物為4′,5,6,7-四甲氧基黃酮（123），裂解規(guī)律如 圖4所示[44]。

圖4 橙皮苷和4′,5,6,7-四甲氧基黃酮的MS/MS裂解途徑Fig.4 Possible MS/MS fragmentation patterns of hesperidin and 4′,5,6,7-tetramethoxyflavone

化合物101在m/z273.0762處顯示[M＋H]＋離子，計(jì)算出C15H12O5的元素組成?；衔?01的碎片離子為m/z273.0762 [M＋H]＋、m/z231.0540 [M＋H-42]＋、189.0544 [M＋H-84]＋、179.0332 [M＋H-94]＋、153.0195 [M＋H-C8H8O]＋、147.0464 [M＋H-C6H6O3]＋、119.0468 [M＋H-C7H6O4]＋。將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[45]參考數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，化合物101被鑒定為柚皮素[45]，柚皮素主要以葡萄糖苷的形式存在，廣泛存在于枳、柚子、橘子、橙子等蕓香科植物的果皮和果肉中。化合物115在m/z625.1738處顯示分子離子[M＋H]＋，分子式為C28H32O16?；衔?15在m/z479.1158 [M＋H-146]＋、317.0642 [M＋H-308]＋、129.0512 [M＋H-496]＋處有碎片離子，鑒定為異鼠李素-3-O-蕓香糖苷（115）[46]。化合物69顯示m/z為449.1076 [M-H]-的前體離子，結(jié)合碎片m/z431.0869 [M-H-H2O]-、287.0503 [MH-glucose]-和269.0422[M-H-H2O-glucose]-的片段以及文獻(xiàn)[47]，鑒定為黃諾馬苷（69）?；衔?5m/z433.1127，分子式為C21H22O10，產(chǎn)生的m/z為273.0767 [M-H-146]-和153.0184 [M-H-146-120]-的產(chǎn)物離子為洋李苷的典型碎裂模式[48]?；衔?6初步鑒定為蘆丁，m/z301.0352的主要片段是由槲皮素3-O-蕓香糖苷中蕓香糖苷基團(tuán)的損失產(chǎn)生[49]。

2.2.3 酚酸類(lèi)

酚酸廣泛分布在水果和蔬菜中，受到越來(lái)越多的關(guān)注，由于其具有生物活性的植物化學(xué)物質(zhì)[50]，酚酸被用作人類(lèi)的膳食補(bǔ)充劑和中藥[51]。綠原酸（23）、對(duì)香豆酸（45）和香草酸（41）為代表性化合物。在負(fù)離子模式下，一級(jí)質(zhì)譜提供的準(zhǔn)分子離子峰為m/z353.0852 [M-H]-。將該化合物裂解后，在m/z191 處產(chǎn)生了一個(gè)位置特異性片段，結(jié)合文獻(xiàn)[45]參考數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，對(duì)應(yīng)的是失去咖啡酸自由基，即綠原酸（23）。同理，化合物41在質(zhì)譜上存在m/z為167.0334 [M-H]-的分子片段，在二級(jí)質(zhì)譜中，負(fù)離子模式下二級(jí)質(zhì)譜提供的碎片離子分別為m/z152.0110 [M-H-·CH3]-、122.9337 [M-H-CO2]-和108.0225 [M-H-CH3-CO2]-。結(jié)合以上信息，最終鑒定該化合物為香草酸（41）。結(jié)合文獻(xiàn)[38]參考質(zhì)譜數(shù)據(jù)，對(duì)香豆酸（45）中的片段m/z119.0471 [M-H-CO2]-是由于損失一分子甲基產(chǎn)生的。反式阿魏酸（49）在m/z117.0324處的特征產(chǎn)物離子表明分子中羧基[HCOOH]-的損失。沒(méi)食子酸（36）二級(jí)譜圖顯示m/z125.0242處有典型的子離子，對(duì)應(yīng)CO2的損失。結(jié)合文獻(xiàn)[49]鑒定，化合物66為芥子酸，其正離子準(zhǔn)分子離子峰為m/z225.075 [M＋H]＋，碎片離子為m/z119.0488 [M＋H-CH3COOH-H2O]＋。

2.2.4 非揮發(fā)性組分差異

如圖5、6和表2所示，南康組特有的非揮發(fā)性組分有4 個(gè)：催吐蘿芙木定（88）、5-phenyl-3-[3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxypentanoic acid（111）、2-acetoxy-4-pentadecylbenzoic acid（138）、1-palmitoyl-lysophosphatidylcholine（139）；瑞金組特有的非揮發(fā)性組分有4 個(gè)：甲硫腺苷（47）、Lactarorufin B（73）、rac-橙皮素（90）、1-(9Z,12Z,15Zoctadecatrienoyl)-sn-glycero-3-phosphocholine（133）；信豐組特有的非揮發(fā)性組分有6 個(gè)：榼藤子苷（43）、deoxyphomalone（51）、梔子苷b（60）、矢車(chē)菊-3-O-2G-葡萄糖蕓香糖苷（63）、桉脂素（108）、2-(beta-D-glucopyranosyloxy)-7-(alpha-L-rhamnopyranosyloxy)-5-hydroxy-4′-methoxyflavone（116），安遠(yuǎn)、南康、瑞金、信豐的共同非揮發(fā)性組分有102 個(gè)。

表2 采用UPLC-QTOF-MS的臍橙的非揮發(fā)性成分鑒定Table 2 Information about non-volatile compounds of navel oranges identified by UPLC-QTOF-MS

圖5 采用UPLC-QTOF-MS方法得到臍橙果肉總離子流圖Fig.5 Total ion current chromatograms of volatile components of

圖6 采用UPLC-QTOF-MS方法得到臍橙非揮發(fā)性成分Venn圖Fig.6 Venn diagram of non-volatile components of navel oranges identified by UPLC-QTOF-MS

3 結(jié)論

本研究通過(guò)聯(lián)合HS-SPME-GC-MS和UPLC-QTOFMS對(duì)贛南臍橙的化學(xué)成分進(jìn)行分析。采用HPLC-QTOFMS方法，通過(guò)對(duì)其代謝物進(jìn)行提取和分析，分別在正離子模式和負(fù)離子模式下采集數(shù)據(jù)，比對(duì)數(shù)據(jù)庫(kù)和文獻(xiàn)鑒定非揮發(fā)性化合物148 種。其中黃酮類(lèi)化合物54 種、有機(jī)酸20 種、糖苷類(lèi)化合物20 種、氨基酸14 種、酚酸類(lèi)化合物12 種、其他類(lèi)28 種。采用HS-SPME-GC-MS結(jié)合NIST 17數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)97 種揮發(fā)性化合物進(jìn)行鑒定，這些化合物包括46 種烯烴類(lèi)（包含40 種萜烯）、醇類(lèi)13 種、醛類(lèi)12 種、萜類(lèi)9 種、羧酸6 種、酮類(lèi)4 種、脂類(lèi)4 種、酯類(lèi)2 種、芳香烴1 種。本研究檢測(cè)到的化合物不僅為贛南臍橙的潛在應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)，而且為贛南臍橙的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)提供基礎(chǔ)，具有一定的指導(dǎo)意義。