朱璉抑制Ⅱ型針法干預(yù)盆腔炎性疾病后遺癥大鼠的效果及其對(duì)前列腺素、VEGF、MMP2表達(dá)的影響▲

黃敬文 范郁山 麥 威 張 卉 賀煜俊 黃梓欣

(廣西中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院,廣西南寧市 530001)

盆腔炎性疾病是一種婦科炎癥性疾病,發(fā)病率高,若未能得到及時(shí)、徹底的治療可導(dǎo)致不孕、輸卵管妊娠、慢性盆腔痛及炎癥反復(fù)發(fā)作,從而嚴(yán)重影響婦女的生殖健康[1-2]。盆腔炎性疾病的病原體包括外源性病原體(如沙眼衣原體、淋病奈瑟菌)及寄居于陰道的菌群,但由于其發(fā)生部位較深,病原體種類繁多且培養(yǎng)標(biāo)本不易采集,患者癥狀、體征不典型且輕重不一,因此該病的治療存在一定的困難,其診斷和治療難以規(guī)范[3-4]。盆腔炎性疾病在急性發(fā)作期如未能得到及時(shí)有效的治療,遷延日久則發(fā)展為盆腔炎性疾病后遺癥(sequelae of pelvic inflammatory disease,SPID)[5]。西醫(yī)治療SPID以口服抗生素藥物為主,必要時(shí)給予手術(shù)治療。然而,抗生素具有一定的副作用,手術(shù)則會(huì)增加患者感染風(fēng)險(xiǎn)。在中醫(yī)臨床領(lǐng)域中,針灸治療SPID已形成較為完整的治療理論與體系。朱璉針法為現(xiàn)代針灸家朱璉所創(chuàng),總體上分為興奮型與抑制型,每種分型又細(xì)分為兩種。其中朱璉抑制Ⅱ型針法手法刺激感強(qiáng)烈,延續(xù)時(shí)間較長(zhǎng),又稱為強(qiáng)刺激法。朱璉抑制Ⅱ型針法可用于治療因炎癥反應(yīng)而產(chǎn)生疼痛的疾病[6],機(jī)體功能處于亢進(jìn)時(shí),其能夠起到鎮(zhèn)痛、舒緩的作用,在治療SPID的炎癥反應(yīng)中具有很強(qiáng)的針對(duì)性。但朱璉抑制Ⅱ型針法治療SPID的具體作用機(jī)制尚待研究。

有研究顯示,前列腺素(prostaglandin,PG)水平的改變是盆腔炎性疾病的重要誘因之一。作為一種重要的炎癥因子,PG增高會(huì)引起子宮平滑肌及血管收縮缺血,引發(fā)疼痛[7-8];基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)2是MMP基因家族的成員,是一種能夠切割細(xì)胞外基質(zhì)的成分和參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的分子,在炎癥細(xì)胞因子刺激下其表達(dá)量會(huì)升高[9]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是一種促進(jìn)血管生成的生長(zhǎng)因子,VEGF表達(dá)變化與SPID的發(fā)展具有相關(guān)性[10]。因此,本研究選用成年雌性未孕SD大鼠,采用宮內(nèi)接種混合菌液法制備SPID大鼠模型,檢測(cè)朱璉抑制Ⅱ型針法干預(yù)后大鼠血清PGF2α、PGE2含量,以及子宮組織VEGF、MMP2蛋白表達(dá)水平,探討朱璉抑制Ⅱ型針法治療SPID的作用機(jī)制,為朱璉抑制Ⅱ型針法治療SPID提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 無特定病原體級(jí)健康、雌性未孕SD大鼠55只,6周齡,體質(zhì)量(200±20)g,由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供[許可證號(hào):SCXK(湘)2019-0004]。將大鼠飼養(yǎng)于廣西中醫(yī)藥大學(xué)中心溫度為20 ℃、相對(duì)濕度為40%～60%的無特定病原體級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室中,給予大鼠自由飲水?dāng)z食,并隨時(shí)更換墊料。本實(shí)驗(yàn)方案通過廣西中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查(審查證書編號(hào):DW20220310-030)。

1.2 試劑與儀器 阿奇霉素片(中山可可康制藥有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H20066382)。大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌[中國(guó)醫(yī)學(xué)細(xì)菌菌種保藏管理中心,貨號(hào):CMCC(B)44102、CMCC(B)26003],化膿性鏈球菌(美國(guó)菌種保藏中心,貨號(hào):ATCC19615)。大鼠PGF2αELISA測(cè)定試劑盒(廈門侖昌碩生物科技有限公司,貨號(hào):YD-30699),大鼠PGE2ELISA測(cè)定試劑盒(廈門侖昌碩生物科技有限公司,貨號(hào):YD-30697),兔單克隆VEGF抗體(Abcam公司,貨號(hào):ab32152),兔單克隆MMP2抗體(Abcam公司,貨號(hào):ab92536),二喹啉甲酸檢測(cè)試劑盒(Solarbio Science &Technology Co.,Ltd.,貨號(hào):PC0020),內(nèi)參β-actin(ABclonal公司,貨號(hào):AC026),山羊抗兔IgG(Abcam公司,貨號(hào):ab6721),山羊抗小鼠IgG(Abcam公司,貨號(hào):ab6789)。云龍牌針灸針(0.25 mm×25 mm,吳江市云龍醫(yī)療器械有限公司);自動(dòng)組織脫水機(jī)(Thermo Fisher Scientific 公司,型號(hào):Excelsior AS),組織切片機(jī)[徠卡顯微系統(tǒng)(上海)貿(mào)易有限公司,型號(hào):2235],組織攤片機(jī)[徠卡顯微系統(tǒng)(上海)貿(mào)易有限公司,型號(hào):HI1210],組織烤片機(jī)[徠卡顯微系統(tǒng)(上海)貿(mào)易有限公司,型號(hào):HI1210];電熱干燥箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司,型號(hào):DHG-9091A),恒溫培養(yǎng)箱(上海申賢恒溫設(shè)備廠,型號(hào):DHP-90052),通風(fēng)柜(廣東匯綠實(shí)驗(yàn)室設(shè)備科技有限公司,型號(hào):630),光學(xué)顯微鏡(OLYMPUS公司,型號(hào):BX-53),低溫離心機(jī)(Eppendorf公司,型號(hào):5418R),組織勻漿機(jī)(IKA集團(tuán),型號(hào):T18),金屬恒溫水浴鍋(上海齊欣科學(xué)儀器有限公司,型號(hào):HWS-28),多功能酶標(biāo)儀(Molecular Devices公司,型號(hào):FilterMax F3),普通離心機(jī)(上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司,型號(hào):TD4),水平搖床(海門市其林貝爾儀器制造有限公司,型號(hào):TS-3D),電泳儀(Bio-Rad公司,型號(hào):PowerPac Basic),蛋白轉(zhuǎn)印系統(tǒng)(Bio-Rad公司,型號(hào):Mini Trans-Blot Cell),凝膠成像系統(tǒng)(上海天能科技有限公司,型號(hào):Tanon 5200),恒溫培養(yǎng)振蕩器(上海智城分析儀器制造有限公司,型號(hào):ZWYR-2102C)。

1.3 造模方法 將55只SD雌性大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。采用隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為空白組、模型組、西藥組、普通針刺組(普針組)、朱璉抑制Ⅱ型針法組(針法組),每組11只。除空白組外,其余各組大鼠通過宮內(nèi)注射混合菌液聯(lián)合機(jī)械損傷法[11-12]制備SPID大鼠模型。在禁食12 h后,給予大鼠腹腔注射10%水合氯醛(0.4 mg/100 g),待大鼠處于完全深度麻醉后施行手術(shù)。將大鼠置于手術(shù)臺(tái)(仰臥位),固定四肢,下腹部除毛后使用碘附消毒。沿下腹部正中線偏下位置做一長(zhǎng)為1 cm的縱向切口,打開切口充分暴露子宮,用1 mL注射器向一側(cè)宮腔注射0.2 mL混合菌液,注射完成后使用注射針頭刮擦宮腔,以造成機(jī)械損傷,然后在另一側(cè)進(jìn)行相同操作。操作結(jié)束后將子宮復(fù)位,縫合切口并消毒周圍皮膚。術(shù)后5 d內(nèi)定期對(duì)大鼠切口進(jìn)行消毒。各組分別于造模后2周隨機(jī)抽取1只大鼠用于評(píng)估造模情況,給予大鼠腹腔麻醉后切開腹部,充分暴露子宮,如通過肉眼觀察可見大鼠子宮腫脹充血、色澤暗紅、雙側(cè)形態(tài)不對(duì)稱,輸卵管迂曲、硬化、增粗,盆腔組織廣泛粘連且有積液填充,則提示造模成功。

1.4 干預(yù)方法 造模成功后,不給予空白組與模型組任何治療手段。給予西藥組灌胃阿奇霉素:使用4.8 mL 0.9%氯化鈉注射液將500 mg阿奇霉素充分溶解,配置成100 mg/mL的阿奇霉素溶液,按每日45 mg/kg灌胃,1次/d,連續(xù)灌胃4周。給予普針組普通針刺治療:參考《大鼠穴位圖譜的研制》[13]的穴位進(jìn)行選穴,直刺中極穴(臍下約30 mm處)、雙側(cè)三陰交穴(后肢內(nèi)踝尖直上10 mm處),用提插瀉法進(jìn)行針刺,其間不行針,留針15 min后出針,1次/d,連續(xù)干預(yù)4周。給予針法組朱璉抑制Ⅱ型針法治療:選穴同普針組,采用朱璉緩慢捻進(jìn)針法進(jìn)針,在穴位處慢慢捻動(dòng)針柄,捻動(dòng)幾次稍停,以產(chǎn)生“虛捻”的感覺,然后再捻,逐漸向下加力,深刺至筋層后,緩慢捻轉(zhuǎn)、提插[6],進(jìn)針耗時(shí)2 min,留針15 min后,采用平穩(wěn)拔出法出針,1次/d,連續(xù)干預(yù)4周。

1.5 標(biāo)本采集 末次干預(yù)結(jié)束后給予大鼠禁食,次日腹腔注射10%水合氯醛(0.4 mg/100 g),成功麻醉后,取腹主動(dòng)脈血5 mL,4 ℃下以3 000 r/min離心20 min,取上清液,置于-20 ℃冷凍保存。充分暴露大鼠子宮,觀察雙側(cè)子宮形態(tài)后切取其病變較為明顯的部分組織,置于10%甲醛溶液進(jìn)行固定,用于光學(xué)顯微鏡下觀察。將剩余組織凍存于-80 ℃冰箱,用于Western blot檢測(cè)。

1.6 HE染色觀察子宮組織病理學(xué)變化 取出已固定好的組織切成合適大小,行脫水透明處理;次日將完成透明的組織進(jìn)行浸蠟、包埋、切片(切片厚度為3 μm)、烤片;將切片再次脫蠟、脫水,分別進(jìn)行蘇木素和伊紅染色,中性樹膠封片后在光學(xué)顯微鏡下觀察。

1.7 ELISA法檢測(cè)大鼠血清PGF2α和PGE2含量 按照ELISA測(cè)定試劑盒說明書檢測(cè)大鼠血清PGF2α和PGE2含量。從冰箱中取出試劑盒及樣本后,置于室溫(25 ℃～28 ℃)平衡120 min,設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50 μL,樣本孔先加入樣本稀釋液40 μL,再加入待測(cè)樣本10 μL;除空白孔外,在標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體(100 μL/孔),用封板膜封住反應(yīng)孔,放入恒溫箱溫育60 min。棄去液體,用吸水紙拍干,每孔加滿洗滌液,靜置20 s,甩去洗滌液,在吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次。在標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔、空白孔中加入底物A、B各50 μL/孔,37 ℃避光孵育15 min;在標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔、空白孔中加入終止液50 μL/孔,15 min內(nèi)在酶標(biāo)儀的450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的A值。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),A450值為縱坐標(biāo),以平滑線連接各標(biāo)準(zhǔn)品的坐標(biāo)點(diǎn)。通過樣品的吸光度值和標(biāo)準(zhǔn)曲線(直線擬合)計(jì)算出樣品的相應(yīng)含量。

1.8 Western blot法檢測(cè)大鼠子宮組織VEGF和MMP2的蛋白表達(dá)水平 取子宮組織,經(jīng)PBS沖洗后置于冰盒,加入200～400 μL高效RIPA組織裂解液,用移液器吹打裂解。使用勻漿機(jī)將組織勻漿至非黏稠狀,轉(zhuǎn)至EP管,以12 000 r/min離心5 min,取上清蛋白,用二喹啉甲酸法測(cè)定蛋白濃度。測(cè)定蛋白濃度后將濃度調(diào)齊,加入5×蛋白上樣緩沖液,100 ℃變性10 min。將變性后的蛋白上樣,先用90 V恒壓電泳20 min,待溴酚藍(lán)色樣本進(jìn)入分離膠層后,轉(zhuǎn)用120 V恒壓電泳70～100 min;使用10%分離膠液以320 mA恒定電流轉(zhuǎn)膜(PVDF膜)70 min,將膜放入封閉液中室溫下封閉1.5 h。按相應(yīng)比例先后在樣本中加入一抗、二抗(稀釋比例為1 ∶8 000)。一抗孵育:用封閉液(5%脫脂奶粉)稀釋一抗,用鑷子將膜放入裝有一抗稀釋液的離心管中進(jìn)行一抗雜交,注意膜的蛋白面向內(nèi),與抗體接觸,將離心管放在4 ℃搖床上過夜。二抗孵育:室溫下,用TBST在脫色搖床上洗膜3次,15 min/次,用5%的封閉液配置相應(yīng)種屬的二抗,將膜放入二抗中并與二抗接觸,放在37 ℃搖床孵育90 min后,在室溫環(huán)境下用TBST在洗滌搖床上洗膜3次,15 min/次。將膜蛋白面與ECL發(fā)光液充分接觸后,放入凝膠成像系統(tǒng)中顯影、拍照。使用Image J軟件分析所得蛋白條帶的灰度值并記錄。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 使用SPSS 26.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以(x±s)表示,多組間比較采用單因素方差分析,進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 5組大鼠存活情況 模型組有1只大鼠于造模后因感染而死亡,最終納入9只大鼠。其余各組納入10大鼠。

2.2 5組大鼠子宮形態(tài)學(xué)變化 (1)空白組:大鼠子宮形態(tài)、大小、色澤、活動(dòng)度正常,質(zhì)地較軟、結(jié)構(gòu)紋理清晰,與周圍組織無粘連,內(nèi)膜無充血、無水腫及包塊形成。(2)模型組:大部分大鼠子宮腫脹、充血、色澤暗紅、雙側(cè)形態(tài)不對(duì)稱,輸卵管迂曲、硬化、增粗,盆腔組織廣泛粘連且有積液填充;僅個(gè)別大鼠的子宮出現(xiàn)輕度腫脹、有少量積液,雙側(cè)輸卵管與周圍組織輕度粘連。(3)西藥組與普針組:兩組大鼠子宮組織形態(tài)相近,子宮形態(tài)皆有一定程度的恢復(fù),質(zhì)地變軟,活動(dòng)度較空白組差,顏色稍深,宮腔充血、水腫及粘連程度較模型組有明顯改善,個(gè)別組織內(nèi)可見少量積液。(4)針法組:與模型組相比,該組大鼠子宮組織色澤變淺,質(zhì)地變軟,活動(dòng)度基本恢復(fù),宮腔充血和水腫程度明顯減輕,輸卵管與周圍組織間隙清晰。

2.3 5組大鼠組織病理學(xué)變化 空白組大鼠子宮組織結(jié)構(gòu)清晰,細(xì)胞間質(zhì)無炎癥細(xì)胞;可見腺體,子宮無改變;黏膜層結(jié)構(gòu)完整,細(xì)胞間聯(lián)系緊密。模型組大鼠子宮組織結(jié)構(gòu)不清晰,可見大量的炎癥細(xì)胞,內(nèi)膜上皮細(xì)胞變形、壞死,內(nèi)膜連貫性中斷,間質(zhì)細(xì)胞水腫、出血。與模型組比較,西藥組與普針組大鼠子宮組織可見黏膜固有層腫脹,上皮細(xì)胞間質(zhì)增大,但內(nèi)膜無明顯脫落。針法組大鼠子宮組織結(jié)構(gòu)較清晰,可見極少量的炎癥細(xì)胞,可見腺體。見圖1。

圖1 5組大鼠子宮組織病理學(xué)變化(HE染色,×100)

2.4 5組大鼠血清PGF2α和PGE2含量的比較 與空白組相比,模型組及各干預(yù)組大鼠血清PGF2α和PGE2含量均升高(均P<0.05);各干預(yù)組大鼠血清PGF2α和PGE2含量均低于模型組,且針法組、西藥組大鼠血清PGF2α和PGE2含量均低于普針組(均P<0.05),但針法組與西藥組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。見表1。

表1 5組大鼠血清PGF2α和PGE2含量的比較(x±s,pg/mL)

2.5 5組大鼠子宮組織VEGF和MMP2的蛋白表達(dá)水平比較 與空白組相比,模型組及各干預(yù)組大鼠子宮組織VEGF、MMP2的蛋白表達(dá)水平均升高(均P<0.05);各干預(yù)組大鼠子宮組織VEGF、MMP2的蛋白表達(dá)水平均低于模型組(均P<0.05);針法組大鼠子宮組織VEGF、MMP2的蛋白表達(dá)水平均低于普針組,但與西藥組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。見表2及圖2。

表2 5組大鼠子宮組織VEGF、MMP2的蛋白表達(dá)水平比較(x±s)

3 討 論

中醫(yī)學(xué)理論認(rèn)為“久病入絡(luò)”,其病機(jī)為血瘀。SPID的疼痛機(jī)理與“血瘀”密切相關(guān),沖任阻滯,胞宮、胞脈失暢,血行不暢,不通則痛,與西醫(yī)學(xué)盆腔炎性疾病的發(fā)病機(jī)制——血液流變異常、炎癥反應(yīng)有異曲同工之處?！夺樉募滓医?jīng)》言:“沖脈任脈者,皆起于胞宮,上循脊里,為經(jīng)絡(luò)之海?！币虼?針刺治療SPID取穴應(yīng)從沖、任二脈著手,通調(diào)沖任氣血。中極穴屬任脈,是任脈與足三陰經(jīng)交會(huì)之處,為膀胱的募穴,“極”意味任脈氣血在此處達(dá)到最高點(diǎn),為婦科諸病要穴之一,可調(diào)和沖任、補(bǔ)益氣血;三陰交穴屬足太陰脾經(jīng),與中極穴同為足三陰經(jīng)交會(huì)穴,具有活血通絡(luò)、調(diào)經(jīng)止痛的作用,兩穴皆主治不孕、帶下、月經(jīng)不調(diào)等婦科疾病。有研究表明,針刺中極穴、三陰交穴,可以降低血清炎癥因子水平、加速病理產(chǎn)物代謝、緩解疼痛[14]。因此本實(shí)驗(yàn)選取中極穴、雙側(cè)三陰交穴進(jìn)行干預(yù)。朱璉抑制Ⅱ型針法是基于巴普洛夫神經(jīng)學(xué)說創(chuàng)立的,進(jìn)針時(shí)緩慢捻轉(zhuǎn)并保持平穩(wěn),將針由天、人、地三部由淺入深緩慢刺入穴位,通過刺激皮膚表層與深層的神經(jīng)系統(tǒng),釋放出抑制、修復(fù)的神經(jīng)信號(hào),促使機(jī)體恢復(fù)正常狀態(tài)[6]。朱璉認(rèn)為針刺之所以能治病,主要是由于其可激發(fā)和調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)部神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)機(jī)能和管制機(jī)能,神經(jīng)系統(tǒng)的機(jī)能活動(dòng)是興奮和抑制,針灸的刺激主要是對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)這兩種機(jī)能活動(dòng)的關(guān)系進(jìn)行調(diào)整,使之從不正常狀態(tài)恢復(fù)到正常狀態(tài)[6]。本研究采用朱璉抑制Ⅱ型針法治療SPID大鼠,結(jié)果顯示,治療后大鼠子宮形態(tài)接近正常子宮組織,組織結(jié)構(gòu)較清晰,組織的炎癥明顯減輕,表明朱璉抑制Ⅱ型針法對(duì)SPID具有較好的干預(yù)效果。朱璉針法治療SPID具有以下優(yōu)勢(shì):一是針灸通過刺激神經(jīng),疏通經(jīng)絡(luò),可調(diào)節(jié)人體陰陽、氣血、臟腑功能,且其能夠直達(dá)病灶,起效更快;二是針灸通過激發(fā)機(jī)體自身的調(diào)節(jié)機(jī)能,可促進(jìn)機(jī)體釋放內(nèi)源性物質(zhì),發(fā)揮防治疾病的效應(yīng),且不會(huì)產(chǎn)生毒性損害,對(duì)人體更加安全;三是朱璉針法以中醫(yī)學(xué)整體觀念出發(fā),將人作為一個(gè)整體,綜合調(diào)節(jié)全身各系統(tǒng)的功能。此外,雖然目前臨床研究提示針灸可以增強(qiáng)免疫、緩解疼痛、消除SPID的炎癥[15],但多數(shù)治療方案取穴較多,有潛在風(fēng)險(xiǎn)。而本研究只取中極穴、雙側(cè)三陰交穴,可減輕患者心理負(fù)擔(dān),提高患者的接受度,利于臨床的應(yīng)用推廣。

SPID的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜多樣,其中血清炎癥因子水平升高是發(fā)病的關(guān)鍵因素。PGF2α參與炎癥、癌癥、多種心血管疾病的病理過程,其水平升高可以導(dǎo)致子宮平滑肌收縮、局部組織缺血,從而引發(fā)疼痛[16]。PGE2是一種血管擴(kuò)張劑,可刺激細(xì)胞增殖、分化及新血管生成,同時(shí)也是一種疼痛介質(zhì),PGE2的水平升高可以引起神經(jīng)反應(yīng)異常,增加痛感[17]。本研究結(jié)果顯示,模型組大鼠血清PGF2α和PGE2含量高于空白組,而針法組大鼠血清PGF2α和PGE2含量均低于模型組(均P<0.05)。這提示朱璉抑制Ⅱ型針法治療SPID的機(jī)制可能與降低PGF2α、PGE2水平,從而緩解疼痛反應(yīng)、改善組織血液循環(huán)相關(guān)。

VEGF是最強(qiáng)大的新生血管因子,其作用是促進(jìn)血管新生,但 VEGF能使血液中的蛋白等成分排出,因此子宮組織中VEGF過表達(dá)會(huì)加劇子宮組織的充血和水腫[18]。本研究結(jié)果顯示,模型組大鼠子宮組織VEGF蛋白表達(dá)水平高于空白組,而針法組大鼠子宮組織VEGF蛋白表達(dá)水平低于模型組(均P<0.05)。提示朱璉抑制Ⅱ型針法治療SPID的機(jī)制可能為降低VEGF表達(dá),從而抑制內(nèi)皮細(xì)胞增生,降低其通透率,進(jìn)而減少子宮充血與水腫。MMP2是一種重要的酶,其參與細(xì)胞外基質(zhì)的分解,并在血管生成、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞再生中扮演重要角色,MMP2水平升高對(duì)婦科腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移具有較強(qiáng)的判斷意義[19]。MMP2的合成增加,可使細(xì)胞外基質(zhì)發(fā)生分解,基底膜的保護(hù)功能受損、完整性完全喪失,最終導(dǎo)致炎癥細(xì)胞滲出,不利于炎癥的控制[20]。本研究結(jié)果顯示,模型組大鼠子宮組織MMP2蛋白表達(dá)水平高于空白組,而針法組大鼠子宮組織MMP2蛋白表達(dá)水平低于模型組(均P<0.05)。說明朱璉抑制Ⅱ型針法可降低MMP2蛋白表達(dá)水平,從而抑制炎癥物質(zhì)的分泌,有效促進(jìn)子宮組織修復(fù)。

此外,本研究中,針法組大鼠的子宮形態(tài)、組織炎癥改善優(yōu)于西藥組及普針組,在降低血清PGF2α和PGE2含量、子宮組織VEGF、MMP2蛋白表達(dá)水平方面與西藥組相近且優(yōu)于普針組。普通針刺法通過發(fā)揮穴位的主治功能,以達(dá)到治療效果,朱璉針法不僅基于穴位的主治功能,還同時(shí)發(fā)揮調(diào)控神經(jīng)系統(tǒng)的效應(yīng)機(jī)制,具有較大優(yōu)勢(shì)。朱璉抑制Ⅱ型針法與西藥的療效相似,但長(zhǎng)期服用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素容易引起胃腸道不適、肝損害等不良反應(yīng),因而只適用于短期治療,具有一定的局限性。朱璉抑制Ⅱ型針法發(fā)揮效應(yīng)機(jī)制的同時(shí)不產(chǎn)生任何毒副作用,可長(zhǎng)期應(yīng)用于SPID的治療。

綜上所述,朱璉抑制Ⅱ型針法可能通過降低血清PGF2α、PGE2含量,抑制VEGF、MMP2蛋白表達(dá)來發(fā)揮治療SPID的作用,其效果優(yōu)于普通針刺法,與西藥干預(yù)效果相近。本研究結(jié)果或可為SPID的臨床治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ),對(duì)發(fā)揚(yáng)朱璉針灸學(xué)術(shù)思想和探索SPID的病因及治療方法具有一定作用。