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    魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系研究現(xiàn)狀

    2023-07-12 04:34:52景宏麗孔玉方袁向芬張旻王娜陳冬杰吳紹強(qiáng)
    水產(chǎn)學(xué)雜志 2023年3期
    關(guān)鍵詞:細(xì)胞培養(yǎng)原代細(xì)胞系

    景宏麗,孔玉方,袁向芬,張旻,王娜,陳冬杰,吳紹強(qiáng)

    (中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院,北京 100176)

    在已知的脊椎動(dòng)物種群中,魚(yú)類(lèi)約占48%,魚(yú)類(lèi)細(xì)胞作為脊椎動(dòng)物組織和細(xì)胞模型應(yīng)用于多個(gè)生物學(xué)科,是一個(gè)巨大資源[1]。魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系作為實(shí)驗(yàn)材料,比活魚(yú)實(shí)驗(yàn)具有便捷、經(jīng)濟(jì)、易操作和重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。對(duì)比人和哺乳動(dòng)物離體培養(yǎng)的細(xì)胞株,魚(yú)類(lèi)細(xì)胞株平均傳代100 代仍可繼續(xù)分裂,且來(lái)源于成魚(yú)的細(xì)胞系仍具有分裂能力。本文歸納整理了近年新建魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系的數(shù)據(jù),綜述了魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系組織來(lái)源、培養(yǎng)方法及應(yīng)用現(xiàn)狀,以期為魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系研究提供最新的參考數(shù)據(jù)。

    1 國(guó)內(nèi)外魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系構(gòu)建情況

    自1962 年Wolf 和Quimby 建立了第一個(gè)魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系—虹鱒(Oncorhynchus mykiss)性腺細(xì)胞系(RTG-2)[2]以來(lái),魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系應(yīng)用已有60 年的歷史。截至目前,至少建立和應(yīng)用了826 株細(xì)胞系[3]。這些細(xì)胞系分別來(lái)源于約74 科186 種魚(yú)類(lèi)的不同組織,其中鯉科的魚(yú)類(lèi)種類(lèi)最多,約27 種,但是來(lái)源于虹鱒的細(xì)胞系數(shù)量最多,約為73 株。淡水魚(yú)類(lèi)和溯河洄游性魚(yú)類(lèi)約525 株,分別來(lái)源于42 科的105 種魚(yú)類(lèi)的不同組織;而海水魚(yú)類(lèi)及咸水魚(yú)類(lèi)的細(xì)胞系約為301 株,分別來(lái)源于約32 科的81 種海水魚(yú)類(lèi)的不同組織。該數(shù)據(jù)與張博等[4]報(bào)道魚(yú)類(lèi)隸屬科的數(shù)量有所減少,但是,魚(yú)類(lèi)種類(lèi)和數(shù)目都增加。特別是來(lái)源于海水魚(yú)類(lèi)種類(lèi)和數(shù)目明顯增加。目前魚(yú)類(lèi)細(xì)胞培養(yǎng)已實(shí)現(xiàn)從淡水魚(yú)類(lèi)擴(kuò)展到海水魚(yú)類(lèi),相信未來(lái)會(huì)擴(kuò)展到其他水生動(dòng)物,會(huì)建立更多種類(lèi)細(xì)胞系,形成豐富細(xì)胞系資源庫(kù)。

    我國(guó)學(xué)者新建的部分細(xì)胞系并未統(tǒng)計(jì)在內(nèi)。據(jù)統(tǒng)計(jì),截至2010 年上半年,我國(guó)已經(jīng)建立的魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系約70 株[4]。筆者進(jìn)一步統(tǒng)計(jì),在2011—2021 年間中國(guó)學(xué)者公開(kāi)發(fā)表的新建且能穩(wěn)定傳代的魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系約94 株,分別來(lái)源于53 種魚(yú)類(lèi)不同組織(表1)。在2011—2021 年新建立細(xì)胞系報(bào)道中,至少80%由亞洲學(xué)者報(bào)道,這與Lakra 等[1]結(jié)果類(lèi)似。這些亞洲學(xué)者中中國(guó)學(xué)者居多,其次是印度。中國(guó)學(xué)者已然成為全世界新建細(xì)胞系研究領(lǐng)域主要貢獻(xiàn)者。

    2 細(xì)胞系的組織來(lái)源

    細(xì)胞系建立是一個(gè)漫長(zhǎng)復(fù)雜的過(guò)程,會(huì)因?yàn)槿〗M織時(shí)出現(xiàn)污染而造成試驗(yàn)失敗,因此建立細(xì)胞系通常選擇比較容易獲得的正常魚(yú)類(lèi)組織。目前已經(jīng)報(bào)道的組織或器官有肝臟、腎臟、腦、鰭條、皮膚和性腺等。在2011—2021 年間,本文統(tǒng)計(jì)的94 株的國(guó)內(nèi)魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系中,來(lái)自鰭條組織細(xì)胞系有26 株,占新建細(xì)胞系27.66%;來(lái)自腦組織細(xì)胞系14 株,占新建細(xì)胞系14.89%;來(lái)自腎組織細(xì)胞系14 株,占新建細(xì)胞系14.89%;來(lái)自性腺組織細(xì)胞系10 株,占新建細(xì)胞系9.4%。由此可見(jiàn),鰭條是建立細(xì)胞系最常選擇的組織之一,這是由于取鰭條組織不用殺死成魚(yú),且鰭條組織的再生能力很強(qiáng),離體培養(yǎng)細(xì)胞增殖活性強(qiáng)[5]。

    為了能夠更好發(fā)揮魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系作用,魚(yú)類(lèi)組織來(lái)源除了選取常見(jiàn)組織,還會(huì)根據(jù)需求選取特殊組織構(gòu)建細(xì)胞系。如關(guān)檸楠等[67]建立團(tuán)頭魴骨組織細(xì)胞系;魏鈺娟等[68]建立異育銀鯽脊髓組織細(xì)胞系。

    國(guó)內(nèi)外魚(yú)類(lèi)細(xì)胞建系建立雖然已經(jīng)取得了很大進(jìn)步,但并不是所有的魚(yú)類(lèi)組織都能夠構(gòu)建穩(wěn)定可傳代的細(xì)胞系,如付思思等[6]在錦鯉組織細(xì)胞體外培養(yǎng)的初步研究中,鰭條細(xì)胞系已傳至第39 代,但心臟和肌肉細(xì)胞系分別停留在第2 代和第4代。建議應(yīng)根據(jù)實(shí)際需要和組織特性合理選擇用于細(xì)胞培養(yǎng)的組織來(lái)源,否則不能獲得預(yù)期的細(xì)胞系。

    3 魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系原代培養(yǎng)方法

    魚(yú)類(lèi)細(xì)胞培養(yǎng)分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)兩個(gè)階段。原代培養(yǎng)是細(xì)胞培養(yǎng)的起始而最關(guān)鍵的階段。細(xì)胞原代培養(yǎng)方法有多種,如組織塊法、機(jī)械分離法、絡(luò)合劑分散法、酶消化法、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法和微載體細(xì)胞培養(yǎng)法等[5]。近年數(shù)據(jù)顯示,酶消化法和組織塊法使用頻率最多。目前采用酶消化法建立的魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系已有較多報(bào)道,如Liu 等[25]建立了石斑魚(yú)的腦細(xì)胞系;Xu 等[26]建立了鯽的腦細(xì)胞系;Jing等[37,59]建立了金魚(yú)吻端、腎臟和心臟細(xì)胞系;張瑩瑩等[38]建立了金錢(qián)魚(yú)的腎細(xì)胞系;周佳楠等[66]建立了金錢(qián)魚(yú)鰓細(xì)胞系。采用組織塊法成功建立的細(xì)胞系有錦鯉的鰭條細(xì)胞系[6]、斑石鯛的肌肉、腦和肝細(xì)胞系[27,28]、大菱鲆的腦和心臟細(xì)胞系[29,60]等。

    雖然以上兩種細(xì)胞原代培養(yǎng)方法均得到了廣泛應(yīng)用,但研究數(shù)據(jù)顯示,相同組織細(xì)胞系使用原代培養(yǎng)方法并不是單一固定在酶消化法或組織塊法上,即不具有專(zhuān)一性。如建立皮膚細(xì)胞系研究中,來(lái)源于中華鱘、牙鲆、石斑魚(yú)的皮膚細(xì)胞系使用了組織塊法[5,56,57],而中華鳑鲏的皮膚細(xì)胞系使用了酶消化法[58];在腦細(xì)胞系研究中,來(lái)源斑石鯛、鱖和大菱鲆的腦細(xì)胞系使用組織塊法[28-30],來(lái)源金魚(yú)、鯽、卵形鯧鲹和錦鯉的腦細(xì)胞系使用酶消化法[26,31,32];在性腺細(xì)胞系研究中也有類(lèi)似報(bào)道[48-50]。除了以上兩種原代培養(yǎng)方法,在建立魚(yú)類(lèi)的胚胎細(xì)胞系研究中使用了機(jī)械分離法[65]。盡管現(xiàn)有的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)較為成熟,且獲得了重要成果,但還有相當(dāng)多的魚(yú)類(lèi)組織器官的細(xì)胞培養(yǎng)至今尚未成功。這就需要不斷開(kāi)發(fā)新的原代細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)來(lái)解決這一難題。

    4 培養(yǎng)基和添加劑的選擇

    要建立魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系,從組織到細(xì)胞延伸是決定細(xì)胞系能否建成的關(guān)鍵步驟之一,整個(gè)過(guò)程中主要營(yíng)養(yǎng)來(lái)源就是培養(yǎng)基。因此選擇合適培養(yǎng)基至關(guān)重要。培養(yǎng)基組成包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清、抗生素和促細(xì)胞生長(zhǎng)因子等。細(xì)胞系不同時(shí)期需要成分有所不同,但是基礎(chǔ)培養(yǎng)基和血清是必備成分。

    目前常見(jiàn)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括Dulbeccos Modified Eagle Medium(DMEM)、Medium 199(M199)、Leibovitz-15(L-15)、Dulbecco's Modified Eagle Medium:Ham's F-12(DMEM:F12)和Minimum Essential Medium(MEM)。每種培養(yǎng)基適用細(xì)胞系不同,如DMEM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分高于MEM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基,其根據(jù)糖的含量又分為高糖DMEM 和低糖DMEM,適合培養(yǎng)增殖活躍的細(xì)胞[5];M199 所含營(yíng)養(yǎng)成分達(dá)60 多種,在淡水魚(yú)細(xì)胞培養(yǎng)中比較常見(jiàn)[37,59];L-15 培養(yǎng)基采用半乳糖作為糖源,且豐富了氨基酸組成成分,在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中不用添加CO2,海水魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系的培養(yǎng)使用較多[25]。DMEM/F12是Ham’s F12 與DMEM 以1∶1 的比例混合培養(yǎng)基,適用于培養(yǎng)增殖活力較弱的細(xì)胞[28];MEM 培養(yǎng)基含有多種必需氨基酸和維生素,適用于培養(yǎng)要求不太高魚(yú)類(lèi)的細(xì)胞[45,51]。這些商品化培養(yǎng)基產(chǎn)品多數(shù)是由國(guó)外廠家授權(quán)后國(guó)內(nèi)生產(chǎn)商生產(chǎn)的,但是未見(jiàn)有國(guó)內(nèi)學(xué)者自主研發(fā)商品化培養(yǎng)基報(bào)道,希望未來(lái)能對(duì)此做些研究,生產(chǎn)我國(guó)自有品牌的培養(yǎng)基,提高我國(guó)在細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品市場(chǎng)上的競(jìng)爭(zhēng)力。

    在建立細(xì)胞系之初,選擇基礎(chǔ)培養(yǎng)基一般是根據(jù)來(lái)源組織確定培養(yǎng)基。但近年來(lái)研究顯示,來(lái)源于同一種族同一組織的細(xì)胞系使用的培養(yǎng)基有所不同。王藝舟等[5]建立青魚(yú)鰭條組織細(xì)胞系使用的是DMEM 培養(yǎng)基,張雪萍等[7]則使用的是L-15。來(lái)自不同種族同一組織的細(xì)胞系則可以使用相同的培養(yǎng)基。如來(lái)源于金魚(yú)和鯽魚(yú)的腦組織建立細(xì)胞系都可以使用M199 培養(yǎng)基[26]。當(dāng)然,也有報(bào)道顯示,來(lái)源不同種類(lèi)同一組織細(xì)胞系使用不同的培養(yǎng)基[8,17,39]。同一個(gè)細(xì)胞系也可以在多種培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。李苗苗等[40]建立鰻鱺腎臟細(xì)胞系時(shí),發(fā)現(xiàn)DMEM/F12 和L15 培養(yǎng)液均適合其正常生長(zhǎng)和增殖,而在MEM 培養(yǎng)液中無(wú)法正常生長(zhǎng)。以上說(shuō)明,在建立原代細(xì)胞系時(shí),培養(yǎng)基的選擇不具有一定的規(guī)律性。因此,在建立細(xì)胞系初期,可以多選擇幾種培養(yǎng)基進(jìn)行原代培養(yǎng)。在細(xì)胞系建立后,培養(yǎng)基必須優(yōu)化,通過(guò)優(yōu)化培養(yǎng)基選擇出適合培養(yǎng)該細(xì)胞系的培養(yǎng)基。

    血清是細(xì)胞培養(yǎng)最重要的一種營(yíng)養(yǎng)添加物。魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系最常用血清是胎牛血清(Fetal bovine serum,F(xiàn)BS)。縱觀近年來(lái)細(xì)胞培養(yǎng)中胎牛血清添加量來(lái)看,僅傅永明等[18]在建立二倍體紅鯽、三倍體湘云鯽和異源四倍體鯽鯉尾鰭細(xì)胞系時(shí),使用的血清濃度為30%,通常使用的濃度范圍在10%~20%。這主要是因?yàn)檠鍧舛冗^(guò)高,對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性,不利于細(xì)胞系生長(zhǎng)。隨著細(xì)胞代數(shù)增加,細(xì)胞系狀態(tài)變?yōu)榉€(wěn)定時(shí),血清的濃度會(huì)降至10%左右[45]。為了細(xì)胞更好的貼壁生長(zhǎng),在魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系培養(yǎng)時(shí)除了加FBS 外,還添加一定濃度的魚(yú)血清和胚胎提取液[5]。

    除了血清,另一種重要的添加物是生長(zhǎng)因子。目前常用生長(zhǎng)因子包括表皮生長(zhǎng)因子(epidermal growth factor,EGF)、堿性成纖維生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、血小板和胰島素生長(zhǎng)因子(insulin-like growth factor-I,IGF-I)等。Sun 等[48]通過(guò)添加bFGF、EGF 和IGF-I 促進(jìn)來(lái)源半滑舌鰨的性腺細(xì)胞生長(zhǎng)。鄭媛等[45]在來(lái)源半滑舌鰨的細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中添加了bFGF。單莉娟[41]在松江鱸細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中添加bFGF 和EGF。

    在魚(yú)類(lèi)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中還會(huì)經(jīng)常加入其它輔助成分,如Sun 等[48]加入了β-琉基乙醇,可以直接刺激細(xì)胞分裂增殖并保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷;齊文闖等[49]加入的白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)有利于維持細(xì)胞未分化狀態(tài)。

    以上培養(yǎng)基和添加劑在魚(yú)類(lèi)組織啟動(dòng)原代培養(yǎng)時(shí)承啟著重要的作用,但是在傳代培養(yǎng)中也易出現(xiàn)細(xì)胞增長(zhǎng)過(guò)快產(chǎn)生細(xì)胞死亡。建議在細(xì)胞系進(jìn)行傳代培養(yǎng)中要及時(shí)調(diào)整培養(yǎng)基和添加劑劑量。當(dāng)然,考慮培養(yǎng)基和添加劑成分越簡(jiǎn)單,越有利于后期細(xì)胞系的推廣應(yīng)用,魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系在后期傳代過(guò)程動(dòng)物源、無(wú)蛋白和化學(xué)成分限定培養(yǎng)基)培養(yǎng)細(xì)胞系。這是漫長(zhǎng)而復(fù)雜過(guò)程,一旦成功,將開(kāi)啟魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系發(fā)展史上新紀(jì)元。

    5 細(xì)胞系的應(yīng)用

    隨著魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系發(fā)展,其被廣泛應(yīng)用于病毒學(xué)、免疫學(xué)、內(nèi)分泌學(xué)、腫瘤學(xué)、細(xì)胞工程等研究領(lǐng)域。近年報(bào)道顯示,新建的魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系主要應(yīng)用在魚(yú)類(lèi)病毒學(xué)研究。這也是魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系建立的初衷。

    自Wolf 首次利用魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系成功地從鱒性腺細(xì)胞系中分離出第一株魚(yú)類(lèi)病毒傳染性胰臟壞死病毒后[2],緊接著越來(lái)越多的魚(yú)類(lèi)病毒從魚(yú)類(lèi)細(xì)胞中成功地分離和鑒定,這為魚(yú)類(lèi)疾病的研究奠定了基礎(chǔ)。鰭條組織細(xì)胞系可用于新加坡石斑魚(yú)虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)的研究[19]。腦組織細(xì)胞系可用于鯉皰疹病毒二型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)的研究[26];脾臟組織細(xì)胞系可用于石斑魚(yú)虹彩病毒(grouper iridovirus,GIV)和鱖傳染性脾腎壞死病毒(infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)的增殖研究[62]。目前使用細(xì)胞系鑒定的病毒有至少有30 種,包括呼腸孤病毒科、雙RNA 病毒科、正黏病毒科、副黏病毒科、杯狀病毒科、皰疫病毒科、小RNA 病毒科和虹彩病毒科等[20]。

    似乎魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系僅能用于魚(yú)類(lèi)病毒的研究,其實(shí)魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系還可以用于來(lái)自?xún)蓷珓?dòng)物蛙病毒屬病毒的研究[69]。當(dāng)然,魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系是否能用于感染其他水生動(dòng)物病毒的研究還有待進(jìn)一步研究。

    細(xì)胞系除了可以分離病毒外,還可以通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)研究魚(yú)類(lèi)病毒致病機(jī)制,可以從源頭上了解病毒的感染過(guò)程,解決水生動(dòng)物疫病預(yù)防中“卡脖子”問(wèn)題,促進(jìn)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)可持續(xù)發(fā)展。

    6 存在問(wèn)題和建議

    目前,雖然魚(yú)類(lèi)細(xì)胞培養(yǎng)已經(jīng)取得了許多成果,但是仍然存在許多尚未解決的問(wèn)題,值得深入研究。

    (1)傳代穩(wěn)定性問(wèn)題。正常細(xì)胞的分裂次數(shù)有限,這是遺傳因素所決定,不易改變。因此,從正常組織獲得的細(xì)胞系經(jīng)過(guò)一定次數(shù)的分裂后,就會(huì)細(xì)胞衰老,要防止過(guò)度傳代。此外也要注意細(xì)胞系傳代過(guò)程中細(xì)胞突變現(xiàn)象,即細(xì)胞在培養(yǎng)初期鑒定過(guò)的形態(tài)、功能等,隨著代數(shù)增加表現(xiàn)出現(xiàn)不再一致的現(xiàn)象。

    (2)缺乏針對(duì)新發(fā)病毒病病原敏感細(xì)胞系的問(wèn)題。魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系在研究病毒中有許多優(yōu)點(diǎn),但是,單個(gè)魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系并不適用于所有病毒增殖。如金魚(yú)腎臟細(xì)胞系對(duì)CyHV-2 不敏感,不能用于CyHV-2 增殖[37]。鱸的鰭條細(xì)胞系不能用來(lái)增殖病毒性神經(jīng)壞死病毒(viral nervous necrosis virus,VNNV)[70]。魚(yú)類(lèi)病毒的易感性具有物種特異性,而來(lái)自同種魚(yú)的不同組織的細(xì)胞系對(duì)病毒敏感性也具有特異性。因此,為了適應(yīng)日益增長(zhǎng)的病毒種類(lèi),需要建立豐富的魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系資源庫(kù)。

    (3)國(guó)內(nèi)缺少魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系數(shù)據(jù)庫(kù):國(guó)內(nèi)細(xì)胞系報(bào)道很多,但多數(shù)研究沒(méi)有跟進(jìn),即這些研究的可靠性尚未有足夠的證實(shí)。建立一種細(xì)胞數(shù)據(jù)庫(kù),通過(guò)細(xì)胞系數(shù)據(jù)庫(kù)及時(shí)更新細(xì)胞系相關(guān)信息,有助于及時(shí)了解魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系的溯源情況和研究進(jìn)展。

    (4)缺少魚(yú)類(lèi)細(xì)胞系的國(guó)內(nèi)流通機(jī)構(gòu)。如在鯉皰疹病毒II 型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)敏感細(xì)胞系研究中,魏鈺娟等[68]在異育銀鯽脊髓組織細(xì)胞系的建立中,雖然已有學(xué)者建立了異育銀鯽腦組織細(xì)胞系[33]和鰭條細(xì)胞系[9],且研究CyHV-2 敏感性,但由于不對(duì)外供應(yīng),其限制了對(duì)CyHV-2 的研究。錦鯉組織細(xì)胞系[10,21]的研究也存在同樣的問(wèn)題。此外,ATCC 相關(guān)機(jī)構(gòu)雖然可以購(gòu)買(mǎi)一定的細(xì)胞系,但是某些客觀原因,細(xì)胞系不能及時(shí)到達(dá)實(shí)驗(yàn)室;且國(guó)內(nèi)學(xué)者構(gòu)建部分細(xì)胞系不在ATCC 等機(jī)構(gòu)保藏。因此,應(yīng)建立細(xì)胞系的國(guó)內(nèi)流通機(jī)構(gòu),保障對(duì)魚(yú)類(lèi)相關(guān)疾病的研究,從也避免相關(guān)研究機(jī)構(gòu)花費(fèi)大量人力、物力和資金建系。

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    艾迪注射液對(duì)大鼠原代肝細(xì)胞中CYP1A2、CYP3A2酶活性的影響
    中成藥(2018年9期)2018-10-09 07:18:32
    酶解大豆蛋白的制備工藝研究及其在細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用研究
    STAT3對(duì)人肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞系增殖與凋亡的影響
    3種陰離子交換色譜固定相捕獲細(xì)胞培養(yǎng)上清液中紅細(xì)胞生成素的效果比較
    色譜(2015年6期)2015-12-26 01:57:32
    抑制miR-31表達(dá)對(duì)胰腺癌Panc-1細(xì)胞系遷移和侵襲的影響及可能機(jī)制
    E3泛素連接酶對(duì)卵巢癌細(xì)胞系SKOV3/DDP順鉑耐藥性的影響
    采用PCR和細(xì)胞培養(yǎng)方法比較流感樣病例不同標(biāo)本的流感病毒檢出觀察
    橋粒芯糖蛋白1、3 在HaCaT 細(xì)胞、A431 細(xì)胞及原代角質(zhì)形成細(xì)胞中的表達(dá)
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