膀胱尿路上皮癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2表達(dá)水平及其預(yù)測術(shù)后復(fù)發(fā)的價值

張榮順，王慶偉，朱文

（1.河南省舞鋼市人民醫(yī)院 外一科，河南 平頂山 462500；2.鄭大一附院 泌尿外科，河南 鄭州 450052；3.鄭大一附院 泌三科，河南 鄭州 450052）

膀胱尿路上皮癌（bladder urothelial carcinoma,BUC）為臨床常見的一種惡性腫瘤，存在高復(fù)發(fā)率與多發(fā)性特點(diǎn)［1］。膀胱癌于實體惡性腫瘤中發(fā)病率處于第4 位，多見于男性，男女比例約為4∶1［2］。目前膀胱癌確切發(fā)病和復(fù)發(fā)分子機(jī)制尚未闡述明確，目前認(rèn)為，其和患者整個膀胱黏膜的上皮基因組穩(wěn)定性不佳有關(guān)［3］。生存素（survivin）為近幾年研究發(fā)現(xiàn)的一種調(diào)控腫瘤細(xì)胞信息通路，這一信號通路參與多個惡性腫瘤的發(fā)生與進(jìn)展病理過程［4］。人類錯配修復(fù)基因2（human mismatch repair gene2,hMSH2）于生物進(jìn)化中相對保守，可降低自發(fā)突變、修復(fù)DNA 堿基的錯配功能以及提高DNA 的復(fù)制穩(wěn)定性，故hMSH2 基因多態(tài)性可影響腫瘤發(fā)生易感性，同時對于腫瘤的演化與進(jìn)展存在預(yù)測價值［5-6］。本研究探討survivin、hMSH2、細(xì)胞周期蛋白D1（Cyclin D1）對于BUC患者術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測價值，以期為臨床早期方式予以數(shù)據(jù)支持，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取河南省舞鋼市人民醫(yī)院2020 年2 月至2022 年1 月收治的80 例接受手術(shù)治療的BUC 患者為研究對象，均簽署知情同意書。其中男43 例，女37 例；年齡56～74 歲，平均（65.28±4.35）歲。①納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)過病理學(xué)診斷為BUC；手術(shù)前無放化療史；有完整臨床病例資料；研究方案經(jīng)過學(xué)術(shù)委員會、倫理委員會審核批準(zhǔn)。②排除標(biāo)準(zhǔn)：其他病理種類膀胱癌；伴有其他惡性腫瘤；無法完成術(shù)后隨訪；中途自愿退出；合并認(rèn)知障礙或者精神障礙。

80 例接受手術(shù)治療的BUC 患者，均于術(shù)中留取癌組織（BUC 組）以及距離癌緣2.5 cm 的癌旁組織（對照組）。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)染色法 入組腫瘤組織石蠟標(biāo)本制作為4 μm 連續(xù)切片，將切片脫蠟、水化，于3%濃度過氧化氫-微波-甲醇內(nèi)于室溫下持續(xù)浸泡10 min，滅活過氧化氫酶活性；利用微波抗原持續(xù)修復(fù)20 min，pH 值為7.6，修復(fù)液為EDTA抗原修復(fù)液；經(jīng)室溫冷卻之后滴加一抗，濕盒4℃冰箱內(nèi)孵育一抗過夜；第2 d 經(jīng)TBS 洗3 次標(biāo)本，滴加生物素標(biāo)記二抗，于室溫下孵育10 min；滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈霉親和素于室溫下孵育10 min；DAB 顯色2 min，后蘇木精予以復(fù)染2 min，予以脫水、透明與封片，于顯微鏡下進(jìn)行觀察，為保障染色質(zhì)量，每張切片用已知陽性組織作陽性對照（survivin、Cyclin D1、hMSH2），用PBS 代替一抗作為陰性對照，用磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作為陰性對照。

1.2.2 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 由2 名病理科高年資醫(yī)生經(jīng)盲法閱片，當(dāng)結(jié)果不一致時經(jīng)過協(xié)商判定結(jié)果，最終結(jié)果是以細(xì)胞核或者胞質(zhì)呈棕黃或褐色為陽性，每張切片于高倍鏡下計數(shù)細(xì)胞，按照染色強(qiáng)度進(jìn)行打分，即0 分無色、1 分淺黃色、2 分棕黃色、3 分棕褐色，染色強(qiáng)度需要和背景著色對比；在按照陽性細(xì)胞占百分比予以打分，即0 分陰性、1 分陽性細(xì)胞≤10%、2 分陽性細(xì)胞11%～50%、3 分陽性細(xì)胞51%～75%、4 分陽性細(xì)胞＞75%，染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分乘積≥2 分歸免疫反應(yīng)陽性（+）。

1.3 觀察指標(biāo)

①比較兩組survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達(dá)水平。②隨訪1 年，統(tǒng)計復(fù)發(fā)狀況，比較復(fù)發(fā)患者（22 例）和未復(fù)發(fā)患者（58 例）癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達(dá)水平。③比較不同病理學(xué)參數(shù)患者癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達(dá)水平。④分析癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達(dá)水平與病理學(xué)參數(shù)相關(guān)性。⑤分析癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達(dá)水平聯(lián)合預(yù)測BUC 患者術(shù)后復(fù)發(fā)價值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗；計數(shù)資料以百分率（%）表示，行χ2檢驗；采用受試者工作特征（receiver operating characteristic curve,ROC）曲線，獲取曲線下面積（area under curve,AUC）、置信區(qū)間、敏感度、特異度及cut-off 值；相關(guān)性采用Spearman分析。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組survivin、Cyclin D1、hMSH2 陽性表達(dá)率比較

與對照組相比，BUC 組survivin、Cyclin D1 陽性表達(dá)率較高，hMSH2 陽性表達(dá)率較低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組survivin、Cyclin D1、hMSH2 陽性表達(dá)率［n(%)］

2.2 復(fù)發(fā)和未復(fù)發(fā)患者癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達(dá)水平比較

與未復(fù)發(fā)患者相比，復(fù)發(fā)患者癌組織survivin、Cyclin D1 表達(dá)水平明顯升高，hMSH2 表達(dá)水平明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 復(fù)發(fā)和未復(fù)發(fā)患者癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達(dá)情況 ［n(%)］

2.3 不同病理學(xué)參數(shù)癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達(dá)水平比較

膀胱癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達(dá)水平與年齡、性別、原發(fā)腫瘤個數(shù)無關(guān)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。癌組織survivin、Cyclin D1表達(dá)水平比較：G2/3級高于G1級，T2～T4期 高于Tis～T1期，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；癌組織hMSH2 表達(dá)水平比較：G2/3級低于G1級，T2～T4期低于Tis～T1期，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 不同病理學(xué)參數(shù)癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達(dá)情況 ［n(%)］

2.4 癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達(dá)水平與病理學(xué)參數(shù)相關(guān)性分析

癌組織survivin 表達(dá)水平與腫瘤分級、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)呈正相關(guān)（P＜0.05）；癌組織Cyclin D1 表達(dá)水平與腫瘤分級、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)呈正相關(guān)（P＜0.05）；癌組織hMSH2 表達(dá)水平與腫瘤分級、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。見表4。

表4 癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達(dá)水平與病理學(xué)參數(shù)相關(guān)性分析

2.5 癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達(dá)水平聯(lián)合預(yù)測BUC 患者術(shù)后復(fù)發(fā)價值分析

以術(shù)后復(fù)發(fā)BUC 患者為陽性樣本，以術(shù)后未復(fù)發(fā)BUC 患者為陰性樣本繪制ROC 曲線，結(jié)果顯示，癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達(dá)水平聯(lián)合預(yù)測BUC 患者術(shù)后復(fù)發(fā)的AUC 為0.886，最佳診斷敏感度、特異度分別為81.82%、94.83%。見表5。

表5 癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達(dá)水平聯(lián)合預(yù)測BUC 患者術(shù)后復(fù)發(fā)價值分析

3 討論

BUC 為常見泌尿系統(tǒng)的惡性腫瘤之一。2015年國內(nèi)膀胱癌新發(fā)病例超出8 萬，超出3 萬患者由于膀胱癌死亡［7］。因膀胱癌存在多發(fā)性以及癌旁黏膜具有癌前病變等特點(diǎn)，治療之后復(fù)發(fā)風(fēng)險仍可達(dá)30%～50%，危及患者生命健康，加劇患者家庭的生活壓力［8］。因此早期預(yù)測BUC 患者術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險，可為臨床早期制定防治措施以及改善預(yù)后具有重要意義。

本研究結(jié)果表現(xiàn)，BUC 組hMSH2 陽性表達(dá)率明顯低于對照組，且復(fù)發(fā)患者癌組織hMSH2 陽性表達(dá)率明顯下降，且G2/3級、T2～T4期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者癌組織hMSH2 陽性表達(dá)率明顯低于G1級、Tis～T1期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，說明hMSH2 參與BUC 的發(fā)生與進(jìn)展，動態(tài)監(jiān)測其水平變化，有助于臨床評估病情程度。研究表明，基因異常參與惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展，而基因異常表現(xiàn)方式主要為基因突變以及異常轉(zhuǎn)錄［9］。hMSH2 于基因突變與異常轉(zhuǎn)錄中發(fā)揮極為重要作用，其為人類錯配修復(fù)基因內(nèi)最早被發(fā)現(xiàn)的一種修復(fù)異?；蜣D(zhuǎn)錄因子，功能為當(dāng)基因產(chǎn)生異常時能及時修復(fù)，一旦修復(fù)功能產(chǎn)生缺陷可增加抑癌基因的突變率與遺傳的不穩(wěn)定性，從而促進(jìn)腫瘤演化與進(jìn)展［10］。survivin 為凋亡抑制蛋白家族的一個重要成員，在人類胚胎發(fā)育組織和多個腫瘤細(xì)胞中呈特異性表達(dá)，于正常機(jī)體中僅在睪丸、胸腺以及分泌期子宮等多個組織內(nèi)表達(dá)［11］。本研究結(jié)果表明，BUC組survivin 陽性表達(dá)率較高，復(fù)發(fā)患者癌組織survivin 表達(dá)水平明顯升高，且G2/3級、T2～T4期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者癌組織survivin 表達(dá)水平顯著高于G1級、Tis～T1期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，提示survivin 參與BUC 的發(fā)生與進(jìn)展，可作為臨床診斷的指標(biāo)之一。survivin 過度表達(dá)于細(xì)胞惡性早期便可出現(xiàn)，其過度表達(dá)打破細(xì)胞增殖與凋亡之間平衡，致使細(xì)胞惡變與腫瘤發(fā)生［12］，此外，survivin能保護(hù)生長因子，進(jìn)而誘導(dǎo)腫瘤組織新生血管形成，為腫瘤的生長與侵襲提供有利組織微環(huán)境［13］。Cyclin D1 屬于原癌基因之一，和細(xì)胞周期素依賴激酶（CDK4）相結(jié)合產(chǎn)生Cyclin D1/CDK4 復(fù)合物，激活CDK4，利用調(diào)節(jié)底物Rb 蛋白磷酸化，分泌轉(zhuǎn)錄因子E2F，加快細(xì)胞G1/S 期的轉(zhuǎn)換，增加細(xì)胞增殖［14］。本研究顯示，BUC 組癌組織Cyclin D1 陽性表達(dá)率較高，復(fù)發(fā)患者癌組織survivin 表達(dá)水平明顯升高，且G2/3級、T2～T4期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者癌組織survivin 表達(dá)水平顯著高于G1級、Tis～T1期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，說明Cyclin D1 表達(dá)水平可反映BUC 患者病情程度，有助于制定更具有針對性的治療方案。

此外，本研究經(jīng)ROC 曲線分析顯示，癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達(dá)水平聯(lián)合預(yù)測BUC患者術(shù)后復(fù)發(fā)的敏感度、特異度較高（P＜0.05），說明癌組織survivin、Cyclin D1、hMSH2 表達(dá)水平可作為臨床預(yù)測術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險的指標(biāo)，其原因為三者分別從基因異常、細(xì)胞增殖等方面對病情程度、復(fù)發(fā)風(fēng)險予以評估，發(fā)揮協(xié)同效果，故預(yù)測價值較高。

綜上所述，BUC 患者癌組織survivin、Cyclin D1 水平呈高表達(dá)、hMSH2 水平呈低表達(dá)，聯(lián)合預(yù)測術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險的敏感性與特異性較高，故臨床可通過動態(tài)監(jiān)測三者表達(dá)水平來完善治療方案。