關(guān)嶺牛MEF2C基因克隆與差異表達性分析

孫金魁,許厚強*,黃 勇,李 永,熊 訊

(1.貴州大學(xué) 高原山地動物遺傳育種與繁殖教育部重點實驗室/貴州省動物遺傳育種與繁殖重點實驗室,貴州 貴陽 550025;2.貴州大學(xué) 動物科學(xué)學(xué)院,貴州 貴陽 550025;3.貴州大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院,貴州 貴陽 550025)

關(guān)嶺牛是貴州省著名黃牛品種,產(chǎn)于南北盤江流域滇、桂、黔相鄰的廣大山區(qū),其中以中心產(chǎn)區(qū)的關(guān)嶺縣最為著名,主要位于云貴高原南部及其邊緣地帶[1]。得益于優(yōu)質(zhì)的生態(tài)環(huán)境形成了關(guān)嶺牛獨特的品種特性,關(guān)嶺牛具有肢蹄強健、體質(zhì)強壯、短小精悍、耐粗飼抗病力強等優(yōu)良特性,對當(dāng)?shù)厣鷳B(tài)條件具有非常強的適應(yīng)性,其自身攜帶的獨特基因是生物多樣性的重要組成部分[2],是中國較為寶貴的家畜品種遺傳資源。

肌細(xì)胞增強因子-2(myocyte enhancer factor 2,MEF2)屬于轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子MADS-Box家族,定位于細(xì)胞核內(nèi),通過調(diào)節(jié)肌肉特異基因的表達影響骨骼肌發(fā)育分化。該家族包括微小染色體維持蛋白(minichromosome main-tenance protein 1,MCM1)、AGAMOUS、DEFICIENS和血清反應(yīng)因子(SRF)等成員[3]。MEF2蛋白最初在發(fā)育中的骨骼肌肌管中被發(fā)現(xiàn),具有DNA結(jié)合活性,具備結(jié)合肌肉肌酸激酶(MCK)基因啟動子中富含A/T的DNA序列的能力[4]。前期研究中,MEF2被證實在線蟲與果蠅中為單基因,MEF2基因家族在脊椎動物中含有4個亞基,分別包括MEF2A、MEF2B、MEF2C和MEF2D,家族成員結(jié)構(gòu)相似,皆含有中心MEF2結(jié)構(gòu)域,N端結(jié)合DNA的MADS區(qū)域和C端轉(zhuǎn)錄激活區(qū)域,在其N端都含有MADS-box保守結(jié)構(gòu),MEF2基因在行使其功能時,主要通過MADS-box結(jié)構(gòu)域和MEF2結(jié)構(gòu)域與其他轉(zhuǎn)錄輔因子的相互作用來調(diào)控其下游靶基因的轉(zhuǎn)錄活性,具備調(diào)控細(xì)胞凋亡,包括神經(jīng)元、肌肉、血管、淋巴細(xì)胞和骨骼在內(nèi)的多種組織的分化、形態(tài)發(fā)生和維持的作用[5]。MEF2的DNA結(jié)合位點是一段偏保守的序列,該序列在肌肉組織特異性表達基因的調(diào)控區(qū)大量存在,具有調(diào)控動物胚胎期肌肉發(fā)育的功能[6]。

MEF2C基因是MEF2家族在骨骼肌發(fā)育過程中最早表達的的成員,可將該基因視作信號轉(zhuǎn)錄開關(guān),作為很多上游信號的積分器進而發(fā)揮功能。在成肌細(xì)胞分化過程中,該基因作為肌肉特異性基因的轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮作用,與神經(jīng)元的終末分化和有絲分裂后存活相關(guān)[7];在機體大多數(shù)組織中均有表達,屬于廣譜表達基因[8],還參與調(diào)控正常神經(jīng)發(fā)生、骨轉(zhuǎn)換和內(nèi)皮細(xì)胞血管生成以及誘導(dǎo)細(xì)胞增殖分化的過程,在早期神經(jīng)元的分化與大腦皮層的分布發(fā)揮重要作用[9-12]。MEF2C基因與機體發(fā)育聯(lián)系密切,可在體內(nèi)影響多巴胺的神經(jīng)元分化調(diào)控,ADRIO等[13]研究發(fā)現(xiàn)MEF2C基因參與了額顳葉變性(frontal variant of frontotemporal lobe degeneration,fv-FTLD)癲癇發(fā)作。目前MEF2C基因的研究已在豬、鴨子、華貴櫛孔扇貝和牦牛等物種中進行了報道[14-17],有關(guān)MEF2C基因在關(guān)嶺牛中的研究鮮有報道。因此,本試驗以關(guān)嶺牛為試驗對象,探究MEF2C基因在不同時期關(guān)嶺牛以及雜交牛組織器官中的表達特征和生物信息學(xué)特性,為今后進一步改善關(guān)嶺牛產(chǎn)肉性能和進行良種選育,挖掘種質(zhì)資源提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 動物于貴州省安順市西秀區(qū)幺鋪鎮(zhèn)屠宰場選取關(guān)嶺牛和犢牛以及雜交牛(梨木贊?！陵P(guān)嶺牛)各3頭,采集心臟、肝臟、脾臟、肺臟、前腿肌、后腿肌、背最長肌7個組織,用生理鹽水(0.9%NaCl)、DEPC水(0.1%焦碳酸二乙酯)進行處理,置于-80℃冰柜保存,用于各組織器官的總RNA提取。

1.2 試劑與儀器TRIzol試劑購自英駿生物技術(shù)有限公司(Gibco,美國),SYBR Green qPCR Master Mix、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒均購自MCE公司(美國),2×Es Taq Master Mix、無水乙醇、異丙醇、丙三醇、DEPC水均購自康為世紀(jì)生物科技有限公司(Life technologies,北京),DM5000 Marker購自擎科生物技術(shù)有限公司(北京),超微量紫外分光光度計,購自美國Thermo Fisher公司;多功能梯度擴PCR儀(型號為ABIVeritiTM,德國),實時熒光定量PCR儀;臺式高速冷凍離心機。PCR擴增儀(C1000 TouchTM)、凝膠成像系統(tǒng)(Uni-versal Hood Ⅱ),均購自美國BIO-RAD有限公司。

1.3 組織總RNA提取取組織樣品放入研缽內(nèi),加入適量液氮碾磨,待組織被磨成粉末狀即可,轉(zhuǎn)移至1.5 mL離心管中,采用TRIzol法提取關(guān)嶺牛各組織的總RNA,測定總RNA的濃度和純度,置于-80℃冰柜冷藏備用。

1.4 cDNA第一鏈合成在PCR管中加入5×gDNA Remover Reaction Mix,gDNA Remover,組織RNA和DEPC-ddH2O,混勻并短暫離心,37℃放置5 min;隨即加入2×RT Recation MIX(with primer),StarScript Ⅱ RT MIX 1 μL,DEPC-ddH2O,再次混勻離心,42℃孵育15 min,85℃加熱5 min,后置于-20℃冰箱保存。

1.5 引物設(shè)計與合成參考NCBI數(shù)據(jù)庫中的MEF2C(GenBank登錄號NM_001046113.1)的mRNA序列,使用Primer Premier 5.0設(shè)計擴增引物和熒光表達引物(表1),將設(shè)計好的引物與內(nèi)參引物GAPDH(牛)送至擎科生物技術(shù)有限公司(北京)進行合成。

表1 引物序列信息

1.6 基因克隆與測序分析PCR擴增反應(yīng)程序為94℃ 5 min預(yù)變性;94℃ 10 s變性,62℃ 20 s退火,72℃ 30 s延伸,共35個循環(huán);72℃終延伸5 min。產(chǎn)物用1.0%的瓊脂糖凝膠電泳檢測。目的片段與pMD-19T載體連接,連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到DH5α感受態(tài)細(xì)胞中,挑選單克隆菌落培養(yǎng),進行菌液PCR鑒定。篩選所需的陽性菌液送至重慶擎科生物技術(shù)有限公司(北京)測序。

1.7 生物信息學(xué)分析運用生物信息學(xué)在線分析軟件(表2)對牛MEF2C基因編碼蛋白的理化性質(zhì)、親疏水性、亞細(xì)胞定位、跨膜結(jié)構(gòu)域、蛋白網(wǎng)絡(luò)預(yù)測、二級和三級結(jié)構(gòu)及磷酸化位點進行分析。在NCBI上查詢其他10個物種MEF2C基因核苷酸序列,使用MEGA7.0軟件進行同源性比對,構(gòu)建系統(tǒng)進化樹。

表2 預(yù)測分析網(wǎng)址軟件

2 結(jié)果

2.1 牛MEF2C基因CDS區(qū)克隆與測序電泳檢測發(fā)現(xiàn)在1 000～2 000 bp之間顯現(xiàn)出單一明亮的條帶(圖1A),與預(yù)期片段大小一致,將膠回收產(chǎn)物和PMD-19T載體以及Soution Ⅰ離心混勻,16℃金屬浴過夜連接。菌液PCR驗證結(jié)果顯示在1 326 bp附近有1條明亮條帶(圖1B),與預(yù)期結(jié)果相符。

2.2 牛MEF2C蛋白理化特性分析牛MEF2C基因的mRNA序列為2 770 bp(NM_001046113.1),ORF(開放閱讀框)為1 326 bp,編碼441個氨基酸,5′非編碼區(qū)長為383 bp,3′非編碼區(qū)長為1 059 bp;MEF2C蛋白理化特性分析結(jié)果表明MEF2C基因蛋白總原子數(shù)為6 632,分子式為C2053H3281N607O671S2,理論等電點為7.71,相對分子質(zhì)量約為48 kDa;不穩(wěn)定系數(shù)為51.07。氨基酸中組成含量最高的是絲氨酸(13.60%)、組成含量最低是色氨酸(0.50%);43個帶正電荷的氨基酸殘基(Arg+Lys)、44個帶負(fù)電荷的氨基酸殘基量(Asp+Glu);脂肪族系數(shù)是67.87;總平均親水性是-0.640。利用PSORT Prediction對牛MEF2C基因編碼產(chǎn)物亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)預(yù)測分析,結(jié)果顯示其主要定位于為細(xì)胞核(60.90%),其次為細(xì)胞質(zhì)(21.70%)、線粒體(13.00%)和細(xì)胞骨架(4.30%)。

A.MEF2C基因CDS區(qū)擴增圖(M.DL5000 DNA Marker; 1～3.MEF2C基因CDS區(qū)擴增產(chǎn)物);B.MEF2C基因菌液PCR鑒定圖(M.DL5000 DNA Marker;1～3.MEF2C基因CDS區(qū)菌液PCR產(chǎn)物)

2.3 MEF2C蛋白二級和三級結(jié)構(gòu)預(yù)測SOPMA和SWISS-MODEL對MEF2C蛋白二級和三級結(jié)構(gòu)分析預(yù)測,在MEF2C蛋白中,無規(guī)則卷曲(67.80%)占比最大,其次為α-螺旋(17.69%)、延伸鏈(10.88%)以及β-折疊(3.63%)(圖2)。通過預(yù)測三級結(jié)構(gòu)模型(圖3)得知MEF2C蛋白主要由α-螺旋、無規(guī)卷曲和延長鏈在空間上通過折疊組成,與其二級結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果基本吻合。

圖2 牛MEF2C蛋白二級結(jié)構(gòu)預(yù)測分析

圖3 牛MEF2C蛋白三級結(jié)構(gòu)預(yù)測分析

2.4 MEF2C蛋白結(jié)構(gòu)域與親疏水性預(yù)測SMART軟件對MEF2C蛋白功能結(jié)構(gòu)域進行預(yù)測,結(jié)果顯示(圖4),在MEF2C蛋白氨基酸序列的1～60位有1個MADS功能結(jié)構(gòu)域,E值=3.29e-37。在324～334位、387～403位之間各存在1個低復(fù)雜區(qū)域(low complexity)。ProtScale軟件對親疏水性預(yù)測,結(jié)果(圖5)所示,MEF2C蛋白的最高分值是1.933,疏水性最強;最低分值是-3.389,親水性最強。

圖4 牛MEF2C蛋白功能結(jié)構(gòu)域預(yù)測

2.5 MEF2C基因磷酸化位點和跨膜結(jié)構(gòu)域預(yù)測分析NetPhs 3.1 Server對MEF2C蛋白磷酸化位點進行預(yù)測,結(jié)果表明牛MEF2C蛋白共有98個磷酸化位點,絲氨酸(Ser)、蘇氨酸(Thr)和酪氨酸(Tyr)的數(shù)量分別為60,26和12個(圖6)。利用TMHMM軟件對牛MFE2C蛋白跨膜結(jié)構(gòu)域進行預(yù)測分析(圖7),結(jié)果表明MEF2C蛋白大多處于膜外,小部分置于膜內(nèi),即MEF2C蛋白有跨膜結(jié)構(gòu)域,是膜蛋白。

圖5 牛MEF2C基因親疏水性預(yù)測分析

2.6 MEF2C基因氨基酸序列同源性分析和遺傳進化樹構(gòu)建NCBI上查找10個不同物種的MEF2C基因核苷酸序列,利用Megalign軟件對關(guān)嶺牛(Bostaurus,NP_001039578.1)和牦牛(Bosmutus,XP_005905875.1)、水牛(Bubalusbubalis,XP_0448-03251.1)、山羊(Caprahircus,XP_005683480)等10個不同物種的MEF2C基因氨基酸序列進行同源相似性分析。結(jié)果(圖8)顯示,關(guān)嶺牛MEF2C氨基酸序列與牦牛、水牛和駱駝的氨基酸序列同源性為99.8%,與大象和火雞氨基酸序列同源性較低,分別為27.8%和10.4%。使用MEGA7.0軟件構(gòu)建MEF2C基因遺傳進化樹并計算遺傳距離;與NCBI中登錄的牦牛(Bosmutus,XM_005905813.2)、火雞(Meleagrisgallopavo,XM_031557439.1)等10個物種的基因序列進行比對,構(gòu)建遺傳進化樹。結(jié)果(圖9)顯示,關(guān)嶺牛MEF2C基因與牦牛和水牛的遺傳距離較近,與火雞的遺傳距離較遠(yuǎn);表明MEF2C基因在物種中體現(xiàn)出一定的遺傳保守性。

圖6 牛MEF2C蛋白磷酸化位點預(yù)測結(jié)果

圖7 牛MEF2C蛋白跨膜結(jié)構(gòu)域預(yù)測結(jié)果

圖8 不同物種MEF2C蛋白氨基酸序列同源性比對分析

2.7 牛MEF2C蛋白互作網(wǎng)絡(luò)預(yù)測利用STRING預(yù)測牛MEF2C蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖譜,結(jié)果(圖10)所示,包含與酵母Hda1(histone deacetylase-1)蛋白高度同源的Ⅱa類HDAC家族成員,組蛋白去乙酰化酶(HDAC)家族蛋白成員HDAC4和HDAC5;參與核心組蛋白(H2A、H2B、H3和H4)N末端部分賴氨酸殘基的去乙?；?去乙?；渌鞍踪|(zhì)分子或與其他蛋白形成復(fù)合物[18],并在轉(zhuǎn)錄調(diào)控、細(xì)胞周期進程和發(fā)育中發(fā)揮重要作用。絲裂原蛋白活化激酶(MAPK)家族蛋白成員MAPK11、MAPK12、MAPK13與MAPK14,通過激活環(huán)中TGY基序的雙重磷酸化發(fā)揮功效[19],參與細(xì)胞分化與生長凋亡,在細(xì)胞反應(yīng)級聯(lián)中起重要作用,以及參與心肌發(fā)育和成肌細(xì)胞分化的GATA4、MYOD1、PTK2、NKX2-5等相關(guān)蛋白。MEF2C在整個蛋白互作網(wǎng)絡(luò)中具有控制心臟形態(tài)發(fā)生和肌肉生成、參與血管發(fā)育、調(diào)節(jié)基礎(chǔ)和誘發(fā)的突觸傳遞以及參與神經(jīng)發(fā)生和皮質(zhì)結(jié)構(gòu)的發(fā)育等分子功能,與各互作蛋白共同發(fā)揮功能,參與生肌細(xì)胞生長發(fā)育等生理過程。

2.8 MEF2C基因在牛不同組織中的表達量實時熒光定量PCR結(jié)果顯示,MEF2C基因在關(guān)嶺牛和雜交牛的7個組織中皆有表達。以脾臟作為對照組,GAPDH為內(nèi)參基因。結(jié)果(圖11)所示,關(guān)嶺牛與雜交牛在肺臟中的表達呈極顯著性差異(P<0.01),在心臟、脾臟、肝臟和背最長肌中的表達呈顯著性差異(P<0.05),在前腿肌和后腿肌中表達量差異不顯著(P>0.05)。通過對關(guān)嶺牛在犢牛階段和成年牛階段的7個不同組織器官進行分析(圖12),MEF2C基因在犢牛和成年牛的7個組織中表達量差異均極顯著(P<0.01),心臟和脾臟在成年牛階段表達量極顯著高于犢牛階段(P<0.01),其他5個組織中在犢牛階段的表達量極顯著高于成年牛階段。MEF2C基因在關(guān)嶺牛犢牛階段不同組織間的表達特征(圖13A)所示,該基因在肺臟中表達量極顯著高于其他組織,表達量從高到低依次是肺臟、脾臟、肝臟、前腿肌、心臟、背最長肌和后腿肌。MEF2C基因在關(guān)嶺牛成年牛的脾臟中表達量極顯著高于其他組織(圖13B),MEF2C基因表達量從高到低順序依次是脾臟、心臟、肺臟、肝臟、前腿肌、后腿肌和背最長肌。同時,進一步研究發(fā)現(xiàn)MEF2C基因在牛成肌細(xì)胞分化過程的表達量與細(xì)胞分化時間呈正相關(guān)。MEF2C基因在0,12,24,48 h的表達量呈上升的趨勢(圖14),不同時間段的表達量差異極顯著(P<0.01),表明MEF2C基因在成肌細(xì)胞分化過程中有著至關(guān)重要的作用。

圖9 牛MEF2C基因系統(tǒng)進化樹

圖10 牛MEF2C蛋白互作網(wǎng)絡(luò)預(yù)測分析

*.P<0.05;**.P<0.01

*.P<0.05;**.P<0.01

A.MEF2C基因在犢牛不同組織器官中的表達差異;B.MEF2C基因在成年牛不同組織器官中的表達差異;圖柱上不同小寫字母a、b、c、d、e表示各組織表達量差異顯著(P<0.05);圖柱上不同大寫字母A、B、C、D表示各組織表達量差異極顯著(P<0.01)。下同

圖14 MEF2C基因在牛成肌細(xì)胞分化過程中的表達差異及生長趨勢

3 討論

MEF2在骨骼肌、心肌和平滑肌的肌生成中起重要作用,對肌肉分化至關(guān)重要[20]。MEF2本身并不具備肌源性活性,但與bHLH(basic helix-loop-helix)蛋白家族共同發(fā)揮作用時,可驅(qū)動并放大肌源性分化程序[21]。MEF2蛋白N端具備結(jié)合DNA功能的MADS區(qū)域和中心MEF2結(jié)構(gòu)域,C端為轉(zhuǎn)錄激活區(qū)域,該區(qū)域在MEF2基因家族成員及不同物種間的保守性較低且序列多變,含有多種可變剪接方式,以進一步調(diào)控MEF2蛋白活性[22-24]。MEF2主要通過CaMK-HDACs(Ca2+-鈣調(diào)素依賴的蛋白激酶-組蛋白去乙酰化酶)、calcineurin(鈣調(diào)磷酸酶)和MAPK(絲裂原活化蛋白激酶)3種信號通路發(fā)揮作用[25]。MEF2基因大多通過MADS-box結(jié)構(gòu)域和中心MEF2結(jié)構(gòu)域與其他轉(zhuǎn)錄輔因子相結(jié)合來發(fā)揮作用,家族成員與許多參與肌肉生長和發(fā)育的基因相結(jié)合,以啟動或加強肌源性基因的表達[26-28],通過控制下游靶基因的轉(zhuǎn)錄活性來調(diào)控細(xì)胞的分裂、分化和凋亡的過程。目前已證實牛MEF2C基因被定位于7號染色體[29],MEF2C作為廣譜表達基因,該基因結(jié)構(gòu)由N端的MADS-box位點和鄰近的MEF2位點、中間的2個轉(zhuǎn)錄活性位點TAD1和TAD2與C端的選擇性剪切位點三部分組成[30]。MEF2C基因?qū)趋篮凸趋兰〉陌l(fā)育至關(guān)重要,在心血管與神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育方面發(fā)揮調(diào)功能[31-32]。LIU等[33]研究發(fā)現(xiàn),在肌肉受到損傷的小鼠中,同時敲除MEF2A、MEF2C和MEF2D后,肌肉修復(fù)過程受到顯著抑制,成肌細(xì)胞分化過程受到嚴(yán)重阻礙。同時,有研究表明MEF2C在神經(jīng)中樞系統(tǒng)發(fā)育和治療癲癇等方面有著重要作用[34-35]。

本試驗成功擴增出關(guān)嶺牛MEF2C基因CDS區(qū)序列,對比NCBI中的基因序列,尚未發(fā)現(xiàn)核苷酸突變位點。關(guān)嶺牛MEF2C基因與其他10個不同物種的氨基酸序列進行比對分析,結(jié)果表明MEF2C基因在不同物種間存在一定的差異,說明該基因在結(jié)構(gòu)和功能上具有物種和品種特異性,可能與MEF2蛋白C末端在不同物種間的保守性偏低相關(guān)[36]。MEF2C蛋白理化特性分析結(jié)果顯示MEF2C基因編碼441個氨基酸,相對分子質(zhì)量約為48 kDa,為堿性不穩(wěn)定蛋白。蛋白二級結(jié)構(gòu)以無規(guī)則卷曲(67.80%)與α-螺旋(17.69%)為主,GRAVY值預(yù)測親疏水性發(fā)現(xiàn)MEF2C具有較強的親水性,有利于其在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用。MEF2C在其氨基酸序列第1～60號位預(yù)測到1個MADS結(jié)構(gòu)域,MADS結(jié)構(gòu)域又被稱作DNA結(jié)合區(qū),具備與DNA結(jié)合和二聚化的功能,其主要DNA結(jié)合元件是2個雙親性α-螺旋的反平行卷曲螺旋,每個亞單位1個;DNA纏繞在卷曲的螺旋周圍,使螺旋的N末端適合DNA大溝[37]。從螺旋N-末端延伸的鏈到達DNA主鏈上方并穿入小溝;1個4鏈的反平行β折疊緊靠著DNA對面的卷曲螺旋面,是二聚化界面的中心成分,MADS-box結(jié)構(gòu)域通常與K-box區(qū)域相關(guān)。MEF2C基因在信號通路中發(fā)揮中心調(diào)控因子的作用,擁有多個與肌肉發(fā)育相關(guān)的互作因子,通過與其他蛋白互作進而調(diào)控信號傳導(dǎo),與董晨等[38]研究結(jié)果相似。

MEF2C基因在關(guān)嶺牛和雜交牛各組織器官中均有表達,同一組織在不同牛種之間和同一牛種的不同組織之間的表達程度存在一定的差異性,且在關(guān)嶺牛不同發(fā)育階段的表達程度存在差異性,說明MEF2C基因?qū)儆趶V譜表達基因。該基因在關(guān)嶺牛和雜交牛內(nèi)臟器官中的表達量差異顯著,在肌肉中的表達量差異不顯著,該結(jié)果可為關(guān)嶺牛良種選育和遺傳標(biāo)記提供數(shù)據(jù)參考。通過對比MEF2C基因在關(guān)嶺牛犢牛階段和成年階段各組織器官表達量可知,MEF2C基因在成年牛脾臟和心臟中的表達量極顯著高于犢牛,說明MEF2C基因與心肌生長發(fā)育關(guān)系密切[39]。研究表明,MEF2C基因可作為心臟基因的重要轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,MEF2C功能受到影響將導(dǎo)致心臟疾病的發(fā)生[40];而在其他組織中的表達量要極顯著低于犢牛,與王興東等[17]、朱弘焱等[14]和展召陽等[41]研究結(jié)果相似,MEF2C基因在機體不同年齡段中皆可表達,且表達量差異顯著,表達量隨年齡增長呈負(fù)相關(guān),可能與機體肌肉組織達到相應(yīng)階段后的發(fā)育遲緩有關(guān)。同時研究發(fā)現(xiàn)MEF2C基因?qū)ε３杉〖?xì)胞分化有著重要作用。本試驗結(jié)果表明MEF2C基因在關(guān)嶺牛不同組織器官的生長發(fā)育和成肌細(xì)胞的分化有一定作用,但未在蛋白水平做深入研究,后期可從蛋白方面對MEF2C做深層研究。本試驗進一步完善了MEF2C基因?qū)﹃P(guān)嶺牛生長發(fā)育的影響,為探究地方優(yōu)質(zhì)種質(zhì)資源提供了理論參考。