應用雙層式蟲卵過濾裝置進行蛔蟲卵檢測的效果

杜艷紅，李佳

九江市潯陽區(qū)疾病預防控制中心 （江西九江 332000）

寄生蟲寄生于宿主或附著于體外，通過對被寄生動物造成損害的方式維持生存、發(fā)育或繁殖所需的營養(yǎng)，可能由此導致疾病傳播或誘發(fā)各種并發(fā)癥[1-2]。隨著檢測技術(shù)相關(guān)理論和方法的不斷完善，以及實時熒光定量聚合酶鏈反應（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction，qRT-PCR）檢測、環(huán)介導等溫擴增、酶聯(lián)免疫檢測等技術(shù)的創(chuàng)新應用，提升了寄生蟲蟲卵檢測的靈敏度和特異度。但受限于儀器設備和操作要求，其不適于大范圍推廣應用，尤其經(jīng)濟相對落后的中西部地區(qū)，各級疾病預防控制中心依然應用傳統(tǒng)的蟲卵檢測方法[3]?；紫x是人體常見且呈世界性分布的寄生蟲，具有感染性強、癥狀不典型、感染后表現(xiàn)隱匿等特征。其在衛(wèi)生條件相對較差的地區(qū)更為流行，同時因主要寄生于小腸部位，可通過檢測糞便樣品中的蟲卵而確診。雖然檢測流程和技術(shù)較為簡單，但依然需要配合較為完善的樣品前期處理，才能更好地提升檢測效果[4]。面對較大樣本量的處理和檢測任務，傳統(tǒng)操作較為煩瑣?；趥鹘y(tǒng)檢測方式的不足，本研究特對蟲卵過濾裝置進行優(yōu)化設計，使初步去除糞便雜質(zhì)、收集蟲卵過濾兩步驟同時進行，增強使用的便捷性和適用范圍。為進一步明確雙層式蟲卵過濾裝置的實踐效果，特進行如下對照試驗研究，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2019年2月至2022年8月，對江西省某地948例確診蛔蟲感染患兒（男613 例、女335 例）糞便樣品進行蛔蟲卵檢測，每例患兒均單獨采集樣品，共采集948 份糞便樣品，一式兩份。患兒家長均對研究內(nèi)容知情同意。

診斷標準：參照《膽道蛔蟲病的診斷和治療（國內(nèi)文獻綜述）》[5]，根據(jù)患者流行病學史、臨床癥狀，結(jié)合實驗室檢查進行確診。

納入標準：均為學齡兒童（6～12 歲）蛔蟲感染確診患兒；采集糞便樣品前6 個月未使用驅(qū)蟲藥物；取樣前未合并其他感染性疾病；病情可控。排除標準：合并消化系統(tǒng)器質(zhì)性疾?。缓喜⑵渌纳x感染。

1.2 儀器和試劑

所用儀器主要包括光學顯微鏡（OLYMPUS 公司，SZX16 型），恒溫水浴箱（滄州鴻浩杰科建筑儀器有限公司，HWY-30 型）。所用試劑主要包括氯化鈉、醋酸，均為試劑純，購自南昌明瑞化工有限公司。所用耗材主要包括149、88、44 μm規(guī)格尼龍紗布，塑料定量板，刮片，載玻片，蓋玻片，濾紙等，均由九江市潯陽區(qū)疾病預防控制中心提供。

1.3 檢測方法

蛔蟲感染確診患兒糞便樣品一式兩份根據(jù)采用不同的前期處理操作方法分為對對照組和實驗組，但由相同的操作人員負責寄生蟲樣品的后期檢測，檢測蟲卵均為蛔蟲卵。具體實施之前，操作人員均完成操作流程培訓、蟲卵鑒別培訓，能根據(jù)患兒排出蟲體的形態(tài)進行鑒別。

對照組采用紗布燒杯過濾裝置。手工制作簡易過濾裝置，將3 層紗布疊加置于燒杯上方，取2 g 待測糞便樣品溶于0.9%氯化鈉注射液（58 ml）制作懸浮漿液，倒入燒杯進行3 次過濾，分別使用的濾網(wǎng)規(guī)格為網(wǎng)眼直徑149、88、44 μm；再使用0.9%氯化鈉注射液對紗布進行3～5 次漂洗，沖洗液再次經(jīng)濾紙過濾。檢測方法為0.9%氯化鈉注射液直接涂片法：用粗吸管收集表面液體并轉(zhuǎn)移至載玻片，厚度以能隱約辨認玻片下方字跡為宜，將蓋玻片蓋于樣本上并靜置10 min，再將其置于顯微鏡載玻片上，使用低倍鏡進行觀察，每份樣品重復進行3 張涂片鏡檢，鏡檢時瀏覽全片。

試驗組采用雙層式蟲卵過濾裝置，其結(jié)構(gòu)特征和使用方法如下。（1）結(jié)構(gòu)特征：矩形塊狀濾液箱頂部設有支架和過濾組件，濾筒底部設有出口、頂部可放置濾液瓶；濾管頂端均為相互貼合的半圓形設置，便于兩個濾管匹配設置于濾筒的圓管；濾管底端分別連接過濾盒，過濾盒連接濾液箱頂部，濾液箱頂板上方的2 個過濾盒位置貫通設置一圓槽，過濾盒均通過圓槽連通于濾液箱；濾液箱底部平行設有2 個滑軌，濾液箱內(nèi)通過滑軌設有一可抽拉濾液盒，濾液盒的頂部為空置結(jié)構(gòu)；濾筒包括方柱筒和錐形筒，兩者之間開設一貫通的圓管，方柱筒側(cè)面向內(nèi)水平開設第一矩形槽，第一矩形槽的兩側(cè)面均設有第一滑槽，第一矩形槽內(nèi)通過第一滑槽設有一可抽拉第一過濾網(wǎng)[6]，見圖1～2。（2）使用方法：操作前檢查，確保雙層式蟲卵過濾裝置濾筒和過濾組件之間密封性良好，沖刷濾筒、過濾盒、濾液箱，避免雜質(zhì)影響操作過程，更新并檢查濾網(wǎng)，確保正常使用。檢驗人員將待測樣品溶于0.9%氯化鈉注射液，制作成懸浮漿液，而后倒入過濾裝置，樣品流經(jīng)第一過濾網(wǎng)時可通過孔徑去除雜質(zhì)，同時通過2 個濾管和第2 過濾網(wǎng)進行兩份樣品的收集；檢驗人員可通過濾液盒側(cè)面設置把手進行過濾后樣品的提取，重復使用0.9%氯化鈉注射液對樣品進行3～5 次漂洗；載玻片和蓋玻片操作、低倍鏡觀察方法同對照組。

圖1 雙層式蟲卵過濾裝置結(jié)構(gòu)示意圖

圖2 雙層式蟲卵過濾裝置實物圖

1.4 指標記錄

研究團隊組建3 人小組，負責采集研究效應指標相關(guān)數(shù)據(jù)。（1）蛔蟲卵檢出情況：檢測948 例蛔蟲感染確診患兒糞便樣品中蛔蟲卵是否檢出及具體計數(shù)，計數(shù)方法參照麥克馬斯特計數(shù)法，每克糞便樣品蛔蟲卵計數(shù)=（左計數(shù)池內(nèi)蟲卵數(shù)+右計數(shù)池內(nèi)蟲卵數(shù)）/2×200[7]。（2）操作人員對操作過程滿意程度：對20 名操作人員進行主觀評定，評定內(nèi)容包括3 個維度（樣品前期處理效率、樣品前期處理方便程度、樣品前期處理衛(wèi)生狀況），每個維度均設置3 個選項（滿意、一般、不滿意）。

1.5 統(tǒng)計學處理

采用Epidata 3.0 軟件建立數(shù)據(jù)庫，采用SPSS 20.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料以±s表示，采用t檢驗。計數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗。等級資料采用Z檢驗。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組樣品蛔蟲卵檢出率與每克樣品蛔蟲卵計數(shù)比較

試驗組陽性檢出率高于對照組，每克糞便樣品蛔蟲卵計數(shù)大于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

2.2 操作人員對操作過程滿意程度比較

20 名操作人員對樣品前期處理過程的3 個維度進行滿意程度評價，結(jié)果顯示，試驗組3 個維度滿意度均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 操作人員對操作過程滿意程度比較（例）

3 討論

目前，臨床對阿苯達唑、甲苯達唑、伊維菌素等藥物的廣泛應用，極大程度提升了蛔蟲病的治愈率。但受蛔蟲病傳播途徑廣泛、居民衛(wèi)生習慣欠佳、雌蟲繁殖能力極強、蟲體生存能力較強等因素的交互影響，蛔蟲病的發(fā)病率依然居高不下，甚至在經(jīng)濟欠發(fā)達地區(qū)長期流行[8]。就寄生部位而言，通常情況下絕大多數(shù)蛔蟲寄生于人體的小腸部位，發(fā)生膽內(nèi)、肺部等位置轉(zhuǎn)移的比例相對較小，因此檢測重點人群糞便能有效、快速地判定蛔蟲感染情況，而0.9%氯化鈉注射液直接涂片法依然是當前最經(jīng)濟、便捷且廣泛應用的檢測技術(shù)。就檢測結(jié)果而言，雖然蛔蟲病患者通過糞便樣品檢測蛔蟲卵的陽性率較高，但糞便樣品前期處理的規(guī)范性依然會影響最終檢測結(jié)果，尤其是影響蛔蟲卵定量檢測結(jié)果[9]。因此，持續(xù)加強糞便樣品前期處理過程的規(guī)范性，尤其是通過裝置設計優(yōu)化樣品前期處理過程，同時提升操作過程的便捷性，對于提升操作人員工作效率，并提高蛔蟲卵定量檢測結(jié)果至關(guān)重要。

本研究結(jié)果顯示，試驗組陽性檢出率高于對照組，每克糞便樣品蛔蟲卵計數(shù)大于對照組，主要與試驗組所用的裝置極大程度優(yōu)化了糞便樣品的前期處理過程有關(guān)。其原因如下：（1）方柱筒和錐形筒內(nèi)設有一貫通圓管，內(nèi)設的第一過濾網(wǎng)、第二過濾網(wǎng)能快速實現(xiàn)糞便樣品懸浮漿液的連續(xù)過濾，同時第一過濾網(wǎng)和第二過濾網(wǎng)具有不同的孔徑，可根據(jù)實驗檢測要求去除雜質(zhì)、收集蟲卵等；（2）分別通過兩個濾管和第二過濾網(wǎng)進行兩份樣品的收集，可同時對兩份樣品進行檢查、比較和研究，大大提高了實驗效率并豐富了實驗內(nèi)容；（3）雙層式蟲卵過濾裝置還可根據(jù)實際需要調(diào)整濾網(wǎng)的網(wǎng)眼規(guī)格，以更好地進行糞便樣品的前期處理，進而提升后期檢測的準確率。兩組糞便樣品蛔蟲卵計數(shù)存在差異的原因為，經(jīng)過雙層式蟲卵過濾裝置處理的糞便樣品初步實現(xiàn)了蛔蟲卵的富集，因此在使用0.9%氯化鈉注射液直接涂片法進行樣品檢測時，蛔蟲卵檢出的數(shù)量相對更大[10]。

本研究結(jié)果顯示，操作人員對試驗組雙層式蟲卵過濾裝置的使用滿意度更高。其原因為，雙層式蟲卵過濾裝置初步實現(xiàn)了糞便樣品懸浮漿液的連貫性處理，不需要按照傳統(tǒng)的樣品前期處理方法（使用紗布進行過濾，并對紗布進行重復漂洗），極大提升了操作效率。同時，進行室外臨時檢測時也不同于傳統(tǒng)方法（必須攜帶燒杯、尼龍濾網(wǎng)、相關(guān)支架等裝置），僅憑借雙層式蟲卵過濾裝置就能實現(xiàn)樣品的快速處理。除此之外，面對多項時效性強的檢測任務時，雙層式蟲卵過濾裝置在完成單項樣品前期處理后，就能使用0.9%氯化鈉注射液對設置內(nèi)壁進行快速沖洗，免去了后期處理的煩瑣工作。試驗組操作人員認為雙層式蟲卵過濾裝置對樣品前期處理更為衛(wèi)生，其原因為，雙層式蟲卵過濾裝置實現(xiàn)了糞便樣品懸浮漿液的過濾，全部過程均在濾筒、濾液箱內(nèi)部實現(xiàn)，即使因操作力度較大而產(chǎn)生空氣懸浮物質(zhì)，也不會對操作人員產(chǎn)生附加影響。

綜上所述，雙層式蟲卵過濾裝置用于蛔蟲卵檢測，能明顯提升檢測效果，操作人員對樣品前期處理效率、方便程度、衛(wèi)生狀況也更為滿意。本研究創(chuàng)新之處在于，通過雙層式蟲卵過濾裝置初步實現(xiàn)了樣品的連貫性處理，同時根據(jù)實際需要不斷調(diào)整尼龍濾網(wǎng)規(guī)格，從而實現(xiàn)蛔蟲卵的富集，利于提高蛔蟲卵檢出率及每克糞便樣品的蛔蟲卵計數(shù)。但本研究亦存在兩點不足：一是檢測對象均為蛔蟲卵，是否適用于其他寄生蟲蟲卵相關(guān)樣品的前期處理，后續(xù)研究有待確認；二是雙層式蟲卵過濾裝置使用效果主要通過操作人員主觀評價獲得，客觀指標尚需后續(xù)研究進一步采集分析。