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    兩款市售苦蕎醋沉淀中黃酮含量的測(cè)定

    2023-06-21 07:25:50李二冬
    農(nóng)產(chǎn)品加工 2023年10期
    關(guān)鍵詞:市售苦蕎蘆丁

    李二冬

    (1. 山西省檢驗(yàn)檢測(cè)中心(山西省標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量技術(shù)研究院),山西太原 030032;2. 食品藥品安全防控山西省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山西太原 030032)

    0 引言

    苦蕎醋利用苦蕎為原料,采用科學(xué)的方法,運(yùn)用微生物學(xué)發(fā)酵的基本原理而制成的一種功能食品[1]??嗍w醋中含有多種營(yíng)養(yǎng)成分,如黃酮類化合物、多種微量元素、葡萄糖、氨基酸成分[2-5]等。其中,黃酮類化合物泛指2 個(gè)苯環(huán)通過中央三碳鏈連接而成的一類化合物,即有C6-C3-C6 基本構(gòu)型[6]。黃酮類化合物是植物在生長(zhǎng)過程中形成的一大類次生代謝產(chǎn)物[7],主要以碳糖基類或者苷類的形式廣泛存在于植物的根、葉、果實(shí)、花和蓮中。人體內(nèi)不能直接合成黃酮類化合物,而黃酮類化合物對(duì)人體有著非常重要的生化作用[8],所以必須通過食物獲取[9]。對(duì)于研究食物中的黃酮類化合物顯得尤為重要。羅磊等人[10]通過H2O2誘導(dǎo)HUVEC 細(xì)胞損傷,建立細(xì)胞氧化損傷模型,并通過對(duì)照試驗(yàn)得出,綠豆皮黃酮能提高機(jī)體抗氧化酶活性,清除自由基,減輕H2O2對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的損傷。張立虎等人[11]研究表明黃酮有抗腫瘤、預(yù)防腫瘤作用,是一種很有潛力的癌癥化學(xué)預(yù)防劑,能顯著降低多種惡性腫瘤的發(fā)病率。Maras J E 等人[12]和Fu Yu 等人[13]研究發(fā)現(xiàn)黃酮類化合物有強(qiáng)心護(hù)肝,防治心血管疾病的作用。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,苦蕎醋中也含有黃酮類化合物。

    然而,由于制作工藝和醋本身的特征,苦蕎醋容易發(fā)生沉淀,而沉淀通常不被利用,作為垃圾而丟棄。為了研究苦蕎醋沉淀中黃酮類化合物的含量,對(duì)比了兩款市售苦蕎醋沉淀中黃酮的含量,為苦蕎醋的改性工藝研究提供理論基礎(chǔ)。

    1 試驗(yàn)部分

    1.1 試劑

    兩款苦蕎醋(雁門清高苦蕎醋、寧化府黑苦蕎醋),購自當(dāng)?shù)爻?;蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(HPLC≥98%),江西佰草源生物科技有限公司提供;無水乙醇、硝酸鋁、亞硝酸鈉、氫氧化鈉、稀鹽酸(分析純),天津市大茂化學(xué)試劑廠提供。試驗(yàn)中所用的水為二次蒸餾水。

    1.2 儀器設(shè)備

    S224S 型電子分析天平,鶴壁市鑫泰高科儀器制造有限公司產(chǎn)品;U-3010 型紫外-可見(UV-Vis)分光光度計(jì),日本日立公司產(chǎn)品;DZG-6050(D) 型真空干燥箱,上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司產(chǎn)品;電熱恒溫水浴鍋,浙江臨海市東方儀器廠產(chǎn)品;TDL-5A型離心機(jī),上海菲恰爾分析儀器有限公司產(chǎn)品。

    1.3 苦蕎醋沉淀中黃酮的提取

    分別將2 款市售苦蕎醋的沉淀取出,在60 ℃真空干燥箱中烘干5 h,并將烘干后的物質(zhì)碾成粉末。分別稱取2 種粉末1.00 g 于具塞錐形瓶中,加70%乙醇50 mL,恒溫70 ℃水浴2.5 h,冷卻至室溫,以轉(zhuǎn)速8 000 r/min 離心10 min,取上清液用70%乙醇定容至50 mL,為提取液。

    1.4 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

    用蘆丁作為標(biāo)準(zhǔn)品[14-15],測(cè)定兩款市售苦蕎醋沉淀中黃酮的含量。將蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品在真空干燥箱中干燥至恒重,并精密稱取25.0 mg,于50 mL 容量瓶中,加70%乙醇定容,即得到0.5 mg/mL 的蘆丁儲(chǔ)備液。分別取蘆丁儲(chǔ)備液0,0.2,0.4,0.8,1.2,1.6,2.0,2.5 mL 于25 mL 容量瓶中,加70%乙醇6 mL,并依次加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的NaNO2溶液1 mL,搖勻靜置6 min;質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的Al(NO3)3溶液1 mL,搖勻靜置6 min;質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的NaOH 溶液10 mL;繼續(xù)加水至刻度線,搖勻靜置15 min 待用。將未加入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液的容量瓶溶液作空白,于波長(zhǎng)353 nm 處測(cè)定吸光度,并繪制吸光度與濃度之間的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    1.5 兩款市售苦蕎醋沉淀中黃酮含量的測(cè)定

    分別取兩款市售苦蕎醋沉淀提取液2.0 mL 于25 mL 容量瓶中,按照2.4 的方法配制溶液、測(cè)定吸光度,并按照蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線和公式(1) 得到兩款苦蕎醋沉淀中黃酮質(zhì)量濃度。

    式中:C——根據(jù)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)得的黃酮質(zhì)量濃度,mg/mL;

    V1——苦蕎醋沉淀提取液的總體積,50 mL;

    V3——取提取液,2 mL;

    V2——2 mL 提取液稀釋后的體積,25 mL;

    m——苦蕎醋沉淀的質(zhì)量,1 g。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 最大吸收波長(zhǎng)的確定

    蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液吸收光譜圖見圖1。

    圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液吸收光譜圖

    由圖1 可知,蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液為300~600 nm 時(shí)的紫外-可見吸收光譜圖,于波長(zhǎng)為353 nm 處時(shí)吸光度最大,所以試驗(yàn)過程中選擇該波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)。

    2.2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

    蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液和吸光度的線性關(guān)系見圖2。

    圖2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液和吸光度的線性關(guān)系

    在0~0.05 mg/mL 范圍內(nèi)蘆丁的吸光度隨著質(zhì)量濃度的增加而增加,其線性回歸方程為Y=0.0391 2+29.176 9C(mg/mL),相關(guān)系數(shù)R2=0.998 6,吸光度與濃度呈良好的線性相關(guān),可用于樣品的測(cè)定。

    2.3 試驗(yàn)條件的優(yōu)化

    從苦蕎醋沉淀中提取黃酮時(shí),溶劑的濃度、提取溫度、提取時(shí)間對(duì)黃酮提取量(即含量) 有很大的影響,所以需要對(duì)試驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化。

    2.3.1 乙醇體積分?jǐn)?shù)的考查

    不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇對(duì)黃酮質(zhì)量濃度的影響見圖3。

    圖3 不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇對(duì)黃酮質(zhì)量濃度的影響

    由圖3 可知,當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)從50%到80%變化,70%時(shí)黃酮質(zhì)量濃度達(dá)到最大值,隨著乙醇濃度的增加,黃酮質(zhì)量濃度變化不大。因此,為節(jié)約成本,試驗(yàn)中選擇用70%的乙醇作為溶劑。

    2.3.2 提取溫度的考查

    提取溫度對(duì)黃酮質(zhì)量濃度的影響見圖4。

    圖4 提取溫度對(duì)黃酮質(zhì)量濃度的影響

    由圖4 可知,隨著提取溫度的升高,黃酮質(zhì)量濃度升高,當(dāng)提取溫度到達(dá)70 ℃時(shí),黃酮質(zhì)量濃度達(dá)到最大。所以,選擇提取溫度為70 ℃。

    2.3.3 提取時(shí)間的考查

    提取時(shí)間對(duì)黃酮質(zhì)量濃度的影響見圖5。

    圖5 提取時(shí)間對(duì)黃酮質(zhì)量濃度的影響

    由圖5 可知,隨著提取時(shí)間的增加,黃酮質(zhì)量濃度也在隨著增加,在150 h 之后不再增加。因此,選擇150 h 為最佳提取時(shí)間。

    2.4 兩款市售苦蕎醋沉淀中黃酮質(zhì)量濃度的測(cè)定

    在優(yōu)化試驗(yàn)條件的基礎(chǔ)上,分別提取兩款市售苦蕎醋沉淀中的黃酮,平行測(cè)定吸光度各3 次,取平均值,并按照蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線和公式(1) 得到黃酮質(zhì)量濃度分別為0.43 mg/mL 和0.31 mg/mL。

    3 結(jié)論

    用醇熱法,在優(yōu)化試驗(yàn)條件的基礎(chǔ)上對(duì)兩款市售苦蕎醋沉淀中的黃酮進(jìn)行了提取,并用紫外-可見分光光度法進(jìn)行了定量測(cè)定。結(jié)果顯示,沉淀中均有較高水平的黃酮類物質(zhì)。為苦蕎醋中活性物質(zhì)黃酮的的保護(hù)及生產(chǎn)工藝中黃酮類化合物的改性研究提供了理論基礎(chǔ)。

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