脂質(zhì)體遞藥系統(tǒng)的靶向修飾*

杜 桑 崔韶暉 陳星妍 張樹彪

（大連民族大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，生物技術(shù)與資源利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，大連 116600）

脂質(zhì)體（liposomes，LPs）是由脂質(zhì)雙層膜構(gòu)成的中空小球，在水相中，脂質(zhì)分子通常會(huì)自發(fā)聚集，以疏水尾部“尾對(duì)尾”、親水頭部“肩并肩”的形式形成一個(gè)雙層的中空囊泡，其中空的部分可以裝載親水性的藥物［1］，同時(shí)，其脂雙層之間又可以裝載親脂性藥物。由于LPs的這種特點(diǎn)，被認(rèn)為是一種良好的藥物載體。此外，LPs還有許多其他優(yōu)點(diǎn)，如粒徑可調(diào)控、穩(wěn)定性較好、具有緩釋作用、毒性低、生物相容性好、無(wú)免疫原性、造價(jià)低等［2］。LPs作為藥物載體，能夠很好地保護(hù)藥物免受外部介質(zhì)的傷害，可以減少藥物所引起的副作用，但是由于缺乏腫瘤靶向性，使得LPs藥物難以達(dá)到良好的治療效果。為了克服該缺點(diǎn)，研究者們開發(fā)出多種靶向修飾LPs。腫瘤細(xì)胞會(huì)高表達(dá)一些受體，靶向LPs就是在LPs表面插入可以與腫瘤細(xì)胞表面受體識(shí)別的修飾物，利用修飾物與受體的特異性識(shí)別與結(jié)合作用，將LPs攜帶的藥物遞送進(jìn)腫瘤細(xì)胞，進(jìn)而達(dá)到治療腫瘤的目的［3］。根據(jù)靶向修飾物的類型不同，可分為多肽類、抗體類、糖類、配體類、核酸適配體類5個(gè)主要類型（圖1）。本文依據(jù)這5類，就近幾年來(lái)國(guó)內(nèi)外有關(guān)靶向修飾LPs遞藥系統(tǒng)的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

Fig. 1 Schematic diagram of the main types of targeting modified liposomes圖1 靶向修飾脂質(zhì)體主要類型的示意圖

1 多肽修飾的脂質(zhì)體

多肽分子是機(jī)體內(nèi)一類重要的生物活性物質(zhì)，參與機(jī)體的生長(zhǎng)發(fā)育以及代謝，同時(shí)也是蛋白質(zhì)水解的中間產(chǎn)物。多肽具有高特異性、高選擇性、尺寸小、易修飾和高生物相容性等優(yōu)點(diǎn)，此外，由于沒(méi)有三級(jí)結(jié)構(gòu)，多肽通常會(huì)更加穩(wěn)定，因此，多肽在靶向給藥方面具有非常廣闊的應(yīng)用前景［4］。按照多肽功能可大致分為靶向細(xì)胞多肽、細(xì)胞穿膜肽和靶向細(xì)胞穿膜肽三類［5］。

1.1 靶向細(xì)胞多肽修飾的脂質(zhì)體

靶向細(xì)胞多肽（homing peptide，HP）也稱歸巢肽，是一類與腫瘤細(xì)胞或腫瘤微環(huán)境因子結(jié)合的特異性多肽［4］。HP已被廣泛應(yīng)用于藥物遞送領(lǐng)域，其中以精氨酸（R）-甘氨酸（G）-天冬氨酸（D）三肽（RGD）組成的靶向活性肽最為典型。RGD能與整合素受體（αvβ3、αvβ5和αvβ1）選擇性結(jié)合，進(jìn)而促使RGD 修飾的LPs 與細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞膜發(fā)生相互作用。此外，有研究表明，相比于線狀的RGD肽，環(huán)狀的RGD 肽（cyclic RGD、cRGD）與整合素結(jié)合的效果更好［6-7］。

Fu等［6］用自主合成的三肽頭部的類脂N,N-雙十四烷氧酰胺乙基三聚鳥氨酸酰胺（CDO14）和二油酰磷脂酰乙醇胺（dioleoylphosphatidylethanolamine，DOPE）為基礎(chǔ)，制備了cRGD 修飾的LPs（cRGD/CD），同時(shí)搭載阿霉素（doxorubicin，DOX）用以靶向治療肺癌（圖2）。cRGD/CD-DOX的細(xì)胞攝入率更高，因?yàn)閏RGD能實(shí)現(xiàn)肺癌細(xì)胞靶向性，同時(shí)CDO14 脂質(zhì)體具有酸不穩(wěn)定性，即在溶酶體的酸性環(huán)境下，能夠解組裝，并實(shí)現(xiàn)溶酶體逃逸，從而釋放DOX以達(dá)到殺死腫瘤細(xì)胞的目的。體內(nèi)外研究結(jié)果均表明，相比于對(duì)照組，cRGD/CD-DOX有更強(qiáng)的抗腫瘤活性。

Fig. 2 Schematic diagram of cRGD modified liposomes targeting tumors［6］圖2 cRGD修飾的脂質(zhì)體靶向腫瘤示意圖［6］

由天冬酰胺（N）-甘氨酸（G）-精氨酸（R）組成的三肽NGR 可以與腫瘤細(xì)胞膜上的氨基肽酶N（aminopeptidase N，CD13）特異性結(jié)合，因此也被用于LPs靶向修飾［8］。Gu等［9］將NGR肽插入到包載紫杉醇（paclitaxel，PTX）的pH 敏感LPs 表面，以CD13 高表達(dá)的人纖維肉瘤細(xì)胞HT-1080 為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，NGR 肽修飾的LPs 能特異性靶向HT-1080細(xì)胞，并顯著提高LPs的抗腫瘤活性。

HP 通過(guò)與細(xì)胞表面的受體結(jié)合，能有效將其修飾的LPs 攜帶進(jìn)入腫瘤細(xì)胞，顯示出HP 修飾的LPs 在腫瘤治療中具有巨大潛力。然而，目前HP修飾LPs的應(yīng)用仍然受到限制，其中關(guān)鍵的問(wèn)題在于這些多肽的受體主要存在于腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞，并不具有腫瘤治療的普適性。因此，提高對(duì)HP普適性篩選的研究十分重要。

1.2 細(xì)胞穿透肽修飾的脂質(zhì)體

細(xì)胞穿透肽（cell-penetrating peptide，CPP）是一類體積小、氨基酸序列短的多肽序列。其與脂質(zhì)雙層具有高親和力，當(dāng)CPP 與細(xì)胞膜結(jié)合時(shí)，這些多肽序列能夠負(fù)責(zé)膜轉(zhuǎn)位，進(jìn)而使CPP 內(nèi)化進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)［10］。CPP具有將藥物載體快速、高效、無(wú)毒地輸送到細(xì)胞中的巨大前景，為解決因進(jìn)入細(xì)胞受阻的治療方式提供了新方向［11］。

反 式 激 活 轉(zhuǎn) 錄 蛋 白 （transactivative transcription protein，TAT）是從人類免疫缺陷病毒中發(fā)現(xiàn)的一個(gè)富含精氨酸序列的多肽，具有CPP的 性 質(zhì)。Kuai 等［12］設(shè) 計(jì) 了 一 種 由 聚 乙 二 醇（polyethylene glycol，PEG） 和TAT 修 飾 的 可 控LPs。其中PEG 由二硫鍵連接，可以保護(hù)性遮擋TAT，當(dāng)添加完全裂解劑L-半胱氨酸（L-Cys）時(shí)可以斷裂二硫鍵，釋放PEG 的空間位阻，從而暴露“功能分子”TAT，TAT 可以提高LPs 的細(xì)胞攝取，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞對(duì)LPs攝入的控制。由于CPP本身缺乏靶向性，單獨(dú)修飾CPP的LPs往往無(wú)法實(shí)現(xiàn)靶向腫瘤目的，為了解決這個(gè)問(wèn)題，Shi 等［13］設(shè)計(jì)了一種同時(shí)具有主動(dòng)靶向整合素αvβ3和細(xì)胞穿膜功能的多肽，它是由cRGD 和CPP 組成的串聯(lián)肽。研究結(jié)果顯示，該串聯(lián)肽修飾的紫杉醇LPs對(duì)荷瘤小鼠的抑瘤率達(dá)到85.04%，且小鼠的存活率明顯高于其他各對(duì)照組。

CPP具有很強(qiáng)的細(xì)胞穿透能力。用CPP修飾載藥的LPs能有效提高細(xì)胞攝入率，但是由于CPP不能特異識(shí)別腫瘤組織細(xì)胞，可能存在對(duì)正常組織細(xì)胞產(chǎn)生傷害的風(fēng)險(xiǎn)。因此，往往需要對(duì)CPP 進(jìn)行進(jìn)一步的設(shè)計(jì)或是同時(shí)聯(lián)合靶向基團(tuán)共修飾LPs，以達(dá)到既增強(qiáng)靶向作用又能提高癌細(xì)胞攝入率的目的。

1.3 靶向細(xì)胞穿膜肽修飾的脂質(zhì)體

靶向細(xì)胞穿膜肽（cell-penetrating homing peptides， CPHPs）同時(shí)擁有細(xì)胞靶向和細(xì)胞穿膜的功能。Sugahara 等［14］篩選出一種靶向細(xì)胞穿膜肽（internalizing RGD，iRGD），iRGD 是指內(nèi)化RGD，其氨基酸序列為CRGDKGPDC，能主動(dòng)靶向識(shí)別高表達(dá)整合素αvβ3受體的腫瘤細(xì)胞，且具有穿膜作用。iRGD 遵循多步腫瘤靶向機(jī)制，首先完整的肽結(jié)合到表達(dá)整合素αvβ3受體的細(xì)胞表面，隨后被蛋白質(zhì)水解，產(chǎn)生CRGDK 片段，CRGDK 片段對(duì)整合素αvβ3受體親和力較低而對(duì)神經(jīng)黏連蛋白1 親和力較高，促使CRGDK 從整合素αvβ3受體轉(zhuǎn)移到神經(jīng)黏連蛋白1，由此產(chǎn)生了穿膜活性［14］。

Deng 等［15］制備了iRGD 修飾的包載DOX 的LPs（iRGD-LTSL-DOX）。該LPs 利用iRGD 的靶向性和細(xì)胞穿透性，將藥物載體帶入腫瘤細(xì)胞，釋放DOX 以達(dá)到殺傷腫瘤細(xì)胞的作用。體外實(shí)驗(yàn)比較了對(duì)αvβ3表達(dá)程度不同的細(xì)胞靶向能力，結(jié)果顯示，iRGD-LTSL-DOX 在高表達(dá)αvβ3的細(xì)胞中，其靶向能力是LTSL-DOX 的1.8~2 倍。該結(jié)果表明，iRGD 修飾的LPs 能有效靶向到腫瘤細(xì)胞中并實(shí)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。Yu 等［16］利用修飾有iRGD的空間穩(wěn)定性LPs（iRGD-SSL-DOX）進(jìn)行黑色素瘤的治療。黑色素瘤細(xì)胞B16-F10過(guò)表達(dá)αv整合素受體，能識(shí)別iRGD 修飾的LPs。體外以及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，iRGD 修飾的LPs 具有更高的腫瘤靶向性和腫瘤穿透活性。體內(nèi)抗腫瘤結(jié)果表明，iRGD-SSL-DOX對(duì)B16-F10荷瘤小鼠的抗黑色素瘤作用強(qiáng)于SSL-DOX。

利用多肽修飾LPs將藥物輸送到癌細(xì)胞的研究越來(lái)越受關(guān)注，體內(nèi)外的研究也都顯示著良好的結(jié)果［17］。多肽修飾的LPs 可以增加所攜帶藥物在腫瘤細(xì)胞中的富集，提高腫瘤治療的效果，顯示出其良好的研究?jī)r(jià)值和應(yīng)用前景。但是由于多肽自身存在一些限制因素，如缺乏靶向性、靶向普適性等。因此，如何解決多肽存在的限制因素是未來(lái)研究的重要關(guān)鍵。

2 抗體修飾的脂質(zhì)體

抗 體 修 飾 的 LPs 即 免 疫 脂 質(zhì) 體（immunoliposomes，IL），是將單抗或抗體功能化片段插入LPs表面，借助抗體與靶細(xì)胞表面抗原特異性結(jié)合，從而使LPs遞藥系統(tǒng)富集于靶細(xì)胞，減少藥物副作用［18］。IL 依據(jù)靶頭抗體可分類為完整抗體、單克隆抗體、抗體Fab 片段和單鏈抗體（single chain fragment variable，scFv）［18-19］。其中完整抗體由于體積過(guò)于巨大，不利于LPs的體內(nèi)循環(huán)，且專一性不強(qiáng)，所以目前很少使用完整抗體作為修飾體。

2.1 單克隆抗體修飾的脂質(zhì)體

利用雜交瘤技術(shù)將骨髓瘤細(xì)胞和可分泌抗體的B淋巴細(xì)胞融合，再經(jīng)過(guò)篩選和克隆化得到大量單克隆細(xì)胞株，該細(xì)胞株產(chǎn)生的高度均一、僅針對(duì)某一特定抗原的抗體即為單克隆抗體。單克隆抗體具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、交叉反應(yīng)少的優(yōu)點(diǎn)。

Petrilli 等［20］將西妥昔單抗與荷載5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU）的LPs 連接，制備成裝載5-FU 的IL， 用于靶向表皮生長(zhǎng)因子受體（epidermal growth factor receptors，EGFR）高表達(dá)的鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞SCC。通過(guò)IL與普通LPs對(duì)比研究發(fā)現(xiàn)，SCC 細(xì)胞對(duì)西妥昔單抗修飾的IL 的攝取是非修飾LPs 的3.5 倍。在體內(nèi)，皮下注射IL 與陰性對(duì)照相比，腫瘤體積減少了60%以上；與游離5-FU 溶液和對(duì)照LPs 治療相比，腫瘤體積減少約50%。Survivin 抑制劑YM155［21］是一種有前途的治療神經(jīng)細(xì)胞瘤的藥物，但其利用率低限制了其使用。Gholizadeh 等［21］利用二棕櫚酰磷脂酰膽堿（1,2-dihexadecanoyl-rac-glycero-3-phosphocholine，DPPC）為脂質(zhì)載體裝載YM155，同時(shí)修飾上抗二唾 液 酸 神 經(jīng) 節(jié) 苷 脂 （monoclonal antidisialoganglioside，GD2）單克隆抗體，使LPs具有特異性識(shí)別成神經(jīng)腫瘤細(xì)胞的功能。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，GD2修飾的LPs與成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞的結(jié)合能力增加了4 倍，并且，由于LPs 的保護(hù)，使得YM155 在血漿中維持較高的水平，能有效殺傷神經(jīng)瘤細(xì)胞。

單克隆抗體在靶向修飾藥物載體研究方面具有較好的應(yīng)用前景，利用其專一性與抗原結(jié)合的特點(diǎn)，可以精準(zhǔn)地將藥物載體帶入到靶細(xì)胞內(nèi)。但單克隆抗體的制備對(duì)于技術(shù)有一定的要求，這限制了其大規(guī)模的應(yīng)用。此外，對(duì)于單克隆抗體自身所帶來(lái)的細(xì)胞毒性也還缺乏較為深入的研究。

2.2 抗體Fab片段修飾的脂質(zhì)體

抗體Fab片段是抗體在蛋白水解酶的作用下切割而來(lái)，由重鏈可變區(qū)、重鏈恒定區(qū)、輕鏈可變區(qū)、輕鏈恒定區(qū)以及一個(gè)二硫鍵組成［18，22］。Fab片段的尺寸較小，相比于整個(gè)抗體，其擁有更高的表面密度，更多的單位面積上可結(jié)合部位數(shù)量，以及優(yōu)秀的組織穿透能力［23］。

Khan等［24］制備了可以靶向治療人表皮生長(zhǎng)因子受體2（human EGFR 2，HER2）過(guò)表達(dá)的乳腺癌IL。LPs 表面插入HER2 抗體的Fab 片段，同時(shí)裝載脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，F(xiàn)ASN）的siRNA用于抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖。對(duì)HER2過(guò)表達(dá)的乳腺癌SK-BR3細(xì)胞進(jìn)行治療，結(jié)果顯示，制備的FASN-siRNA 修飾的LPs 都表現(xiàn)出明顯更高的細(xì)胞攝取和內(nèi)化效率，細(xì)胞的存活率降至20%，而對(duì)于HER-2 低表達(dá)的乳腺癌MCF-7 細(xì)胞，其存活率則降至36%。該結(jié)果顯示出抗體Fab片段修飾的LPs 具有良好的腫瘤靶向能力。同樣針對(duì)乳腺癌，Li 等［25］制備了修飾有ErbB2 抗體Fab 片段的LPs，可以通過(guò)乳腺癌細(xì)胞上的ErbB2 受體達(dá)到靶向目的，得到較好的治療效果。

抗體Fab片段體積小、穿透力高，且由于沒(méi)有Fc 片段，不會(huì)受到巨噬細(xì)胞和B 細(xì)胞等免疫細(xì)胞上Fc 受體的影響，能躲避機(jī)體的免疫監(jiān)控，將所攜帶的藥物載體運(yùn)送至靶細(xì)胞。當(dāng)然，由于沒(méi)有Fc 片段，抗體Fab 片段的降解速度也會(huì)加快，因此，如何提高抗體Fab片段的穩(wěn)定性，減緩其在體內(nèi)的降解速度將是抗體Fab片段使用的一個(gè)亟需解決的問(wèn)題。

2.3 單鏈抗體修飾的脂質(zhì)體

scFv是由抗體重鏈高變區(qū)和輕鏈高變區(qū)兩部分通過(guò)一個(gè)短肽連接而成的抗體，scFv含有完整的抗原結(jié)合位點(diǎn)，是具有抗體活性的最小功能結(jié)構(gòu)單位，因其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、穿透能力強(qiáng)并且制備成本低而成為目前最先進(jìn)的IL靶頭抗體形式［26］。

頭頸部鱗狀細(xì)胞癌（squamous cell carcinoma of head and neck，SCCHN）是世界第5 大常見癌癥，由于該區(qū)域的解剖學(xué)復(fù)雜性，完全手術(shù)切除幾乎是不可能的。Wang 等［27］制備了一種可以靶向SCCHN 的IL，該LPs 利用抗EGFR 人源scFv 作為靶向修飾物，包載DOX 用以殺傷腫瘤細(xì)胞。體外的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，相比于非靶向LPs，IL 增強(qiáng)了SCCHN 細(xì)胞的內(nèi)吞作用，并顯著降低藥物遞送載體的半數(shù)抑制濃度（IC50）。小鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，利用IL 治療的小鼠中位存活時(shí)間顯著延長(zhǎng)，且沒(méi)有明顯的全身毒性增加。Saeed 等［28］利用黑色素瘤抗原A1 的T 細(xì)胞受體樣抗體的scFv 片段，修飾包載DOX 的LPs 用于靶向治療黑色素瘤，通過(guò)對(duì)比非靶向LPs，黑色素瘤細(xì)胞在體外對(duì)IL的結(jié)合和內(nèi)化更明顯。細(xì)胞毒性結(jié)果顯示，雖然非靶向LPs和靶向LPs體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)相似，但是靶向LPs的蓄積量要明顯高于非靶向LPs，抗腫瘤活性也更優(yōu)于非靶向LPs。

上述研究將抗體與LPs結(jié)合，利用抗體與抗原具有強(qiáng)專一性，設(shè)計(jì)出針對(duì)腫瘤治療的IL，既能減少藥物的副作用，又能提高療效［18］。抗體作為靶向修飾物制備IL似乎是提高LPs靶向不足的有效方法［19］。目前，對(duì)于IL 的研究仍有不足，需要考慮到抗體的半衰期較短，且儲(chǔ)存條件較為苛刻，不利于LPs遞藥系統(tǒng)的大規(guī)模應(yīng)用，同時(shí)，當(dāng)抗體與抗原結(jié)合時(shí)，其自身就會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞毒性，這些細(xì)胞毒性是否影響IL 的功能還需要進(jìn)一步的研究。相信隨著技術(shù)的發(fā)展，IL 的臨床應(yīng)用也有望成為現(xiàn)實(shí)。

3 糖基修飾的脂質(zhì)體

糖類是細(xì)胞能量的主要來(lái)源，細(xì)胞通過(guò)糖酵解產(chǎn)生ATP來(lái)供給能量。腫瘤細(xì)胞相比于正常細(xì)胞，失去生長(zhǎng)控制能力，因此需要攝入大量的ATP 來(lái)維持生存，而細(xì)胞膜表面葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體（glucose transporters，GLUT）的表達(dá)增加可以滿足這一要求，GLUT不僅特異性轉(zhuǎn)運(yùn)葡萄糖，還能轉(zhuǎn)運(yùn)半乳糖、甘露糖及其衍生物等［29］，同時(shí)，糖類還參與細(xì)胞的許多代謝過(guò)程。此外，基于不同細(xì)胞的特點(diǎn)，細(xì)胞表面還會(huì)特異性表達(dá)多種糖受體，這提示，可以將糖基作為配體來(lái)修飾LPs，實(shí)現(xiàn)靶向腫瘤細(xì)胞目的。

3.1 葡萄糖及其衍生物修飾的脂質(zhì)體

葡萄糖是細(xì)胞能量來(lái)源的基本物質(zhì)，一般細(xì)胞表面都會(huì)表達(dá)GLUT用于攝入葡萄糖，由于腫瘤失去生長(zhǎng)控制能力，對(duì)于能量的需求極大，這就導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞表面會(huì)過(guò)量表達(dá)GLUT 來(lái)維持其能量需求，葡萄糖修飾的LPs就是利用腫瘤細(xì)胞表面過(guò)表達(dá)的GLUT為靶向目標(biāo)來(lái)實(shí)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的精準(zhǔn)靶向藥物遞送［30］。Mu 等［31］設(shè)計(jì)了一種新型功能性葡萄糖偶聯(lián)材料TPGS1000-Glu，由葡萄糖衍生物4-氨基苯基-D-吡喃葡萄糖苷（4-aminophenyl-β-Dglucopyranoside，Glu）和維生素E 衍生物D-α-生育酚聚乙二醇1000 琥珀酸酯（D-α-tocopherol polyethylene glycol 1000 succinate，TPGS1000）組成，Glu 具有腫瘤靶向性，TPGS1000 具有抑制腫瘤藥物外排和改善藥物溶解性的作用，TPGS1000-Glu 通過(guò)插入到LPs 以實(shí)現(xiàn)腫瘤靶向的目的，同時(shí)LPs攜帶表阿霉素用于治療腦膠質(zhì)瘤。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，TPGS1000-Glu 修飾的表阿霉素LPs 包封率高且多分散指數(shù)小，與非靶向LPs對(duì)比，其不僅能夠跨過(guò)血腦屏障（blood brain barrier，BBB），同時(shí)具有更強(qiáng)的藥物攝取和抗膠質(zhì)瘤作用。Shen等［32］利用烷基葡萄糖苷的葡萄糖片段作為靶向頭部對(duì)LPs進(jìn)行修飾，包載雙氫青蒿素（dihy-droartemisinin，DHA）用于抗肝癌治療。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，該LPs對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2 具有良好的靶向性，抗腫瘤活性明顯增加。

利用葡萄糖作為靶向配體是一種很有前途的修飾方式，葡萄糖來(lái)源廣、價(jià)格低，且GLUT在腫瘤細(xì)胞上高表達(dá)，這為葡萄糖的應(yīng)用提供了可能性。當(dāng)然，目前關(guān)于葡萄糖作為靶向配體的研究還比較少，且研究多以體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)行，仍需要進(jìn)行更多的相關(guān)性實(shí)驗(yàn)來(lái)對(duì)這種修飾方式進(jìn)行檢驗(yàn)。

3.2 半乳糖及其衍生物修飾的脂質(zhì)體

半乳糖（galactose， Gal）是廣泛存在于奶產(chǎn)品或甜菜中的一種單糖，是某些糖蛋白的重要成分。肝細(xì)胞表面存在一類半乳糖受體，也被稱為唾液酸糖蛋白受體（asialoglycoprotein receptor，ASGPR），可以特異性與Gal 結(jié)合，以受體介導(dǎo)的胞吞作用大量攝入Gal 進(jìn)行分解代謝和再循環(huán)［33-34］。因此Gal可以作為靶向修飾物，實(shí)現(xiàn)藥物載體的肝癌細(xì)胞靶向。

Liu 等［35］制備了包載去甲斑螯素片的ASGPR靶向LPs。該LPs 是利用二硬脂?；字Ｒ掖及? 聚乙二醇（1, 2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-Poly，DSPE-PEG） 與Gal 結(jié)合形成半乳糖化LPs（Gal-Lipo）。GAL-Lipo 通過(guò)其LPs 外側(cè)的Gal 末端分子和HepG2 細(xì)胞上的ASGPR 選擇性結(jié)合，然后利用受體介導(dǎo)的胞吞作用將攜帶藥物的LPs攝入HepG2細(xì)胞內(nèi)達(dá)到富集藥物的作用。體外實(shí)驗(yàn)表明，相比于未經(jīng)Gal修飾的LPs，GAL-Lipo 被顯著地內(nèi)化到HepG2 細(xì)胞中，這也意味著更多的藥物能被輸送到細(xì)胞內(nèi)。Wang等［36］制備了以Gal修飾的LPs，以熱激活延遲熒光（thermally activated delayed fluorescence，TADF）為熒光探針評(píng)價(jià)LPs靶向腫瘤細(xì)胞的能力，共聚焦顯微鏡和流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果表明，與空白PEGDSPE 修 飾 的LPs 相 比，HepG2 細(xì) 胞 對(duì)Gal-PEGDSPE修飾的LPs的攝取效率更高。

Gal 修飾的LPs 展現(xiàn)出了其優(yōu)異的肝癌細(xì)胞靶向能力，通過(guò)與ASGPR 結(jié)合，將LPs 以受體介導(dǎo)的胞吞作用攝入細(xì)胞。因此，Gal是肝癌細(xì)胞靶向載體理想的修飾物。當(dāng)然，Gal 修飾的LPs 也存在需要解決的問(wèn)題，雖然，Gal 修飾的LPs 可以相對(duì)精準(zhǔn)定位于肝癌細(xì)胞，但是在肝癌治療中，如何避免對(duì)正常肝細(xì)胞損傷還需要更為深入的研究。

3.3 甘露糖及其衍生物修飾的脂質(zhì)體

甘露糖（mannose，Man）是一種單糖，是多種多糖的重要組成成分，在人體代謝過(guò)程中，具有重要作用。Man 可以與甘露糖受體（mannose receptor，MR）結(jié)合，用于修飾藥物載體進(jìn)行癌癥治療［30］。MR 是一種高效的內(nèi)源性受體。其功能包括清除內(nèi)源性分子、促進(jìn)抗原提呈、調(diào)節(jié)細(xì)胞活化和運(yùn)輸。它在腫瘤轉(zhuǎn)移和免疫逃避中也起著重要作用［37-38］。

Xiong 等［38］以包載PTX 的LPs 為基礎(chǔ)，通過(guò)在LPs 表面插入Man，制備了Man 修飾的紫杉醇LPs （PTX-Man Lips），該LPs能夠靶向MR，用于提高PTX對(duì)MR高表達(dá)的結(jié)直腸癌的治療作用。小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在治療21 d后，相比生理鹽水 組、PTX-Lips 組、Man Lips 組 和PTX-Lips 組，PTX-Man Lips 顯示出更高的抗腫瘤活性，同時(shí)與生理鹽水對(duì)照組相比，PTX-Man Lips 腫瘤抑制率為69.79%。表明Man 修飾的LPs 有可能成為結(jié)直腸癌靶向治療的潛在給藥系統(tǒng)。

天然糖類物質(zhì)具有較好的生物安全性和生物降解性，獲取來(lái)源廣，價(jià)格低廉，有良好的靶向功能，因此具有廣泛的應(yīng)用前景［34］。表1 例舉了以糖類為靶向修飾物的相關(guān)信息。利用細(xì)胞膜表面的糖受體與糖類物質(zhì)特異性結(jié)合是該修飾的關(guān)鍵。在研究中，需要考慮細(xì)胞表面相應(yīng)糖受體表達(dá)的差異性。此外，糖類修飾的LPs所產(chǎn)生的細(xì)胞毒性還未見系統(tǒng)性報(bào)道。目前，糖類修飾LPs的研究尚處于初步階段，仍有大量問(wèn)題需要解決，但是相信隨著技術(shù)的發(fā)展，糖類修飾的LPs可以取得更大進(jìn)步。

Table 1 Summary of targeting liposomes with glycosylation modifications表1 糖基化修飾的靶向脂質(zhì)體匯總

4 配體修飾的脂質(zhì)體

由于癌細(xì)胞基因表達(dá)的改變，不同癌細(xì)胞會(huì)過(guò)度表達(dá)一些特殊的受體，而正常細(xì)胞低表達(dá)或不表達(dá)這些受體。因此，在LPs表面修飾上可以與這些受體結(jié)合的配體，能夠使LPs特異性地識(shí)別這些癌細(xì)胞或組織，實(shí)現(xiàn)靶向遞送［40］。目前，基于細(xì)胞表面受體特異性結(jié)合的配體研究主要集中于葉酸（folic acid， FA）、 表 皮 生 長(zhǎng) 因 子（epidermal growth factor，EGF） 及 轉(zhuǎn) 鐵 蛋 白（transferrin，TF）等。

4.1 葉酸修飾的脂質(zhì)體

FA 是一種水溶性維生素，是機(jī)體中參與一碳單位轉(zhuǎn)移的重要輔助因子，也是基因復(fù)制的必需物質(zhì)。葉酸受體（folate receptor，F(xiàn)AR）是細(xì)胞有效攝入FA而特異性表達(dá)的糖蛋白膜受體，對(duì)FA具有高親和力。當(dāng)FA 與靶細(xì)胞上FAR 特異性結(jié)合時(shí)，能通過(guò)受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用被內(nèi)化進(jìn)入細(xì)胞，研究發(fā)現(xiàn)在一些腫瘤細(xì)胞表面會(huì)高表達(dá)FAR，以便攝取更多的FA，這提示FAR 可以作為潛在的靶點(diǎn)用于腫瘤靶向治療［41-42］。

Nguyen 等［43］制 備 了FA 修 飾 的 靶 向LPs（FA@AuNR-DOX-LPs）協(xié)同化療和光熱療法治療乳腺癌。如圖3所示，該LPs表面修飾FA，內(nèi)部包裹金納米棒（AuNR）和DOX。通過(guò)對(duì)比FA 修飾的LPs 與非靶向LPs 的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，F(xiàn)A 修飾的LPs具有更高的細(xì)胞攝入率，表明其具有更強(qiáng)的靶向能力。此外，荷瘤小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，靶向LPs聯(lián)合治療可以有效抑制腫瘤的生長(zhǎng)。Tie等［44］則利用FA 修飾的LPs（F-PLP/pBIM）遞送BIM-S基因來(lái)治療肺癌。BIM-S基因翻譯促凋亡蛋白BIM，BIM已被證明是細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，F(xiàn)-PLP/pBIM 能特異性抑制肺癌生長(zhǎng)，減少腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)，減輕腫瘤重量。

Fig. 3 Schematic of FA-modified liposomes co-encapsulated by AuNR and DOX for treating breast cancer［43］圖3 AuNR和DOX共同包封的FA修飾的脂質(zhì)體治療乳腺癌示意圖［43］

FA 作為靶向修飾物的研究已經(jīng)受到廣泛的關(guān)注，因?yàn)镕AR 在多種腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)。許多研究證明，F(xiàn)A 可以非常高效地將LPs 攜帶進(jìn)入腫瘤細(xì)胞。雖然，F(xiàn)A 修飾的LPs 研究取得了較大的進(jìn)展，但是仍有一些問(wèn)題有待解決，例如，F(xiàn)A 修飾的LPs進(jìn)入細(xì)胞后的釋放機(jī)制仍不明確，由此所帶來(lái)的可能的細(xì)胞毒性也需要進(jìn)一步的闡明。

4.2 表皮生長(zhǎng)因子修飾的脂質(zhì)體

EGFR是細(xì)胞生理的重要調(diào)節(jié)因子，在細(xì)胞增殖、存活和分化過(guò)程中起著重要的調(diào)節(jié)作用［45］。當(dāng)EGF結(jié)合EGFR后，會(huì)引發(fā)EGFR的二聚化和內(nèi)源性激酶的激活，然后通過(guò)網(wǎng)格蛋白依賴的胞吞作用內(nèi)化EGF。EGFR的激活通常會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。研究表明，當(dāng)細(xì)胞發(fā)生癌變時(shí)，EGFR過(guò)表達(dá)，正常細(xì)胞一般每個(gè)細(xì)胞表達(dá)4×104~1×105個(gè)EGFR，而腫瘤細(xì)胞每個(gè)細(xì)胞可表達(dá)2×106個(gè)EGFR，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞快速增殖，這使得EGFR 成為理想的靶向研究位點(diǎn)［46］。

Thomas等［47］報(bào)道了一種具有EGFR靶向能力的LPs（111In-EGF-LP-Dox），該LPs裝載DOX的同時(shí)進(jìn)行高劑量的放射性111In 標(biāo)記。研究對(duì)比了EGFR 高表達(dá)的MDA-MB-468 和低表達(dá)的MCF-7兩種細(xì)胞的細(xì)胞攝取差異，111In-EGF-LP-Dox 在MDA-MB-468 細(xì)胞中攝取量更多，且聯(lián)合治療的實(shí)驗(yàn)組對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷效果更好。Wang 等［48］為了克服順鉑（cisplatin，CDDP）的毒副作用和低水溶解性，使用海藻酸鈉（sodium alginate，SA）包裹CDDP，構(gòu)建了以順鉑-海藻酸鈉（CS）為偶聯(lián)物的LPs（CS-EGF-Lip），并在LPs 上插入EGF用于靶向治療EGFR高表達(dá)的卵巢癌。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)比非靶向的LPs 和游離的CDDP，CS-EGFLip能明顯抑制腫瘤的生長(zhǎng)和遷移，基本不會(huì)影響小鼠的體重，且腎毒性較低。Huang 等［49］將酵母胞嘧啶脫氨酶（yeast cytosine deaminase，F(xiàn)cy）和人表皮生長(zhǎng)因子（human EGF，hEGF）利用基因工程技術(shù)形成融合蛋白Fcy-hEGF，然后將FcyhEGF 插入到包裹治療用放射性核素188Re 的LPs 表面，構(gòu)建了新型LPs（188Re-liposome-Fcy-hEGF）。融合蛋白Fcy-hEGF能夠與EGFR結(jié)合，同時(shí)，F(xiàn)cy可以將5-氟胞嘧啶（5-fluorocytosine，5-FC）酶促轉(zhuǎn)化為1 000倍毒性的5-FU以達(dá)到殺傷腫瘤細(xì)胞的效果。

4.3 轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的脂質(zhì)體

TF 是一種能夠以高親和力可逆結(jié)合三價(jià)鐵原子的蛋白質(zhì)，通過(guò)與細(xì)胞膜上的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體（transferrin receptor，TFR）結(jié)合從而將結(jié)合的鐵原子內(nèi)化進(jìn)細(xì)胞［50］。TFR 在各種正常組織上普遍表達(dá)，反映了細(xì)胞對(duì)鐵的代謝需求。多項(xiàng)研究表明相對(duì)于正常細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞表面的TFR 表達(dá)上調(diào)［51］，這使得TF成為精準(zhǔn)治療的有效靶點(diǎn)。

Jhaveri 等［52］設(shè) 計(jì) 了 修 飾 有TF 的LPs（TF-RES-L）， 將 包 載 的 藥 物 白 藜 蘆 醇（resveratrol，Res） 靶向到神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（glioblastoma，GBM），以實(shí)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的定向殺傷。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)Res 濃度約為200 μmol/L時(shí)，非靶向LPs（Res-L）處理的細(xì)胞存活率為61.9%，TF-RES-L 處理的細(xì)胞存活率為54.2%。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，TF-RES-L對(duì)裸鼠的腫瘤生長(zhǎng)抑制作用明顯優(yōu)于對(duì)照組，表明TF 的修飾可以為L(zhǎng)Ps 提供有效的靶向性。全乳鐵蛋白（hololactoferrin，Lf）是一種天然的鐵飽和乳鐵蛋白，具有多種生理功能，可作為TFR 的潛在配體［53］。Zhang 等［53］利用全乳鐵蛋白修飾包載DOX 的LPs（Lf-Liposome-Dox）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，該LPs 不僅可以靶向蓄積在TFR 高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞中，還可以催化H2O2轉(zhuǎn)化為氧氣，能有效緩解腫瘤缺氧微環(huán)境，并可以結(jié)合在X 射線（X-ray）的照射下增強(qiáng)其化療效果，顯著抑制小鼠體內(nèi)的腫瘤生長(zhǎng)。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示全乳鐵蛋白LPs 有巨大的腫瘤治療潛力。

總之，依賴于受體的主動(dòng)靶向LPs很有臨床應(yīng)用前景，但該系統(tǒng)有一個(gè)亟需解決的問(wèn)題，即受體是正常細(xì)胞存活所必需的，當(dāng)以腫瘤細(xì)胞過(guò)表達(dá)的受體為靶標(biāo)時(shí)，難免會(huì)因?yàn)檎＜?xì)胞也存在本底水平的受體表達(dá)而被“誤傷”。雖然配體修飾的LPs仍有很多尚未解決的問(wèn)題，但其已在靶向治療研究中顯示出巨大優(yōu)勢(shì)。

5 核酸適配體修飾的脂質(zhì)體

核酸適配體（aptamers）是通過(guò)富集配體系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)（SELEX）從隨機(jī)的DNA或RNA文庫(kù)中篩選出來(lái)的一類具有高特異性、強(qiáng)親和力、能精準(zhǔn)識(shí)別目標(biāo)物的單鏈寡聚核苷酸［54-55］，aptamer 可通過(guò)二、三級(jí)結(jié)構(gòu)的折疊形成特定的三維空間構(gòu)型與靶分子高親和性、高特異性地相互作用［56］。Aptamer的目標(biāo)物具有多樣性，不僅能與小分子結(jié)合，甚至能與整個(gè)生物體結(jié)合［57］。相比于傳統(tǒng)的抗體，aptamer 具有合成簡(jiǎn)單、分子質(zhì)量更低、穩(wěn)定性更高、毒性更低、程序可控等優(yōu)點(diǎn)［58］。此外，有研究表明，在腫瘤學(xué)領(lǐng)域，aptamer 不會(huì)在全身給藥中刺激免疫系統(tǒng)的Fc 區(qū)域，同時(shí)具有更高的腫瘤穿透性、保留性，且能夠均勻分布［59-61］。Aptamers 根據(jù)其合成類型可分為DNA 和RNA兩類。

5.1 DNA核酸適配體修飾的脂質(zhì)體

Cao 等［62］于2009 年第一次利用aptamer 修飾LPs，用于藥物的靶向遞送治療。該LPs包載順鉑，表面修飾有適配體AS1411 （5'-GGT GGT GGT GGT TGT GGT GGT GGT GGT TTT TTT TTT TT-3'）。AS1411 與核仁素有很高的親和力，核仁素在多種癌細(xì)胞表面過(guò)度表達(dá)，利用這個(gè)特性，AS1411 修飾的LPs可以特異靶向癌細(xì)胞表面，將殺傷性藥物富集于癌細(xì)胞內(nèi)，達(dá)到精準(zhǔn)治療的目的。Yu 等［63］同樣利用適配體AS1411（5'-GGT GGT GGT GGT TGT GGT GGT GGT GG-3'）作為靶向修飾物制備出了AS1411 適配體功能化LPs （AS1411/Lipo-PTX-siPLK1），該LPs 同時(shí)包載有PTX 和PLK1 siRNA（siPLK1）用于對(duì)乳腺癌的治療。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，AS1411/Lipo-PTX-siPLK1可以使MCF-7細(xì)胞的PLK1 mRNA 表達(dá)下調(diào)約79%，而對(duì)照的PBS 組AS1411/Lipo-PTX-siCTR（非特異性siRNA組）則無(wú)明顯的下調(diào)作用。體內(nèi)的抗腫瘤活性結(jié)果顯示，經(jīng)S1411/Lipo-PTX-siPLK1 注射治療后，腫瘤生長(zhǎng)明顯受到抑制，且荷瘤小鼠的存活時(shí)間延長(zhǎng)。Ara 等［64］分離到一個(gè)DNA 適配體AraHH001（5'-ACG TAC CGA CTT CGT ATG CCA ACA GCC CTT TAT CCA CCT C-3'），AraHH001 可以特異性識(shí)別鼠腫瘤內(nèi)皮細(xì)胞（mouse tumor endothelial cells， mTECs），并利用該適配體修飾PEG 化LPs給藥系統(tǒng)（APT-PEG-LPs）。研究結(jié)果表明，適配體能有效增強(qiáng)mTECs 細(xì)胞對(duì)于APT-PEG-LPs 的攝取，并在一定程度上具有內(nèi)體逃逸能力。CRISPR/Cas9 是一種功能強(qiáng)大的基因編輯工具，具有特異性強(qiáng)、效率高等特點(diǎn)［65］。Liang 等［66］將CRISPR/Cas9技術(shù)與靶向修飾LPs結(jié)合，制備了一種可靶向骨肉瘤（osteosarcoma，OS）細(xì)胞的LPs遞送系統(tǒng)，該遞送系統(tǒng)包裹編碼血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A（vascular EGF A， VEGFA） gDNA 和Cas9 的CRISPR/Cas9 質(zhì)粒，表面修飾有靶向OS 細(xì)胞的適配 體LC09 （5'-GCT AAG CGG GTG GGA CTT CCT AGT CCC ACC CGC TTA GCA AAG TAG CGT GCA CTT TTG-3'）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該系統(tǒng)促進(jìn)了CRISPR/Cas9 在肺病變的原位OS 組織和轉(zhuǎn)移性O(shè)S 組織中的選擇性分布，并且有效降低了VEGFA的表達(dá)和分泌，抑制了原位OS的惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移，減少血管生成，且未檢測(cè)到毒性。Song等［67］篩選出可以靶向識(shí)別4T1細(xì)胞的適配體SRZ1（5'-CCT GAC AGT CGA GAC-N30-CAC CGG GGT CCT AGG-3'），將該適配體修飾于包載DOX 的LPs，用于靶向遞送藥物到4T1 細(xì)胞中以達(dá)到治療目的。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，SRZ1 修飾后的LPs 相比于空白LPs 而言，其細(xì)胞攝入率更高，腫瘤殺傷力更強(qiáng)。

5.2 RNA核酸適配體修飾的脂質(zhì)體

Baek等［68］合成了一種與前列腺特異性膜抗原（prostate specific membrane antigen， PSMA） 的RNA 適配體（5'-GGGAGGACGAUGCGGACCGAAAAAGACCUGACUUCUAUACUAAGUCUACGUUCCCAGACGACUCGCCCGA-3'） 偶 聯(lián) 的LPs（DOX-Aptamosome），利用適配體與膜上抗原結(jié)合，將包載DOX 的LPs 內(nèi)吞進(jìn)前列腺癌細(xì)胞LNCaP，以殺死癌細(xì)胞。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)比PSMA 陰性細(xì)胞PC-3，LNCaP 細(xì)胞內(nèi)有明顯的熒光，而PC-3 細(xì)胞則沒(méi)有觀察到熒光，同時(shí)通過(guò)與缺乏PSMA 適配體的對(duì)照LPs 對(duì)比，發(fā)現(xiàn)DOXAptamosome對(duì)LNCaP細(xì)胞的毒性明顯更大。小鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，DOX-Aptamosome主要分布在腫瘤和肝、腎中，并且隨著時(shí)間推移，肝、腎中的DOX-Aptamosome的分布在逐漸減少，小鼠體內(nèi)的腫瘤體積也在減小。這些結(jié)果表明，通過(guò)將藥物包裹在RNA 適配體修飾的LPs 中是一種潛在的靶向給藥策略。Bandekar 等［69］同樣利用PSMA 適配體A10 作為靶向修飾物，包載α 粒子生成器225Ac，利用225Ac 的高放射性實(shí)現(xiàn)殺死腫瘤細(xì)胞的目的。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，每個(gè)LPs 表面平均結(jié)合有（9±2）個(gè)A10，平均粒徑為（107±2）nm，且能夠很好地選擇性結(jié)合、內(nèi)化和殺死PSMA 陽(yáng)性的癌細(xì)胞。Zhen 等［70］利用A10 作為靶向修飾物，包載PLK1 CRISPR/Cas9系統(tǒng)，該系統(tǒng)可以沉默腫瘤細(xì)胞中生存基因Polo樣蛋白激酶1，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)殺死腫瘤細(xì)胞的目的。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，A10-LPs-CRISPR/Cas9遞送嵌合體能有效地靶向腫瘤細(xì)胞，在體外不僅具有顯著的基因沉默能力，同時(shí)在體內(nèi)可以觀察到明顯的腫瘤消退作用，且免疫應(yīng)答低。Moosavian等［71］制備了由TSA14 （5'-GCTGGAGCATTTATGGATGAACCTTGGACGGAA-3'） 修 飾 的 包 載DOX的LPs（aptamer-PL-Dox），TSA14 與Tubo 細(xì)胞有很高的親和力，Tubo 細(xì)胞是一種從BALB-neuT 小鼠乳腺癌體外建立的克隆系，過(guò)表達(dá)HER-2 受體（HER2/erb-2）。通過(guò)與非靶向LPs 相比，aptamer-PL-Dox在Tubo乳腺細(xì)胞系中的攝取率更高，毒性作用更強(qiáng)，腫瘤中Dox的蓄積也更多，抗腫瘤能力也有很大提高。Ma 等［72］制備了適配體A15（5＇-CCCUCCUACAUAGGG-3＇）修飾包載姜黃素的LPs用于前列腺癌治療。CD133是前列腺癌細(xì)胞表面高表達(dá)膜蛋白，適配體A15 可以和CD133 特異性結(jié)合，同時(shí)姜黃素作為一種植物化學(xué)物質(zhì)在治療前列腺癌方面顯示出巨大的潛力。該LPs在體內(nèi)外的實(shí)驗(yàn)結(jié)果都顯示出其具有良好的靶向抗腫瘤效果。

Aptamers 作為一種人工合成的短的單鏈DNA或RNA 分子，可以高親和力和特異性地與靶標(biāo)結(jié)合。研究表明，相比于抗體而言，aptamers較小的體積使其擁有比抗體更高的腫瘤穿透性，附著在納米顆粒表面的過(guò)程也比抗體更容易和更具重復(fù)性［61］。目前aptamers 已在癌癥治療研究方面受到關(guān)注，作為一種新興的技術(shù)手段，仍有許多問(wèn)題需要克服，例如，aptamers需要從隨機(jī)單鏈核酸序列文庫(kù)中篩選出來(lái)，具有很強(qiáng)的隨機(jī)性，無(wú)法通過(guò)人工設(shè)計(jì)，這顯著提高了aptamers 的制造成本。此外，由于人體的循環(huán)系統(tǒng)中存在核糖核酸酶，因此，aptamers的穩(wěn)定性也需要評(píng)估。期望隨著研究的深入和技術(shù)的發(fā)展，aptamers的應(yīng)用迎來(lái)更好的前景。

6 多靶向修飾脂質(zhì)體

單一靶向修飾的LPs 發(fā)展至今已經(jīng)比較成熟，然而，在臨床應(yīng)用中仍有不足之處。針對(duì)癌細(xì)胞受體的單靶向修飾往往會(huì)因?yàn)檎＜?xì)胞也表達(dá)了相應(yīng)受體而造成非選擇性的毒性。為了解決這個(gè)問(wèn)題，研究者們探索出對(duì)LPs進(jìn)行多靶點(diǎn)修飾的策略，進(jìn)一步提高了LPs遞藥系統(tǒng)的精準(zhǔn)靶向性。

甘草次酸受體（glycyrrhetinic acid recptor，GA-R）在大鼠肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞膜表面大量表達(dá)，肝癌組織中的GA-R 的表達(dá)是鄰近正常肝組織的1.5~5倍［73］，單獨(dú)使用GA修飾的LPs可能會(huì)引起正常肝細(xì)胞的損傷。為了解決這個(gè)問(wèn)題，Li 等［74］在GA修飾DOX 脂質(zhì)體的基礎(chǔ)上，將花生凝集素（peanut agglutinin，PNA）插入到LPs 表面，PNA可以與癌細(xì)胞上過(guò)表達(dá)的黏蛋白1 （mucin 1，MUC1）特異性結(jié)合，利用PNA和GA制成雙配體修飾的LPs（DOX-GA/PNA-Lips），從而實(shí)現(xiàn)對(duì)肝癌細(xì)胞的主動(dòng)靶向，避免對(duì)正常肝細(xì)胞的傷害。以MUC1陽(yáng)性肝癌細(xì)胞株SMMC07721 為靶細(xì)胞的體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，DOX-GA/PNA-Lips 對(duì)細(xì)胞的毒性作用最強(qiáng)，其IC50值為（7.4±0.79）μg/L，是游離DOX 的1/7，是無(wú)配體修飾LPs 的1/2，是單配體修飾LPs 的2/3，顯示出雙配體修飾的高靶向性和藥物傳遞效率。

多靶向修飾除了能夠提高LPs遞藥系統(tǒng)的靶向準(zhǔn)確性，還可以被設(shè)計(jì)用于層級(jí)靶向遞送。腦膠質(zhì)瘤是最常見的顱內(nèi)腫瘤，然而由于存在BBB，因此常規(guī)的LPs 無(wú)法精準(zhǔn)到達(dá)腦部腫瘤部位。Gao等［75］開發(fā)了由FA 和TF 雙修飾的LPs，可以實(shí)現(xiàn)多級(jí)靶向，將藥物準(zhǔn)確的送達(dá)腦膠質(zhì)瘤。TF 負(fù)責(zé)將LPs 特異靶向到BBB 上的TFR，在穿過(guò)BBB 之后，F(xiàn)A 可以特異性的靶向腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞上過(guò)表達(dá)的FAR，最終達(dá)到將LPs包封的藥物運(yùn)輸?shù)侥X膠質(zhì)瘤的目的。Wang等［76］設(shè)計(jì)了可以靶向肝癌細(xì)胞溶酶體的LPs（Gal-Mor-LPs），該LPs 表面修飾Gal和嗎啉（morpholine，Mor），內(nèi)部包載姜黃素。Gal 可以識(shí)別肝癌細(xì)胞上過(guò)表達(dá)的半乳糖受體，Mor 可以靶向溶酶體。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Gal-Mor-LPs 比LPs 和Gal-LPs 有著更好的溶酶體靶向性，且抗腫瘤作用也更強(qiáng)。

通過(guò)對(duì)LPs 進(jìn)行多靶向修飾設(shè)計(jì)，使LPs 具有更優(yōu)異的細(xì)胞選擇性、細(xì)胞攝取或腫瘤穿透能力，在腫瘤靶向治療中顯示出巨大優(yōu)勢(shì)。但是，在設(shè)計(jì)多靶向載體時(shí)應(yīng)進(jìn)行多方面評(píng)估，如配體的密度、位置、與受體的親和力等對(duì)靶向效果有較大影響的因素［77］。目前，多靶向修飾已經(jīng)受到研究人員的極大關(guān)注，通過(guò)在納米藥物載體表面修飾不同靶標(biāo)物，不僅可以提高腫瘤靶向遞送效果，更能賦予納米藥物載體更多功能，如克服BBB 和靶向細(xì)胞器等。因此，未來(lái)應(yīng)更多地關(guān)注多靶向納米藥物載體的設(shè)計(jì)，以促進(jìn)其臨床應(yīng)用。

7 展 望

隨著癌癥發(fā)病率愈來(lái)愈高，其治療方法的研究也在不斷提升，然而，癌細(xì)胞耐藥性以及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移使得癌癥的根治成為難點(diǎn)。精準(zhǔn)殺死癌細(xì)胞是癌癥治療的最高目標(biāo)。目前化療藥物是主要的癌癥治療方法之一，但是化療藥物在產(chǎn)生作用時(shí)，往往會(huì)波及到正常的細(xì)胞，這使得癌癥治療的副作用比較大，所以亟需對(duì)化療藥物進(jìn)行組合優(yōu)化研究。LPs作為一種藥物載體，有著巨大的應(yīng)用潛力，能將藥物包裹起來(lái)，通過(guò)對(duì)LPs 的靶向修飾，還可以使LPs擁有精準(zhǔn)定位腫瘤細(xì)胞并釋放藥物的能力，增強(qiáng)藥物的有效利用率，減少毒副作用。

本文概述了近年來(lái)靶向修飾LPs遞送系統(tǒng)的研究進(jìn)展，并對(duì)其進(jìn)行了分類綜述。目前的LPs研究主要集中在對(duì)其表面進(jìn)行靶向修飾，也有很多結(jié)合其他治療手段，如化療、光療、免疫療法等對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行聯(lián)合治療。雖然靶向LPs遞藥系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)明顯，但是由于許多靶向受體在正常細(xì)胞中也存在本底表達(dá)，這導(dǎo)致LPs遞藥系統(tǒng)也會(huì)被正常細(xì)胞識(shí)別攝入而引起不良反應(yīng)。另外，LPs遞藥系統(tǒng)的精準(zhǔn)控制釋放也是個(gè)亟需解決的問(wèn)題，若能解決上述問(wèn)題，LPs遞藥系統(tǒng)的研發(fā)和臨床應(yīng)用將獲得更大提升，也將進(jìn)一步推動(dòng)癌癥治療研究的發(fā)展。