血管硬化與MTHFR C677T基因多態(tài)性和同型半胱氨酸的相關(guān)性▲

朱芳萱 盧鋒

廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院(1 健康管理中心,2 老年心血管內(nèi)科),南寧市 530000

動(dòng)脈粥樣硬化是心血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,是引起心腦血管不良事件發(fā)生的主要原因,而動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的重要機(jī)制之一是血管內(nèi)皮細(xì)胞功能損傷。因此,正常血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的維持對(duì)預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化具有重要意義。血管內(nèi)皮細(xì)胞具有感應(yīng)局部血流剪切力改變、介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)的功能,血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)與結(jié)構(gòu)的重塑,可引起血管內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂,促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生。心踝血管指數(shù)不受血壓的影響,可定量反映主動(dòng)脈、股動(dòng)脈和脛骨動(dòng)脈的動(dòng)脈硬化情況[1]。研究表明,血清同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化和血栓的形成具有促進(jìn)作用[2],而亞甲基四氫葉酸還原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR) C677T位點(diǎn)基因突變可引起機(jī)體Hcy的代謝作用減弱,引起血清Hcy水平升高,從而參與動(dòng)脈粥樣硬化形成,增加心腦血管疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[3]。本研究探討廣西地區(qū)健康體檢人群血管硬化與MTHFR C677T位點(diǎn)基因多態(tài)性和血清Hcy水平的相關(guān)性,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2019年1月至2020年5月于我院健康管理中心體檢的460名健康體檢者。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)有慢性心臟病病史者;(2)有免疫系統(tǒng)性疾病者;(3)凝血功能障礙者;(4)肝腎功能不全者;(5)罹患惡性腫瘤者;(6)長(zhǎng)期服用葉酸、B族維生素等影響Hcy水平的藥物者。

1.2 指標(biāo)檢測(cè)

1.2.1 血壓 應(yīng)用上臂式電子血壓計(jì)(江蘇康尚生物醫(yī)療科技有限公司,蘇械注準(zhǔn)20192070076)測(cè)量血壓。受檢者測(cè)量前不吸煙、不飲酒、不飲濃茶或咖啡、不做劇烈運(yùn)動(dòng),安靜休息至少5 min后,取端坐位裸露右上臂,右上臂與心臟處于同一水平,將袖帶緊貼患者右上臂,袖帶下緣距肘彎處約2.5 cm,松緊度約能放2指;按下開始鍵充氣測(cè)量,連續(xù)測(cè)量3次,每次間隔≥2 min;取3次血壓測(cè)量值的平均值作為受檢者當(dāng)日的血壓。

1.2.2 血脂、空腹血糖和血清Hcy 于清晨采空腹肘靜脈血2 mL,4 000 r/min離心10 min,獲取血清,采用AU 5400型全自動(dòng)生化分析儀(美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司)檢測(cè)血清總膽固醇、三酰甘油水平。于清晨采空腹肘靜脈血2 mL,采用奧林巴斯AU 640生化分析儀檢測(cè)空腹血糖水平。于清晨采空腹肘靜脈血2 mL,4 000 r/min離心10 min,獲取血清,應(yīng)用Hcy檢測(cè)試劑盒[北京九強(qiáng)生物技術(shù)股份有限公司,國(guó)食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字2006第3400161號(hào)]、血同型半胱氨酸檢測(cè)儀(深圳奧薩醫(yī)藥有限公司)檢測(cè)血清Hcy水平。將血清Hcy水平>10 μmol/L定義為高Hcy[4]。

1.2.3 MTHFR C677T位點(diǎn)基因型檢測(cè) 取4 mL 外周靜脈血,提取DNA,置于-20℃冰箱保存。應(yīng)用羅氏LightCycler 480型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀擴(kuò)增MTHFR C677T。

正向引物為5′-CTTTGAGGCTGACCTGAAGC-3′,反向引物為5′-CTGGGAAGAACTCAGCGAAC-3′。FAM探針為5′-FAM-AGGTGTCTGCGGGAGTCGATTTC- TAMARA-3′,VIC探針為5′-VIC-AGGTGTCTGCGGGAGCCGATTTC-TAMARA-3′。擴(kuò)增條件:50℃ 5 min,94℃ 5 min;94℃ 25 s,56℃ 25 s,72℃ 25s,共35個(gè)循環(huán)。末次循環(huán)后,72℃延伸7 min。于72℃下收集熒光信號(hào),根據(jù)FAM通道和VIC通道所形成的擴(kuò)增曲線判斷MTHFR C677T位點(diǎn)基因型。

1.3 分組 采用日本福田VS-1000動(dòng)脈硬化檢測(cè)儀檢測(cè)心踝血管指數(shù)。心踝血管指數(shù)>9.0者納入血管硬化組,反之則納入非血管硬化組[5]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 21.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以x±s表示,兩組間均數(shù)的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分?jǐn)?shù)表示,兩組間的比較采用χ2檢驗(yàn)。血管硬化的影響因素分析采用多因素logistic回歸分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組患者臨床資料的比較 兩組患者的年齡、性別、收縮壓、舒張壓、血清總膽固醇水平、血清三酰甘油水平、空腹血糖水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。兩組患者的血清Hcy水平、MTHFR C677T位點(diǎn)基因型差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。見表1。

表1 兩組患者臨床資料的比較 [x±s, n(%)]

續(xù)表1

2.2 血管硬化影響因素的多因素logistic回歸分析 以有無血管硬化作為應(yīng)變量,以年齡、性別、血清Hcy水平、MTHFR C677T位點(diǎn)基因型作為自變量,進(jìn)行多因素logistic回歸分析(變量賦值情況見表2)。結(jié)果顯示,男性、血清Hcy水平高、MTHFR C677T位點(diǎn)CT型或TT型為血管硬化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(均P<0.05)。見表3。

表2 賦值表

表3 血管硬化影響因素的多因素logistic回歸分析

3 討 論

動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致血管內(nèi)膜增厚、狹窄閉塞和血栓的形成是心血管疾病最主要的病因。Hcy水平升高可以引起血液中產(chǎn)生大量的氧化基團(tuán),使血管內(nèi)皮細(xì)胞受損、內(nèi)皮功能紊亂,導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣斑塊的形成;還可以引起血管平滑肌細(xì)胞增殖,加速血管硬化進(jìn)展,使血管壁彈性下降。MTHFR是Hcy在機(jī)體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵酶之一[6],當(dāng)MTHFR C677T位點(diǎn)發(fā)生錯(cuò)義突變時(shí),MTHFR酶活性下降或缺乏,影響Hcy代謝,導(dǎo)致血清Hcy水平升高從而促進(jìn)血管硬化形成。MTHFR C677T位點(diǎn)基因分三型,即CC型、CT型和TT型,其中CC型稱為正?；蛐?TT型為純合子突變基因型,CT型為雜合子突變基因型。吳慶慶等[7]的研究報(bào)告,MTHFR C677T位點(diǎn)TT型老年高血壓患者的頸動(dòng)脈內(nèi)膜厚度和Hcy水平均大于/高于 CT型和 CC型患者。靳鈺等[8]的研究結(jié)果表明,MTHFR C677T位點(diǎn)TT型高血壓患者的冠心病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)明顯高于MTHFR C677T位點(diǎn)CC型和CT型患者。

本研究結(jié)果顯示,男性、血清Hcy水平高、MTHFR C677T位點(diǎn)CT型或TT型為血管硬化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。有研究[9]報(bào)告,MTHFR C677T位點(diǎn)基因多態(tài)性與高血壓患者Hcy水平密切相關(guān),而高水平的Hcy能夠直接損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能,造成機(jī)體凝血和纖溶功能紊亂,導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生和發(fā)展,增加缺血性腦卒中和冠心病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。有學(xué)者研究[10-13]發(fā)現(xiàn),MTHFR C677T位點(diǎn)C→T基因突變不僅與頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度增加有明顯的相關(guān)性,也是頸動(dòng)脈粥樣斑塊形成的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,使成人缺血性腦卒中和冠心病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加。分析其原因可能為:MTHFR C677T位點(diǎn)C→T基因突變可造成MTHFR活性下降,機(jī)體Hcy水平升高,從而發(fā)揮促動(dòng)脈血管硬化的作用[6,14];MTHFR C677T在動(dòng)脈內(nèi)彈力層斷裂中發(fā)揮重要作用,可促進(jìn)平滑肌細(xì)胞向內(nèi)膜遷移,從而引起動(dòng)脈粥樣硬化[9]。但也有研究認(rèn)為,MTHFR C677T位點(diǎn)基因多態(tài)性與缺血性腦卒中后Hcy水平升高和頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度增加無關(guān)[15]。

梁長(zhǎng)流等[16]的研究報(bào)告:MTHFR C677T位點(diǎn)TT、CC、CT型的高血壓男性患者中,H型高血壓患者的占比均高于同基因型女性患者,且男性高血壓患者Hcy水平高于女性患者,這可能是因?yàn)榇萍に啬芡ㄟ^升高蛋氨酸的轉(zhuǎn)氨作用,促進(jìn)Hcy代謝循環(huán),從而降低Hcy水平;H型高血壓發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)與MTHFR C677T位點(diǎn)基因型、性別等有密切關(guān)系。張娟等[17]的研究表明,男性急性腦梗死患者頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度較女性患者厚,男性是頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度增加的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

綜上所述,男性、Hcy水平高、MTHFR C677T位點(diǎn)基因型(CT型或TT型)為血管硬化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。