川金解郁湯干預(yù)輕中度抑郁患者的療效分析及代謝組學(xué)研究

孫文　肖江　鄭欣宇　周紹明　楊萍

〔摘要〕 目的 分析川金解郁湯（Chuanjin Jieyu Decoction， CJJYD）對(duì)輕中度抑郁（mild to moderate depression， MTMD）患者干預(yù)前后的代謝物差異性及相關(guān)代謝物變化規(guī)律，為CJJYD治療MTMD提供科學(xué)依據(jù)。方法 納入湖南省腦科醫(yī)院2020年1月至12月期間23名MTMD患者作為病例組（Dep組）、健康人21名作為對(duì)照組（CT組），Dep組予以CJJYD干預(yù)6周，早晚各服1劑，每次100 mL。采用漢密爾頓抑郁量表（Hamilton depression scale， HAMD）和抑郁自評(píng)量表（self-rating depression scale， SDS）評(píng)定療效；超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析干預(yù)前后血漿代謝物變化；采用多維度統(tǒng)計(jì)分析，篩選差異代謝物并進(jìn)行分析。結(jié)果 MTMD患者經(jīng)CJJYD干預(yù)后，HAMD和SDS評(píng)分明顯降低（P<0.01）。與CT組相比，Dep組患者血漿中檢測(cè)145個(gè)差異代謝物，涉及亞油酸代謝等38條代謝通路；Dep組經(jīng)CJJYD干預(yù)后，患者血漿中檢測(cè)46個(gè)差異代謝物，涉及煙酸和煙酰胺代謝等11條代謝通路。結(jié)論 MTMD患者經(jīng)CJJYD干預(yù)后，抑郁癥狀得到改善，代謝組學(xué)有差異性代謝物，涉及亞油酸代謝、煙酸和煙酰胺代謝、精氨酸和脯氨酸代謝等代謝通路，可能為其抗抑郁的機(jī)制之一。

〔關(guān)鍵詞〕 抑郁癥；川金解郁湯；超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜；差異代謝物；郁金；川芎

〔中圖分類號(hào)〕R259? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ? 〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674－070X.２０23.05.028

Clinical efficacy and metabolomics of Chuanjin Jieyu Decoction in treating mild to

moderate depression

SUN Wen， XIAO Jiang， ZHENG Xinyu， ZHOU Shaoming*， YANG Ping

1. Department of Psychiatry， Hunan Brain Hospital， Changsha， Hunan 410007， China; 2. School of Clinical Medicine， Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China

〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Objective To analyze differential metabolites and the associated metabolite change rules of Chuanjin Jieyu Decoction （CJJYD） in treating mild to moderate depression （MTMD） both before and after intervention， and to provide scientific bases for treating MTMD patients with CJJYD. Methods A total of 23 MTMD patients received in Hunan Brain Hospital from January to December 2020 were included as case group （Dep group）. In addition， 21 healthy people were set as the control group （CT group）. Dep group was treated with CJJYD for 6 weeks， with 1 dose of 100 mL in the morning and the same dose in the evening. The Hamilton depression scale （HAMD） and self-rating depression scale （SDS） were used to assess the efficacy， and ultra-high performance liquid chromatography-high resolution mass spectrometry （UPLC-MS） was taken to analyze the changes in plasma metabolites before and after treatment. Differential metabolites were screened and analyzed using mutil-dimensional statistical analysis. Results MTMD patients showed a significant lower HAMD and SDS scores after being treated with CJJYD （P<0.01）. A total of 145 differential metabolites were detected in the plasma of Dep group compared to CT group， involving 38 metabolic pathways such as linoleic acid metabolism; 46 differential metabolites were identified in the plasma of Dep group after CJJYD intervention， involving 11 metabolic pathways such as niacin and nicotinamide metabolism. Conclusion Depression symptoms were alleviated in MTMD patients after CJJYD treatment. Differential metabolites were shown in metabolomics after CJJYT intervention， involving metabolic pathways such as linoleic acid metabolism， niacin and nicotinamide metabolism， and arginine and proline metabolism， which may be one of its anti-depression mechanisms.

〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 depression; Chuanjin Jieyu Decoction; ultra-high performance liquid chromatography-high resolution mass spectrometry; differential metabolites; Yujin （Radix Curcumae）; Chuanxiong （Rhizoma Chuanxiong）

抑郁癥是一種機(jī)制復(fù)雜且病因未明的精神疾病，臨床表現(xiàn)以情緒低落、思維遲緩、認(rèn)知功能損害、意志活動(dòng)減弱和軀體癥狀為主，加重了家庭以及社會(huì)的負(fù)擔(dān)[1]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為抑郁癥發(fā)病主要與五臟功能失調(diào)、情志不暢有關(guān)，患者主要表現(xiàn)為由情志不舒、氣郁不伸所致的心情抑郁、咽有梗阻、胸脅脹滿、易怒善哭等一系列癥狀[2]。世界衛(wèi)生組織估計(jì)，到2030年，抑郁癥或?qū)⑽涣腥蚣膊∝?fù)擔(dān)首位[3]。使用常規(guī)西藥治療抑郁癥在短期內(nèi)是有效的，但不會(huì)延遲或阻止疾病的發(fā)展，且治療效果具有不穩(wěn)定、不良反應(yīng)大和用藥依從性差的缺點(diǎn)[4-5]，故治療抑郁癥最緊迫的任務(wù)之一就是尋找到療效高、不良反應(yīng)小的新藥[6]。

代謝組學(xué)可以直觀地表征整體代謝特征[7]，對(duì)生物身體內(nèi)的每一個(gè)代謝產(chǎn)物開展定量分析，并找尋到其與病理生理變動(dòng)的相對(duì)關(guān)系。本研究通過(guò)超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測(cè)定輕中度抑郁（mild to moderate depression， MTMD）患者經(jīng)川金解郁湯（Chuanjin Jieyu Decoction， CJJYD）干預(yù)前后血漿代謝組學(xué)數(shù)據(jù)，利用多元統(tǒng)計(jì)分析方法，篩選出MTMD患者經(jīng)CJJYD干預(yù)后相關(guān)的差異代謝物，進(jìn)而分析與之相關(guān)的代謝通路變化規(guī)律，為臨床應(yīng)用CJJYD治療MTMD提供科學(xué)依據(jù)。試從代謝組學(xué)的方向，解釋湖南省腦科醫(yī)院院內(nèi)制劑CJJYD改善MDMT患者癥狀的機(jī)制。

1 資料與方法

1.1? 研究對(duì)象

本研究將于2020年1月至12月在湖南省腦科醫(yī)院就診MTMD患者（Dep組）及體檢正常對(duì)照（CT組）。Dep組納入23名MTMD患者，CT組納入21名健康對(duì)照。Dep組13名男性，10名女性，年齡15～45（24.67±8.56）歲；CT組13名男性和8名女性，年齡16～45（25.90±9.03）歲；兩組受試者性別和年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究通過(guò)湖南省腦科醫(yī)院倫理委員會(huì)準(zhǔn)許（倫理批準(zhǔn)號(hào)：2019-6-26），全部受試者在研究開始前都簽定了知情同意書。

1.2? 診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1? 西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)? 參照中國(guó)成人失眠伴抑郁焦慮診治專家共識(shí)[8]診斷為MTMD：漢密爾頓抑郁量表（Hamilton depression scale， HAMD）評(píng)分7～24分[9]。

1.2.2? 中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn)? 本試驗(yàn)的MTMD患者為肝郁氣滯證，其診斷標(biāo)準(zhǔn)為：精神抑郁，胸脅脹滿、情緒不寧，或咽中如有異物梗塞，或頻發(fā)噯氣，善太息，脘痞，悲傷欲哭，舌苔薄白，脈弦[10]。

1.3? 納入標(biāo)準(zhǔn)

（1）符合中國(guó)成人失眠伴抑郁焦慮診治專家共識(shí)MTMD的診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]；（2）HAMD評(píng)分7～24分[9]及抑郁自評(píng)量表（self-rating depression scale， SDS）評(píng)分50～69分[11]；（3）年齡18～60歲；（4）患者及家屬均簽署了知情同意書，對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程均知情；（5）患者在參與試驗(yàn)前1個(gè)月內(nèi)未使用任何抗精神病藥物及中藥的治療。

1.4? 排除標(biāo)準(zhǔn)

（1）受試者不能嚴(yán)格遵守研究要求；（2）有潛在自殺風(fēng)險(xiǎn)患者；（3）嚴(yán)重軀體疾病或腦器質(zhì)性疾??；（4）嚴(yán)重的多器官功能障礙者；（5）社會(huì)功能受損嚴(yán)重；（6）伴發(fā)精神病癥狀（幻覺(jué)、妄想）。

1.5? 主要儀器與試劑

Waters ACQUITY UPLC BEH Amide（2.1 mm×100 mm， 1.7 μm）液相色譜柱；超高效液相色譜儀（型號(hào)：Vanquish，賽默飛世爾科技公司）；高分辨質(zhì)譜儀（型號(hào)：Q Exactive HFX，賽默飛世爾科技公司）。乙酸銨（批號(hào)：631-61-8，SIGMA-ALDRICH）。

1.6? 干預(yù)方法

CT組：對(duì)受試者不予任何干預(yù)處理。Dep組：予CJJYD干預(yù)。CJJYD方由川芎10 g，紅景天15 g，郁金10 g，延胡索10 g，刺五加15 g，路路通8 g，土鱉蟲5 g，蜈蚣2 g，地龍10 g，石菖蒲10 g組成，所有中藥飲片均購(gòu)自湖南君昊中藥飲片科貿(mào)有限公司。用水煎煮，每日煎煮2次，早晚各服1劑，每次100 mL，療程為6周。

1.7? 樣品采集及處理方法[12]

Dep組受試者在經(jīng)CJJYD干預(yù)前采集一次靜脈血，經(jīng)CJJYD干預(yù)6周后采集一次靜脈血，而CT組只需采集一次靜脈血即可。采集受試者空腹肘靜脈血10 mL（使用真空促凝采血管，采集時(shí)間為8：00），將采血管混勻，快速置于離心機(jī)中，溫度4 ℃、3500 r/min（半徑15 cm）離心15 min。移取樣品100 μL至EP管中，隨后加入萃取液400 μL[（甲醇∶乙腈=1∶1（V/V），含內(nèi)標(biāo)混合物）]，顛倒混勻30 s，后冰水浴超聲10 min，然后將離心管置于-40 ℃條件下，靜置1 h。隨后將其放置在離心機(jī)中，溫度4 ℃、12 000 r/min（半徑86 cm）離心15 min，取上清液至進(jìn)樣瓶中上機(jī)檢驗(yàn)。全部樣品另取相等上清液混合成質(zhì)控樣品（quality control， QC），上機(jī)檢驗(yàn)。

1.8? 行為學(xué)檢測(cè)

HAMD和SDS評(píng)定的時(shí)間分別于干預(yù)前及干預(yù)后6周后。其中，HAMD評(píng)定量表由17個(gè)項(xiàng)目構(gòu)成，每一個(gè)條目的分值為0～4分，總分0～68分。得分越高，抑郁程度越重[9]。SDS由20個(gè)條目構(gòu)成，每一個(gè)項(xiàng)目分值為1～4分，總成績(jī)20～80分。得分越高，抑郁程度越重[11]。

1.9? 色譜條件及質(zhì)譜條件

1.9.1? 色譜條件? 樣品采集及處理方法[13]：流動(dòng)相A為水相，含25 mmol/L乙酸銨和25 mmol/L氨水，流動(dòng)相B為乙腈。采用梯度洗脫：0～0.5 min，95% B；0.5～7 min，95%～65% B；7～8 min，65%～40% B；8～9 min，40% B；9～9.1 min，40%～95% B；9.1～12 min，95% B。流動(dòng)相流速0.5 mL/min，柱溫30 ℃，樣品盤溫度4 ℃，進(jìn)樣體積2 μL。

1.9.2? 質(zhì)譜條件? 分別采用正離子和負(fù)離子掃描模式對(duì)質(zhì)譜分析數(shù)據(jù)進(jìn)行收集，離子源主要參數(shù)如下，鞘氣流速：50個(gè)Arb單位；輔助氣體流速：10個(gè)Arb單位；毛細(xì)血管溫度：320 ℃；碰撞能量：10、30、60 V；電噴霧電壓：3.5 kV（+）或-3.2 kV（-）。

1.10? 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 22.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)量資料以“ｘ±s”表示，滿足正態(tài)性及方差齊性的采用兩樣本獨(dú)立t檢驗(yàn)，不滿足正態(tài)性及方差齊性的采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，多組間進(jìn)行比較采用單因素方差分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。完成峰識(shí)別、峰提取、峰對(duì)齊等工作。過(guò)濾單個(gè)峰值，保留空值不超過(guò)50%的峰面積數(shù)據(jù)，進(jìn)行內(nèi)部歸一化處理[14]。在提取和處理數(shù)據(jù)后，進(jìn)行多維統(tǒng)計(jì)分析[15]。單維統(tǒng)計(jì)分析包括火山圖、T檢驗(yàn)、變異倍數(shù)（fold change， FC）分析。通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)BiotreeDB V2.1檢索精確分子質(zhì)量，經(jīng)二級(jí)譜圖匹配的方式對(duì)代謝物結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定，Cutoff值設(shè)置為0.90。

2 結(jié)果

2.1? Dep組干預(yù)前后HAMD和SDS評(píng)分比較

與干預(yù)前比較，干預(yù)后Dep組HAMD和SDS評(píng)分明顯降低（P<0.01）。詳見表1。

2.2? 代謝組質(zhì)量控制

QC在測(cè)試期間進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)，以評(píng)價(jià)分析系統(tǒng)的穩(wěn)定性并確保收集數(shù)據(jù)的質(zhì)量。QC樣本（黃色）在PCA圖中聚集在一起，表明本項(xiàng)目?jī)x器分析系統(tǒng)穩(wěn)定，生成數(shù)據(jù)可信。詳見圖1。

2.3? 多元變量統(tǒng)計(jì)分析

血漿的代謝譜信息通過(guò)液相質(zhì)譜色譜聯(lián)用技術(shù)獲得，本研究采用PCA技術(shù)分析血漿的代謝譜以獲得相應(yīng)的散點(diǎn)圖，結(jié)果表明，在PC1和PC2、PC3三維圖上，CT組與Dep組干預(yù)前及Dep組干預(yù)后均存在明顯的分離趨勢(shì)。詳見圖1。

采用監(jiān)督的模式識(shí)別方式，OPLS-DA分析在實(shí)現(xiàn)降維的同時(shí)考慮了分組信息，因此，它可以用于特征選擇以及分類，去除與實(shí)驗(yàn)觀察不相干的任意信息，最大程度地獲取與實(shí)驗(yàn)操作有關(guān)的信息，尋找與兩組差別有關(guān)的代謝物。也就是在代謝組學(xué)數(shù)據(jù)分析中，可以用于篩選不同組之間的差異代謝物。詳見圖2。

OPLS-DA模型去除實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的無(wú)關(guān)信息，但是建立的模型需要進(jìn)行驗(yàn)證，本實(shí)驗(yàn)研究采用7倍交叉驗(yàn)證和置換檢驗(yàn)對(duì)建立的模型進(jìn)行檢驗(yàn)。CT組與Dep組干預(yù)前的R²Y、Q²在正離子模式下分別為0.56、-1.07，負(fù)離子模式下分別為0.72、-1.01；Dep組干預(yù)前、Dep組干預(yù)后的R²Y、Q²在正離子模式下分別為0.65、-0.78，負(fù)離子模式下分別為0.77、-0.56。總體來(lái)說(shuō)，模型具有良好的有效性。

2.4? 差異代謝物篩選

通過(guò)OPLS-DA分析，每個(gè)代謝物可以得出一個(gè)VIP值，即變量重要性投影（variable importance in projection， VIP），VIP值越大，代表該物質(zhì)對(duì)于區(qū)分兩組所具有的貢獻(xiàn)越大，通常將T檢驗(yàn)的P＜0.05結(jié)合VIP＞1作為顯著性差異代謝物的篩選標(biāo)準(zhǔn)。兩組實(shí)驗(yàn)物質(zhì)定量的比值——FC，用于評(píng)估CT組、Dep組干預(yù)前、Dep組干預(yù)后之間差異代謝物變化的顯著性，F(xiàn)C>1則表示兩組相比，代謝物上調(diào)。CT組與Dep組干預(yù)前比較，正離子模式下，D-丙氨酸、膽堿、丙烯酰胺等代謝物上調(diào)，負(fù)離子模式下，9-十六碳烯酸、花生四烯酸等代謝物上調(diào)。與Dep組干預(yù)前比較，Dep組干預(yù)后正離子模式下右旋脯氨酸、吡啶甲酸、苯甲醛等代謝物上調(diào)，負(fù)離子模式下十五酸等代謝物上調(diào)。反之，F(xiàn)C<1則表示兩組相比，代謝物下調(diào)。CT組與Dep組干預(yù)前比較，正離子模式下海藻糖、腺嘌呤等代謝物下調(diào)，負(fù)離子模式下甘油醛、左旋葡聚糖等代謝物下調(diào)。與Dep組干預(yù)前比較，Dep組干預(yù)后正離子模式下二烯酸、7-酮基膽固醇等代謝物下調(diào)，負(fù)離子模式下鄰苯二酚、琥珀酸半醛、琥珀酸等代謝物下調(diào)。詳見圖3。

為了對(duì)所篩選的差異代謝物的合理性進(jìn)行評(píng)價(jià)，對(duì)獲得的差異代謝物進(jìn)行聚類分析[16]，分別獲得CT和Dep組干預(yù)前、Dep干預(yù)后的熱圖和s-plot圖。在熱圖中，可以顯著的觀察到CT和Dep組干預(yù)前、Dep干預(yù)后分別分為兩類，表明篩選的代謝物是合理的。詳見圖4—5。

2.4.1? CT組與Dep組干預(yù)前的差異代謝物? 與CT組對(duì)比，Dep組干預(yù)前血漿中共篩選出145個(gè)差異代謝物，正離子模式和負(fù)離子模式下分別篩選出97個(gè)和48個(gè)差異代謝物。其中，D-丙氨酸、膽堿、1-芐氧基-3-吲哚甲醛、棕櫚酰左旋肉堿、N-鳥氨?；?L-牛磺酸等102個(gè)代謝物顯著升高（P＜0.05，P＜0.01），海藻糖、腺嘌呤、甘油醛、吡咯烷酮羧酸等43個(gè)代謝物顯著降低（P＜0.05，P＜0.01）。詳見表2。

2.4.2? Dep組干預(yù)前后差異代謝物? 與干預(yù)前比較，干預(yù)后Dep組血漿中共篩選出46個(gè)差異代謝物，正離子模式和負(fù)離子模式下分別篩選出37個(gè)和9個(gè)差異代謝物。其中，D-脯氨酸、2-異丙基苯基甲基氨基甲酸酯等33個(gè)代謝物顯著升高（P＜0.05，P＜0.01），7-酮基膽固醇、13-羥基十八碳二烯酸等9種代謝物顯著降低（P＜0.05，P＜0.01）。詳見表3。

2.4.3? 差異代謝物的代謝通路分析? 篩選出差異代謝物后，對(duì)與代謝物相關(guān)的代謝通路進(jìn)行篩選，從而找出其中關(guān)聯(lián)性最高的關(guān)鍵代謝通路[17]。在權(quán)威數(shù)據(jù)庫(kù)KEGG和PubChem中，對(duì)差異代謝物進(jìn)行映射獲得匹配信息后，在相應(yīng)物種Homo sapiens（human）的通路數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行代謝通路分析，結(jié)果信息以氣泡圖進(jìn)行呈現(xiàn)。詳見圖6。正離子模式下，CT組與Dep組比較，共篩選出亞油酸代謝，精氨酸和脯氨酸的代謝，賴氨酸代謝，組氨酸代謝，甘油磷脂代謝等14條差異代謝通路（圖6A）。Dep組干預(yù)后，共篩選出3條差異代謝通路，包括亞油酸代謝，煙酸和煙酰胺代謝，精氨酸和脯氨酸代謝（圖6B）。負(fù)離子模式下，CT組與Dep組干預(yù)前比較，共篩選出?；撬岷痛闻；撬岽x，花生四烯酸代謝，賴氨酸代謝、賴氨酸生物合成，氨酰t-RNA生物合成等24條差異代謝通路（圖6C）；Dep組干預(yù)后，共篩選出丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸代謝、丁酸甲酯代謝、檸檬酸循環(huán)、酪氨酸代謝等8條差異代謝通路（圖6D）。正負(fù)離子模式檢測(cè)下的各種代謝通路，主要涉及氨基酸代謝和能量代謝，其中，氨基酸代謝通路檢測(cè)到的差異性代謝物最多。

3 討論

抑郁癥是臨床常見的精神心理疾病之一，患者以心境障礙和焦慮障礙為主要特征，嚴(yán)重者可有自傷和自殺行為，且抑郁發(fā)作往往有復(fù)發(fā)傾向，影響人們的身心健康和生活質(zhì)量。CJJYD是湖南省腦科醫(yī)院的一種治療抑郁癥的中藥方劑，其組成為川芎、紅景天、郁金、延胡索、刺五加、路路通、土鱉蟲、蜈蚣、地龍、石菖蒲。郁金具行氣解郁、清氣凝神之功。β-谷甾醇是郁金中主要包含的一種植物甾醇，根據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，β-谷甾醇可以顯著提高抑郁小鼠腦內(nèi)5-羥色胺和去甲腎上腺素的水平，緩解小鼠抑郁樣行為[18]；川芎活血行氣、通達(dá)解郁，可通過(guò)上調(diào)環(huán)磷腺苷效應(yīng)元件結(jié)合蛋白-腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子通路，增加腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的表達(dá)，改善腦卒中后抑郁大鼠的認(rèn)知功能[19]，二者合為君藥。紅景天益氣活血、養(yǎng)心通脈，刺五加益氣健脾、補(bǔ)腎安神，延胡索活血化瘀、疏肝行氣，三者合為臣藥。路路通祛風(fēng)活絡(luò)，助川芎活血行氣之力；石菖蒲開竅豁痰、醒神益智，增郁金解郁寧神之功，二者共為佐藥。土鱉蟲破血逐瘀，蜈蚣通絡(luò)止痛，地龍定驚通絡(luò)，共為使藥。10味藥共同發(fā)揮抗抑郁的作用。MTMD患者口服CJJYD 6周后，其HAMD和SDS得分均低于干預(yù)前（P<0.01），說(shuō)明CJJYD能夠改善MTMD患者的抑郁癥狀。

本研究致力于討論CJJYD干預(yù)MDMT的作用機(jī)制，在此項(xiàng)研究中，本研究團(tuán)隊(duì)?wèi)?yīng)用非靶向治療代謝組學(xué)技術(shù)，研究MTMD患者CJJYD干預(yù)前后血液中代謝物的變化趨勢(shì)，篩選出合理的差異代謝物，找到與代謝物關(guān)聯(lián)性最高的關(guān)鍵通路，探尋代謝物、代謝通路和生理病理機(jī)制的相對(duì)關(guān)系。在本研究中，QC檢驗(yàn)驗(yàn)證了分析系統(tǒng)的穩(wěn)定性，T檢驗(yàn)和OPLS-DA模型緊密結(jié)合用以篩選出各組間顯著的差異代謝物，聚類分析法證明了本研究中篩選出的差異代謝物是合理的。與CT組對(duì)比，Dep組的差異代謝通路主要聚集在亞油酸代謝、精氨酸和脯氨酸的代謝、賴氨酸代謝、組氨酸代謝、甘油磷脂代謝、牛磺酸和次?；撬岽x等通路上。谷氨酸是介導(dǎo)大多數(shù)中樞興奮性神經(jīng)傳導(dǎo)的遞質(zhì)，腦內(nèi)神經(jīng)元中谷氨酸的合成、代謝和再攝取異常時(shí)介導(dǎo)的興奮性毒性會(huì)造成腦內(nèi)神經(jīng)元損傷，與抑郁癥的發(fā)生密切相關(guān)[20]。?；撬崾菣C(jī)體內(nèi)的一種極為重要的神經(jīng)遞質(zhì)，其能通過(guò)明顯減少促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子、促腎上腺皮質(zhì)激素、皮質(zhì)醇分泌來(lái)改善抑郁癥的癥狀[21]，慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激通過(guò)激活TLR4介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，誘發(fā)磷脂代謝紊亂，是抑郁癥發(fā)生的機(jī)制之一[22]，結(jié)合本研究結(jié)論，進(jìn)一步驗(yàn)證以上代謝通路在抑郁癥的發(fā)生中起著重要性的主導(dǎo)作用。Dep組經(jīng)CJJYD干預(yù)后的差異代謝通路主要富集在亞油酸代謝、煙酸和煙酰胺代謝、精氨酸和脯氨酸代謝、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝、丁酸甲酯代謝、檸檬酸循環(huán)、酪氨酸代謝等通路上。谷氨酸可在谷氨酸脫羧酶的作用下生成γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid， GABA），突觸間隙里的谷氨酸和GABA被星形膠質(zhì)細(xì)胞再攝取后進(jìn)一步轉(zhuǎn)化成谷胺和谷氨酸。GABA是一種體內(nèi)重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，焦慮、抑郁等情緒越嚴(yán)重，體內(nèi)GABA含量減少越明顯[23]。人類的部分邊緣腦區(qū)，前額葉皮質(zhì)中存有GABA能神經(jīng)系統(tǒng)投影，這些腦區(qū)與情緒認(rèn)知作用有密切的關(guān)系，谷氨酸代謝通路失調(diào)可能會(huì)影響邊緣腦區(qū)、前額葉皮質(zhì)的功能，這應(yīng)該是抑郁癥患者谷氨酸水平上升、GABA水平降低的主要原因之一[24]。已有研究發(fā)現(xiàn)[25]，腐胺的抗抑郁功效在逼迫游泳試驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)操作中被驗(yàn)證，這有可能是通過(guò)抑制NAMDR介導(dǎo)多胺位點(diǎn)，與NAMDR相互影響得到的結(jié)果。谷氨酰胺可以進(jìn)入三羧酸循環(huán)，天冬氨酸參加精氨酸的生物合成[26]，正丁酸甲酯是亮氨酸的中間代謝產(chǎn)物，可對(duì)肌肉蛋白質(zhì)的生成和溶解進(jìn)行調(diào)控[27]，以上代謝通路主要涵蓋氨基酸代謝和能量代謝，其中，氨基酸代謝途徑檢測(cè)出的差異代謝物較多。因而，CJJYD很有可能是通過(guò)氨基酸代謝通路使抑郁癥患者的癥狀改善。

本研究所采用的方法能較為系統(tǒng)全面的篩選、鑒定出與CJJYD干預(yù)MDMT有關(guān)的代謝物和代謝通路，但是也存在一定的局限，如每組樣本數(shù)比較小，未采用基因組學(xué)、蛋白組學(xué)驗(yàn)證CJJYD的療效。因此，研究結(jié)論有利于論述CJJYD干預(yù)MDMT的有關(guān)機(jī)制，可以為臨床治療MDMT提供啟發(fā)，但尚需大樣本研究加以驗(yàn)證。

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