LC-MS測(cè)定南瓜、蘆筍、水芹和番木瓜中吡唑醚菌酯殘留量

陳鑫 劉騫 劉軍

摘要：研究建立了一種快速高效測(cè)定南瓜、蘆筍、水芹和番木瓜中吡唑醚菌酯殘留量的方法。南瓜、蘆筍、水芹和番木瓜經(jīng)過(guò)乙腈提取、PSA和C18凈化后，采用AQ-C18液相色譜柱分離，液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定。結(jié)果表明，該方法的平均回收率為88.4%～110.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0～7.7%，符合農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留分析要求。在0.01～1.00 mg/L具有良好的線性關(guān)系。該方法操作簡(jiǎn)單、快速、靈敏、準(zhǔn)確，完全能夠滿足南瓜、蘆筍、水芹和番木瓜中吡唑醚菌酯殘留量的日常檢測(cè)需要。

關(guān)鍵詞：吡唑醚菌酯;液相色譜質(zhì)譜（LC-MS）;檢測(cè)

中圖分類號(hào)：O657.7+2? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：0439-8114（2019）05-0092-04

Abstract： A rapid and efficient method for determination of pyraclostrobin in pumpkin， asparagus， cress and papaya was established in this study. Pumpkin， asparagus， cress and papaya samples were extracted by acetonitrile， and purified by PSA and C18. Then the target compound was analyzed with liquid chromatography mass spectrometry after its separation in AQ-C18 column. The recovery of this method was 88.4%～110.0% with the coefficient of variation from 0 to 7.7%， which met the requirements of pesticide residue analysis in crops. The linear relationship was good between 0.01 mg/L and 1.00 mg/L. This method was simple， rapid， sensitive and accurate. It was suitable for daily determination of pyraclostrobin in pumpkin， asparagus， cress and papaya.

Key words： pyraclostrobin; liquid chromatography mass spectrometry（LC-MS）; determination

吡唑醚菌酯作為一種新型廣譜殺菌劑，由巴斯夫公司于1993年發(fā)現(xiàn)，并于2002年登記上市。它的毒性作用機(jī)理是通過(guò)阻止細(xì)胞色素合成過(guò)程中的電子轉(zhuǎn)移，從而抑制線粒體呼吸作用，使線粒體不能產(chǎn)生和提供細(xì)胞正常代謝所需的ATP，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。吡唑醚菌酯具有廣譜、高效、低毒和對(duì)非靶標(biāo)生物安全，對(duì)使用者和環(huán)境安全友好，對(duì)作物安全性好等特點(diǎn)。截至目前，吡唑醚菌酯已在100多種農(nóng)作物上登記使用[1]。吡唑醚菌酯在農(nóng)作物中的大量使用自然會(huì)引起人們對(duì)相關(guān)農(nóng)作物質(zhì)量安全方面（如農(nóng)藥殘留）的關(guān)注。因此，農(nóng)作物中吡唑醚菌酯的殘留檢測(cè)十分重要。

目前，國(guó)內(nèi)外關(guān)于農(nóng)作物中吡唑醚菌酯的殘留檢測(cè)方法已有大量報(bào)道。Susana等[2]開(kāi)發(fā)了葡萄中吡唑醚菌酯的液相色譜儀-二極管陣列檢測(cè)器和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)方法。Francesc等[3]建立了一種免疫親和柱萃取-液相色譜-紫外檢測(cè)器分析法檢測(cè)水果汁中吡唑醚菌酯的方法。Adalberto等[4]報(bào)道了固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法用于芒果中吡唑醚菌酯殘留量的測(cè)定。張志恒等[5]采用高效液相色譜法-二極管陣列測(cè)定了草莓中吡唑醚菌酯的殘留量。王燕等[6]開(kāi)發(fā)了一種丙酮提取-PSA小柱凈化-高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定人參中吡唑醚菌酯殘留量的分析方法。劉軍等[7]建立了一種乙腈提取-Carbon/NH2小柱凈化-液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀的分析方法，用于柑橘中吡唑醚菌酯殘留量的分析。到目前為止暫未發(fā)現(xiàn)南瓜、蘆筍、水芹和番木瓜中吡唑醚菌酯的殘留檢測(cè)方法。因此，本研究擬開(kāi)發(fā)一種快速、簡(jiǎn)便的吡唑醚菌酯殘留量檢測(cè)方法。

1? 材料與方法

1.1? 材料與儀器設(shè)備

乙腈（分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）;甲醇、甲酸、乙腈（色譜純，美國(guó)J.T.Baker公司）;吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)品（純度99.7%，上海農(nóng)藥研究所）;無(wú)水硫酸鈉（分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），使用前450 ℃灼燒4 h;提取鹽包[6 g MgSO4+1.5 g NaOAc，島津技邇（上海）商貿(mào)有限公司];凈化管[50 mg PSA+50 mg C18+150 mg MgSO4，2 mL，島津技邇（上海）商貿(mào)有限公司];試驗(yàn)用水為超純水;南瓜、蘆筍、水芹和番木瓜購(gòu)置于當(dāng)?shù)爻泻娃r(nóng)貿(mào)市場(chǎng)。

LC 20ADvp高效液相色譜儀，配有LCMS 2010 EV質(zhì)譜檢測(cè)器和電噴霧離子源（ESI），自動(dòng)進(jìn)樣器，LC-MS工作站（日本，島津公司）;色譜柱為InertSustainTM AQ-C18 HP，150 mm×2.1 mm，填料粒徑 3 μm，[島津技邇（上海）商貿(mào)有限公司];MS3渦旋混合器（IKA，德國(guó)）;Stephan UMC 5食品粉碎機(jī)（Stephan，德國(guó)）;T25分散器（IKA，德國(guó)）;TDL-40B離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）;XP504R型電子天平（瑞士Mettle Toledo公司）;Milli-Q型超純水機(jī)（美國(guó)Millipore公司）。

1.2? 標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制

稱取適量的吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)品溶于甲醇中，配制成濃度為80 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。檢測(cè)時(shí)再用乙腈稀釋配成0.01、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00 mg/L系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3? 樣品前處理方法

1.3.1? 提取? 將南瓜、蘆筍、水芹和番木瓜樣品分別用食品粉碎機(jī)打碎成泥狀，然后稱取10.0 g樣品置于80 mL離心管中，再加入20 mL乙腈。使用T25分散器以15 000 r/min高速勻漿提取1 min。加入提取鹽包（6 g MgSO4+1.5 g NaOAc）后使用T25分散器再勻漿提取1 min，最后4 000 r/min離心6 min。

1.3.2? 凈化? 吸取1 mL上清液于2 mL凈化管（50 mg PSA+50 mg C18+150 mg MgSO4），渦旋混勻1 min，再8 000 r/min離心5 min。取上清液經(jīng)0.22 μm尼龍濾膜過(guò)濾于樣品瓶中，待測(cè)。

1.4? 液相色譜-質(zhì)譜條件

色譜柱為InertSustainTM AQ-C18 HP（150 mm×2.1 mm，3 μm），流動(dòng)相為含0.1%甲酸水溶液和乙腈（35+65，V+V），流速0.2 mL/min，柱溫40 ℃，進(jìn)樣量5 μL，離子源模式為電噴霧（ESI+），SIM掃描模式（m/z[M+H]：388），檢測(cè)器（DET）電壓1.75 kV;CDL溫度250 ℃;加熱塊溫度200 ℃;干燥氣壓力0.04 MPa;霧化氣流速1.5 L/min。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 樣品前處理

前處理采用了果蔬農(nóng)藥殘留分析中常用的提取溶劑乙腈，相比于其他研究中采用丙酮[6]或者丙酮和二氯甲烷[8]作為提取溶劑，省去了置換溶劑的過(guò)程，且更加適合后續(xù)液相色譜-質(zhì)譜的分析。采用QuEchERS方法對(duì)提取的樣品進(jìn)行凈化，具有簡(jiǎn)單、高效、成本低的特點(diǎn)。由圖1可知，該凈化方法對(duì)南瓜、蘆筍、水芹和番木瓜4種基質(zhì)均有效，凈化效果好，目標(biāo)物峰型不受雜質(zhì)的影響，完全能夠滿足吡唑醚菌酯的殘留分析。

2.2? 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析

采用電噴霧電離模式對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行離子化，選擇離子模式進(jìn)行定量分析。采用AQ-C18 HP色譜柱按照前述色譜條件對(duì)樣品進(jìn)行分離，吡唑醚菌酯的保留時(shí)間約為10 min（圖1）。由圖1可見(jiàn)，該儀器方法能夠有效地將目標(biāo)物與4種基質(zhì)（南瓜、蘆筍、水芹和番木瓜）中的雜質(zhì)進(jìn)行分離，盡量減少了雜質(zhì)對(duì)目標(biāo)物的干擾，保證了方法的可靠性。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法具有很好的分離性、選擇性和靈敏度，已被廣泛用于吡唑醚菌酯的分析[6]。

2.3 線性關(guān)系與檢出限

按照前述儀器分析方法將吡唑醚菌酯的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液平行測(cè)定3次。以平行測(cè)定的平均峰面積為縱坐標(biāo)，以濃度（mg/L）為橫坐標(biāo)，作回歸曲線，如圖2所示。得到線性方程為y=1.88×107x，相關(guān)系數(shù)為0.995，吡唑醚菌酯在0.01～1.00 mg/L線性關(guān)系良好，與洪文英等[9]和吳迪等[10]所報(bào)道的結(jié)果一致。在上述儀器測(cè)定條件下，以10倍信噪比計(jì)算得出吡唑醚菌酯的最小檢出量為8.6×10-3 ng。由此可見(jiàn)，該方法完全能夠滿足農(nóng)作物中吡唑醚菌酯殘留量檢測(cè)要求。

2.4? 添加回收試驗(yàn)

將購(gòu)自超市和農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)的南瓜、蘆筍、水芹和番木瓜作為未知樣品。首先按照前述的分析測(cè)試方法確認(rèn)樣品中不含目標(biāo)物。然后分別添加低（0.02 mg/kg）、中（0.20 mg/kg）、高（2.00 mg/kg，水芹高濃度添加為4.00 mg/kg）3個(gè)濃度梯度進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，并且每個(gè)濃度設(shè)置5個(gè)平行。按照前述的前處理和儀器分析方法得到添加回收試驗(yàn)結(jié)果如表1所示，南瓜樣品的低、中、高3個(gè)添加濃度的平均回收率分別為98.4%、106.9%、91.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為5.6%、3.2%、2.0%;蘆筍樣品的低、中、高3個(gè)添加濃度的平均回收率分別為94.8%、94.6%、107.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為7.7%、3.2%、4.5%;水芹樣品的低、中、高3個(gè)添加濃度的平均回收率分別為98.0%、110.0%、88.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為5.8%、0、3.7%;番木瓜樣品的低、中、高3個(gè)添加濃度的平均回收率分別為101.0%、97.0%、106.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為5.4%、2.8%、2.7%。4種基質(zhì)（南瓜、蘆筍、水芹和番木瓜）中吡唑醚菌酯的平均回收率為88.4%～110.0%，滿足殘留檢測(cè)的要求。王燕等[6]的研究表明人參（根、莖、葉）中吡唑醚菌酯的加標(biāo)回收率為86%～95%，劉軍等[7]的研究表明柑橘（果肉、全果）中吡唑醚菌酯的加標(biāo)回收率為98%～117%，與本研究的回收率結(jié)果相一致，可見(jiàn)該方法完全能夠滿足南瓜、蘆筍、水芹和番木瓜中吡唑醚菌酯殘留量的檢測(cè)要求。

3? 結(jié)論

本研究建立了南瓜、蘆筍、水芹和番木瓜中吡唑醚菌酯的殘留檢測(cè)方法，該方法具有前處理方法操作簡(jiǎn)單、快速，設(shè)備要求低和儀器分析方法特異性強(qiáng)、靈敏度高等特點(diǎn)。南瓜、蘆筍、水芹和番木瓜中吡唑醚菌酯的平均回收率為88.4%～110.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0～7.7%，能夠滿足日常檢測(cè)的需要，該方法為農(nóng)產(chǎn)品中吡唑醚菌酯的殘留檢測(cè)提供了很好的參考。

本研究?jī)H分析了該方法在南瓜、蘆筍、水芹和番木瓜4種農(nóng)產(chǎn)品中的適用性，是否適合于其他更多的農(nóng)產(chǎn)品還需進(jìn)一步的驗(yàn)證。此外，試驗(yàn)僅研究了吡唑醚菌酯這一種代表性農(nóng)藥，其他種類的農(nóng)藥是否適用該方法也需進(jìn)一步研究，以拓展該方法的適用性。

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