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    疾病類型和臨床指標(biāo)對(duì)CMIA抗HCV抗體檢測(cè)的影響

    2023-05-22 08:12:44李燕平
    檢驗(yàn)醫(yī)學(xué) 2023年3期
    關(guān)鍵詞:灰區(qū)丙型肝炎符合率

    何 鑫 李燕平

    (1. 蘭州大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院,甘肅 蘭州 730000;2. 蘭州大學(xué)第一醫(yī)院檢驗(yàn)科,甘肅 蘭州 730000)

    根據(jù)世界衛(wèi)生組織的統(tǒng)計(jì)結(jié)果,2015年全球丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染人數(shù)已達(dá)7 100萬,且呈逐年增加趨勢(shì)[1]。約有80%的HCV感染者不能自行清除HCV,會(huì)發(fā)展為慢性丙型肝炎,有20%的感染者最終發(fā)展為肝硬化和肝細(xì)胞肝癌[2]。世界衛(wèi)生組織(World Health Organization,WHO)、美國疾病預(yù)防控制中心、歐洲肝臟研究協(xié)會(huì)等均建議將抗HCV抗體作為丙型肝炎的篩查項(xiàng)目,位于灰區(qū)的結(jié)果應(yīng)通過HCV RNA檢測(cè)以明確診斷[3-4]?;瘜W(xué)發(fā)光微粒子免疫測(cè)定法(chemiluminescence microparticle immunoassay,CMIA)測(cè)定抗HCV抗體具有較高的靈敏度和特異性,被認(rèn)為是定量檢測(cè)抗HCV抗體的有效方法之一。但針對(duì)不同人群的研究結(jié)果表明,CMIA存在一定的假陽性可能[5-6]。本研究同時(shí)納入患者臨床資料和血清學(xué)指標(biāo),擬探討CMIA檢測(cè)抗HCV抗體產(chǎn)生灰區(qū)結(jié)果的可能原因,為抗HCV抗體檢驗(yàn)報(bào)告的解讀提供新思路,降低誤診的可能。

    1 材料和方法

    1.1 研究對(duì)象

    選取2017年7月—2019年6月蘭州大學(xué)第一醫(yī)院采用CMIA進(jìn)行抗HCV抗體檢測(cè),且結(jié)果位于灰區(qū)(S/CO值為1.0~5.0)的患者430例。排除樣本出現(xiàn)嚴(yán)重溶血、脂血和病歷資料不全、既往有丙型肝炎病史、未同步進(jìn)行HCV RNA檢測(cè)的患者,最終納入183例患者(灰區(qū)組),其中男87例、女76例,年齡(58.94 ±14.86)歲;包括惡性腫瘤33例、乙型肝炎16例、膽囊炎16例、膽囊結(jié)石13例、良性腫瘤13例、肝硬化11例、膽管結(jié)石9例、膽管炎9例,其他疾病63例。以同期蘭州大學(xué)第一醫(yī)院抗HCV抗體檢測(cè)結(jié)果為陰性(S/CO值<1.0)的健康體檢者33名作為正常對(duì)照組,其中男18名、女15名,年齡(54.67±13.61)歲。所有患者的HCV RNA檢測(cè)結(jié)果均為陰性。

    1.2 方法

    收集所有研究對(duì)象的臨床資料和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)(天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、總蛋白、白蛋白、球蛋白、白蛋白/球蛋白比值、總膽紅素、直接膽紅素、間接膽紅素、堿性磷酸酶、γ-谷氨?;D(zhuǎn)移酶、膽堿酯酶、α-L-巖藻糖苷酶、總膽汁酸、尿素、肌酐、尿酸、鉀離子、鈉離子、氯離子、鈣離子、總膽固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、乙型肝炎表面抗原、乙型肝炎表面抗體、乙型肝炎e抗原、乙型肝炎e抗體、乙型肝炎核心抗體、人類免疫缺陷病毒抗原和抗體、梅毒螺旋體抗體)檢測(cè)結(jié)果。

    采集所有研究對(duì)象清晨空腹靜脈血3~5 mL,待充分凝固后,2 150×g離心10 min,分離血清。采用ARCHITECT i2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(美國雅培公司)及配套試劑(CMIA)檢測(cè)抗HCV抗體。當(dāng)首次檢測(cè)結(jié)果位于灰區(qū)(S/CO值為1.0~5.0)時(shí),將血清樣本以6 467×g高速離心10 min,在同一臺(tái)儀器上復(fù)檢。對(duì)復(fù)檢結(jié)果仍處于灰區(qū)的患者重新采集血液樣本,采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction,RTPCR)檢測(cè)HCV RNA。分別采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)抗HCV抗體。ELISA試劑盒購自北京萬泰公司,檢測(cè)儀器為Anthos 2010型酶標(biāo)儀(鄭州博賽公司)。電化學(xué)發(fā)光法試劑盒購自瑞士羅氏公司,檢測(cè)儀器為cobas e601全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(瑞士羅氏公司)。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。呈非正態(tài)分布的計(jì)量資料以中位數(shù)(M)[四分位數(shù)(P25~P75)]表示,組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例或率表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn)。對(duì)二分類變量進(jìn)行數(shù)量化處理后,采用多元線性回歸分析確定抗HCV抗體檢測(cè)的影響因素。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 CMIA、ELISA、電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)結(jié)果與RT-PCR檢測(cè)結(jié)果的符合率

    所有患者的HCV RNA結(jié)果均為重新采樣后檢測(cè)得出的。以RT-PCR檢測(cè)結(jié)果為參考,CMIA和電化學(xué)發(fā)光法與RT-PCR的符合率為100.00%,ELISA與RT-PCR的符合率為97.81%。見表1。

    表1 CMIA、ELISA和電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)結(jié)果與RT-PCR檢測(cè)結(jié)果的符合率

    2.2 病史和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)對(duì)CMIA檢測(cè)灰區(qū)樣本抗HCV抗體S/CO值的影響

    以病史資料和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)為自變量,以CMIA抗HCV抗體的檢測(cè)結(jié)果為因變量,進(jìn)行多元線性回歸分析,結(jié)果顯示,良性腫瘤(t=2.080,P=0.039)可使CMIA檢測(cè)抗HCV抗體的S/CO值升高;離子滲透壓越高(t=-2.238,P=0.027),CMIA檢測(cè)抗HCV抗體的S/CO值越低;其他指標(biāo)對(duì)CMIA檢測(cè)抗HCV抗體無影響(P>0.05)。見表2。

    表2 抗HCV抗體檢測(cè)結(jié)果的多元線性回歸分析

    2.3 灰區(qū)組和正常對(duì)照組血清離子滲透壓的比較

    灰區(qū)組血清離子滲透壓為297.00(293.00~301.00)mmol/L,與正常對(duì)照組[297.00(292.00~300.00)mmol/L]比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

    3 討論

    本研究使用的全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)測(cè)定的是HCV基因組中表達(dá)穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)蛋白HCr43和非結(jié)構(gòu)蛋白c100-3所產(chǎn)生的抗體。c100-3蛋白的克隆序列所在的NS3片段在HCV感染早期即已出現(xiàn),可提升檢測(cè)的靈敏度,具有早期診斷價(jià)值[7]。另外,本研究使用的CMIA試劑盒說明書提示S/CO值<1.0為陰性,S/CO值≥1.0為陽性。但有研究發(fā)現(xiàn),S/CO值≥5.0時(shí),該試劑盒的陽性預(yù)測(cè)值≥95%[8]。因此,本實(shí)驗(yàn)室在臨床實(shí)際應(yīng)用中將S/CO值1.0~5.0設(shè)定為該試劑盒的檢測(cè)灰區(qū),即弱反應(yīng)性。本研究結(jié)果顯示,與ELISA相比,CMIA法和電化學(xué)發(fā)光法與RT-PCR的符合率為100.00%,準(zhǔn)確率更高。

    《中國丙型病毒性肝炎醫(yī)院感染防控指南(2021年版)》[9]將HCV RNA檢測(cè)作為驗(yàn)證HCV感染的依據(jù),所有弱反應(yīng)性(灰區(qū))樣本均需進(jìn)行HCV RNA檢測(cè)驗(yàn)證后才可作出診斷。本研究所有灰區(qū)樣本HCV RNA檢測(cè)結(jié)果均為陰性,不能確診為丙型肝炎,因此考慮抗HCV抗體結(jié)果升高是受其他因素影響。本研究多元線性回歸分析結(jié)果顯示,當(dāng)患者有良性腫瘤史時(shí),會(huì)使CMIA檢測(cè)抗HCV抗體的S/CO值升高,導(dǎo)致出現(xiàn)灰區(qū)結(jié)果。眾所周知,免疫分析方法易受非特異性抗體的影響[10],非特異性抗體的濃度越高,產(chǎn)生的干擾作用也越大[11]。有研究結(jié)果顯示,腫瘤患者血液中存在少量非特異性抗體[12-13],這些抗體可結(jié)合多個(gè)物種的免疫球蛋白的Fc、Fab和F(ab')2片段,導(dǎo)致免疫學(xué)方法的檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)假陽性[14-15]。本研究采用CMIA檢測(cè)抗HCV抗體,若患者體內(nèi)的非特異性抗體與試劑中大腸埃希菌和酵母菌來源的HCV抗原結(jié)合,可造成檢測(cè)結(jié)果假性升高;若與吖啶酯標(biāo)記的鼠抗人抗體結(jié)合物結(jié)合,則可使檢測(cè)結(jié)果假性降低。因此,有良性腫瘤史的患者抗HCV抗體的檢測(cè)結(jié)果會(huì)受非特異性抗體影響。

    本研究多元線性回歸分析結(jié)果還顯示,離子滲透壓升高(t=-2.238,P=0.027)可使CMIA檢測(cè)抗HCV抗體水平降低?;覅^(qū)組與正常對(duì)照組之間離子滲透壓差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),因此血清離子滲透壓的變化對(duì)于提示CMIA檢測(cè)抗HCV抗體灰區(qū)結(jié)果的意義還有待探討。

    綜上所述,采用CMIA檢測(cè)有良性腫瘤史患者的樣本時(shí)S/CO值可能會(huì)升高,導(dǎo)致出現(xiàn)灰區(qū)結(jié)果。因此,可將患者的病史資料作為評(píng)價(jià)灰區(qū)結(jié)果的一個(gè)參考依據(jù),以提供更有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

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