高效液相色譜法在藥品檢驗中的應用

劉素如

上世紀初期,高效液相色譜法開始出現(xiàn),之后經(jīng)過不斷發(fā)展得到了廣泛的應用?，F(xiàn)階段,諸如生物醫(yī)藥、食品科學以及生命科學等諸多領域均已在應用這一技術,而其中應用最多的莫過于藥品檢驗。由現(xiàn)行版《中國藥典》中規(guī)定的內(nèi)容可知,此法的應用具有科學性和廣泛性,因而在藥品檢驗中得到了非常迅速的發(fā)展。就現(xiàn)階段的實際情況來說,我國藥品檢驗的一個主要檢測方法就是高效液相色譜法,相關研究結果也表明,此法和普通檢驗方法相比,檢驗結果更加準確,因此針對高效液相色譜法在藥品檢驗中的應用展開深入探究,具有重要的現(xiàn)實意義。

1 高效液相色譜法概述

高效液相色譜法,英文簡稱為HPLC,屬于色譜法范疇,在高壓輸液系統(tǒng)的輔助下泵入色譜柱內(nèi)不同極性的溶劑、緩沖液等,并分離相關成分,借助特定儀器展開檢測,最終有效分析樣本。見圖1?，F(xiàn)階段已將其作為一項重要的分離和分析技術廣泛應用于包括醫(yī)學、藥學、化學等在內(nèi)的多個領域［1］。此法相較于經(jīng)典色譜法來說存在明顯差別,通過對新型高壓輸液泵、固定相的使用,增加了檢驗結果的精確度,也讓溶劑以最短的時間通過色譜柱,加快分離,分離速度遠遠超過經(jīng)典色譜法。社會的快速發(fā)展,讓高效液相色譜法也衍生出了包括離子交換色譜法、分子排阻色譜法以及吸附色譜法等在內(nèi)的各種分支類型。

圖1 高效液相色譜技術裝置圖

2 高效液相色譜法原理、特點分析

高效液相色譜法以液體為流動相,而在色譜中最關鍵的一個部分就是高壓輸液系統(tǒng)［2］。這一方法借助高壓輸液泵,將比例或是極性不同的溶劑充分混合,向固定相的實驗色譜柱中泵入制成的流動相,再借助進樣閥向其中注入檢測樣品,以流動相和柱內(nèi)相通,之后再完全分離柱內(nèi)液體,將其慢慢滲入到檢測器內(nèi)并進行監(jiān)測,從而完成試樣化學分析。高效液相色譜法的應用主要借助三部分內(nèi)容,分別是高效微粒固定相、新型高壓輸液泵以及高靈敏度檢測器,三者合用將經(jīng)典液相色譜法優(yōu)勢充分發(fā)揮了出來。目前,高效液相色譜法在具體應用時采用了高效色譜填料、小口徑柱,借助高壓輸液泵使溶劑能夠更快的流通,盡快通過色譜柱。由于高效液相色譜法所采用的高壓輸液泵工作效率非常高,因此在對藥物成分進行檢測時花費的時間較短,同時借助色譜柱進行分離,極大的提高了分離效果與檢測速度。與經(jīng)典柱色譜法相比,其能夠更快的完成分離,部分甚至超過1000倍以上。因此,高靈敏、高壓、高效和高速是高效液相色譜法主要特點,因此高效液相色譜法在臨床上具有越來越廣的應用范圍。

3 高效液相色譜法在藥品檢驗中的應用

3.1 藥品有效成分檢驗 就高效液相色譜法而言,其最關鍵的一項內(nèi)容就是藥品有效成分檢驗,對藥品質量與安全具有直接影響。每一種新藥在進入市場之前均要接受嚴格的質量檢驗,對藥物中的有效成分予以掌握,在與標準要求相符之后才能上市。通過對高效液相色譜法的應用,能夠得到靈敏而精確的檢驗結果,并針對藥品有效藥物成分實施目標檢驗,從而將藥物中附形劑帶給結果數(shù)據(jù)的不良影響降至最低。比如,在利用高效液相色譜法檢驗黃芩片有效成分——黃酮含量時,整個操作過程較為簡單,也取得了精準可靠的檢驗結果。通過這一類技術對藥物有效成分的測定,可保障藥物質量,推動藥品出口［3］。借助高效液相色譜法檢驗藥品質量,檢測各區(qū)域有效成分的含量,對每個部分的含量進行比較,從而可篩選出最優(yōu)質量區(qū)段?？梢钥闯?在藥品檢驗時依據(jù)藥物特點選擇高效液相色譜法,不僅操作簡單方便,還能保證檢驗結果的準確可靠。

3.2 藥物鑒別 每一種藥物的藥用價值均存在差異,因此一定要仔細鑒別藥物,使其作用能得到充分發(fā)揮［4］。通過高效液相色譜法對藥物進行鑒別,可將時間、組分結構、性質保留下來,并把其當做藥物定性的參數(shù)。比如,在鑒別南北五味子時,借助高效液相色譜法測定兩種五味子中組分含量,采用C18 柱,流動相是配比為65∶35 的甲醇與水,控制流速在1.0 ml/min,檢測波長≤250 nm,如此可在最短時間內(nèi)把南北五味子的組分含量鑒別出來。可見,高效液相色譜法的合理運用,能夠為藥品鑒別工作提供新的思路和方法。

3.3 藥品含量檢測 針對藥物原料中諸多雜質和成分,均可應用高效液相色譜法進行檢測,其花費的檢測時間較長,準確性與可靠性也很高［5］。比如,在對阿司匹林腸溶片進行有關物質檢查時,由于此藥屬于水楊酸類化合物,很容易被水解和氧化成醌型物質,因而水溶液不具良好的化學穩(wěn)定性,對此便可采取高效液相色譜法進行檢測。以1%冰醋酸的甲醇溶液為溶劑,一方面能夠提高藥物溶解性,另一方面也可增強溶液的穩(wěn)定性,使檢驗結果更加理想。采用高效液相色譜法對四環(huán)素類藥物進行檢測,能夠將四環(huán)素類立體異構體與其自身有效分離。對復方金銀花顆粒溶液中的有機酸含量進行檢測時,可利用高效液相色譜法區(qū)分有機酸的類型,便于分析藥物代謝機制。總之,以高效液相色譜法對藥品進行檢驗、檢測,可準確檢查原藥品中的雜質限量、成分含量以及中間體含量,防止假藥劣藥的出現(xiàn),在確保藥品質量的同時,提高用藥的安全性［6］。

3.4 抗生素檢驗 臨床在使用抗生素類藥物時,患者很容易出現(xiàn)不良反應,究其原因在于藥物中有中間體、聚合物和降解產(chǎn)物存在,而借助高效液相色譜法則能夠明確各類抗生素藥品中的雜質限量,從而科學指導臨床用藥［7］。以氨芐西林膠囊為例,針對其雜質限量,就可用高效液相色譜法進行檢測,在最短時間內(nèi)將藥物的主成分和降解產(chǎn)物、有關物質相分離,對制劑限度予以控制?，F(xiàn)階段,我國抗菌藥物均必須進行抗生素含量的測定,同時還包括大量的動物源性食品,以免人們在飲食過程中攝入抗生素殘留,引起藥物體內(nèi)蓄積,產(chǎn)生不適,影響身體健康［8］。

3.5 中藥質量檢測 中藥具有復雜的成分,對其進行質量檢測往往比較困難,采用常規(guī)的檢測方法尚難提高結果的準確性［9］。針對中藥成分多、分離難的問題,高效液相色譜法已成為測定中藥有效成分含量非常有效的一種方法。具體體現(xiàn)在：針對中藥的待測組分和其他雜質,高效液相色譜法可在最短的時間內(nèi)完成對二者的分離,保證后續(xù)中藥鑒別、檢查和含量測定環(huán)節(jié)的順利開展。比如,針對復方丹參滴丸中的丹參素和兒茶醛的含量,借助高效液相色譜法進行測定,效果非常好,不僅具有較高的分離度,且定量準確,讓定性檢測存在的問題得到了較好的解決。所以,將高效液相色譜法應用于中藥質量檢測中,分離度佳、靈敏度高、操作簡便、結果準確可靠,可定量、定性分析測定中藥產(chǎn)品中的有效成分,有助于實現(xiàn)中藥質量檢測的現(xiàn)代化、標準化和規(guī)范化。

3.6 手性藥物檢測 除了在以上幾方面發(fā)揮了積極的作用外,高效液相色譜法也可用于檢測一些難度較大的手性藥物。一般來說,手性化合物可通過以下幾種方法獲得,包括不對稱合成、外消旋體拆分、天然物的提取以及生物合成等。據(jù)了解,手性藥物及其相應的對映異構體,物理性質、化學性質基本相同,因此,在對其進行分離與鑒別時,操作難度就比較大［10］。而高效液相色譜法則可憑借其自身的高靈敏性,在不用進行衍生化的前提下分析、檢測手性藥物。目前,在手性藥物分析中,最常見的一種方法就是色譜分離法,其共包含三部分內(nèi)容,分別是臨界流體色譜、高效毛細管電泳色譜與高效液相色譜,對手性藥物拆分意義重大。針對分離起來比較困難的手性藥物,可先做衍生化反應,使一個非對映異構分子形成,接著再完成分離檢測。總之,高效液相色譜法不論是在手性新藥研究,手性藥物代謝,還是質量控制過程均有非常高的應用價值,且同時還具有很廣泛的發(fā)展前景［11］。

3.7 非添加化學成分檢驗 近年來,日趨激烈的市場競爭,導致市場上出現(xiàn)了諸多聲稱有藥物治療作用的保健品或假藥,而其制假的方式無一例外的都是以非法方式添加化學成分［12］。因此,在對非法添加的化學成分進行檢驗的過程中,高效液相色譜法是必不可少的分析方法。薄層色譜法與之相比,相對比較復雜,誤差率較高,專屬性較差。而高效液相色譜法不論是分析能力,還是分離效果均比較強,能夠快速進行定量檢查,并對藥物成分開展分離定性,以保證藥品質量,確保藥物作用達到最優(yōu)。

4 高效液相色譜新技術的發(fā)展

現(xiàn)階段,正處于發(fā)展中的高效液相色譜新技術主要有3 種,分別是高效液相色譜法-蒸發(fā)光散射檢測技術(HPLC-ELSD)、高效液相色譜-質譜聯(lián)用技術(HPLC-MS)和快速高效液相色譜技術［13］。HPLCELSD 技術通過結合蒸發(fā)光檢測技術和高效液相色譜技術,讓過去被含發(fā)色團的化合物檢測范圍所限制的問題得到了有效解決,進而使高效液相色譜技術被應用于更大的范圍內(nèi)。HPLC-MS 技術是在液相色譜技術上運用質譜儀把復雜的有機混合物給有效分離,該種技術主要就是對質譜儀強大的組分鑒定能力予以了運用?？焖俑咝б合嗌V技術是基于高效液相色譜技術進一步優(yōu)化了色譜參數(shù),同時升級、改造了柱子,讓柱子面對高壓也能夠較好的承受,使柱效增加,進而提高高效液相色譜技術的速度、效率,使檢測可以在更短的時間內(nèi)完成［14］。

5 實際案例應用

以復方氨基酸注射液為例,在對其焦谷氨酸含量進行測定時,就可對高效液相色譜技術予以采用,借以體現(xiàn)在藥品檢驗中,高效液相色譜技術的應用效果,具體來說就是,當人體未充分吸收到蛋白質時,受氨基酸過低的影響,機體便會出現(xiàn)新陳代謝障礙,而這個時候若對藥物復方氨基酸注射液予以使用,則能夠讓患者接收到充足的蛋白質,進而使術后營養(yǎng)狀況得到有效改善［15］。按照氨基酸總量,這一藥物可分為兩種規(guī)格,即 5% 與12%,而含L-谷氨酸含量也有兩種,分別是0.75 mg/ml 和1.80 mg/ml。因為必須在高溫條件下制備產(chǎn)品,所以極易導致藥物中有焦谷氨酸產(chǎn)生,對此就可借助高效液相色譜技術來測定復方氨基酸注射液中焦谷氨酸的含量。

在具體測定時,應優(yōu)化色譜條件、測定方法。以Agilent ZORBAXSB-C18 色譜柱作為首選,其耐酸性非常強,能夠將樣品中的不同組分峰有效分離,且柱溫一定要控制在適宜范圍內(nèi),以便提高柱效。為了讓分離效果更為理想,設定pH 值為1.6。同時將樣品過柱環(huán)節(jié)省略,直接測定樣品,也降低成分含量,獲得準確性、可靠性更高的測定結果。

綜上所述,隨著社會經(jīng)濟的日新月異,人們越來越注重藥品的安全和質量,只有實現(xiàn)藥品檢驗檢測技術的飛速發(fā)展,才能從根本上保障廣大人民群眾用藥的安全性。隨著高效液相色譜技術在大范圍內(nèi)的應用,人們的用藥安全已經(jīng)得到了基本的保障,該檢測技術在今后的發(fā)展空間廣闊、前景遠大,值得人們引起高度重視。