翡翠景天黑腐病菌山扁豆生棒孢生物學特性及室內(nèi)藥劑篩選

姚錦愛　黃鵬　張杰　侯翔宇　余德億

關(guān)鍵詞：翡翠景天；山扁豆生棒孢；生物學特性；毒力測定

中圖分類號：S436.8 文獻標識碼：A

多肉植物（succulent plant）具有肥厚的肉質(zhì)根、莖或葉，因此也稱為“多漿植物”，其形嬌俏動人，葉色豐富綺麗，花期長，適宜居家裝飾，深受人們喜愛，是近年來熱門的新興觀賞植物[1]。其中景天科（Crassulaceae）是多肉植物中最重要的科之一，在中國常見種屬有景天屬（Sedum）、擬石蓮屬（Echeveria）、長生草屬（Sempervivum）、蓮花掌屬（Aeonium）、風車草屬（Graptoveria）等10 屬242 種[2]。翡翠景天（Sedum morganianum）是福建省主要種植品種之一，受福建省亞熱帶氣候影響，多肉植物翡翠景天種植基地黑腐病發(fā)生嚴重。調(diào)查發(fā)現(xiàn)植株感病初期葉片或莖部出現(xiàn)黑褐色病斑，隨后病斑逐漸擴大呈水漬狀，直至葉片腐爛，后期葉片大量脫落，嚴重時導致植株死亡。據(jù)報道，翡翠景天黑腐病的病原菌為山扁豆生棒孢（Corynespora cassiicola）[3]。山扁豆生棒孢是一種世界性的植物病原菌，寄主范圍廣，可侵染黃瓜、甜椒、番茄等作物，具有癥狀類型多樣的特點，在濕熱環(huán)境下擴展迅速，常侵染植物葉片，也可侵染寄主的花、果實、根莖[4-5]。

近年由病原菌山扁豆生棒孢引起的翡翠景天黑腐病不斷加重，嚴重降低了翡翠景天的產(chǎn)量和觀賞價值。目前，關(guān)于該病原菌生物學特性的研究尚無報道。因此，明確該病原菌的生物學特性，為多肉植物翡翠景天的種植栽培提供指導；篩選高效安全的殺菌劑，可為翡翠景天黑腐病的綜合防治提供理論支撐和指導依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試菌株：翡翠景天黑腐病病原菌代表性菌株山扁豆生棒孢（Corynespora cassiicola）FJSD-3，GenBank 登錄號為MG825181，由福建省農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所提供。

供試 藥劑： 97%氯氟醚菌唑（ mefentrifluconazole，異丙醇三唑類，巴斯夫歐洲公司），98%咪鮮胺原藥（prochloraz，咪唑類，河北阿爾泰藥業(yè)有限公司），99%苯醚甲環(huán)唑（difenoconazole，三唑類，湖南騰聯(lián)藥業(yè)有限公司），98%吡唑醚菌酯原藥（pyraclostrobin，甲氧基丙烯酸酣類，合肥隆之升藥業(yè)有限公司）， 97%多菌靈原藥（carbendazim，苯并咪唑類，上海昆淼實業(yè)有限公司），99.8%咯菌腈原藥（fludioxonil，吡咯類，陜西恒潤化學工業(yè)有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 病原菌生物學特性測定（1）溫度對病原菌菌絲生長的影響。采用菌絲生長速率法測定[6]。取新鮮的山扁豆生棒孢菌餅（d=5.0 mm）接種于PDA 平板中央，分別置于10～40 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每5 ℃為一梯度，共7 個梯度，6 d 后采用十字交叉法測量菌落直徑，每處理3 次重復。

（2）pH 對病原菌菌絲生長的影響。取新鮮的山扁豆生棒孢菌餅（d=5.0 mm）接種于pH 分別為4、5、6、7、8、9、10、11 的PDA 平板中央，在30 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，6 d 后測量菌落直徑，測定方法同1.2.1-（1），每處理3 次重復。

（3）光照對病原菌菌絲生長的影響。取新鮮的山扁豆生棒孢菌餅（d=5.0 mm）接種于PDA 平板中央，依次放置在全光照、12 h 光照/12 h 黑暗和全黑暗的30 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，6 d 后測量菌落直徑，測定方法同1.2.1-（1），每處理3 次重復。

（4）不同碳、氮源對病原菌菌絲生長的影響。以蔗糖、淀粉、麥芽糖、葡萄糖、乳糖為供試碳源，以查氏培養(yǎng)基（硝酸鈉3 g、磷酸氫二鉀1 g、硫酸鎂0.5 g、氯化鉀0.5 g、硫酸亞鐵0.01 g、蔗糖30 g、瓊脂粉16 g、蒸餾水定容至1000 mL）為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，以不加碳源培養(yǎng)基為對照，以分別加入30 g 供試碳源為處理組，測定各碳源對病原菌菌絲生長的影響，取新鮮的山扁豆生棒孢菌餅（d=5.0 mm）接種于各碳源平板中央，在30 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，6 d 后測量菌落直徑，測定方法同1.2.1-（1），每處理3 次重復。以牛肉浸膏、酵母粉、硫酸銨、蛋白胨、硝酸鈉為供試氮源，以查氏培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，以不加氮源培養(yǎng)基為對照，以分別加入30 g 供試氮源為處理組，測定各氮源對病原菌菌絲生長的影響，取新鮮的山扁豆生棒孢菌餅（d=5.0 mm）接種于各氮源平板中央，在30 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，6 d 后測量菌落直徑，測定方法同1.2.1-（1），每處理3 次重復。

1.2.2 6 種殺菌劑的室內(nèi)毒力測定用無菌水將6 種供試藥劑配置成濃度為1 mg/L 的母液，在PDA 培養(yǎng)基內(nèi)加入各藥劑母液， 制成濃度為0.002、0.01、0.05、0.25、1.25、6.25 mg/L 的含藥PDA 平板。取新鮮的山扁豆生棒孢菌餅（d=5.0 mm）接種于含藥PDA 平板中央，以不含藥劑的PDA 平板為對照，在30 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，6 d 后測量菌落直徑，測定方法同1.2.1-（1），每處理3 皿， 3 次重復，計算抑制率。菌絲生長抑制率=（對照組菌落直徑-藥劑處理組菌落直徑）/（對照組菌落直徑-菌餅直徑）×100%。

1.3 數(shù)據(jù)處理

在 DPS 7.05 數(shù)據(jù)處理軟件上，利用Duncans新復極差法對生物學特性（溫度、pH、光照條件、碳氮源）進行顯著性分析；根據(jù)室內(nèi)毒力測定抑制率計算6 種殺菌劑對供試菌株的有效抑制中濃度（EC50）。

2 結(jié)果與分析

2.1 病原菌的生物學特性

2.1.1 溫度對病原菌菌絲生長的影響由圖 1A可知，溫度在10～30 ℃時，菌落直徑隨溫度的升高而增大，30 ℃ 時菌落直徑最大， 為（64.33±1.15）mm，當溫度在35 ℃以上時，菌落直徑隨溫度的升高而減小，在40 ℃時無法生長。結(jié)果表明，翡翠景天黑腐病菌山扁豆生棒孢菌絲生長的最適溫度為30 ℃，且高溫會抑制菌絲的生長。

2.1.2 pH 對病原菌菌絲生長的影響由圖 1B 可知，pH 為4～11 時，病原菌菌絲均可生長；當pH為4～7 時，菌落直徑隨pH 的升高而增大；當pH為7 時，菌落直徑最大，為（68.67±1.15）mm；當pH 為8～11 時，菌落直徑隨pH 的升高而減小。結(jié)果表明，翡翠景天黑腐病菌山扁豆生棒孢菌絲生長的最適pH 為7，整體喜好中性環(huán)境。

2.1.3 光照條件對病原菌菌絲生長的影響由圖1C 可知，在全黑暗、半光照和全光照3 種條件下，病原菌菌絲均能生長，全光照和光暗交替條件下菌絲的生長速度顯著高于全黑暗條件。結(jié)果表明，光照有利于菌絲生長。

2.1.4 不同碳、氮源對病原菌菌絲生長的影響翡翠景天黑腐病菌在含不同碳、氮源的平板上均能生長，生長速度差異顯著。碳源中蔗糖、乳糖、麥芽糖和葡萄糖的菌絲生長速度顯著高于對照組（圖1D），其中以葡萄糖為碳源的菌絲生長速度最快，培養(yǎng)6 d 后菌落直徑為（73.33±1.15）mm；氮源中牛肉浸膏、硫酸鈉的菌絲生長速度慢于對照組（圖1E），說明這2 種氮源對翡翠景天黑腐病病原菌菌絲的生長有一定抑制作用，蛋白胨和酵母的菌絲生長速度顯著高于對照組，其中以蛋白胨為氮源的菌絲生長速度最快， 培養(yǎng)6 d 后菌落直徑為（80.00±2.00）mm。結(jié)果表明，翡翠景天黑腐病病原菌菌絲生長的最適碳、氮源分別為葡萄糖和蛋白胨。

2.2 6 種殺菌劑室內(nèi)毒力測定

室內(nèi)毒力測定結(jié)果表明，供試的6 種不同化學結(jié)構(gòu)和作用機制的殺菌劑對翡翠景天黑腐病病原菌均具有不同程度的抑制作用（表1），其中氯氟醚菌唑的毒力最強，EC50 為0.0129 mg/L；其次為咪鮮胺，EC50 為0.0135 mg/L，苯醚甲環(huán)唑和咯菌腈的EC50 分別為0.0273、0.0296 mg/L；吡唑醚菌酯的毒力一般，EC50 為0.0768 mg/L；多菌靈的毒力最弱，EC50 為0.9353 mg/L。結(jié)果表明，氯氟醚菌唑和咪鮮胺對翡翠景天黑腐病病菌山扁豆生棒孢的毒力最強，而多菌靈對該病原菌的毒力弱。

3 討論

多肉植物翡翠景天黑腐病菌山扁豆生棒孢（C.cassiicola）是一種危害嚴重的病原真菌，通過測定其生物學特性，表明該病原菌菌絲生長的最適溫度為30 ℃，與田守波等[7]在番茄上發(fā)現(xiàn)的山扁豆生棒孢的最適溫度一致；菌落生長的最適pH為7，與張笛等[8]在黃瓜上發(fā)現(xiàn)的山扁豆生棒孢的最適pH 一致；光照有利于菌絲的生長，這與孫會杰等[9]在芝麻上發(fā)現(xiàn)的山扁豆生棒孢一致；碳、氮源篩選試驗結(jié)果表明，翡翠景天黑腐病菌菌絲生長的最適碳、氮源分別為葡萄糖和蛋白胨，其中最適碳源與王曉宇等[10]在蓮藕上發(fā)現(xiàn)的山扁豆生棒孢一致，但最適氮源與其不同，這可能是由于不同寄主的病原菌在生理特性上，抑或是2種作物的生長環(huán)境存在差異導致的。

目前，化學防治仍是該病原真菌的主要防治手段，篩選高效安全的殺菌劑對于田間科學用藥具有一定的指導作用。室內(nèi)毒力試驗結(jié)果表明，氯氟醚菌唑、咪鮮胺、苯醚甲環(huán)唑和咯菌腈對翡翠景天黑腐病病原菌具有較強毒力，EC50 分別為0.0129、0.0135、0.0273、0.0296 mg/L。這些殺菌劑對其他寄主植物的山扁豆生棒孢病原菌也具有較強毒力。李秀環(huán)[11]對黃瓜靶斑病菌的研究表明，氯氟醚菌唑?qū)ξ覈煌貐^(qū)的92 株黃瓜靶斑病菌均有較強毒力，EC50 范圍為0.001～1.370 mg/L。溫浩等[12]對草莓棒孢葉斑病病原菌的敏感性研究表明，咪鮮胺和苯醚甲環(huán)唑具有較好的毒力效果。禾麗菲等[13]對黃瓜靶斑病菌的室內(nèi)毒力試驗結(jié)果表明，咯菌腈和苯醚甲環(huán)唑的毒力效果較好。而本研究的室內(nèi)毒力結(jié)果并不能代表其田間實際防效，因為寄主植物的生長特性、病原菌及環(huán)境等條件的差異會影響其田間防效[14]。因此，后續(xù)可對藥劑的田間應用、藥劑殘留和對非靶標生物的影響等方面開展研究，研究結(jié)果將為翡翠景天黑腐病的有效防治提供科學指導。