高強(qiáng)度超聲波浴對小麥醇溶蛋白結(jié)構(gòu)及抗原性的影響

曹佳興,朱海蘭,王君榮,蒙太和,張國治,4*

1.河南工業(yè)大學(xué) 糧油食品學(xué)院, 河南 鄭州 450001 2.鄭州科技學(xué)院 食品科學(xué)與工程學(xué)院, 河南 鄭州 450064 3.中糧面業(yè)(武漢)有限公司, 湖北 武漢 430000 4.河南省面制主食工程技術(shù)研究中心, 河南 鄭州 450001

小麥?zhǔn)鞘澜绶秶鷥?nèi)重要的糧食作物之一,特別在一些東方國家,有悠久的種植和食用歷史。然而小麥同牛奶、雞蛋、花生、大豆、樹堅(jiān)果、貝類、魚類,并稱為八大過敏原,是食物攝入過敏以及接觸過敏的主要誘因之一[1]。食用小麥會(huì)誘發(fā)多種過敏癥狀,如乳糜瀉、貝殼哮喘、面包師哮喘以及小麥依賴性運(yùn)動(dòng)過敏等。全球范圍內(nèi)有0.2%～0.9%的成年人和0.4%～1.3%的兒童存在小麥過敏癥,并且這一數(shù)字還在持續(xù)上升[2-3]。中國是世界上最大的小麥生產(chǎn)國和消費(fèi)國,小麥經(jīng)常作為主食或其他食品輔料被廣泛食用,這也給小麥不耐受群體帶來了潛在威脅。

小麥醇溶蛋白(Glia)中存在大量抗原表位,是誘發(fā)小麥過敏的主要麩質(zhì)蛋白之一[4-5]。目前,常用的蛋白質(zhì)加工技術(shù)包括高溫、超高壓、超聲、輻照、酶處理以及化學(xué)處理等。這些方法能有效降低過敏原的抗原性,其中酶處理的抑制效果最好[6],但是會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)的加工性能較差;傳統(tǒng)的高溫技術(shù)以及超高壓技術(shù)對抗原抑制效果并不穩(wěn)定;輻照作為新型高效的食品加工技術(shù),目前尚未被市場接受[7]。超聲波是一種非熱處理技術(shù),近年來廣泛應(yīng)用于新興食品的研發(fā)中。研究表明,超聲技術(shù)對水產(chǎn)、乳制品和部分水果中過敏原的抗原性具有良好的抑制效果[8-10],但在小麥的免疫特性方面研究較少。

作者設(shè)置了不同的超聲功率處理Glia,通過化學(xué)表征、光譜分析以及間接非競爭性酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、免疫印跡吸附試驗(yàn)(Western blotting)測定Glia的結(jié)構(gòu)以及抗原性,對超聲處理前后Glia抗原性和結(jié)構(gòu)變化的相關(guān)性進(jìn)行了分析,為低敏性谷物食品的開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

小麥粉：河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院;聚丙烯酰胺凝膠電泳試劑盒、兔抗小麥醇溶蛋白血清：上海雅酶生物技術(shù)有限公司;HRP-山羊抗兔IgG：Sigma公司;PVDF膜、福林酚試劑、雙組分TMB顯色劑、雙組分DAB顯色劑：北京索萊寶科技有限公司;5,5′-二硫代雙-2-硝基苯甲酸(DTNB)、鄰苯二甲醛：上海麥克林生化科技有限公司。其他試劑均為分析純。

1.2 主要儀器與設(shè)備

全自動(dòng)凱式定氮儀：福斯分析儀器公司;超聲波清洗裝置：昆山超聲儀器有限公司;電泳裝置及成像設(shè)備：Bio-Rad生命科學(xué)有限公司;傅里葉變換紅外光譜儀：美國布魯克儀器有限公司;熒光分光光度計(jì)、紫外分光光度計(jì)：島津株式會(huì)社;激光顯微拉曼光譜儀：美國賽默飛世爾儀器有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 蛋白質(zhì)的制備

Glia的提取參照Zhang等[11]的研究。提取物通過凱氏定氮法測定其蛋白含量為91.27%。提取的Glia凍干后于4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 超聲波浴處理

將Glia充分溶解在65%乙醇中,質(zhì)量濃度為10 mg/mL。設(shè)定超聲條件：超聲時(shí)間2 h,功率0、240、360、480、600 W;頻率40 kHz,溫度30 ℃。

1.3.3 SDS-PAGE

參照李慧靜[12]的方法對Glia進(jìn)行SDS-PAGE分析,小麥醇溶蛋白與4倍上樣緩沖液按照體積比3∶1 混合,煮沸10 min后上樣。

1.3.4 游離巰基含量和游離氨基含量的測定

采用ELLMA法測定游離巰基含量[13]。將0.03 mL ELLMA工作液(8 mg DTNB溶解于2 mL TRIS(pH 8)緩沖液中)加入3 mL Glia溶液中,暗反應(yīng)30 min后測定412 nm處吸光度。

游離巰基含量=75.53×A412×D/C,

式中：A412為412 nm處的吸光度;D為稀釋倍數(shù);C為樣品質(zhì)量濃度,mg/mL。

游離氨基含量的測定參照陽倩等[14]的方法。

1.3.5 FTIR分析

參照?；勖舻萚15]的方法進(jìn)行蛋白質(zhì)FTIR掃描。準(zhǔn)確稱量1 mg樣品,與100 mg KBr混合碾磨,壓成薄片后用于光譜采集。

1.3.6 熒光光譜分析

將樣品用PBS緩沖液(pH 7.2)溶解,樣品質(zhì)量濃度為0.25 mg/mL。設(shè)置熒光光譜參數(shù)：激發(fā)波長280 nm,發(fā)射波長290～500 nm。

1.3.7 拉曼光譜分析

使用10倍物鏡聚焦,至窗口能夠清晰地觀察到樣品。然后采集樣品的拉曼光譜,設(shè)定波長785 nm,激光功率25 MW,狹縫寬度50 nm,采集范圍400～2 000 cm-1。

1.3.8 Western blotting分析

參照Zhao等[16]的方法,對樣品進(jìn)行Western blotting分析。

1.3.9 ELISA分析

參照Zhang等[11]的方法,并稍加調(diào)整。采用間接非競爭ELISA分析超聲波浴后Glia的抗原性變化。將100 μL /孔的2 mg/mL Glia用脫脂牛奶(5%)包被于96孔板中,4 ℃封閉過夜。倒凈封閉液,使用PBST(PBS-吐溫20)洗滌孔板3次以上,然后每孔加入100 μL 一抗(兔抗小麥醇溶蛋白血清),37 ℃孵化1 h。倒凈孔板中的一抗血清,按照前文所述洗滌3次除去未反應(yīng)的一抗血清,然后每孔加入100 μL 二抗血清(HRP-山羊抗兔IgG),37 ℃孵化1 h。反應(yīng)結(jié)束后重復(fù)上述洗滌操作,去除未反應(yīng)的二抗血清,然后加入TMB顯色液(A液與B液體積比1∶1)顯色15 min,使用H2SO4(2 mol/L)終止顯色反應(yīng)。Glia抗原性可由450 nm處吸光度(OD)表示,計(jì)算抗原抑制率：

抗原抑制率=(OD0-OD450)/OD0×100%,

式中：OD0為未進(jìn)行超聲處理的Glia在450 nm處的吸光度;OD450為超聲處理的Glia在450 nm處的吸光度。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)均設(shè)定3組平行。通過SPSS 26.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 超聲波浴對Glia亞基的影響

通過還原性SDS-PAGE技術(shù)分離α/β-Glia、γ-Glia、ω- Glia,并且分析HIWU對Glia亞基的影響。由圖1(a)可知,Glia的電泳條帶主要集中于27～48 kDa。隨著超聲功率增強(qiáng),Glia的條帶沒有顯著改變,表明超聲處理Glia不會(huì)產(chǎn)生新的小分子亞基,與O′sullivan等[17]的研究一致,超聲處理并沒有引起小麥蛋白亞基的顯著變化。因?yàn)槌暡ㄔ∈且环N相對溫和的處理方式,因此對于一些構(gòu)象緊密的蛋白質(zhì),HIWU提供的能量并不能引起其一級結(jié)構(gòu)的變化。非還原SDS-PAGE如圖1(b)所示,在非還原條件下,Glia的分子質(zhì)量主要集中在27～35 kDa之間。360 W和480 W超聲處理后的Glia條帶變深,這可能是α/β-Glia通過二硫鍵交聯(lián)形成了蛋白質(zhì)聚合體。600 W處理后的Glia條帶強(qiáng)度減輕,這可能是超聲引起的蛋白質(zhì)聚集形成了大分子聚合體而無法進(jìn)入泳道。

2.2 超聲波浴對Glia游離巰基含量和游離氨基含量的影響

蛋白質(zhì)中的巰基以及二硫鍵會(huì)影響蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性,超聲波誘發(fā)蛋白質(zhì)變性,可能會(huì)體現(xiàn)在蛋白質(zhì)游離巰基與二硫鍵之間的轉(zhuǎn)換。未處理Glia中游離巰基含量為(5.37±0.10) nmol/mg,經(jīng)過超聲處理后Glia中游離巰基增加了(0.18～1.82) nmol/mg。在480 W超聲處理后的Glia中游離巰基含量達(dá)到最大,為(7.19±0.13) nmol/mg。高強(qiáng)度超聲破壞了蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu),使其結(jié)構(gòu)舒展[18],這可能導(dǎo)致內(nèi)部的游離巰基暴露。然而當(dāng)處理功率達(dá)到600 W時(shí),游離巰基含量下降至(6.78±0.21) nmol/mg。這可能是因?yàn)楦邚?qiáng)度超聲空化效應(yīng)產(chǎn)生的自由基(H2O-OH-+H+)[19]、游離巰基被氧化,也有可能是由于超聲引起蛋白質(zhì)聚集,掩蓋了部分巰基。

通過對游離氨基的測定,可以判斷超聲處理后Glia結(jié)構(gòu)的展開程度和氧化程度[20]。由圖2可知,未處理Glia中游離氨基含量為(587.25±1.07) nmol/mg。240 W超聲處理后Glia中游離氨基有所減少,這可能是蛋白質(zhì)聚集所致。隨超聲功率增強(qiáng),Glia中游離氨基含量顯著增加。

注：泳道1-5分別為超聲功率0、240、360、480、600 W處理后的樣品。圖1 超聲波浴處理后Glia的還原SDS-PAGE和非還原SDS-PAGEFig.1 Reduced SDS-PAGE and non-reduced SDS-PAGE of Glia after ultrasonic bath treatment

注：不同字母表示差異顯著(P <0.05)。圖7同。圖2 超聲波浴處理后Glia中游離巰基和游離氨基含量Fig.2 Content of free sulfhydryl and free amino groups in Glia after ultrasonic bath treatment

這可能是由于蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)拉伸導(dǎo)致氨基暴露。另外,超聲產(chǎn)生的剪切空化效應(yīng),在溶液中產(chǎn)生微小氣泡并瞬間破裂,導(dǎo)致局部瞬時(shí)溫度升高使氨基氧化。

2.3 超聲處理對Glia二級結(jié)構(gòu)的影響

FTIR光譜的酰胺Ⅰ帶包含了蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)的信息(圖3),通過對其進(jìn)行擬合計(jì)算得到蛋白質(zhì)各種二級結(jié)構(gòu)的含量。由表1可知,未處理Glia中β-折疊含量為(49.27±0.02)%,是Glia的主要二級結(jié)構(gòu),α-螺旋、β-轉(zhuǎn)角和無規(guī)則卷曲分別為(14.39±0.01)%、(17.16±0.01)%和(19.18±0.03)%。在240 W功率處理后Glia的α-螺旋增加。繼續(xù)增大處理功率,α-螺旋含量顯著降低,同時(shí)蛋白質(zhì)中無規(guī)則結(jié)構(gòu)顯著增加。這表明超聲處理導(dǎo)致Glia二級結(jié)構(gòu)去卷曲化,蛋白質(zhì)的彈性降低。本研究中,Glia的有序結(jié)構(gòu)被HIWU破壞,蛋白質(zhì)的親水或疏水區(qū)域暴露從而出現(xiàn)了新的分子內(nèi)和分子鍵交聯(lián)。然而Li等[21]研究發(fā)現(xiàn),啤酒花谷蛋白樣品中α-螺旋和β-折疊在經(jīng)過150～350 W超聲處理10 min后顯著增加。因此,超聲剪切作用也可能導(dǎo)致蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)更加扭曲復(fù)雜,形成新的折疊結(jié)構(gòu)。

圖3 超聲波浴處理后Glia的FTIR光譜Fig.3 FTIR spectra of Glia after ultrasonic bath treatment

蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)與其致敏性密切相關(guān),Zhou等[22]用高靜水壓技術(shù)處理銀杏種子蛋白,使其結(jié)構(gòu)趨于無序化,并有效降低了蛋白的致敏性。He等[23]將花生過敏原Ara h1與膳食多酚結(jié)合,有效地降低了其對嗜堿性粒細(xì)胞的脫顆粒程度,這一過程也伴隨著蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)變。Glia經(jīng)超聲處理后α-螺旋和β-折疊結(jié)構(gòu)減少,蛋白質(zhì)進(jìn)一步趨于無序。這有可能是破壞了Glia的構(gòu)象表位,使特異性抗體無法正常識別。

2.4 超聲波浴對Glia三級結(jié)構(gòu)的影響

蛋白質(zhì)中由于酪氨酸(Tyr)、色氨酸(Trp)和苯丙氨酸(Phe)等芳香族氨基酸存在,使蛋白質(zhì)具有內(nèi)源熒光。這些氨基酸對微環(huán)境變化敏感,通過對其熒光進(jìn)行分析可以判斷蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)變化。由圖4可知,未處理的Glia最大熒光強(qiáng)度為511.47±0.45 A.U.,最強(qiáng)熒光發(fā)射波長為349 nm。樣品經(jīng)超聲處理后均出現(xiàn)猝滅現(xiàn)象,并且Glia的內(nèi)源熒光強(qiáng)度最大值(FLmax)隨著超聲功率增強(qiáng)而顯著降低。HIWU使蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)舒展,蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象改變,包裹在疏水區(qū)域的Tyr和Trp開始暴露并與極性環(huán)境接觸,從而導(dǎo)致Glia內(nèi)源熒光降低。

表1 超聲波浴處理后Glia的二級結(jié)構(gòu)含量Table 1 Content of Glia secondary structure after ultrasonic bath treatment %

注：內(nèi)插表中同列不同字母表示差異顯著(P<0.05)。圖4 超聲波浴處理后Glia的熒光光譜Fig.4 Fluorescence spectra of Glia after ultrasonic bath treatment

2.5 超聲波浴對Glia側(cè)鏈結(jié)構(gòu)的影響

2.5.1 酪氨酸和色氨酸

由圖5可知,拉曼光譜中850、830 cm-1的特征峰是由于Tyr殘基的對位取代苯環(huán)振動(dòng)產(chǎn)生。這兩處峰值之比(I850/I830)即費(fèi)米共振可用于表征Tyr的位置狀態(tài)[24]。若(I850/I830)≥1,則酪氨酸處于暴露狀態(tài);若(I850/I830)<1則處于包埋狀態(tài)。由表2可知,未處理Glia的I850/I830小于1,說明Tyr處于“嵌入”狀態(tài)。Glia經(jīng)過超聲后I850/I830均大于1,說明超聲處理導(dǎo)致Glia三級結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,Tyr殘基暴露,進(jìn)一步與極性環(huán)境接觸。

圖5 超聲波浴處理后Glia的拉曼光譜Fig.5 Raman spectra of Glia after ultrasonic bath treatment

拉曼光譜中760 cm-1處的峰(I760)由Trp殘基伸縮振動(dòng)產(chǎn)生。以phe作為內(nèi)標(biāo)進(jìn)行歸一化處理后,該處峰強(qiáng)度可用于Trp未知狀態(tài)的表征。有研究表明,原本嵌入在疏水環(huán)境中的Trp暴露于極性環(huán)境后,其760 cm-1處的峰值會(huì)降低[25]。由表2可知,超聲后Glia的I760小于未處理的,這表明Try殘基逐漸從嵌入狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)楸┞稜顟B(tài)。

綜上所述,超聲處理導(dǎo)致Tyr和Trp暴露并更容易接觸極性環(huán)境,蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)在超聲之后發(fā)生改變,這一結(jié)論與熒光分析一致。

2.5.2 二硫鍵構(gòu)象分析

拉曼光譜在500～550 cm-1處的特征峰包含了蛋白質(zhì)二硫鍵的結(jié)構(gòu)信息。500～510 cm-1為g-g-g模式;515～525 cm-1為g-g-t模式;535～545 cm-1是t-g-t模式[26]。通過對500～550 cm-1范圍內(nèi)的峰進(jìn)行擬合分析并計(jì)算以分析超聲對二硫鍵結(jié)構(gòu)的影響。

由表2可知,未處理的Glia中二硫鍵主體構(gòu)型為g-g-g,其含量為(46.55±0.04)%,占比最高。g-g-g型主要作用于分子內(nèi)部,t-g-t型主要與分子間二硫鍵作用有關(guān)。Glia中t-g-t型二硫鍵含量較少,這主要是由于ω-Glia中巰基含量較少,Glia分子間不易形成二硫鍵[27]。經(jīng)過超聲之后,Glia的構(gòu)型從g-g-g轉(zhuǎn)變?yōu)間-g-t和t-g-t,g-g-g含量顯著降低而t-g-t含量顯著增加。這可能是因?yàn)槌暡ㄔ谌芤褐挟a(chǎn)生了強(qiáng)的空化效應(yīng)破壞了原有的分子內(nèi)二硫鍵,同時(shí)氧化了部分活躍的巰基形成分子間二硫鍵。另外,Glia中t-g-t含量在360 W時(shí)增加至(26.28±1.12)%,繼續(xù)增強(qiáng)處理功率至600 W,t-g-t含量減少至(10.72±0.74)%,這可能是由于高強(qiáng)度的超聲波打斷了分子間的二硫鍵。超聲作用力破壞了蛋白質(zhì)的二硫鍵構(gòu)象,這也使蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)變得不穩(wěn)定,導(dǎo)致結(jié)構(gòu)松散暴露出新的游離巰基。當(dāng)處理功率過高時(shí),導(dǎo)致分子重新聚集,這也可能是在600 W時(shí)Glia游離巰基減少的原因之一。二硫鍵的存在使蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)更穩(wěn)定,可能使其結(jié)合表位更容易表達(dá),當(dāng)二硫鍵被還原時(shí),蛋白質(zhì)的抗體結(jié)合能力顯著降低[28]。因此結(jié)構(gòu)的變化與蛋白質(zhì)的抗原性是密切相關(guān)的。

表2 超聲波浴處理后Glia側(cè)鏈結(jié)構(gòu)變化及二硫鍵構(gòu)型含量Table 2 Change of Glia side chain structure and the content of disulfide bond configuration after ultrasonic bath treatment

2.6 超聲波浴對Glia亞基的抗體結(jié)合能力影響

采用Western blotting對Glia亞基的抗原性進(jìn)行分析。由圖6可知,未處理和超聲處理的Glia均出現(xiàn)免疫條帶,其中240、360、600 W處理后的Glia在25 kDa附近的反應(yīng)條帶略有加深,而480 W處理的Glia在25 kDa附近幾乎沒有免疫反應(yīng)條帶。說明超聲產(chǎn)生了小分子亞基并且其具有結(jié)合IgG的能力,但這與SDS-PAGE分析不同,可能是由于Western blotting比SDS-PAGE更靈敏。超聲處理對30～40 kDa內(nèi)的Glia亞基抗原性影響不顯著,可能是由于該處蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定,超聲提供的能量不足以對其產(chǎn)生影響。

注：泳道1-5分別為超聲功率0、240、360、480、600 W處理后的樣品。圖6 超聲波浴處理后Glia的免疫印記圖Fig.6 Western blotting of Glia after ultrasonic bath treatment

Glia的抗原性受其線性表位和構(gòu)象表位影響,而線性表位的變化對其影響更為顯著[29]。但并不意味著線性表位的破壞會(huì)使Glia抗原性完全喪失,因?yàn)楫a(chǎn)生的一些小分子肽依然能夠結(jié)合IgG誘發(fā)超敏反應(yīng)。另外,構(gòu)象表位同樣是抗原在動(dòng)物體內(nèi)誘發(fā)超敏反應(yīng)的重要原因,因此還需對其進(jìn)一步分析。

2.7 超聲波浴對Glia的抗原性影響

由圖7可知,與未超聲的Glia相比,超聲處理顯著降低了Glia的抗原性,并且隨著超聲功率增加,Glia的抗原性逐漸降低。超聲功率為480 W時(shí)降低效果顯著,其抗原抑制率為(33.03±1.72)%。當(dāng)功率升高至600 W時(shí),Glia的抗原性稍增加。影響蛋白質(zhì)抗原性的主要原因是表位的完整性以及可接觸性[30]。因此,Glia抗原性降低主要是超聲導(dǎo)致蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)變化,從而使原有的抗原表位被破壞或隱藏,導(dǎo)致特異性抗體無法正確識別抗原表位。結(jié)合前文所述,蛋白質(zhì)的α-螺旋和β-折疊含量降低;游離巰基暴露,酪氨酸和色氨酸極性環(huán)境增強(qiáng)和二硫鍵構(gòu)象轉(zhuǎn)變,表明蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)經(jīng)超聲處理后變得松散。而繼續(xù)增大處理功率,又會(huì)增加Glia的抗原性,這可能是由于高強(qiáng)度超聲處理使游離巰基重新氧化成二硫鍵,形成了新的構(gòu)象表位;也有可能是蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)被破壞導(dǎo)致埋藏在內(nèi)部的線性表位重新暴露,導(dǎo)致Glia抗原性增強(qiáng)。

圖7 超聲處理后Glia抗原性變化Fig.7 Change of Glia antigenicity after ultrasonic bath treatment

3 結(jié)論

本研究采用化學(xué)法、光譜法分析超聲處理對Glia結(jié)構(gòu)的影響,并通過Western blotting、ELISA分析其抗原性變化。結(jié)果表明,超聲處理顯著降低了Glia的抗原性,在功率為480 W時(shí)降低效果最顯著,其抗原抑制率為(33.03±1.72)%?；瘜W(xué)表征發(fā)現(xiàn),超聲處理使Glia游離氨基和游離巰基的含量增加;SDS-PAGE分析并未發(fā)現(xiàn)有小分子亞基產(chǎn)生,而Western blotting結(jié)果卻顯示超聲之后25 kDa處的亞基抗原反應(yīng)增強(qiáng)。光譜分析表明,經(jīng)過超聲處理的Glia二級結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,有序結(jié)構(gòu)含量降低;超聲處理改變了Glia的三級結(jié)構(gòu)和側(cè)鏈結(jié)構(gòu),酪氨酸和色氨酸進(jìn)一步暴露并接觸到極性環(huán)境。此外,維持蛋白質(zhì)空間構(gòu)象穩(wěn)定的g-g-g型二硫鍵含量減少。Glia空間構(gòu)象的改變可能破壞或掩蓋其抗原表位。本研究分析了超聲功率變化對Glia結(jié)構(gòu)和抗原性的影響,發(fā)現(xiàn)超聲對Glia的二級、三級結(jié)構(gòu)影響顯著,適度超聲能有效減少Glia的抗原反應(yīng)。超聲波作為新型食品加工技術(shù),對開發(fā)低敏性谷物制品有廣闊的應(yīng)用前景,但其抑制機(jī)制需進(jìn)一步研究。