轉(zhuǎn)位蛋白配體XBD173 對(duì)香煙煙霧提取物誘導(dǎo)小鼠肺炎癥反應(yīng)的減輕作用及其機(jī)制

高興洪, 唐紅梅, 李月蛟, 王孝蕓, 王 星, 袁謝芳, 吳 敏

（西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院炎癥與變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)室，四川 瀘州 646000）

自1956 年RICHARD-DOLL 闡述了吸煙與肺癌高度相關(guān)［1］，吸煙的危害已經(jīng)被廣泛研究。煙霧暴露可參與機(jī)體多種疾病的發(fā)生發(fā)展，巨噬細(xì)胞在受到香煙煙霧提取物（cigarette smoke extract，CSE）刺激時(shí)，可極化為M1 型巨噬細(xì)胞，分泌多種炎癥因子，在CSE 誘導(dǎo)的肺部炎癥反應(yīng)中具有重 要 作 用［2］，轉(zhuǎn) 位 蛋 白（translocator protein，TSPO）廣泛分布于線粒體外膜，具有調(diào)節(jié)膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)、類固醇類激素合成、卟啉轉(zhuǎn)運(yùn)、血紅素合成、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞增殖、離子運(yùn)輸、線粒體功能調(diào)節(jié)和免疫調(diào)節(jié)等多種功能［3］。XBD173 為人工合成的TSPO 配體，研究［4］顯示：XBD173 具有良好的抗炎作用和神經(jīng)保護(hù)作用，但XBD173 對(duì)CSE誘導(dǎo)的肺炎癥反應(yīng)和巨噬細(xì)胞極化是否有作用及其可能機(jī)制，國(guó)內(nèi)外尚未見相關(guān)報(bào)道。因此本研究以C57BL/6 小鼠和RAW264.7 細(xì)胞為研究對(duì)象，探討XBD173 對(duì)CSE 所致小鼠肺部炎癥反應(yīng)和CSE誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞M1 型極化的影響及其可能分子機(jī)制，以期為吸煙者的肺炎癥治療提供新思路。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、細(xì)胞、主要試劑和儀器18 只8 周齡SPF 級(jí)C57BL/6 雄性小鼠購于重慶騰鑫生物技術(shù)有限公司，動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK （川）2018-065，體質(zhì)量（20±2）g。12 h 交替照明，溫度保持在22 ℃～26 ℃，自由獲取食物和水，按照《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可管理辦法》和《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》的相關(guān)規(guī)定進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；香煙（嬌子牌）購自成都卷煙廠；小鼠Raw264.7 巨噬細(xì)胞購于中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫；血清購于澳大利亞Bovogen Biological 公司，高糖DMEM 培養(yǎng)基購于上海源培生物科技股份有限公司，XBD173 購于美國(guó)MedChemExpress 生物科技公司，CD80、CD86 和誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）流式抗體均購于賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司，活性氧（reactive oxygen species，ROS）檢測(cè)試劑盒購于上海碧云天生物技術(shù)有限公司，凋亡檢測(cè)試劑盒購于四正柏生物有限公司，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）試劑盒購于南京諾維贊生物科技有限公司，Western blotting 抗體GADPH、核因子κB/p65 （nuclear factor-κB/p65，NF-κB/p65）和磷酸化NF-κB/p65（phosphorylated NF-κB/p65，p-NF-κB/p65）均 購 于 美 國(guó) Cell Signal Technology 公司，ECL 超敏化學(xué)發(fā)光試劑盒購自四正柏生物有限公司，TSPO 轉(zhuǎn)染慢病毒、轉(zhuǎn)染試劑和嘌呤霉素購于吉?jiǎng)P基因，HE 染色試劑盒、RIPA 裂解液和SDS-PAGE 凝膠配制試劑盒均購于碧云天生物技術(shù)公司。凝膠成像分析儀購自美國(guó)BIO-RAD 公司，Leica DM2000 顯微鏡購自德國(guó)Leica Microsystems 公 司，Centrifuge 5810R 離 心 機(jī)購自德國(guó)艾本德公司，Nano400 微量分光光度計(jì)購自北京原平皓生物技術(shù)有限公司，LightCycler480 Ⅱ?qū)崟r(shí)熒光定量PCR 系統(tǒng)購自瑞士羅氏醫(yī)學(xué)儀器公司。

1.2 CSE 制備參 照NAKAMURA 等［5］方 法 制備：將香煙煙嘴與泵連接，通過泵的抽氣作用吸取香煙燃燒后的煙霧，按每支香煙煙霧溶解于2 mL PBS 液制成懸液。懸液經(jīng)NaOH 調(diào)節(jié)pH 值為7.4，經(jīng)孔徑為0.2 μm 濾膜過濾除去細(xì)菌和大顆粒后備用。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組、肺炎癥模型制備及處理18 只小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、CSE 組和CSE+XBD173 組，每組6 只。CSE 組和CSE+XBD173組小鼠給予CSE 滴鼻，每 次20 μ L，連 續(xù)28 d，2 次 間 隔24 h；在 第22～28 天，CSE+XBD173 組小鼠在CSE 刺激前0.5 h 給予10 mg·kg－1XBD173腹腔注射。第29 天處死小鼠。

1.4 HE 染色觀察各組小鼠肺組織病理形態(tài)表現(xiàn)處死小鼠后取新鮮肺組織，4%多聚甲醛固定20 h。脫水、透明、浸蠟和包埋，將包埋好的肺組織蠟塊切片，厚度為4 μm，按HE 染色試劑盒進(jìn)行后續(xù)步驟。染色完成后，顯微鏡下觀察各組小鼠肺組織病理形態(tài)表現(xiàn)。

1.5 PAS 染色觀察各組小鼠肺組織病理形態(tài)表現(xiàn) 處死小鼠后取新鮮肺組織，10% 甲醛固定，石蠟包埋，2 μm 厚度切片后常規(guī)脫蠟至水，PAS染色后中性樹膠封固。顯微鏡下觀察各組小鼠肺組織病理形態(tài)表現(xiàn)。

1.6 RAW264.7 細(xì)胞TSPO 蛋白敲低和篩選將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的RAW264.7 細(xì)胞經(jīng)細(xì)胞刮刮下，完全培養(yǎng)基制成細(xì)胞密度為（3～5）×104mL－1的細(xì)胞懸液，6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板鋪板，每孔2 mL，培養(yǎng)24 h 后，采用感染復(fù)數(shù)（multiplicity of infection，MOI）為20 的慢病毒感染RAW264.7 細(xì)胞以敲低TSPO 基因，培養(yǎng)12 h 后完全培養(yǎng)基換液繼續(xù)培養(yǎng)，在完全培養(yǎng)基中加入2 mg·L－1嘌呤嘧啶篩選，當(dāng)病毒載體上的綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，GFP）陽性表達(dá)率大于80%時(shí)，收集細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。TSPO 基因敲低序列，上游引物：5′-ACCATTGGGCC-3′，下 游 引 物：5′-CTGGTCTA-3′。

1.7 RT-qPCR 法檢測(cè)各組RAW264.7 細(xì)胞中白細(xì)胞介素6（interleukin-6，IL-6）和腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）mRNA 表達(dá)水平將實(shí)驗(yàn)處理后的細(xì)胞按照RNA 提取試劑盒說明書提取RNA；采用微量分光光度計(jì)測(cè)定總RNA純度，檢測(cè)RNA 樣本在波長(zhǎng)260 和280 nm 處的吸光度（A）值，控制A（260）/A（280）在1.9～2.1，RNA 電泳檢測(cè)其完整性。檢測(cè)濃度及純度后取2 μg 總RNA，采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA。逆轉(zhuǎn)錄條件：37 ℃反應(yīng)15 min，85 ℃反應(yīng)5 s。將逆轉(zhuǎn)錄所得cDNA 純化后應(yīng)用RT-qPCR 儀進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。反應(yīng)總體積為20 μL：2 μ L cDNA 模板，2 μ L 引 物，10 μL SYBR qPCR Master Mix，6 μL H2O。PCR 反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性30 s，擴(kuò)增循環(huán)95 ℃、5 s，56 ℃、34 s，共40 個(gè) 循 環(huán)。以β-actin 為 參 照，采 用2－ΔΔCt法 計(jì) 算IL-6 和TNF-α mRNA 相對(duì)表達(dá)水平。引物序列見表1。

1.8 Western blotting 法檢測(cè)各組RAW264.7 細(xì)胞中NF-κB/p65 和p-NF-κB/p65 蛋白表達(dá)水平細(xì)胞刺激結(jié)束后，吸去培養(yǎng)基，PBS 緩 沖 液 洗 滌1 次，加入200 μL RIPA 強(qiáng)裂解液，檢測(cè)蛋白濃度；加入含SDS 上樣緩沖液，煮10 min；進(jìn)行SDSPAGE 凝膠配制，上樣電泳；采用PVDF 膜轉(zhuǎn)膜；5%脫脂奶粉進(jìn)行封閉；按照抗體說明書稀釋一抗，4 ℃過夜孵育。TBST 洗滌3 次，進(jìn)行二抗孵育，4 ℃孵育2 h，TBST 洗滌3 次后，采用ECL 超敏化學(xué)底物試劑盒上機(jī)檢測(cè)拍照分析；Image J 軟件分析各蛋白條帶灰度值，計(jì)算目的蛋白表達(dá)水平。目的蛋白表達(dá)水平=目的蛋白條帶灰度值/β-actin 蛋白條帶灰度值。

1.9 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組RAW264.7 細(xì)胞CD80、CD86、iNOS 和ROS 表達(dá)水平將各組細(xì)胞分裝入5 mL 流式細(xì)胞管內(nèi)，離心細(xì)胞，棄上清，CD80、CD86 和iNOS 抗體用孵育緩沖液按照1∶1 000 稀釋，加入100 μL 含抗體的孵育緩沖液，重懸細(xì)胞；在冰上孵育30 min。1 200 r·min－1離心5 min，棄上清液；加入100 μL 孵育緩沖液重懸細(xì)胞，使用流式細(xì)胞分析儀檢測(cè)分析。ROS 按照試劑盒說明書檢測(cè)。CD80 和CD86 表達(dá)水平以各組熒光陽性細(xì)胞數(shù)量占總細(xì)胞數(shù)百分比表示，iNOS 和ROS 表達(dá)水平以各組細(xì)胞的平均熒光強(qiáng)度表示。

1.10 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組RAW264.7 細(xì)胞凋亡率收集已處理好的細(xì)胞至離心管內(nèi)，1 000 g 離心5 min，棄上清，收集細(xì)胞，用PBS 緩沖液輕輕重懸細(xì)胞并計(jì)數(shù)，取（5～10）×104個(gè)萬重懸的細(xì)胞，1 000 g 離心5 min，棄上清，加入195 μL Annexin Ⅴ-FITC 結(jié)合液輕輕重懸細(xì)胞；加入5 μL Annexin Ⅴ-FITC，混勻；加入10 μL 碘化丙啶染色液，混勻；室溫避光孵育10 min，流式細(xì)胞儀檢測(cè)，按說明書分析。

1.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 24.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。各組細(xì)胞中CD80、CD86、iNOS 和ROS表達(dá)水平，IL-6 和TNF-α mRNA 表達(dá)水平，細(xì)胞凋亡率，NF-κB/p65 和p-NF-κB/p65 蛋白表達(dá)水平均符合正態(tài)分布，以x±s 表示，多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組小鼠肺組織病理形態(tài)表現(xiàn)HE 染色和PAS 染色結(jié)果顯示：對(duì)照組小鼠肺組織中支氣管結(jié)構(gòu)完整，肺泡腔結(jié)構(gòu)清晰，肺泡壁厚度均勻，無增寬和滲出等現(xiàn)象，肺泡間隔無水腫、無炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、無分泌物滲出。CSE 組小鼠肺組織中支氣管管腔變窄，管壁增厚，有分泌物滲出，可見大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡結(jié)構(gòu)不完整。CSE+XBD173組小鼠肺組織中炎癥表現(xiàn)減輕。見圖1。

圖1 各組小鼠肺組織病理形態(tài)表現(xiàn)（×200）Fig.1 Pathomorphology of lung tissue of mice in various groups（×200）

2.2 各組RAW264.7 細(xì)胞中M1 表面標(biāo)志物CD80、CD86 和iNOS 表達(dá)水平與對(duì)照組比較，CSE 組RAW264.7 細(xì) 胞 中CD80、CD86 和iNOS 表達(dá)水平明顯升高（P<0.05或P<0.01）；與CSE組比較，CSE+XBD173 組RAW264.7 細(xì) 胞 中CD80、CD86 和iNOS 表 達(dá) 水 平 明 顯 降 低（P<0.05）。見圖2。

圖2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞中CD80、CD86 和iNOS 表達(dá)水平Fig.2 Expression levels of CD80, CD86，and iNOS in cells in various groups detected by flow cytometry

2.3 各組RAW264.7 細(xì)胞中ROS 表達(dá)水平與對(duì)照組（19 290±2 906）比較，CSE 組RAW264.7細(xì)胞中ROS 表達(dá)水平（26 789±3 980）明顯升高（P<0.05）；與CSE 組 比 較，CSE+XBD173 組RAW264.7 細(xì)胞中ROS 水平（20 120±4 114）明顯降低（P<0.05）。

2.4 各組RAW264.7 細(xì)胞凋亡率與對(duì)照組（8.80%±0.42%）比較，CSE 組RAW264.7 細(xì)胞凋亡率（28.96%±1.73%）明顯升高（P<0.05）；與CSE 組 比 較，CSE+XBD173 組RAW2647 細(xì) 胞凋亡率（22.94%±2.2%）明顯降低（P<0.05）。見圖3。

圖3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率Fig.3 Apoptotic rates of cells in various groups detected by flow cytometry

2.5 各組RAW264.7 細(xì)胞中IL-6 和TNF-α mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組比較，CSE 組RAW264.7 細(xì)胞 中IL-6 和TNF-α mRNA 表 達(dá) 水 平 明 顯 升 高（P<0.05）；與CSE 組 比 較，CSE+XBD173 組RAW264.7 細(xì) 胞 中IL-6 和TNF-α mRNA 表 達(dá) 水 平明顯降低（P<0.05）。當(dāng)RAW264.7 細(xì)胞TSPO蛋白敲低后，在TSPO KD+control 組、TSPO KD+CSE 組 和 TSPO KD+CSE+XBD173 組RAW264.7 細(xì) 胞 中IL-6 和TNF-α mRNA 表 達(dá) 水 平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

表2 RT-qPCR 法檢測(cè)各組細(xì)胞中IL-6 和TNF-α mRNA 表達(dá)水平Tab.2 Expression levels of IL-6 and TNF-α mRNA in cells in various groups detected by RT-qPCR method (n=3，±s）

表2 RT-qPCR 法檢測(cè)各組細(xì)胞中IL-6 和TNF-α mRNA 表達(dá)水平Tab.2 Expression levels of IL-6 and TNF-α mRNA in cells in various groups detected by RT-qPCR method (n=3，±s）

*P<0.05 compared with control group；△P<0.05 compared with CSE group.

TNF-α 1.09±0.13 1.61±0.22*0.65±0.14△1.00±0.10 0.91±0.06 0.75±0.13 Group Control CSE CSE+XBD173 TSPO KD+control TSPO KD+CSE TSPO KD+CSE+XBD173 IL-6 0.95±0.07 2.75±0.98*0.87±0.30△0.32±0.18 0.14±0.07 0.14±0.11

2.6 各組 RAW264.7 細(xì)胞中 NF-κB/p65 和p-NF-κB/p65 蛋白 表達(dá)水平3 組RAW264.7 細(xì) 胞中NF-κB/p65 蛋白表達(dá)水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P>0.05）；與 對(duì) 照 組 比 較，CSE 組RAW264.7 細(xì)胞中p-NF-κB/p65 蛋白表達(dá)水平明顯升高（P<0.05）；與CES組比較，CSE+XBD173組RAW264.7 細(xì)胞中p-NF-κB/p65 表達(dá)水平明顯降低（P<0.05）。見圖4。

圖4 Western blotting 法檢測(cè)各組細(xì)胞中NF-κB/p65 和p-NF-κB/p65 蛋白表達(dá)電泳圖（A）及直條圖（B 和C）Fig.4 Electrophoregram (A) and histograms (B，C) of expressions of NF-κB/p65 and p-NF-κB/p65 proteins in cells in various groups detected by Western blotting method

3 討 論

香煙是一種具有多重毒性的成癮物，與全身多個(gè)器官的損害有關(guān)［6］。香煙煙霧對(duì)心血管具有嚴(yán)重的損傷作用，可表現(xiàn)為內(nèi)皮功能障礙氧化應(yīng)激增加、心血管發(fā)病率和死亡率增加等［7］。TSPO 首先由BRAESTRUP 于1977 年發(fā)現(xiàn)，被認(rèn)為與外周的苯二氮卓類結(jié)合位點(diǎn)有高親和性［8］。正常情況下，TSPO 在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中表達(dá)較低，僅限于星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞，但當(dāng)腦損傷或炎癥時(shí)，其表達(dá)水平明顯升高［9-10］。在急性肺炎模型中，TSPO可作為衡量炎癥損傷的指標(biāo)［11-12］。研究［13-14］表明：TSPO 配體XBD173 可有效緩解視網(wǎng)膜缺血模型中的神經(jīng)退行性變，還可減輕視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的炎癥反應(yīng)。本研究結(jié)果顯示：XBD173 可有效抑制CSE 誘導(dǎo)的肺部炎癥反應(yīng)。

巨噬細(xì)胞是重要的免疫細(xì)胞，其主要的功能包括：①吞噬病原體、感染細(xì)胞、碎片和死亡細(xì)胞；②呈遞抗原；③分泌各種細(xì)胞因子［15］。當(dāng)巨噬細(xì)胞受到刺激時(shí)，會(huì)極化為M1 型巨噬細(xì)胞和M2 型巨噬細(xì)胞，M1 型巨噬細(xì)胞作為一種促炎癥細(xì)胞存在，主要參與體內(nèi)的1 型輔助T 細(xì)胞（T helper 1 cell，TH1）介 導(dǎo) 的 免 疫 反 應(yīng)，可 分 泌TNF-α、IL-1β、IL-12 和IL-6 等 炎 癥 因 子［15-16］，M1 型 巨 噬細(xì)胞參與多種疾病的病理過程。在小鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血模型中，TSPO 配體處理可降低小膠質(zhì)細(xì)胞活化 和 增加抗炎因子的產(chǎn)生［17］，TSPO 配體2-（2-氯苯基）喹唑啉-4-基二甲基氨基甲酸酯（2-Cl-MGV-1）和2-苯基喹唑啉-4-基二甲基氨基甲酸酯（MGV-1）可降低脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)的小 膠 質(zhì) 細(xì) 胞 炎 癥 因 子TNF-α、IL-6 和IL-1β 表達(dá)［18］。本研究結(jié)果顯示：CSE 刺激使RAW264.7細(xì)胞增加M1 極化水平和細(xì)胞因子分泌，XBD173處理可抑制巨噬細(xì)胞M1 極化和細(xì)胞因子分泌，與小鼠肺組織的病理結(jié)果一致；而在TSPO 敲低組中，各組之間無明顯變化，提示TSPO 對(duì)巨噬細(xì)胞功能起重要的調(diào)控作用。

ROS 既是一種重要的抗菌介質(zhì)，也是重要的信號(hào)分子［19］，在細(xì)胞增殖、缺氧適應(yīng)和細(xì)胞信號(hào)傳遞決定中起重要作用，但過量的ROS 會(huì)導(dǎo)致不可逆的細(xì)胞損傷甚至細(xì)胞死亡，許多疾病的發(fā)生和發(fā)展與ROS 生產(chǎn)過剩有密切關(guān)聯(lián)［20］。在視網(wǎng)膜損傷模型中，XBD173 可降低巨噬細(xì)胞的吞噬能力，減少ROS 產(chǎn)生從而發(fā)揮保護(hù)作用［21］。本研究結(jié)果顯示：XBD173 可抑制CSE 誘導(dǎo)的ROS 產(chǎn)生。細(xì)胞產(chǎn)生過量ROS 會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。本研究結(jié)果同時(shí)顯示：XBD173 可抑制CSE 誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡水平。凋亡的巨噬細(xì)胞通過釋放代謝產(chǎn)物和炎癥因子，激活MAPK 信號(hào)通路，導(dǎo)致巨噬細(xì)胞M1 極化增加和炎性因子釋放［22］。年齡相關(guān)黃斑變性模型的 研 究［13］結(jié) 果 顯 示：XBD173 可 通 過NADPH 氧化酶2 （NADPH oxidase 2，NOX2）通路或鈣離子減少ROS 的產(chǎn)生，降低小膠質(zhì)細(xì)胞激活。研究［23］顯 示：TSPO 可 與NOX2 亞 基gp91phox 和p22phox 結(jié)合，其機(jī)制可能與NOX2 通路相關(guān)。

NF-κB 于1986 年作為結(jié)合B 細(xì)胞的κ 輕鏈增強(qiáng)子 的 轉(zhuǎn) 錄 因 子 被 發(fā) 現(xiàn)［24］。NF-κB 家 族 是 真 核 轉(zhuǎn) 錄因子結(jié)構(gòu)相關(guān)的蛋白家族，包括5 個(gè)成員：NF-κB1（p50 及其前體p105）、NF-κB2（p52 以及其前體p100）、RelA （p65）、c-Rel 和RelB，5 個(gè)成員在正常狀態(tài)下通常在細(xì)胞質(zhì)中與NF-κB 抑制因子（inhibitory of NF-κB，IκB）家族結(jié)合保持未激活狀態(tài)，在其經(jīng)典激活途徑中，當(dāng)受到相應(yīng)信號(hào)分子刺激時(shí)，IκB 首先被磷酸化，繼而降解，從而促使NF-κB 異二聚體（RelA-p50 二聚體）從細(xì)胞質(zhì)中轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核，調(diào)控巨噬細(xì)胞向M1 型極化，進(jìn) 而 促 進(jìn)IL-1β、TNF-α 和IL-6 等 促 炎 因 子 的 釋放［25-26］。研究［27］顯示：NF-κB 通 路參與小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥的激活。本研究結(jié)果顯示：CSE 處理組細(xì)胞中p-NF-κB/p65 蛋白表達(dá)水平升高，而XBD173可降低其表達(dá)水平，提示XBD173 可能通過調(diào)節(jié)NF-κB 通路而發(fā)揮抗炎作用。

綜上所述，TSPO 配體XBD173 可減輕CSE 誘導(dǎo)的小鼠肺部炎癥反應(yīng)，TSPO 可調(diào)控巨噬細(xì)胞M1 極化和炎癥因子的產(chǎn)生，其機(jī)制可能與NF-κB通路有關(guān)，但其具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。本研究為XBD173 對(duì)香煙煙霧誘導(dǎo)的肺部炎癥反應(yīng)的保護(hù)作用提供了理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)，未來應(yīng)進(jìn)一步結(jié)合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)探索XBD173 的炎癥抑制作用機(jī)制，為香煙煙霧引起的肺部炎癥的改善提供新思路。