茯苓酸對(duì)人胰腺癌PANC-1 細(xì)胞遷移、侵襲和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的抑制作用

李 銳, 譚曉冬, 胡耀元

（1.中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院第十二普通外科病房，遼寧 沈陽(yáng) 110004；2.中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院胰腺甲狀腺外科病房，遼寧 沈陽(yáng) 110004）

胰腺癌是消化道惡性腫瘤中最具破壞性、預(yù)后最差的一種高度致命的癌癥，是男性和女性癌癥死亡的第四大原因，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)［1］。完全手術(shù)切除可明顯延長(zhǎng)胰腺癌患者的生存期，但胰腺癌通常為晚期確診，因此適合手術(shù)的患者較少，且手術(shù)后復(fù)發(fā)率仍較高，患者5 年生存率低于10%［2］。此外，胰腺癌具有侵襲性，50%的胰腺癌患者就診時(shí)發(fā)生轉(zhuǎn)移，多數(shù)接受手術(shù)治療的患者在術(shù)后4 年內(nèi)發(fā)生轉(zhuǎn)移［3］。因此，了解胰腺癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制對(duì)制定胰腺癌診斷及治療的新方案是必要的。中藥是多成分、多靶點(diǎn)和多階段的藥物，其作為癌癥預(yù)防和治療的藥物被廣泛接受［4］。萜類化合物是最大的一類植物特化次生代謝產(chǎn)物，具有抗高血壓、降低膽固醇和抗組胺保護(hù)作用以及抗腫瘤和抗血管生成活性［5］。茯苓酸（pachymic acid，PA）是一種來自茯苓的羊毛甾烷型三萜類化合物，具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化、降血糖、鎮(zhèn)靜和催眠活性等多種藥理作用［6］。關(guān)于PA 在胰腺癌中發(fā)揮作用的相關(guān)研究較少，CHENG 等［7］發(fā)現(xiàn)：PA 通過激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)吉西他濱耐藥的胰腺癌細(xì)胞凋亡，從而發(fā)揮抗癌作用。PA 對(duì)胰腺癌細(xì)胞遷移和細(xì)胞侵襲的作用及發(fā)揮作用的機(jī)制尚未見報(bào)道，有待進(jìn)一步研究。本研究應(yīng)用PA 處理胰腺癌PANC-1 細(xì)胞及細(xì)胞的裸鼠移植瘤模型，探究其對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）的影響，同時(shí)采用GSE64111 數(shù)據(jù)集中PA 處理及未處理胰腺癌細(xì)胞的差異表達(dá)基因，驗(yàn)證差異表達(dá)基因作為PA 治療胰腺癌的靶點(diǎn)的潛力。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、細(xì)胞、試劑和主要儀器10 只6 周齡雌性SPF 級(jí)BALB/c nude 裸鼠購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（京）2021-0011。PANC-1 細(xì)胞購(gòu)于武漢普諾賽生命科技有限公司。PA 購(gòu)自美國(guó)MCE 公司，si-NC 和si-ATF3 購(gòu)自上海吉瑪基因公司，DMEM培養(yǎng)基和胎牛血清購(gòu)自美國(guó)Gibco 公司，Lipofectamine 3000 轉(zhuǎn)染試劑購(gòu)自美國(guó)Thermo 公司，CCK-8 檢測(cè)試劑盒、BCA 蛋白定量試劑盒、RIPA 裂解液和ECL 化學(xué)發(fā)光試劑盒均購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司，上皮鈣黏素、神經(jīng)鈣黏素、波形蛋白、熱休克蛋白家族A 成員6 （heat shock protein family A member 6，HSPA6）、轉(zhuǎn)錄激 活 因 子 3 （activating transcription factor 3，ATF3）和GAPDH 抗體均購(gòu)自美國(guó)Abcam 公司。5424 低溫高速離心機(jī)購(gòu)自德國(guó)艾本德公司，EG1150 石蠟包埋機(jī)和RM2135 石蠟切片機(jī)購(gòu)自德國(guó)Leica 公司，CKX53 倒置顯微鏡購(gòu)自日本Olympus 公 司，ELx800 酶 標(biāo) 儀 購(gòu) 自 美 國(guó)Bio-Tek 公司，5200 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)購(gòu)自上海天能科技有限公司。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染胰腺癌PANC-1 細(xì)胞用含10%胎牛血清和1%青鏈霉素的DMEM 高糖培養(yǎng)基在37 ℃含5%二氧化碳的恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中長(zhǎng)期培養(yǎng)。將細(xì)胞分為si-NC 組和si-ATF3 組，根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案嚴(yán)格按照Lipofectamine 3000 轉(zhuǎn)染試劑說明書將對(duì)照siRNA 和ATF3 siRNA 轉(zhuǎn)染PANC-1 細(xì)胞，轉(zhuǎn)染結(jié)束后用含終濃度為30 μmol·L－1PA 的完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞24 h。

1.3 CCK-8 法檢測(cè)各組細(xì)胞活性取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的PANC-1 細(xì)胞，均勻接種于96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔3 000 個(gè)細(xì)胞，培養(yǎng)過夜后，分別用含終濃度為0、2、5、10、20、30、40和50 μmol·L－1PA 的 完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞24 h，棄培養(yǎng)基，加入110 μL 含10 μL CCK-8 法檢測(cè)試劑的無血清培養(yǎng)基，37 ℃孵育1 h，酶標(biāo)儀檢測(cè)450 nm 處吸光度（A）值，計(jì)算細(xì)胞活性。細(xì)胞活性=（實(shí)驗(yàn)組A值－空白組A 值）/（對(duì)照組A 值－空白組A 值）×100%。

1.4 Transwell 小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞遷移能力和細(xì)胞侵襲能力取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的PANC-1 細(xì)胞，用不含血清的DMEM 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，取50 000 個(gè)細(xì)胞加入無基質(zhì)膠包被（遷移實(shí)驗(yàn)）及包被基質(zhì)膠（侵襲實(shí)驗(yàn)）的Transwell 小室上室中，小室下室中加入含20%胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)基，待細(xì)胞貼壁，分 別用含終濃度為0、10、30 和50 μmol·L－1PA 的無血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞24 h。取出小室，棄培養(yǎng)基，PBS 緩沖液洗滌3 次，加入4%多聚甲醛室溫固定30 min，PBS 緩沖液洗滌3 次，加入0.5%結(jié)晶紫染色液，室溫染色1 h，PBS 緩沖液洗滌3 次，棉簽擦去小室內(nèi)側(cè)細(xì)胞，倒置顯微鏡下觀察并拍照，采用Image J 軟件進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

1.5 Western blotting 法檢測(cè)各組細(xì)胞中EMT 相關(guān)蛋白、HSPA6 和ATF3 蛋白表達(dá)水平收集處理后的細(xì)胞，加入含蛋白酶抑制劑的RIPA 裂解液，冰上孵育30 min 后超聲破碎3 次，4 ℃、12 000 g 離心20 min，收集上清液。BCA 法檢測(cè)蛋白濃度并根據(jù)蛋白濃度配置上樣量為30 μg 的蛋白樣品，煮樣5 min 使蛋白樣品變性并將樣品上樣于聚丙烯酰胺凝膠上樣孔中，電泳分離蛋白，將蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF 膜上，5%脫脂奶粉室溫封閉1 h 后，加入一抗4 ℃孵育過夜，PBST 洗膜3 次，每次10 min，二抗室溫孵育1 h，PBST 洗膜3 次，每次10 min，ECL 化學(xué)發(fā)光法顯影，使用Image J 軟件進(jìn)行灰度分析。目的蛋白相對(duì)表達(dá)水平=目的蛋白條帶灰度值/內(nèi)參蛋白條帶灰度值。

1.6 基于高通量基因表達(dá)匯編（gene expression omnibus，GEO）分析胰腺癌細(xì)胞中差異表達(dá)基因

通過GEO2R 軟件分析GSE64111 數(shù)據(jù)集中的差異表達(dá)基因，該數(shù)據(jù)集中包含4 個(gè)30 μmol·L－1PA 處理的胰腺癌細(xì)胞樣本和4 個(gè)二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）處理的胰腺癌細(xì)胞樣本，以 log 差 異 倍 數(shù) （fold change，F(xiàn)C）>1或<－1 及調(diào)整后的P<0.05 作為篩選標(biāo)準(zhǔn)篩選差異表達(dá)基因。

1.7 裸鼠胰腺癌皮下移植瘤模型的建立及處理將10 只裸鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和PA 處理組，每組5 只。收集胰腺癌PANC-1 細(xì)胞，將2.5×106個(gè)細(xì)胞皮下注射于裸鼠左腋下，每日用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤長(zhǎng)徑（mm）和短徑（mm），計(jì)算腫瘤體積，腫瘤體積=（長(zhǎng)徑×短徑）2/2。待腫瘤體積達(dá)到60 mm3時(shí)，PA 處 理 組 裸 鼠 腹 腔 注 射25 mg·kg－1PA，對(duì)照組裸鼠注射等量生理鹽水，每周注射3 次，持續(xù)5 周［7］。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死裸鼠，取移植瘤組織。游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤長(zhǎng)徑和短徑，計(jì)算腫瘤體積，電子秤稱量瘤質(zhì)量。將移植瘤組織置于4%多聚甲醛中，采用免疫組織化學(xué)檢測(cè)腫瘤組織Ki-67 蛋白表達(dá)情況。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。各組細(xì)胞活性，細(xì)胞遷移和侵襲能力，EMT 相關(guān)蛋白、HSPA6 和ATF3 蛋白表達(dá)水平，腫瘤體積及瘤質(zhì)量均符合正態(tài)分布，以±s表示，多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用Tukey 檢驗(yàn)。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組PANC-1 細(xì)胞的細(xì)胞活性CCK-8 法檢測(cè)結(jié)果顯示：與空白對(duì)照（0 μmol·L－1PA）組比較，不同濃度（5、10、20、30、40 和50 μmol·L－1）PA 處理組的PANC-1 細(xì)胞活性呈濃度依賴性降低（P<0.05）。見表1。

表1 CCK-8 法檢測(cè)各組PANC-1 細(xì)胞的細(xì)胞活性Tab.1 Activities of PANC-1 cells in various groups detected by CCK-8 assay (n=3,±s,η/%)

表1 CCK-8 法檢測(cè)各組PANC-1 細(xì)胞的細(xì)胞活性Tab.1 Activities of PANC-1 cells in various groups detected by CCK-8 assay (n=3,±s,η/%)

*P<0.05 compared with blank control（0 μmol·L－1PA）group.

Group Blank control PA(μmol·L－1)Cell activity 100.00±4.71 2 5 10 20 30 40 50 96.31±7.15 88.49±3.56*78.50±3.90*71.13±4.02*59.33±3.34*40.67±7.69*22.40±3.83*

2.2 各組細(xì)胞遷移和侵襲能力及EMT 相關(guān)蛋白表達(dá)水平Transwell 小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示：與空 白 對(duì) 照（0 μmol·L－1PA）組 比 較，不 同 濃 度（10、30 和50 μmol·L－1）PA 處 理組PANC-1 細(xì)胞遷移和細(xì)胞侵襲能力呈濃度依賴性降低（P<0.05）。見圖1 和圖2。Western blotting 法檢測(cè)結(jié)果顯示：與空白對(duì)照（0 μmol·L－1PA）組比較，不同 濃 度（10、30 和50 μmol·L－1）PA 處 理 組PANC-1 細(xì)胞中上皮鈣黏素蛋白表達(dá)水平呈濃度依賴性升高（P<0.05），神經(jīng)鈣黏素和波形蛋白表達(dá)水平呈濃度依賴性降低（P<0.05）。見圖3。

圖1 Transwell 小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組PANC-1 細(xì)胞遷移和侵襲能力(結(jié)晶紫，×200)Fig.1 Migration and invasion abilities of PANC-1 cells in various groups detected by Transwell chamber experiment（Crystal violet,×200）

圖2 各組PANC-1 細(xì)胞中遷移細(xì)胞數(shù)（A）和侵襲細(xì)胞數(shù)（B）直條圖Fig.2 Histograms of numbers of migration (A) and invasion (B) cells in PANC-1 cells in various groups

圖3 各組PANC-1 細(xì)胞中EMT 相關(guān)蛋白表達(dá)電泳圖（A）和直條圖（B）Fig.3 Electrophoregram (A) and histogram (B) of expressions of EMT-related proteins in PANC-1 cells in various groups

2.3 各組裸鼠移植瘤生長(zhǎng)和Ki-67 蛋白表達(dá)情況

對(duì)照組裸鼠移植瘤體積為（1 173.19±171.00）mm3，瘤 質(zhì) 量 為（0.676±0.080）g；PA 組裸鼠移植瘤體積為（354.3±86.66）mm3，瘤質(zhì)量為（0.234±0.023）g。與對(duì)照組比較，PA 組裸鼠移植瘤體積和瘤質(zhì)量均明顯降低（P<0.05），見圖4。免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較，PA 組裸鼠移植瘤組織中Ki-67 蛋白棕色陽(yáng)性染色減少。見圖5。

圖4 各組裸鼠移植瘤照片大體表現(xiàn)Fig.4 General morphology of xenografted of nude mice in various groups

圖5 對(duì)照組（A）和PA 組（B）裸鼠移植瘤組織中Ki-67 蛋白表達(dá)情況（免疫組織化學(xué),×200）Fig.5 Expressions of Ki-67 protein in xenografted tissue of nude mice in control group (A) and PA group (B)（Immunohistochemistry,×200）

2.4 PA 處理后胰腺癌細(xì)胞中差異表達(dá)基因的數(shù)據(jù)庫(kù)分析通過GEO2R 軟件分析GSE64111 數(shù)據(jù)集中的差異表達(dá)基因，該數(shù)據(jù)集中包含4 個(gè)30 μmol·L－1PA 處 理 的 胰 腺 癌 細(xì) 胞 樣 本 和4 個(gè)DMSO 處理的胰腺癌細(xì)胞樣本，分析結(jié)果顯示：共23 個(gè)差異表達(dá)基因，其中16 個(gè)基因表達(dá)上調(diào)，7 個(gè)基因表達(dá)下調(diào)，其中差異表達(dá)倍數(shù)最高的基因?yàn)镠SPA6 和ATF3。見圖6。

圖6 PA 處理后胰腺癌細(xì)胞中差異表達(dá)基因Fig.6 Differentially expression genes in pancreatic cancer cells after treated with PA

2.5 各組PANC-1 細(xì)胞中HSPA6 和ATF3 蛋白表達(dá)水平Western blotting 法檢測(cè)結(jié)果顯示：與空白對(duì)照組比較，PA 組PANC-1 細(xì)胞中HSPA6 和ATF3 蛋白表達(dá)水平明顯升高（P<0.05）。見圖7。

圖7 Western blotting 法檢測(cè)各組PANC-1 細(xì)胞中HSPA6 和ATF3 蛋白表達(dá)電泳圖（A）和直條圖（B）Fig.7 Electrophoregram (A) and histogram (B) of expressions of HSPA6 and ATF3 proteins in PANC-1 cells in various groups detected by Western blotting method

2.6 沉 默ATF3 后PANC-1 細(xì) 胞中HSPA6 和ATF3 蛋白表達(dá)水平Western blotting 法檢測(cè)結(jié)果顯示：與si-NC 組比較，si-ATF3 組PANC-1 細(xì)胞中HSPA6 和ATF3 蛋白表達(dá)水平明顯降低（P<0.05）。見圖8。

圖8 Western blotting 法檢測(cè)沉默ATF3 后PANC-1 細(xì)胞中HSPA6 蛋白表達(dá)電泳圖（A）和直條圖（B）Fig.8 Electrophoregram (A) and histogram (B) of expressions of HSPA6 protein in PANC-1 cells after silencing of ATF3 detected by Western blotting method

2.7 沉默ATF3 后PANC-1 細(xì)胞遷移能力和細(xì)胞侵襲能力及EMT 相關(guān)蛋白表達(dá)水平Transwell 小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果見圖9，si-NC 組侵襲細(xì)胞數(shù)為（172.20±11.44）個(gè)，si-ATF3 組侵襲細(xì)胞數(shù)為（264.80±9.36）個(gè)，2 組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；si-NC 組遷移 細(xì)胞數(shù)（132.80±7.36）個(gè)，si-ATF3 組 遷 移 細(xì) 胞 數(shù)（239.80±6.64）個(gè)，2 組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。進(jìn)一步通過Western blotting 法檢測(cè)EMT相 關(guān) 蛋 白 表 達(dá)，結(jié) 果 顯 示：與si-NC 組 比 較，si-ATF3 組PANC-1 細(xì)胞中上皮鈣黏素蛋白表達(dá)水平明顯降低（P<0.05），神經(jīng)鈣黏素和波形蛋白表達(dá)水平明顯升高（P<0.05）。見圖10。

圖9 各組PANC-1 細(xì)胞遷移和侵襲形態(tài)表現(xiàn)（結(jié)晶紫，×200）Fig.9 Morphology of migration and invasion of PANC-1 cells in various groups（Crystal violet,×200）

圖10 各組PANC-1 細(xì)胞中EMT 相關(guān)蛋白表達(dá)電泳圖（A）和直條圖（B）Fig.10 Electrophoregram (A) and histogram (B) of expressions of EMT-related proteins in PANC-1 cells in various groups

3 討 論

由于胰腺癌的高轉(zhuǎn)移性和侵襲能力，傳統(tǒng)的手術(shù)治療及化療藥物治療效果并不明顯［8］。PA 對(duì)多種癌癥的侵襲和轉(zhuǎn)移具有抑制作用，研究［8］發(fā)現(xiàn)PA 以時(shí)間和劑量依賴性方式明顯降低膽囊癌細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移和侵襲。GAO 等［9］發(fā)現(xiàn)：PA 劑量依賴地抑制卵巢癌細(xì)胞體外生長(zhǎng)、遷移和侵襲，并上調(diào)上皮鈣黏素表達(dá)。CHENG 等［10］發(fā)現(xiàn)：PA 抑制胰腺癌細(xì)胞侵襲。本研究結(jié)果顯示：PA 處理可以抑制胰腺癌PANC-1 細(xì)胞體外生長(zhǎng)、遷移和侵襲及體內(nèi)移植瘤生長(zhǎng)。

EMT 是導(dǎo)致胰腺癌腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移和化學(xué)抗性等高度惡性潛能的主要原因［11］。EMT 是指上皮-間質(zhì)狀態(tài)轉(zhuǎn)變，上皮細(xì)胞經(jīng)歷表型和基因型轉(zhuǎn)化以獲得間充質(zhì)表型，上皮表型是可定植和穩(wěn)定的，而間充質(zhì)表型能夠抵抗細(xì)胞凋亡，具有侵襲性和遷移能力［12］。上皮鈣黏素是細(xì)胞表面的上皮鈣黏蛋白分子，有助于頂端-基底極性的上皮細(xì)胞之間的外側(cè)連接，可作為上皮細(xì)胞標(biāo)志蛋白［13］。神經(jīng)鈣黏素和波形蛋白是間充質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志蛋白，EMT 中間充質(zhì)標(biāo)記物的表達(dá)和上皮標(biāo)記物的抑制同時(shí)發(fā)生，一旦EMT 程序被激活，癌細(xì)胞就會(huì)獲得遷移和侵襲能力，進(jìn)而促進(jìn)癌癥的侵襲和轉(zhuǎn)移［14-15］。在本研究中，PA 處理可明顯上調(diào)胰腺癌PANC-1 細(xì)胞上皮鈣黏素表達(dá)，下調(diào)神經(jīng)鈣黏素和波形蛋白表達(dá)，表明PA 抑制PANC-1 細(xì)胞EMT。

為了進(jìn)一步探究PA 抑制胰腺癌細(xì)胞遷移、侵襲和EMT 的機(jī)制，本研究分析了GEO 數(shù)據(jù)庫(kù)GSE64111 數(shù)據(jù)集中的差異表達(dá)基因，該數(shù)據(jù)集包括4 個(gè)30 μmol·L－1PA 處 理 的 胰 腺 癌 細(xì) 胞 樣 本 和4 個(gè)DMSO 處理的胰腺癌細(xì)胞樣本，結(jié)果顯示：HSPA6 和ATF3 在PA 處理的胰腺癌細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)。HSPA6 位于人類染色體1q23.3，編碼一種相對(duì) 分 子 質(zhì) 量 為70 000 的 蛋 白［16］。SHEN 等［17］發(fā)現(xiàn)：百里香醌通過上調(diào)HSPA6 表達(dá)抑制三陰性乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移和侵襲，且HSPA6 高表達(dá)與乳腺癌患者的長(zhǎng)總生存期呈正相關(guān)關(guān)系。COTO-LLERENA 等［18］發(fā) 現(xiàn)：HSPA6 表 達(dá) 上 調(diào)促進(jìn)肝細(xì)胞肝癌細(xì)胞體外增殖和遷移以及體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)。ZHOU 等［19］發(fā)現(xiàn)：HSPA6 在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者中呈高水平表達(dá)，且HSPA6 通過促進(jìn)增殖、侵襲和抗凋亡促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的惡性進(jìn)展?？傊?，HSPA6 在不同癌癥中發(fā)揮致癌或抑癌作用。ATF3是活化轉(zhuǎn)錄因子（activating transcription factor，ATF）/環(huán) 磷 酸 腺 苷 （cyclic adenosine monophosphate，cAMP）反應(yīng)元件結(jié)合家族的成員，在調(diào)節(jié)代謝、免疫和腫瘤發(fā)生中起重要作用，且可能作為癌基因和腫瘤抑制因子發(fā)揮雙重作用［20］。YOUNS 等［21］研究顯示：雷公藤紅素通過上調(diào)ATF3 表達(dá)抑制胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。DUNCAN 等［22］發(fā)現(xiàn)：組蛋白去乙?；敢种苿┖偷鞍踪|(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶抑制劑聯(lián)合處理誘導(dǎo)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和胰腺癌細(xì)胞ATF3 表達(dá)，ATF3 表達(dá)上調(diào)誘導(dǎo)HSPA6 上調(diào)，從而發(fā)揮抗腫瘤協(xié)同作用。本研究結(jié)果顯示：PA 誘導(dǎo)HSPA6 和ATF3 蛋白表達(dá)，沉默ATF3 降低了PA 誘導(dǎo)的HSPA6 蛋白表達(dá)，此外，沉默ATF3 逆轉(zhuǎn)了PA 對(duì)胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移和侵襲的抑制作用。

綜上所述，鑒于PA 抑制胰腺癌細(xì)胞體外增殖、遷移、侵襲和EMT 且在體內(nèi)抑制胰腺癌細(xì)胞移植瘤生長(zhǎng)，PA 有望成為抗胰腺癌轉(zhuǎn)移的有效藥物。PA 通過上調(diào)ATF3 和HSPA6 蛋白表達(dá)發(fā)揮抗腫瘤作用，ATF3 和HSPA6 有望成為抗胰腺癌治療的靶點(diǎn)。本研究結(jié)果為抗胰腺癌治療提供理論依據(jù)。