HER-2基因拷貝數(shù)與胃癌病人術(shù)后生存關(guān)系分析

［摘要］ 目的 探討人表皮生長(zhǎng)因子受體2（HER－2）陽(yáng)性胃癌病人HER－2基因拷貝數(shù)變化與預(yù)后的關(guān)系。

方法 將2013年1月—2017年12月在青島大學(xué)附屬醫(yī)院接受手術(shù)治療的HER－2陽(yáng)性的87例胃癌病人納入本研究。應(yīng)用二代測(cè)序技術(shù)檢測(cè)HER－2基因拷貝數(shù)變化，將拷貝數(shù)變化≤15.63者歸為低表達(dá)組，＞15.63者歸為高表達(dá)組，分析HER－2基因拷貝數(shù)變化與臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系。采用Kaplan－Meier生存曲線、Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行生存分析。

結(jié)果 HER－2基因拷貝數(shù)變化與病人年齡（χ2=5.064，P=0.024）和Lauren分型（χ2=4.744，P=0.029）相關(guān)。單因素生存分析顯示，HER－2基因拷貝數(shù)變化、Lauren分型、腫瘤分化程度、腫瘤浸潤(rùn)程度（T分期）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期均與HER－2陽(yáng)性胃癌病人總生存期相關(guān)（χ2=5.058～12.004，P＜0.05）；多因素Cox回歸分析顯示，HER－2基因拷貝數(shù)變化為影響胃癌病人OS的獨(dú)立預(yù)后因素（HR=3.366，95%CI=1.412～8.021，P=0.006）。

結(jié)論 HER－2基因拷貝數(shù)變化可能成為評(píng)判胃癌病人生存期的潛在新型預(yù)后指標(biāo)。

［關(guān)鍵詞］ 胃腫瘤；基因，erbB－2；基因劑量；預(yù)后

［中圖分類號(hào)］ R735.2

［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］ A

［文章編號(hào)］ 2096－5532（2023）02－0179－04

doi：10.11712/jms.2096－5532.2023.59.062

［開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）］

胃癌是癌癥相關(guān)死亡的第三大原因，世界上約52%的胃癌病人位于中國(guó)。胃癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的多步驟過程，涉及表觀遺傳和遺傳變異的多條信號(hào)通路，包括拷貝數(shù)變化（CNVs）、單核苷酸變異和染色體易位。CNVs是由基因組發(fā)生重排導(dǎo)致的，一般指長(zhǎng)度為1 kb以上的基因組大片段的拷貝數(shù)增加或減少，主要表現(xiàn)為亞顯微水平的缺失和重復(fù)。對(duì)于晚期胃癌，化療可以延長(zhǎng)生存期，但生存率低。人表皮生長(zhǎng)因子受體2（HER－2）的發(fā)現(xiàn)為胃癌提供了新的治療策略。Ⅲ期臨床研究表明，曲妥珠單抗聯(lián)合化療治療HER－2陽(yáng)性胃癌，與單獨(dú)化療相比，病人總生存期（OS）顯著延長(zhǎng)。目前鑒定HER－2陽(yáng)性方法主要為免疫組織化學(xué)染色（IHC）和熒光原位雜交（FISH），但這兩種方法也有不足。AN等研究發(fā)現(xiàn)，HER－2蛋白水平高于臨界值的病人在曲妥珠單抗治療中的表現(xiàn)優(yōu)于低值病人。目前關(guān)于胃癌HER－2基因CNVs的研究較少。本研究旨在通過檢測(cè)HER－2基因CNVs，分析CNVs與臨床病理特征相關(guān)性，探討HER－2基因CNVs與OS的關(guān)系，為胃癌預(yù)后提供新預(yù)測(cè)指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入2013年1月—2017年12月在青島大學(xué)附屬醫(yī)院接受手術(shù)，術(shù)后組織標(biāo)本IHC HER－2 3+的病例資料完整的胃癌病人87例。其中男性72例（82.8%），女性15例（17.2%）；年齡35～87歲，平均（64.5±9.9）歲。

1.2 隨訪方法

對(duì)所有納入研究的病人進(jìn)行隨訪，隨訪截止至2020年4月25日。病人OS定義為從手術(shù)日期開始至病人死亡或末次隨訪的時(shí)間。

1.3 二代測(cè)序（NGS）

1.3.1 文庫(kù)制備和測(cè)序 將石蠟包埋的腫瘤組織切片（厚5 μm），共制備10張，采用標(biāo)準(zhǔn)提取方法（Qiagen，Valencia，CA）分離DNA，并使用基于PicoGreen的dsDNA（Life Technologies，Carlsbad，CA）檢測(cè)定量。將待測(cè)DNA用Covaris ME220超聲刀剪切成較短序列的DNA樣品，利用Illumina TruSeq LT試劑（Illumina Inc，San Diego，CA）制備索引測(cè)序文庫(kù)。使用Illumina Nextseq500/550 測(cè)序儀以快速模式進(jìn)行大規(guī)模平行測(cè)序。

1.3.2 數(shù)據(jù)處理 NGS檢測(cè)會(huì)產(chǎn)生大量的原始序列數(shù)據(jù)，將這些序列數(shù)據(jù)進(jìn)行初級(jí)處理，過濾后得到clean data，對(duì)clean data進(jìn)行序列比對(duì)精準(zhǔn)捕捉基因點(diǎn)突變、缺失、插入、CNVs、結(jié)構(gòu)變異等變異信息。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

使用SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用χ2檢驗(yàn)分析HER－2基因CNVs與臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系；采用Kaplan－Meier生存曲線、Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析HER－2基因CNVs對(duì)OS的影響，采用log－rank檢驗(yàn)法進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 HER－2基因CNVs與臨床病理特征的關(guān)系

以HER－2基因CNVs中位數(shù)15.63作為臨界

值，將CNVs≤15.63病人歸為低表達(dá)組，CNVs＞15.63的病人歸為高表達(dá)組。對(duì)兩組病人的臨床病理特征進(jìn)行比較結(jié)果顯示，HER－2基因CNVs與年齡（χ2=5.064，P=0.024）和Lauren分型（χ2=4.744，P=0.029）有關(guān)，與其余臨床病理學(xué)參數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的相關(guān)性（P＞0.05）。見表1。

2.2 生存分析

對(duì)87例胃癌病人進(jìn)行隨訪，其中28例病人死亡。繪制Kaplan－Meier生存曲線分析各臨床病理特征與OS的關(guān)系，HER－2基因CNVs與OS相關(guān)（χ2=5.070，P=0.024）；進(jìn)一步進(jìn)行分層分析顯示，

在腫瘤TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期病人中，HER－2基因CNVs與OS相關(guān)（P=0.004）。見圖1～3。此外，Lauren分型、腫瘤分化程度、腫瘤浸潤(rùn)程度（T分期）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期均與胃癌病人OS相關(guān)（χ2=5.058～12.004，P＜0.05）。見表2。將以上因素納入Cox回歸模型進(jìn)行多因素分析，結(jié)果顯示，HER－2基因CNVs為影響病人術(shù)后OS的獨(dú)立預(yù)后因素（HR=3.366，95%CI=1.412～8.021，P=0.006），與CNVs低表達(dá)者相比，CNVs高表達(dá)者死亡風(fēng)險(xiǎn)更高。見表3。

3 討 論

HER－2基因定位于人類染色體17q21，其蛋白是原癌基因C－erbB－2的表達(dá)產(chǎn)物，為酪氨酸激酶受體，屬于人表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）家族。基因CNVs與多種人類惡性腫瘤的發(fā)生有關(guān)。在腫瘤發(fā)生過程中，腫瘤增殖基因頻繁擴(kuò)增，凋亡基因則擴(kuò)增減少。LABOTS等對(duì)1 831例原發(fā)性胃癌樣本的研究結(jié)果表明，一些已經(jīng)明確或潛在的抗癌藥物基因靶點(diǎn)顯示出高水平的CNVs，包括HER－2、TUBB3、TOP2A。有研究結(jié)果顯示，HER－2蛋白表達(dá)陽(yáng)性與Lauren分型中腸型胃癌相關(guān)，同時(shí)也與腫瘤部位、腫瘤分化程度、腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期顯著相關(guān)。還有研究結(jié)果表明，HER－2基因擴(kuò)增與較差的腫瘤臨床病理特征相關(guān)，包括腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期。本文研究結(jié)果顯示，HER－2基因CNVs與年齡和Lauren分型相關(guān)。

本研究生存分析結(jié)果顯示，HER－2基因CNVs與HER－2陽(yáng)性胃癌病人術(shù)后OS有關(guān)，且多因素Cox回歸分析提示HER－2基因CNVs是影響OS的獨(dú)立預(yù)后因素，CNVs高者死亡風(fēng)險(xiǎn)更大。這與有關(guān)研究結(jié)果一致。然而一項(xiàng)針對(duì)1 006例胃癌病人的研究結(jié)果顯示，在可手術(shù)的胃癌病人中，HER－2蛋白表達(dá)情況與預(yù)后無(wú)關(guān)。研究結(jié)果不一致的原因可能與HER－2基因檢測(cè)方法、入組人群、研究樣本量等因素有關(guān)。本研究結(jié)果還顯示，Lauren分型、腫瘤分化程度、腫瘤浸潤(rùn)程度（T分期）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期均與胃癌病人OS相關(guān)，但這些因素都不是獨(dú)立預(yù)后因素。

綜上所述，本研究表明HER－2基因CNVs可能成為一種新的預(yù)測(cè)胃癌預(yù)后的指標(biāo)，然而確切的結(jié)論仍需要更大樣本量的前瞻性研究加以證實(shí)。

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（本文編輯 馬偉平）