宮頸癌患者OCT4與臨床病理、HPV感染及SCC-Ag水平的關(guān)系

梁艷萍，競柏松，張琳

(1.永城市人民醫(yī)院 婦科，河南 商丘 476600，2.商丘市第一人民醫(yī)院 婦科，河南 商丘 476100)

宮頸癌屬于女性惡性腫瘤疾病中第二位常見的惡性腫瘤，具有復(fù)發(fā)、癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的特點(diǎn)，影響患者預(yù)后[1]。Liu等[2]認(rèn)為，為了有效提升患者的預(yù)后，需找到可截?cái)喟┘?xì)胞轉(zhuǎn)移關(guān)鍵分子或者片段。八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4(octamer-binding transcription factor 4，OCT4)屬于干細(xì)胞標(biāo)志物，可使干細(xì)胞異常進(jìn)行自我繁殖形成腫瘤。研究OCT4基因表達(dá)情況，可為宮頸癌診治提供依據(jù)。相關(guān)研究指出，OCT4的異常表達(dá)主要存在于干細(xì)胞中，是促進(jìn)干細(xì)胞自我更新、潛能性病變的關(guān)鍵因子，其OCT4基因片段在癌細(xì)胞組織中表達(dá)率顯著高于正常細(xì)胞，在結(jié)腸癌、乳腺癌、肺癌、膀胱癌等異常高表達(dá)[3-4]。為了更好地證明OCT4在干細(xì)胞中表達(dá)，與宮頸癌細(xì)胞密切相關(guān)，且與HPV感染關(guān)聯(lián)，本研究選取永城市人民醫(yī)院接受治療的150例宮頸癌患者的包埋腫瘤組織標(biāo)本作為研究對象，探討宮頸癌中OCT4表達(dá)與臨床病理、人乳頭狀瘤病毒(human papilloma virus，HPV)感染及鱗狀細(xì)胞癌抗原(squamous cell carcinoma antigen，SCC-Ag)水平的關(guān)系。

1 對象與方法

1.1 研究對象選取2018年1月至2021年10月于永城市人民醫(yī)院接受治療的150例宮頸癌患者的包埋腫瘤組織標(biāo)本作為研究對象進(jìn)行回顧性分析，年齡45～75歲，平均(66.7±7.9)歲，收集患者臨床分期、癌癥類型、分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等相關(guān)信息，所有患者未接受任何形式的放化療，臨床診治病理學(xué)資料完整。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批通過。

1.2 檢測方法兔抗OCT4抗體主要是由美國Abcam生物公司提供，采用免疫組織化學(xué)檢測試劑盒[基因科技(上海)股份有限公司]進(jìn)行測試。標(biāo)本經(jīng)體積分?jǐn)?shù)為4%的甲醛水溶液固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，常規(guī)免疫組織化學(xué)染色(SP法)。兔抗OCT4的工作濃度為1∶100、1∶200，實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。染色強(qiáng)度：不著色、淺黃色、棕黃色、棕褐色分別為0、1、2、3分。陽性細(xì)胞百分率：0、 0～<25%、25%～<50%、50%～<75%、75%～100%分別代表0、1、2、3、4分。染色積分>3分為高表達(dá)，≤3分為低表達(dá)。以鱗狀細(xì)胞癌抗原測定試劑盒(蘇州長光華醫(yī)生物醫(yī)學(xué)工程有限公司，國械注準(zhǔn)20173400146)化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測SCC-Ag，檢測方法按說明書進(jìn)行。參考值設(shè)置為1.5 μg·L-1，0.1 μg·L-1為試劑盒靈敏度。免疫組織化學(xué)檢測HPV，HPV分型檢測試劑盒購自亞能生物技術(shù)(深圳)有限公司，檢測的HPV亞型包括16、18、31、33、35、39、45、51等和5種低危型(6、11、42、43、44)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)和百分?jǐn)?shù)(%)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料收集和整理所有受試者類型、OCT4表達(dá)、組織學(xué)分化、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、HPV陽性、SCC-Ag等資料，描述統(tǒng)計(jì)結(jié)果。見表1。

表1 一般資料(n=150)

2.2 宮頸癌中OCT4表達(dá)與臨床病理的關(guān)系OCT4與類型、分期、分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 OCT4表達(dá)與臨床病理[n(%)]

2.3 OCT4表達(dá)與HPV感染及SCC-Ag的關(guān)系有無HPV感染的患者OCT4表達(dá)對比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。不同SCC-Ag水平的患者OCT4表達(dá)對比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 有無HPV感染與OCT4表達(dá)的比較[n(%)]

3 討論

OCT4屬于OCT結(jié)構(gòu)基因的一部分，是POU(Pit-Oct-Unc)轉(zhuǎn)錄因子激活轉(zhuǎn)錄的結(jié)果因子，主要在囊胚細(xì)胞核中表達(dá)，也在早期胚胎中表達(dá)，可維持干細(xì)胞的多樣化，促進(jìn)細(xì)胞自我更新[5]。研究指出，通過OCT4可觀察干細(xì)胞發(fā)展方向，對研究細(xì)胞分化、胚胎發(fā)育等具有積極作用[6-7]。若OCT4持續(xù)性異常表達(dá)，促使組織部分細(xì)胞保留異常更新能力，無限制擴(kuò)大和增殖，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。

從本研究中來看，在不同類型的鱗癌、腺癌中OCT4高表達(dá)概率為84.62%及90.00%，且與分化程度、分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。這均表明OCT4與腫瘤細(xì)胞發(fā)生發(fā)展密不可分。Rasti等[8]研究證明OCT4是維持正常干細(xì)胞、腫瘤干細(xì)胞的多能性和自我更新特性的關(guān)鍵調(diào)控基因，它們誘導(dǎo)彼此的表達(dá)，調(diào)節(jié)癌癥進(jìn)展，并且是腫瘤干細(xì)胞生物標(biāo)記。Simmet等[9]通過小鼠實(shí)驗(yàn)指出，OCT4是維持囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)中Nanog 陽性外胚層細(xì)胞所必需的。國內(nèi)研究中，李冬雷等[10]從喉癌角度指出，OCT4和β-catenin在癌癥組織中均異常表達(dá)，協(xié)同參與癌癥的發(fā)生和發(fā)展過程，聯(lián)合檢測有助于預(yù)測和評估患者預(yù)后。譚遙等[11]認(rèn)為OCT4表達(dá)對間充質(zhì)干細(xì)胞干性維持能力具有積極影響。這表示OCT4可以替代Nanog成為干細(xì)胞的標(biāo)志物，用于臨床診治和預(yù)后。綜合以上種種，OCT4可以如Nanog一般成為腫瘤干細(xì)胞的生物標(biāo)志物。

相關(guān)研究指出，HPV感染與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)[12]。本研究中，鱗癌、腺癌不同類型的宮頸癌HPV感染率超過了75%，說明HPV感染參與到宮頸癌發(fā)生和發(fā)展中。具體原因是HPV感染的病毒可通過侵害宿主細(xì)胞，整合基因組，諸如E6、E7等蛋白基因可激活癌細(xì)胞基因，抑制抗癌基因和癌細(xì)胞凋亡過程，導(dǎo)致癌細(xì)胞無限惡性增殖[13-14]。HPV感染與OCT4表達(dá)的相關(guān)系數(shù)為0.796，屬于中度相關(guān)，這表示HPV感染與OCT4表達(dá)具有顯著的相關(guān)關(guān)系。HPV感染可能與OCT4蛋白高表達(dá)密切相關(guān)，OCT4表達(dá)越多，HPV感染率隨之增加。Panayiotou等[15]研究顯示，OCT4與HPV E7特異性地在E7蛋白的CR3區(qū)域相互作用，并且在C33A細(xì)胞和人類永生化角質(zhì)形成細(xì)胞中引入HPV致癌基因會產(chǎn)生OCT4相關(guān)的轉(zhuǎn)錄和表型模式，OCT4與HPV E7物理相互作用，可調(diào)節(jié)其在HPV+宮頸癌中的活性。Nathansen等[16]認(rèn)為，OCT4可通過調(diào)節(jié)同源重組因子PSMC3IP和RAD54L賦予頭頸部鱗狀細(xì)胞癌干性和放射抗性。國內(nèi)研究中，李昌秀等[17]指出，OCT4與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展密不可分，且OCT4高表達(dá)與高危型HPV感染相關(guān)，兩者可能協(xié)同作用于宮頸癌，這為診治提供新的方向。從國內(nèi)外研究中來看，OCT4作為轉(zhuǎn)錄的結(jié)果因子，可以通過不同基因因子影響HPV感染，進(jìn)一步作用于宮頸癌。這說明OCT4影響HPV感染的發(fā)生率，臨床可用OCT4結(jié)合其他物質(zhì)用于臨床宮頸癌診治和預(yù)后，提升治療效率。

SCC-Ag屬于一種內(nèi)源性絲氨酸蛋白酶抑制劑，是腫瘤TA-4抗原中亞型之一，參與到癌細(xì)胞生長、浸潤、轉(zhuǎn)移當(dāng)中，是腫瘤生物學(xué)標(biāo)志物之一，尤其是在宮頸癌診斷中，其表達(dá)升高程度與腫瘤體積表現(xiàn)呈正相關(guān)。王華等[18]指出，OCT4表達(dá)與SCC-Ag的水平呈正相關(guān)。這與本研究具有一定的相似性，分析OCT4表達(dá)與SCC-Ag一致性為0.567，屬于中等一致性，這表明OCT4可替代SCC-Ag用于宮頸癌診斷，也可相互聯(lián)合用于臨床診斷，具有較高的醫(yī)學(xué)價值。國外相關(guān)研究指出，SCC-Ag也是預(yù)測宮頸癌預(yù)后的有用指標(biāo)[19]。本研究中，OCT4于宮頸癌各項(xiàng)臨床指標(biāo)中并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這說明該指標(biāo)并不會因不同類型、不同分化程度等而產(chǎn)生差異。國內(nèi)外相關(guān)于OCT4表達(dá)與SCC-Ag表達(dá)之間的運(yùn)作機(jī)制的研究并不多見，但是兩者之間的正相關(guān)關(guān)系較為明確。這說明SCC-Ag增加，OCT4表達(dá)上升，宮頸癌程度上升，反之亦然，為此，臨床中應(yīng)高度重視OCT4表達(dá)異常情況，為臨床診治宮頸癌提供借鑒。

綜上所述，宮頸癌患者中，OCT4表達(dá)在不同臨床病理中無差異，與HPV感染及SCC-Ag的表達(dá)存在顯著的關(guān)聯(lián)性。