免疫功能檢查在卵巢功能早衰患者針灸治療中的意義

華德興 邱林果 胡春梅 肖風金

（汕頭大學醫(yī)學院附屬粵北人民醫(yī)院 廣東韶關(guān) 512026）

隨著社會快節(jié)奏地發(fā)展，女性在生活和工作方面的壓力也逐步增加，因此卵巢功能早衰發(fā)病率呈逐年上升，且有低年齡發(fā)展趨勢。由于患者常有持續(xù)性閉經(jīng)、陰道干澀、性交痛、失眠盜汗、心情煩躁、情緒低落、不孕不育等特征，給患者心理、夫妻生活、家庭和睦帶來極大不良反應[1]。房 恭（房氏）調(diào)經(jīng)促孕針是在其臨床實踐經(jīng)驗基礎(chǔ)上依據(jù)中醫(yī)基礎(chǔ)理論開發(fā)而來，針對卵巢功能早衰的治療，目前已經(jīng)廣泛推廣應用于臨床，有滿意的臨床效果[2]。

本研究計劃從CD4+T 淋巴細胞、CD8+T 淋巴細胞和B 淋巴細胞分泌的免疫球蛋白（IgA、IgM、IgG）角度來探討卵巢功能早衰患者經(jīng)房氏調(diào)經(jīng)促孕針治療后免疫功能變化，以期為其療效的應用價值提供理論依據(jù)。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取2019 年2 月至2022 年5 月在粵北人民醫(yī)院經(jīng)房氏調(diào)經(jīng)促孕針治療卵巢功能早衰患者22 例為觀察組，另選同期在粵北人民醫(yī)院體檢人群符合卵巢早衰人員22 例為對照組。觀察組經(jīng)規(guī)范房氏調(diào)經(jīng)促孕針治療3 個療程，對照組做空白等待，試驗結(jié)束后繼續(xù)做針灸或其他方法治療，等待時間同觀察組等針灸治療時間。

卵巢功能早衰診斷標準：西醫(yī)診斷參照第9 版《婦產(chǎn)科學》，中醫(yī)診斷參照《中醫(yī)婦科學》中卵巢功能早衰的診斷標準：①年齡≤40 歲；②閉經(jīng)時間≥4個月；③血清促卵泡激素（FSH）＆gt;40IU/L（檢查2 次,間隔時間1 個月以上）；④兼有以下多項或單項癥狀：腰膝酸軟，畏寒肢冷，舌淡苔白滑，面色黧黑或蒼白，脈沉弱，宮寒不孕，五更泄瀉或大便久瀉?；颊吣挲g22～39 歲，平均（34.77±4.47）歲。

1.2 納入標準與排除標準

納入標準：（1）符合卵巢功能早衰診斷標準者。（2）年齡≥18 歲者。（3）知情同意，并且簽署知情同意書者。排除標準：（1）卵巢局部手術(shù)引起者。（2）腫瘤患者，放化療引起卵巢功能減退者。（3）服用激素、免疫抑制劑等藥物引起的卵巢功能減退者。（4）合并心血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴重原發(fā)疾病者。

1.3 治療方法

1.3.1 醫(yī)療器材及針具。 重慶蜀水儀器廠生產(chǎn)的特定電磁波治療器、英迪牌電子針療儀（型號KWD-8081）及東邦牌一次性使用無菌針灸針（規(guī)格：0.25×25 毫米、0.30×40 毫米、0.3×75 毫米）。

1.4.針灸方法

1.4.1 取穴。分為兩個穴位組，穴位一組包括雙本神、百會、神庭、雙肓俞、關(guān)元、雙大赫、雙卵巢、雙足三里、三陰交、雙太溪、雙太沖十一個穴位，穴位二組包括雙腎俞、雙次 兩個穴位。

1.4.2 操作。穴位一組操作順序從頭部、腹部、下肢的穴位順序。具體操作方法：肓俞雙、關(guān)元、大赫雙、卵巢雙、足三里雙、腎俞雙的穴位直刺1～1.5 寸；三陰交雙、太溪雙、太沖雙的穴位直刺0.5～1 寸；百會、本神雙、神庭的穴位向后平刺0.5～l 寸；次 雙的穴位向正中線斜下刺入第二骶后孔中2～2.5 寸。所有腧穴均要求得氣，留針30 分鐘，留針期間每隔10 分鐘以捻轉(zhuǎn)平補平瀉法行針1 次，每穴行針15 秒；穴位二組連接電針，疏密波，疏密交替持續(xù)1.5 秒，以患者耐受為度。隔天治療1 次，穴位一組與穴位二組交替使用，12 次為1 個療程，治療3 個療程共計3 個月。

1.5 性激素和免疫功能檢測

1.5.1 性激素FSH、E2的檢測。治療前和治療后分別抽靜脈血3 毫升于肝素鋰抗凝試管中，靜止30分鐘至1 小時3500 轉(zhuǎn)速/分鐘離心10 分鐘分離血漿，通過羅氏cobas800 電化學發(fā)光儀及配套試劑用電化學發(fā)光法進行檢測。

1.5.2CD4+、CD8+T 細胞檢測。治療前和治療后分別抽靜脈血2 毫升于EDTA-K2 抗凝采血管中，5000 轉(zhuǎn)速/分鐘離心30 分鐘，取上層薄膜中間層的單細胞懸液懸液100 微升（含1×106個細胞），分別加入單克隆抗體CD3、CD4、CD8，置于4℃冰箱避光染色30 分鐘,用PBS 洗滌細胞2 次后，置于2500 轉(zhuǎn)速/分鐘離心5 分鐘,棄去上清液，于沉淀細胞內(nèi)加500 微升PBS，混勻，上流式細胞儀（貝克曼庫爾特及配套試劑）以CD3 為設(shè)門，將CD4+T 細胞和CD8+T細胞百分比，并計算CD4+/CD8+T 細胞比例。

1.5.3IgA、lgM、lgG 免疫球蛋白的檢測。治療前和治療后分別抽靜脈血5 毫升于干試管中，靜止30分鐘至1 小時3500 轉(zhuǎn)/ 分鐘離心5 分鐘分離血清，通過全自動生化分析儀（儀器邁瑞B(yǎng)S-2000M，試劑美康生物科技股份有限公司）用免疫比濁法進行檢測。

1.6 統(tǒng)計學分析

數(shù)據(jù)處理在SPSS 22.0 軟件上統(tǒng)計分析，其中計量資料用（）表示，組間比較應用均數(shù)t 檢驗，組內(nèi)比較應用配對t 檢驗，檢驗標準以P＆lt;0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 性激素FSH、E2 檢測水平的比較

兩組在治療前FSH、E2水平差異無統(tǒng)計學意義，P＆gt;0.05；3 個療程治療后水平差異有統(tǒng)計學意義，P＆lt;0.05。觀察組治療后與治療前與比較，F(xiàn)SH 水平下降，E2水平上升，差異有統(tǒng)計學意義，P＆lt;0.05。

而對照組空白治療前后比較，F(xiàn)SH、E2變化不明顯，差異無統(tǒng)計學意義，P＆gt;0.05。見表1。

表1 兩組性激素FSH 和E2 檢測情況（）

表1 兩組性激素FSH 和E2 檢測情況（）

注：與本組治療前比較，aP＆lt;0.05；與本組治療前比較，bP＆gt;0.05。

時間組別例數(shù)FSH（IU/L）E2（pg/mL）治療前觀察組2247.17±4.2131.77±4.83對照組2245.54±3.9232.09±3.09 t 值1.3290.256 P 值0.1910.799治療后觀察組2236.93±3.67a37.96±5.05a對照組2246.17±4.70b33.05±3.40b t 值7.2573.782 P 值0.0010.001

2.2 兩組CD4+、CD8+T 細胞檢測水平比較

兩組在治療前CD4+、CD8+、CD4+／CD8+T 細胞水平差異無統(tǒng)計學意義，P＆gt;0.05；3 個月后觀察組指標均有明顯改善，CD4+、CD4+／CD8+T 細胞水平上升，CD8+T 細胞水平下降；對照組無變化，差異無統(tǒng)計學意義，P＆gt;0.05。觀察組治療后CD4+、CD4+／CD8+T 細胞水平高于對照組，CD8+T 細胞水平低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義，P＆lt;0.05。見表2。

表2 兩組CD4+、CD8+T 細胞檢測情況（）

表2 兩組CD4+、CD8+T 細胞檢測情況（）

注：與本組治療前比較，aP＆lt;0.05；與本組治療前比較，bP＆gt;0.05。

時間組別例數(shù)CD4+（%）CD8+（%）CD4+/CD8+治療前觀察組2231.97±3.5037.48±4.280.86±0.11對照組2230.73±2.7135.30±4.560.88±0.13 t 值1.3211.630.605 P 值0.1940.1110.548治療后觀察組2235.01±3.84a31.13±4.23a1.14±0.15a對照組2230.62±2.27b35.36±4.72b0.88±0.12b t 值4.623.1276.408 P 值0.0010.0030.001

2.3 兩組免疫球蛋白水平比較

治療前觀察組和對照組免疫球蛋白水平比較差異均無統(tǒng)計學意義，P＆gt;0.05。3 個月療程結(jié)束后，觀察組與對照組比較IgA、IgM、IgG 水平差異有統(tǒng)計學意義，P＆lt;0.05；觀察組IgA、IgM、IgG 水平與治療前比較均出現(xiàn)不同程度升高，差異均有統(tǒng)計學意義，P＆lt;0.05，但對照組免疫蛋白變化不明顯，差異無統(tǒng)計學意義，P＆gt;0.05。見表3。

表3 兩組免疫球蛋白檢測情況（）

表3 兩組免疫球蛋白檢測情況（）

注：與本組治療前比較，aP＆lt;0.05；與本組治療前比較，bP＆gt;0.05。

時間組別例數(shù)IgA（g/L）IgM（g/L）IgG（g/L）治療前觀察組222.07±0.711.59±0.5313.54±2.69對照組222.14±0.771.68±0.6713.89±2.74 t 值0.2930.4850.313 P 值0.7710.630.756治療后觀察組222.71±0.75a2.22±0.54a15.56±2.33a對照組222.10±0.75b1.63±0.61b13.72±2.60b t 值2.7293.4262.469 P 值0.0090.0010.018

3 討論

房 恭教授首先應用調(diào)經(jīng)促孕針在早發(fā)性卵巢功能不全（POI）患者的對照研究以來[2]，而后續(xù)較多POI 患者臨床研究報道，發(fā)現(xiàn)POI 患者經(jīng)治療后，性激素FSH、LH、FSH/LH 水平下調(diào)，E2、AMH 水平及AFC 數(shù)目上調(diào)，且能調(diào)整患者月經(jīng)周期，使子宮內(nèi)膜厚度增加，改善卵巢功能和低雌激素癥狀，調(diào)節(jié)負性情緒，提高卵子質(zhì)量[3]。繼而推廣到POF 患者，臨床研究也表明，經(jīng)房氏調(diào)經(jīng)促孕針治療后POF 患者與POI 患者療效相當，同樣能改善血清激素水平，促進患者月經(jīng)周期恢復，達到改善卵巢的功能，緩解臨床癥狀[4]。

本研究發(fā)現(xiàn)，卵巢功能早衰患者經(jīng)房氏調(diào)經(jīng)促孕針針刺治療后，激素FSH、E2水平有所改善，說明達到了一定的治療效果，同時CD4+T 細胞、CD4+/CD8+T 細胞檢測水平上升，CD8+T 細胞檢測下降，IgG、IgM、IgA 檢測水平有不同程度上升。以上結(jié)果表明，經(jīng)針灸治療后，患者的細胞免疫和體液免疫均有所改善。由于房氏調(diào)經(jīng)促孕針是組合性針灸穴位治療，具有多方面的功效。根據(jù)文獻報道，本研究推測，可能在針灸足三里、腎俞、天樞、三陰交等穴位起了免疫調(diào)節(jié)作用。

綜上所述，卵巢功能早衰患者經(jīng)房氏調(diào)經(jīng)促孕針治療后除了激素水平有改善外，免疫功能也有明顯改善。因此，本研究認為免疫功能檢查可為房氏調(diào)經(jīng)促孕針治療效果評價提供一定的參考。