全自動血細胞分析儀報警值系統(tǒng)對血常規(guī)復片工作的影響

劉子暉，王自春，范耀方

四川省營山縣人民醫(yī)院 （四川營山 637700）

血常規(guī)作為最普及的檢驗項目，能為臨床提供極為廣泛的診療線索。臨床工作中保證檢驗質(zhì)量除了加強對質(zhì)控、結(jié)果數(shù)據(jù)的審核，血細胞形態(tài)的把控，還應對散點圖、儀器和試劑的性能進行全面掌握。全自動血細胞分析儀在標本檢測過程中除了可進行各類細胞的計數(shù)，還可根據(jù)獲取的光電學信號，生成直方圖與散點圖，運用儀器自身軟件的算法對細胞形態(tài)等相關信息進行提示，并生成一個具體數(shù)值，當該數(shù)值超過設定數(shù)值時儀器認為對應的異常信息可信度較高。不同品牌全自動血細胞分析儀的報警值系統(tǒng)對應的報警信息大致相同，但報警值系統(tǒng)名稱可能存在差異，如希森美康部分機型為Q-flag 值[1-2]，邁瑞部分機型為flag 值，該值可理解為儀器認為特定形態(tài)學異常的概率大小。我院實驗室全自動血細胞分析儀型號為邁克F810，提供與血細胞形態(tài)相關的報警信息如下：原始/異常淋巴細胞，核左移，不典型淋巴細胞，紅細胞碎片，血小板聚集，鐵缺乏，紅細胞凝集。當全自動血細胞分析儀出現(xiàn)報警值大于100 時，儀器認為該類報警提示的可信程度較高，會在結(jié)果主屏上進行陽性提示。隨著血細胞分析儀的自動化程度越來越高，血細胞計數(shù)+推染片+自動審核系統(tǒng)也越來越普及，研究更多有價值的參數(shù)對實驗室制訂更合理的自動審核規(guī)則顯得尤為重要。本研究旨在通過探索我院實驗室邁克F810 的報警值與顯微鏡鏡檢的符合率，評價血細胞分析儀報警值系統(tǒng)在特定形態(tài)異常時的預測價值，以及利用報警值指導血常規(guī)的復片工作效果，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2022 年2 月15 日至3 月16 日我院實驗室采用邁克F810 全自動血細胞分析儀檢測標本6 257 例，對有報警提示（原始細胞/異常淋巴細胞、核左移、異型淋巴細胞、紅細胞碎片、血小板聚集、缺鐵貧）的標本487 例，報警條數(shù)612 條進行人工鏡檢，并將報警值按100～200 區(qū)間和201～300 區(qū)間分組進行對比，其中，紅細胞凝集報警數(shù)量過少，未納入統(tǒng)計。隨機收集同期100 例未出現(xiàn)報警提示的標本作為對照組進行人工鏡檢，記錄鏡檢結(jié)果。

1.2 儀器設備和試劑

全自動血細胞分析儀（邁克生物，F(xiàn)810 型），試劑為邁克F810 適配的稀釋液、溶血劑及熒光染液。瑞氏染液為珠海貝索生物提供。顯微鏡型號為OlympusBX43 雙筒顯微鏡。采血管為二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）真空抗凝管。

1.3 方法

選擇室內(nèi)質(zhì)控在控、測定過程中儀器未出現(xiàn)故障的標本作為篩選的基本條件。觀察此類標本中原始細胞/異常淋巴細胞、核左移、異型淋巴細胞、紅細胞碎片、血小板聚集、缺鐵貧6 項參數(shù)中的報警值，并篩選出報警值超過100 的標本作為陽性標本，在儀器檢測后不超過4 h 內(nèi)進行涂片染色鏡檢[3]；并且隨機抽取同期100 例報警值小于100 的標本作為陰性標本進行涂片染色鏡檢，鏡檢陰性標本時對6 項報警提示均進行檢查。

嚴格遵照第四版《全國臨床檢驗操作規(guī)程》[4]進行瑞氏染色，顯微鏡鏡檢由主管檢驗師以上或有骨髓細胞形態(tài)學專項進修經(jīng)歷的專業(yè)技術人員完成，并嚴格按《臨床血液學檢驗技術》[5]要求進行判定。鏡檢陽性標準[6-9]：原始細胞/異常淋巴細胞，外周血原始細胞、幼稚淋巴細胞、淋巴瘤細胞大于1%判為鏡檢陽性；異型淋巴細胞，反應性淋巴細胞大于3%判為鏡檢陽性；紅細胞碎片，紅細胞碎片大于1%；血小板聚集，3 顆以上血小板黏附聚集，并且能在其他視野重現(xiàn)判為陽性；核左移，桿狀粒細胞＆gt;5%判為陽性；缺鐵貧，紅細胞大小相差1 倍以上且中心淡染區(qū)超過1/3 判為陽性。

1.4 觀察指標

統(tǒng)計相關報警信息與鏡檢標準的符合率，并分析不同報警值區(qū)間各類報警信息與鏡檢結(jié)果的符合率。

1.5 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 26.0 軟件進行數(shù)據(jù)處理與分析，計數(shù)資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗，P＆lt;0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 各類報警信息的符合率的評價

報警率最高的為血小板聚集（2.3%），最低的為核左移（0.9%），符合率最高的為核左移（89.3%），最低的為原始/異常淋巴細胞（2.5%），見表1。

表1 各類報警的儀器報警情況及陽性符合率

2.2 不同報警值區(qū)間差異性評價

原始/異常淋巴細胞報警由于僅有3 例且報警值均為300，不進行比較；紅細胞碎片和核左移報警值在100～200 區(qū)間與201～300 區(qū)間的陽性符合率差異有統(tǒng)計學意義（P＆lt;0.05），缺鐵貧、異型淋巴細胞、血小板聚集報警值在100～200 區(qū)間與201～300 區(qū)間的陽性符合率差異無統(tǒng)計學意義（P＆gt;0.05），見表2。

表2 不同報警值鏡檢陽性符合率比較[例（%）]

2.3 對照組標本的鏡檢結(jié)果統(tǒng)計

對報警值小于100 的100 例標本進行鏡檢后發(fā)現(xiàn)，97 例未達到本次研究的陽性標準，2 例出現(xiàn)血小板聚集，1 例出現(xiàn)紅細胞碎片。

2.4 各類報警值對相應形態(tài)變化的預測價值分析

原始/異常淋巴細胞的截斷值明顯高于儀器設定的閾值為280，閾值較低的是核左移為95，低于儀器設定的閾值；診斷效率最高的為核左移，診斷效率相對偏低的為異型淋巴細胞，見表3。

表3 各報警值的預測效能分析

3 討論

隨著醫(yī)療技術的發(fā)展和進步，全自動血細胞分析儀不僅具有較高的精密度和準確度，還可提供更多參數(shù)供實驗室人員參考，極大地減輕了實驗室人員的勞動強度。目前，主流儀器的檢測原理有電阻抗原理、流式細胞術、化學染色、熒光化學染色，部分品牌還有熒光單克隆抗體染色技術。血細胞分析儀在檢測過程中主要獲取樣本的物理信息有體積、電導率、3 種中角度散射光的測量值（中角光散射、下中角光散射和上中角光散射提供有關粒度和膜表面的信息），軸向光損失測量值（分析細胞透明度）、低角度光散射值（分析細胞復雜性指標）[10-11]。報警值系統(tǒng)產(chǎn)生的數(shù)值就是基于檢測過程中獲取的相應信息，并通過自身算法分析得出，且報警值所提示的報警信息均可通過顯微鏡鏡檢進行確認。因此，通過與人工顯微鏡鏡檢進行比對可以看出該血細胞分析儀報警值這一參數(shù)在臨床實際工作中的使用價值[12]。

我院實驗室邁克F810 的主要原理包括：（1）采用鞘流電阻抗法對血細胞進行計數(shù)；（2）激光流式細胞術和熒光化學染色技術檢測細胞及其他生物顆粒的物理性質(zhì)。該儀器根據(jù)獲取的信號參數(shù)和軟件算法輸出各類細胞的計數(shù)結(jié)果和研究參數(shù)，由于各通道對血細胞的計數(shù)原理不同，同一項目可能會在儀器計數(shù)時出現(xiàn)兩種不同結(jié)果，當差距明顯時通常提示檢測中存在異常，可能是標本中含有異常成分增高導致通道溶血效率下降，也可能是由異常血細胞成分而導致的[13]，如紅細胞及血小板的檢測會通過兩種不同方式給出檢測結(jié)果，一是RBC/PLT通道直接測量對應電脈沖個數(shù)所得，該通道的特點是考察的粒子數(shù)量巨大，在標本無干擾的情況下其結(jié)果更可靠，更穩(wěn)定；二是網(wǎng)織紅通道檢測時，F(xiàn)CR 通道除了將網(wǎng)織紅細胞劃分為LFR、MFR、HFR，還能計算成熟紅細胞區(qū)域、血小板區(qū)域的粒子數(shù)量，從而獲得該通道的RBC-O 和PLT-O 的計數(shù)結(jié)果，該通道的結(jié)果對異常細胞及異常標本的快速識別有著重要意義[14-16]。

儀器報警值研究界面輸出的具體報警數(shù)值，一方面是和細胞形態(tài)密切相關，另一方面數(shù)值越大往往提示異常細胞或異常形態(tài)真實性越高[17-18]。本研究中通過對邁克F810 報警值（原始/異常淋巴細胞、核左移、異型淋巴細胞、紅細胞碎片、血小板聚集、缺鐵貧）的研究發(fā)現(xiàn)，報警值提示系統(tǒng)出現(xiàn)以下特點：（1）對原始細胞/異常淋巴細胞這一報警，鏡檢外周血查見原始細胞的病例儀器提示的報警值均為300（增大研究樣本可能存在不同結(jié)論）；原始細胞/異常淋巴細胞報警信息和異型淋巴細胞報警信息易同時出現(xiàn)，可能是這兩個報警值取決于FCD 散點圖上儀器指定的原始細胞區(qū)域/異型淋巴細胞區(qū)域粒子數(shù)量的多少，而在散點圖中熒光強度和散射光強度不能精準地分開原始細胞和異形淋巴細胞區(qū)域，兩種報警在散點圖上的位置有共性，因而導致兩種報警同時出現(xiàn)[19]；（2）分析報警值的大小發(fā)現(xiàn)，異型淋巴細胞大于200 報警值的陽性率僅稍高于100～200 報警值，不同區(qū)間的陽性符合率無顯著性差異，這可能與此次研究陽性標準為查見大于3%的異型淋巴細胞即判為鏡檢陽性相關[20]，另外，與散點圖上異型淋巴細胞預設定區(qū)域也有關系，異型淋巴細胞預設定區(qū)域粒子的物理性質(zhì)為熒光強度較高，側(cè)向散射光信號明顯較大，這些特性決定了落在該區(qū)域并觸發(fā)報警的粒子除了異型淋巴細胞外，其他均是一些胞體偏大、胞漿偏多的淋巴瘤細胞，而外周血異型淋巴細胞出現(xiàn)的概率大于淋巴瘤細胞，所以此區(qū)域受其他細胞成分的干擾更小[21]；（3）核左移報警陽性符合率具有較高的準確性，在201～300 區(qū)間陽性率符合率更高，低值區(qū)間的核左移鏡檢后更多的是以桿狀粒細胞的增多為主，幼稚粒細胞更多見于高值區(qū)間，因血常規(guī)檢測為臨床提供的形態(tài)描述報告主要應提示原始/幼稚細胞，桿狀粒細胞增多的核左移并非必須提示項，針對此報警項，臨床工作中可以根據(jù)報警數(shù)值有傾向性選擇復片；（4）血小板聚集報警的陽性率較高，符合率尚可，該報警陽性率較高的原因可能是患者病情復雜，采血過程不順暢，標本保存不正確及檢測時間過長等導致，少數(shù)血小板聚集報警與鏡檢不符可能是存在紅細胞碎片、巨大血小板、網(wǎng)織紅細胞等干擾[22]，另外，部分標本采用含網(wǎng)織紅模式和不含網(wǎng)織紅模式同時檢測，可發(fā)現(xiàn)該項報警值可能出現(xiàn)明顯差異，提示該報警值來源于多個參數(shù)；（5）紅細胞碎片報警值在不同報警值區(qū)間鏡檢符合率的差異有統(tǒng)計學意義（P＆lt;0.05），未報警的陰性標本偶有檢出碎片，表明該機型的紅細胞碎片報警不同報警值區(qū)間指導復片工作的價值不同，但也要注意漏檢的風險，大血小板及其他的有核細胞碎片，物理性質(zhì)與紅細胞碎片相似，都會干擾檢測，紅細胞碎片報警值與儀器RBC/PLT 通道檢測時對應有形成分的數(shù)量相關，但并非完全的線性關系。

4 結(jié)論

綜上所述，邁克F810 血細胞分析儀的可疑報警提示大多是和血細胞形態(tài)相關，對指導復片鏡檢有一定的臨床意義。目前，我院實驗室的復片工作除了根據(jù)血常規(guī)各項目數(shù)值制訂的復檢規(guī)則，還采用了報警值系統(tǒng)的以下4 個方面：（1）原始細胞/異常淋巴細胞報警值大于280；（2）異型淋巴細胞報警值大于110；（3）紅細胞碎片報警值大于120；（4）儀器出現(xiàn)缺鐵貧、核左移和血小板聚集報警需結(jié)合血常規(guī)結(jié)果決定是否復片。上述4 條額外的復片規(guī)則的制訂，一方面是根據(jù)實驗室數(shù)據(jù)驗證而來的截斷值，另一方面考慮到原始細胞/異常淋巴細胞、異型淋巴細胞、紅細胞碎片在臨床實際工作中提示白血病、EB病毒感染、血栓性血小板減少性紫癜等疾病中有很大的提示意義，而缺鐵貧、核左移和血小板聚集在截斷值以上有較高的敏感度和特異度，多種疾病和標本采集保存的因素也容易導致相應的形態(tài)學改變[23-25]。因此，各實驗室可根據(jù)自身日常工作積累，并根據(jù)積累結(jié)果，利用報警值這一研究參數(shù)制訂適合自己實驗室的特色復檢規(guī)則，從而達到事半功倍的效果。