關(guān)于白僵菌分類和應(yīng)用的三個問題

魏萬勇

（四川省蠶絲學(xué)校，四川 南充 637000）

白僵菌制劑是我國研究時間最長和應(yīng)用面積最大的真菌殺蟲劑，也是目前農(nóng)林業(yè)上防治食葉害蟲非常有效的生物農(nóng)藥，主要用于防治松毛蟲、玉米螟、大豆食心蟲、菜青蟲、小菜蛾、棉鈴蟲、高粱條螟、甘薯象鼻蟲、馬鈴薯甲蟲、茶葉毒蛾、松針毒蛾、稻苞蟲、稻葉蟬、稻飛虱等多種農(nóng)林害蟲，特別是對玉米螟和松毛蟲，已經(jīng)作為常規(guī)手段連年使用[1]。同時白僵菌也用于專門感染昆蟲獲得需要的產(chǎn)品，如生產(chǎn)僵蠶。本文針對白僵菌的分類、生物農(nóng)藥使用、白僵蠶人工飼養(yǎng)三個方面進行探討研究。

1 白僵菌的分類

白僵菌的研究，最先開始于意大利學(xué)者Bassi。白僵菌6 個代表種已被公認(rèn)，分別是球孢白僵菌（Beauveriabassiana）、布氏白僵菌（Beauveriabrong niartii）、多形白僵菌（Beauveriaamorpha）、蘇格蘭白僵菌（Beauveriacaledonica）、黏孢白僵菌（Beauveriavelata）和蠕孢白僵菌（Beauveriavermiconia）。這6 個種在不同發(fā)育階段具有共同的形態(tài)特征，但也存在一定的差異。在我國目前已發(fā)現(xiàn)的白僵菌有4種，即球孢白僵菌、布氏白僵菌、多形白僵菌和蘇格蘭白僵菌，其中球孢白僵菌和布氏白僵菌比較常見。

真菌分類的主要依據(jù)是有性生殖的各種器官、無性菌絲、孢子和菌落形態(tài)特征等。真菌分類系統(tǒng)較多，目前尚未統(tǒng)一。在真菌傳統(tǒng)分類體系中，一般是基于真菌的形態(tài)學(xué)特征、特別是真菌有性生殖特點來進行分類。在各類微生物學(xué)教材和眾多研究文獻(xiàn)中，白僵菌營養(yǎng)體是有隔膜的菌絲體，菌落平坦，絨毛狀，形成孢子后呈粉狀，表面白色至淡黃色，分生孢子梗瓶狀，單生或分枝，產(chǎn)生在小梗上，分生孢子球形至卵形。對此類真菌生活史了解不完全，只發(fā)現(xiàn)無性繁殖階段，未發(fā)現(xiàn)其有性階段，故稱為半知菌。因此，白僵菌在傳統(tǒng)的分類學(xué)上一直屬于半知菌亞門（Deuteromycontina）絲孢綱（Hyphomycetales）叢梗孢目（Moniliales）叢梗孢科（Moniliaceae）白僵菌屬[2]，但隨著對白僵菌研究的不斷深入，特別是分子進化和系統(tǒng)發(fā)育的研究，有必要將白僵菌重新進行歸類。

近年來趨向采用安斯沃斯（Ainsworth）等人的《真菌學(xué)詞典》所介紹的分類系統(tǒng)，認(rèn)為真菌屬于單獨成立的真菌界（Fungi），界以下分為黏菌門（Myxomycota）和真菌門（Eumycota），通常所稱的真菌即指真菌門菌。真菌門下分為5 個亞門：鞭毛菌亞門（Mastigomycotina）、接合菌亞門（Zygomycotina）、子囊菌亞門（Ascomycotina）、擔(dān)子菌亞門（Basidiomycotina）和半知菌亞門（Deuteromycotina）[2]。真菌的現(xiàn)代分類學(xué)引入了分子生物學(xué)技術(shù)，應(yīng)用較多的主要有核糖體脫氧核酸（rDNA）序列測定，線粒體DNA 限制性片段多態(tài)性（RFLP）分析，隨機擴增多態(tài)性（RAPD）分析及脈沖場凝膠電泳（PFGE）分析等。應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)從遺傳進化角度闡明真菌種群之間和種間內(nèi)的分類學(xué)關(guān)系，是目前真菌分類學(xué)研究的熱點。最近美國生物技術(shù)信息中心（NCBI）將白僵菌歸類于雙核亞界（Dikarya）子囊菌門（Ascomycota）盤菌亞門（Pezizomycotina）糞殼菌綱（Sordariomycetes）肉座菌亞綱（Hypocreomycetidae）肉座菌目（Hypocreales）蟲草菌科（Cordycipitaceae）蟲草屬（Cordyceps）。目前，越來越多的文獻(xiàn)研究采用了NCBI 的分類標(biāo)準(zhǔn)。為了方便交流，避免名稱混亂，排除科學(xué)研究和交流的障礙，為科學(xué)分類和檢索奠定基礎(chǔ)，筆者建議統(tǒng)一白僵菌的分類標(biāo)準(zhǔn)，并采用美國生物技術(shù)信息中心NCBI 的分類標(biāo)準(zhǔn)。

2 生物農(nóng)藥白僵菌的使用

2.1 白僵菌殺蟲機理

白僵菌可以侵入6 個目15 科200 多種昆蟲及螨蟲的體內(nèi)大量繁殖，同時產(chǎn)生白僵素（非核糖體多肽類毒素）、卵孢霉素（苯醌類毒素）和草酸鈣結(jié)晶，這些物質(zhì)可打亂昆蟲新陳代謝、引起中毒，以致死亡[3]。白僵菌殺蟲的有效物質(zhì)是白僵菌的活性孢子。孢子接觸害蟲后，在適宜溫度條件下萌發(fā)，生長菌絲侵入蟲體內(nèi)，產(chǎn)生大量菌絲和分泌物，使害蟲生病，約4～5 d 后死亡。死亡后蟲體僵硬，體表長滿菌絲及白色粉狀孢子。孢子可借風(fēng)、昆蟲擴散，再侵染其他害蟲。持續(xù)施用白僵菌后，由于大量活性孢子的存在，感染寄主死亡之后能在體外產(chǎn)孢并再次擴散，在適宜條件下對害蟲形成流行病害，達(dá)到一年施藥多年有效的效果。

2.2 主要劑型

最初白僵菌劑型是含有大量載體或培養(yǎng)料的粉劑，運輸不便且效果不穩(wěn)定，隨著研究的深入和生產(chǎn)工藝的改進，逐漸發(fā)展了更為方便的、性能更為穩(wěn)定的純孢粉生產(chǎn)和可濕性粉劑?，F(xiàn)在推行乳劑、油劑和黏膏劑，乳劑和油劑主提高孢子懸液分散度與黏附力，黏膏劑主提高包子貯藏期的微囊劑以及防治蛀干害蟲提高利用率。在各種劑型中，為了增加白僵菌殺蟲劑的活力與殺蟲效果，在制劑中常常添加一些助劑、紫外保護劑和增效劑等[4，5]。

2.3 菌種貯藏

白僵菌應(yīng)置陰涼干燥避光處貯存，20℃下保質(zhì)期可達(dá)半年。常溫下油劑貯存含水量在5%以下，5 個月活孢率80%；4℃下含水量1.25～9.87%可貯藏18 個月，活孢率90%以上。限氮培養(yǎng)的白僵菌孢子貯藏期要比限碳的長；水浴時間適當(dāng)延長可以一定程度上延長油劑中后期孢子的活孢率。常溫貯藏的白僵菌適時添加外源營養(yǎng)，對于恢復(fù)孢子活力，提高油劑的活孢率有一定效果。色拉油可以作為白僵菌油劑很好的油劑載體[5]。

2.4 使用方法

白僵菌最適pH 6～7，最適培養(yǎng)溫度20～25℃，在寄主昆蟲等孵化盛期，結(jié)合氣象條件特別是溫度濕度條件，在陰天、雨后或早晚濕度大時使用，與寄主身體接觸或進入寄主體內(nèi)，寄生并產(chǎn)生作用。目前使用的是白僵菌原粉或經(jīng)分離后的白僵菌孢子粉。生產(chǎn)中推薦白僵菌制劑使用濃度為1 億個孢子/mL 或菌粉2 億個孢子/g，同時應(yīng)結(jié)合具體使用方法及防治對象確定使用量。菌液要現(xiàn)配現(xiàn)用，可采用噴粉、噴液、噴霧、撒施、放粉炮、放地炮等多種方法使用。與蘇云金芽孢桿菌、溴氰菊酯、松毛蟲病毒、三唑磷、殺蟲雙、氧化樂果等混合使用，可提高殺蟲效果[6]。

3 僵蠶人工飼養(yǎng)

3.1 僵蠶的藥用價值

家蠶感染真菌病后的病蠶尸體出現(xiàn)僵化，故稱之為僵蠶。在僵蠶的表面長出不同顏色的分生孢子，致使尸體表面形成白、黃、綠、黑、赤、灰等不同顏色的孢子粉被，根據(jù)孢子粉被的顏色，分別稱不同的家蠶真菌病為家蠶白僵病、黃僵病、綠僵病等。傳統(tǒng)的中藥材僵蠶特指蠶蛾科昆蟲家蠶Bombyx mori Linnaeus 4～5 齡的幼蟲感染（或人工接種） 白僵菌Beauveria bassiana（Bals.）Vuillant 而致死的干燥體。白僵蠶作為我國傳統(tǒng)中藥材，具有息風(fēng)止痙，祛風(fēng)止痛，化痰散結(jié)的功效[7]。隨著現(xiàn)代技術(shù)對白僵蠶營養(yǎng)成分及有效成分研究的深入及藥理、藥化、臨床研究，白僵蠶在抗癌、治癌方面的獨特療效逐漸為人所知。此外，白僵蠶含有氨基酸和活性絲光素，有營養(yǎng)皮膚和美容作用；僵蠶蛋白質(zhì)有刺激上皮脂腺，調(diào)節(jié)性激素分泌的作用，因而對女性性激素分泌失調(diào)引起的黃褐斑有一定療效；內(nèi)含維生素E，能清除自由基，抗脂質(zhì)氧化形成的老年斑；所含的活性絲光素能促使皮膚細(xì)胞新生，調(diào)節(jié)皮脂，改善皮膚微循環(huán)，可增白防曬，消除色素沉著，保持皮膚彈性等等。

3.2 白僵蠶規(guī)?；曫B(yǎng)

3.2.1 菌種分離和篩選

白僵菌菌種來自僵蠶尸體上的白僵菌孢子，經(jīng)分離選取優(yōu)質(zhì)單株菌落移植于斜面培養(yǎng)基上，在25～28℃的恒溫下進行培養(yǎng)，經(jīng)過10 d 左右，將提純分離得到的純種在5℃低溫下作為母種保存，再用于擴大培養(yǎng)。

3.2.2 菌種的衰退和復(fù)壯

球孢白僵菌在繼代培養(yǎng)過程中常發(fā)生不同類型的菌落局變，并產(chǎn)生各種形態(tài)和顏色不同于母株的分離株。與出發(fā)菌株（原始菌株）相比，分離株多表現(xiàn)為菌苔瘠薄或氣生菌絲徒長、產(chǎn)孢量下降和毒力降低等現(xiàn)象，意味生產(chǎn)性狀的退化。一旦出現(xiàn)衰退，應(yīng)及時進行寄主復(fù)壯。

3.2.3 孢子活性及使用濃度

白僵菌的不同菌株，毒力各不相同[8]。作為僵蠶生產(chǎn)接種用濃度，要求具有較高的精確性，生產(chǎn)上常使用濃度為1×107～1×108億個孢子/mL 的孢子懸液作為噴灑接種，以蠶體體表見濕為宜。使用濃度過低會導(dǎo)致感染率、成僵率過低，使用濃度過高不僅浪費菌種資源，也會影響僵蠶品質(zhì)。

3.2.4 環(huán)境條件控制

白僵菌孢子萌發(fā)、菌絲生長受制于溫度、濕度、光照、空氣等環(huán)境條件，特別是噴藥接種后溫濕度的影響最為顯著，保持最適溫度20～25℃，不能過高或過低，空氣相對濕度85%～90%。在僵蠶菌的培養(yǎng)過程中，注意開窗通風(fēng)，保持空氣清新，以防止蠶的尸體腐爛。

3.2.5 及時采收加工

把拾取的僵蠶放入烘房高溫滅菌，在90～100℃高溫中烘4～8h，即可以殺死白僵菌，烘干僵蠶。也可以將拾取的僵蠶用石灰吸收水分，曬干或焙干即可。