連續(xù)靜置培養(yǎng)促進(jìn)大腸桿菌生長(zhǎng)和運(yùn)動(dòng)

王 媛, 王芳彬

(合肥工業(yè)大學(xué) 食品與生物工程學(xué)院, 安徽 合肥 230601)

0 引 言

運(yùn)動(dòng)性是細(xì)菌在環(huán)境中移動(dòng)的一種高效策略,這一過(guò)程對(duì)于細(xì)菌在營(yíng)養(yǎng)缺乏的條件下生存至關(guān)重要[1-2]。文獻(xiàn)[3]研究了大腸桿菌K-12(一種腸道共生菌株的模式生物)在連續(xù)5 d培養(yǎng)下的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué),該菌株在體外模擬人類腸道內(nèi)細(xì)菌有規(guī)律的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)。研究表明大腸桿菌K-12在MH培養(yǎng)基中連續(xù)培養(yǎng),每12 h中到達(dá)穩(wěn)定期的時(shí)間縮短,生長(zhǎng)速度加快,最終導(dǎo)致穩(wěn)定期和指數(shù)期蛋白表達(dá)上存在差異,這些蛋白質(zhì)可能會(huì)影響鞭毛運(yùn)動(dòng)的能力。迄今為止,大多數(shù)將營(yíng)養(yǎng)與微生物群聯(lián)系起來(lái)的研究都集中在細(xì)菌的生長(zhǎng)上[4],但是關(guān)于營(yíng)養(yǎng)誘導(dǎo)的細(xì)菌生長(zhǎng)影響其鞭毛運(yùn)動(dòng)的研究卻很少。

在大腸桿菌中,鞭毛馬達(dá)[5-8]是一種跨膜蛋白,可以推動(dòng)細(xì)菌在液體介質(zhì)中游動(dòng)。馬達(dá)旋轉(zhuǎn)由多達(dá)11個(gè)彼此獨(dú)立工作的定子驅(qū)動(dòng),每個(gè)定子由4個(gè)單位的MotA蛋白和2個(gè)MotB蛋白組成,它的運(yùn)動(dòng)方式有2種,即在前進(jìn)和原地打轉(zhuǎn)之間交替。當(dāng)大腸桿菌上的所有鞭毛馬達(dá)沿逆時(shí)針(counterclock wise,CCW)方向旋轉(zhuǎn)時(shí),細(xì)菌就會(huì)前進(jìn);而當(dāng)一個(gè)或多個(gè)馬達(dá)沿順時(shí)針(clockwise,CW)方向旋轉(zhuǎn)時(shí),細(xì)菌會(huì)原地打轉(zhuǎn)[9-11]。

本文以E.coliJY26/pKAF131作為模式生物進(jìn)行研究,對(duì)E.coliJY26/pKAF131連續(xù)5 d靜置[12]培養(yǎng),通過(guò)紫外分光光度計(jì)定時(shí)檢測(cè)E.coliJY26/pKAF131的生長(zhǎng)狀況得到了E.coliJY26/pKAF131連續(xù)5 d的生長(zhǎng)曲線,并通過(guò)乳膠小球粘附在鞭毛馬達(dá)上,利用倒置顯微鏡Ti2-E連續(xù)5 d觀察E.coliJY26/pKAF131穩(wěn)定期的有效運(yùn)動(dòng)的變化,本文在此運(yùn)動(dòng)的基礎(chǔ)上研究了在連續(xù)5 d靜置培養(yǎng)下處于穩(wěn)定期的E.coliJY26/pKAF131的泳動(dòng)性的變化,并且與另外2種野生型菌株E.coliJY26(ΔfliC)和E.coliJY26(ΔmotB)/pKAF131的泳動(dòng)性[13]作比較,E.coli的運(yùn)動(dòng)性強(qiáng)意味著泳動(dòng)性比較敏感。同時(shí)本文研究了在連續(xù)5 d靜置培養(yǎng)下對(duì)處于穩(wěn)定期的E.coliJY26/pKAF131形態(tài)的影響。這些生物物理學(xué)實(shí)驗(yàn)對(duì)深入了解E.coliJY26/pKAF131馬達(dá)的運(yùn)動(dòng)機(jī)制及生物學(xué)功能的研究具有一定的作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株

E.coliJY26/pKAF131、E.coliJY26(ΔfliC)和E.coliJY26/pKAF131(ΔmotB)均由中國(guó)科技大學(xué)袁軍華實(shí)驗(yàn)室提供。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

Tryptone、Yeast、Sodium chloride、Agar powder(BD公司);磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、無(wú)水乙醇、鹽酸、甘油、過(guò)氧化氫(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);天冬氨酸(天津市東麗區(qū)天大化學(xué)試劑廠);M Grease(APIEZON);蛋氨酸、乳酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、氯化鈉、多聚賴氨酸、RIPA、三磷酸腺苷標(biāo)準(zhǔn)品、磷酸酶抑制劑(美國(guó)Sigma公司);氯霉素(GIBCO)。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備

SW-CJ-1FD 超凈工作臺(tái)(上海智誠(chéng));Biophtometer plus分光光度計(jì)、Eppendorf Centrifuge 5430R離心機(jī)(Eppendorf); DSX-24L手提式高壓蒸汽滅菌器(上海申安); JY 92-Ⅱ超聲波破碎儀(新芝生物科技股份有限公司);TS-2搖床(Kylin-Bell);PHS-3C pH計(jì)(濟(jì)南前程分析儀器有限公司);Hitech-Sciencetool Master-Q超純水凈化系統(tǒng)(上海和泰儀器有限公司); BSA1245高精密電子天平(Sartorius公司);HSX-150恒溫培養(yǎng)箱(上海海向儀器設(shè)備廠);Ti2-E倒置顯微鏡(Nikon); ImageQuantLAS 400 mini 熒光成像系統(tǒng)(GE Healthcare)。

1.2 生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

準(zhǔn)備24個(gè)50 mL的離心管,分成3組置于離心管架上。配2 L LB培養(yǎng)基,調(diào)節(jié)pH值到7.3左右,然后分裝到50 mL離心管中,分別加入3個(gè)50 mL離心管盛有40 mL LB培養(yǎng)基,6個(gè)50 mL離心管分別盛有39、38、37 mL培養(yǎng)基,3個(gè)50 mL離心管盛有36 mL培養(yǎng)基。第1天首先將分裝好滅過(guò)菌的LB培養(yǎng)基置于超凈臺(tái)中,從過(guò)夜培養(yǎng)細(xì)菌的試管中取出400 μL的菌液,加入到40 mL LB液體培養(yǎng)基中,搖勻以后放在離心管架上,然后放進(jìn)37 ℃恒溫箱里,每隔2 h測(cè)OD值,12 h內(nèi)測(cè)6次OD值,最后一次測(cè)完立馬離心,5 000 r/min、5 min、24 ℃下離心后倒入新的39 mL LB培養(yǎng)基中。過(guò)夜培養(yǎng)12 h后,第2天早上立馬離心,5 000 r/min、5 min、24 ℃,然后每隔1 h測(cè)OD值,第2天大概需要稀釋測(cè)OD值,取100 μL菌液加900 μL空培養(yǎng)基放進(jìn)1.5 mL離心管內(nèi),震蕩均勻后轉(zhuǎn)入比色皿里測(cè)OD值,連續(xù)12 h中每隔1 h測(cè)1次,需要迅速測(cè)OD值,12 h后離心倒掉上清,加入38 mL LB液體培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。第3天早上,經(jīng)過(guò)培養(yǎng)12 h后再離心,5 000 r/min、5 min、24 ℃,然后加入新鮮38 mL LB培養(yǎng)基,開(kāi)始每隔10 min測(cè)1次,取50 μL菌液加950 μL空培養(yǎng)基放進(jìn)1.5 mL離心管內(nèi),震蕩均勻后轉(zhuǎn)入比色皿里去測(cè)OD值,等菌液濃度穩(wěn)定以后每隔2 h測(cè)1次即可。12 h后離心倒掉上清,加入37 mL LB空培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。第4天早上,經(jīng)過(guò)培養(yǎng)12 h后再離心,5 000 r/min、5 min、24 ℃,然后加入新鮮37 mL LB培養(yǎng)基,開(kāi)始每隔10 min測(cè)1次,取50 μL菌液加950 μl空培養(yǎng)基放進(jìn)1.5 mL離心管內(nèi),震蕩均勻后轉(zhuǎn)入比色皿里去測(cè)OD值,等菌液濃度穩(wěn)定以后每隔2 h測(cè)1次。12 h后離心倒掉上清,加入36 mL LB空培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。第5天早上,經(jīng)過(guò)培養(yǎng)12 h后再離心,5 000 r/min、5 min、24 ℃,然后加入新鮮36 mL LB培養(yǎng)基,開(kāi)始每隔10 min測(cè)1次,取50 μL菌液加950 μL空培養(yǎng)基放進(jìn)1.5 mL離心管內(nèi),震蕩均勻后轉(zhuǎn)入比色皿里測(cè)OD值,等菌液濃度穩(wěn)定后每隔2 h測(cè)1次。

1.3 運(yùn)動(dòng)性實(shí)驗(yàn)

在連續(xù)5 d靜置培養(yǎng)E.coliJY26/pKAF131的生長(zhǎng)過(guò)程中,每天離心后,將新鮮的LB培養(yǎng)基倒入,并在8 h后進(jìn)入穩(wěn)定期。然后取出1 mL細(xì)菌溶液,并將該細(xì)菌溶液稀釋其OD值為0.45～0.50。取1 mL MM溶液洗滌細(xì)菌,5 000g離心1 min,將上清液除去,加入1 mL MM溶液,然后重懸。用移液管取出1 mL 細(xì)菌溶液,用23號(hào)針頭將其吸進(jìn)注射器。然后用聚苯乙烯軟管連接注射器,將這2個(gè)注射器來(lái)回?cái)D壓100次。使用小口徑的針頭切去長(zhǎng)的細(xì)菌鞭毛,從而縮短鞭毛,并使乳膠球更容易粘在鞭毛上。接下來(lái),需要將鞭毛細(xì)菌溶液離心至5 000g,離心1 min,除去上清液。最后吸取300 μL MM溶液移到1.5 mL離心管中,并將其與剩余細(xì)菌混合,以使細(xì)菌均勻地懸浮在300 μL MM溶液中。

用移液槍取出40 μL Sigma的聚賴氨酸溶液,將其緩慢且均勻地放在干燥的蓋玻片上,持續(xù)3 min。將雙面膠帶切成2段等長(zhǎng),然后粘貼到載玻片上。雙面膠帶的2個(gè)部分之間的距離短于蓋玻片的長(zhǎng)度。用鑷子夾住蓋玻片的一個(gè)角,然后用純凈水清洗蓋玻片。從蓋玻片上除去多余的聚賴氨酸,自然干燥,然后將蓋玻片粘到處理過(guò)的一側(cè)。在此實(shí)驗(yàn)中,使用移液器將40 μL細(xì)菌懸液吸入切片通道,然后將準(zhǔn)備好的切片倒置3 min。這樣可以使蓋玻片位于下方,而載玻片位于上方。讓細(xì)菌與聚賴氨酸溶液充分接觸,以便細(xì)菌可以粘在蓋玻片上觀察E.coliJY26/pKAF131的運(yùn)動(dòng)。3 min后,用移液管吸取100 μL MM溶液,并通過(guò)切片通道緩慢洗滌,以去除未粘在蓋玻片上的E.coliJY26/pKAF131。緩慢加入40 μL乳膠顆粒,倒置3 min。然后用移液器吸取100 μL MM溶液,并通過(guò)切片通道緩慢洗滌,以洗去未粘附在E.coliJY26/pKAF131鞭毛上的乳膠小球。最后用APIEZON的M型油脂(潤(rùn)滑脂)密封型材通道的兩端,以備實(shí)驗(yàn)。

使用CMOS相機(jī)(DCC3260M)40倍物鏡并且以500幀/s的速度記錄E.coliJY26/pKAF131鞭毛馬達(dá)的運(yùn)動(dòng)。所有實(shí)驗(yàn)均在23 ℃下進(jìn)行。

1.4 游動(dòng)性實(shí)驗(yàn)

首先將配好的Swimming培養(yǎng)基平放在超凈臺(tái)上,然后在連續(xù)5 d靜置培養(yǎng)大腸桿菌的生長(zhǎng)過(guò)程中,每天早上離心后倒入新鮮的LB培養(yǎng)基等8 h左右到達(dá)穩(wěn)定期,再取出1 mL菌液,稀釋菌液使其OD值為 0.45～0.50。繼續(xù)取出4 μL菌液滴在培養(yǎng)皿的中心位置,吹風(fēng)1 h左右,直到菌液在培養(yǎng)基表面晾干為止。最后輕輕地放置在37 ℃恒溫箱中孵育24 h,倒置培養(yǎng),孵育24 h以后將培養(yǎng)皿輕輕地放在凝膠成像儀中拍照。

1.5 形態(tài)實(shí)驗(yàn)測(cè)定

用乙醇清洗 1 片長(zhǎng)×寬為 76.2 mm×25.4 mm的載玻片,然后用純水清洗1 片長(zhǎng)×寬為18 mm×18 mm 的蓋玻片,最后自然晾干,準(zhǔn)備后續(xù)實(shí)驗(yàn)。使用移液槍吸取 40 μL的 Sigma 公司的多聚賴氨酸(polylysine)溶液,緩慢且均勻地涂布在已經(jīng)晾干的蓋玻片上,靜置3 min。然后將雙面膠截成2段一樣長(zhǎng)且等長(zhǎng)于蓋玻片粘于載玻片上,2段雙面膠的間距要小于蓋玻片的長(zhǎng)度。用鑷子夾住蓋玻片的一角,再用純水清洗蓋玻片,去掉蓋玻片上多余的多聚賴氨酸,自然晾干,經(jīng)過(guò)處理的一面粘住載玻片,這樣就形成了一個(gè)通道。在連續(xù)5 d靜置培養(yǎng)大腸桿菌的生長(zhǎng)過(guò)程中,每日早上離心后倒入新鮮的LB培養(yǎng)基,在8 h以后到達(dá)穩(wěn)定期,然后取出1 mL菌液,測(cè)菌液的OD值為 0.45～0.50。將稀釋好的菌液用移液槍吸取1 mL,加入1.5 mL離心管中,離心5 000g、1 min,去掉上清。然后取1 mL MM 溶液清洗一遍菌體,離心5 000g、1 min,去掉上清。用移液槍吸取300 μL的MM溶液加入1.5 mL離心管中與剩余菌體混合均勻,使細(xì)菌均勻懸浮于 300 μL的MM溶液中。

使用移液槍吸取40 μL 的細(xì)菌懸浮液慢慢地打入切片的通道中,接下來(lái)將做好的切片倒置處理3 min,即讓蓋玻片在下面,載玻片在上面。讓細(xì)菌與多聚賴氨酸(polylysine)溶液充分接觸,便于細(xì)菌沾到蓋玻片上,以便觀察大腸桿菌的形態(tài)。3 min后再將切片正置放好,吸取100 μL的MM溶液,將其緩慢通過(guò)切片通道進(jìn)行清洗,目的是將沒(méi)有粘到蓋玻片上的細(xì)菌清洗掉。最后用 APIEZON 公司生產(chǎn)的 M 型油脂(Grease)將切片通道兩端封住,完成了切片的制備。接下來(lái)立即將制備好的切片拿到顯微鏡下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察。

2 結(jié)果與分析

2.1 E.coliJY26/pKAF131的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)分析

研究表明E.coliK12菌株能在連續(xù)靜置的MH培養(yǎng)基中生長(zhǎng)速度加快,為此測(cè)試E.coliJY26/pKAF131在LB培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)狀況。本文使用一種名為JY26(ΔfliC)的野生型菌株,該菌株是E.coliK12菌株RP437的衍生物。本文將帶有黏性細(xì)絲fliCst的質(zhì)粒pKAF131轉(zhuǎn)入到JY26中。E.coliJY26/pKAF131連續(xù)5 d的生長(zhǎng)曲線如圖1所示。

圖1 E.coliJY26/pKAF131連續(xù)5 d的生長(zhǎng)曲線

由圖1可知,E.coliJY26/pKAF131的生長(zhǎng)速度加快,到達(dá)穩(wěn)定期的時(shí)間縮短。第1天連續(xù)培養(yǎng)E.coliJY26/pKAF131,8 h以后到達(dá)穩(wěn)定期;第2天連續(xù)培養(yǎng)E.coliJY26/pKAF131,2 h到達(dá)穩(wěn)定期;第3～5天連續(xù)培養(yǎng)E.coliJY26/pKAF131,1 h以內(nèi)到達(dá)穩(wěn)定期。結(jié)果表明:E.coliJY26/pKAF131在連續(xù)5 d的靜置LB培養(yǎng)中,生長(zhǎng)速度加快,到達(dá)穩(wěn)定期的時(shí)間縮短。

2.2 E.coliJY26/pKAF131的運(yùn)動(dòng)性分析

在靜置LB培養(yǎng)中,E.coliJY26/pKAF131的生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)連續(xù)5 d發(fā)生變化,因?yàn)橐私膺@是否會(huì)影響E.coliJY26/pKAF131的運(yùn)動(dòng)性,所以本文選擇連續(xù)5 dE.coliJY26/pKAF131生長(zhǎng)的穩(wěn)定期進(jìn)行研究。本文首先對(duì)2種大腸桿菌(野生型大腸桿菌JY26和大腸桿菌JY26/pKAF131)的鞭毛馬達(dá)的轉(zhuǎn)速進(jìn)行分析,E.coliJY26/pKAF131的鑒定結(jié)果如圖 2 所示。因?yàn)橐吧虴.coliJY26(ΔfliC)無(wú)鞭毛基因,所以無(wú)鞭毛運(yùn)動(dòng),作為對(duì)照組;E.coliJY26/pKAF131 是導(dǎo)入了表達(dá)鞭毛基因的質(zhì)粒pKAF131,因此使細(xì)菌獲得了運(yùn)動(dòng)能力和可以標(biāo)記乳膠小球的能力。

圖2 E.coliJY26/pKAF131的鑒定結(jié)果

本文鞭毛馬達(dá)的動(dòng)力學(xué)分析需要利用乳膠小球粘附在E.coliJY26/pKAF131的鞭毛上，通過(guò)倒置顯微鏡Ti2-E觀察E.coliJY26/pKAF131運(yùn)動(dòng)速度的變化。利用E.coliJY26/pKAF131鞭毛馬達(dá)的順時(shí)針?biāo)俣群湍鏁r(shí)針?biāo)俣茸鬟\(yùn)動(dòng)指標(biāo)，并用MATLAB分析鞭毛馬達(dá)的轉(zhuǎn)速。連續(xù)5 d培養(yǎng)E.coliJY26/pKAF131鞭毛馬達(dá)的順時(shí)針轉(zhuǎn)速如圖3所示。圖3中：*表示P<0.05;***表示P<0.001,下同。從圖3可以看出,連續(xù)靜置培養(yǎng)E.coliJY26/pKAF131的順時(shí)針轉(zhuǎn)速分別為(39.59±4.503)Hz、(51.32±5.076)Hz、(53.05±3.687)Hz、(55.70±4.798)Hz、(69.59 ±4.298)Hz,連續(xù)5 d研究的有效細(xì)菌數(shù)為4、17、21、18、28。E.coliJY26/pKAF131的順時(shí)針轉(zhuǎn)速逐漸提高。

連續(xù)5 d培養(yǎng)E.coliJY26/pKAF131鞭毛馬達(dá)的逆時(shí)針轉(zhuǎn)速如圖4所示,其中,* *表示P<0.01。從圖4可以看出,連續(xù)5 d 的E.coliJY26/pKAF131的逆時(shí)針轉(zhuǎn)速分別為(35.33±3.663)Hz、(50.44±4.846)Hz、(52.34±4.026)Hz、(54.57±5.236)Hz、(74.33±5.530)Hz,每天研究的有效細(xì)菌個(gè)數(shù)分別為21、19、22、21、30。與第1天相比,第2天的逆時(shí)針轉(zhuǎn)速提高了30%;第3、4天與第2天相比沒(méi)有顯著性差異,但是轉(zhuǎn)速有所提高。在第5天時(shí),細(xì)菌鞭毛運(yùn)動(dòng)的逆時(shí)針轉(zhuǎn)速達(dá)到約69.59 Hz,與第4天相比增加了約20%。結(jié)果表明:E.coliJY26/pKAF131在連續(xù)5 d的靜置LB培養(yǎng)中,運(yùn)動(dòng)性增強(qiáng),E.coliJY26/pKAF131的逆時(shí)針轉(zhuǎn)速連續(xù)5 d上升,而順時(shí)針轉(zhuǎn)速表明運(yùn)動(dòng)環(huán)境的不利因素也在增加,這與E.coliJY26/pKAF131數(shù)量的增加是一致的,次生毒性代謝產(chǎn)物也在增加[12]。

圖4 E.coliJY26/pKAF131鞭毛馬達(dá)的逆時(shí)針轉(zhuǎn)速

2.3 MotB和FliC的運(yùn)動(dòng)影響分析

為了驗(yàn)證MotB和FliC在E.coliJY26/pKAF131運(yùn)動(dòng)中的重要性,本文將E.coliJY26(ΔfliC)、E.coliJY26(ΔmotB)/pKAF131和E.coliJY26/pKAF131進(jìn)行連續(xù)5 d的靜置LB培養(yǎng),然后在泳動(dòng)培養(yǎng)基上觀察細(xì)菌游動(dòng)的直徑。3種E.coli菌株連續(xù)5 d的群體運(yùn)動(dòng)如圖5所示。圖5中:E.coliJY26為缺少鞭毛FliC基因的菌株;E.coliJY26(ΔmotB)/pKAF131為缺少運(yùn)動(dòng)蛋白基因的菌株;E.coliJY26/pKAF131為有運(yùn)動(dòng)基因并且有鞭毛的菌株;將培養(yǎng)第1天的菌液穩(wěn)定期的細(xì)菌取出4 μL滴在泳動(dòng)固體培養(yǎng)基上,37 ℃孵育24 h拍照;第2～5天以此類推。從圖5可以看出,E.coliJY26/pKAF131游動(dòng)的直徑在連續(xù)培養(yǎng)5 d的靜置培養(yǎng)中發(fā)生變化,隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加，E.coliJY26/pKAF131游動(dòng)的直徑增大。與對(duì)照組相比,當(dāng)同時(shí)存在MotB和FliC時(shí)，E.coliJY26/pKAF131的運(yùn)動(dòng)性才會(huì)隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加而增強(qiáng)。

圖5 3種E.coli菌株連續(xù)5 d的群體運(yùn)動(dòng)

2.4 E.coliJY26/pKAF131的形態(tài)學(xué)分析

有研究表明細(xì)菌的長(zhǎng)寬比與細(xì)菌的遷移率有關(guān)。在連續(xù)5 d的靜置培養(yǎng)中,E.coliJY26/pKAF131的生長(zhǎng)速率加快,運(yùn)動(dòng)性增強(qiáng)。為了分析E.coliJY26/pKAF131的形態(tài),本文將穩(wěn)定期的E.coliJY26/pKAF131制成切片利用倒置顯微鏡隨機(jī)拍攝,并借助MATLAB分析E.coliJY26/pKAF131的形態(tài)和大小。E.coliJY26/pKAF131的測(cè)量數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。連續(xù)5 d培養(yǎng)E.coliJY26/pKAF131的菌體長(zhǎng)寬比如圖6所示。

圖6 連續(xù)5 d培養(yǎng)E.coliJY26/pKAF131的菌體長(zhǎng)寬比

從圖6可以看出,E.coliJY26/pKAF131的長(zhǎng)寬比保持在約2.5,沒(méi)有顯著性差異,但整體的趨勢(shì)與細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)性增強(qiáng)趨勢(shì)相吻合。

3 結(jié) 論

已有的研究表明E.coli在連續(xù)靜置培養(yǎng)中,生長(zhǎng)速率加快,并且與E.coli運(yùn)動(dòng)相關(guān)的一些基因表達(dá)量升高。本文分析發(fā)現(xiàn)連續(xù) 5 d靜置培養(yǎng)E.coliJY26/pKAF131,E.coliJY26/pKAF131的生長(zhǎng)到達(dá)穩(wěn)定期的時(shí)間縮短,生長(zhǎng)速度加快。這些結(jié)果與先前的報(bào)道一致,表明連續(xù)靜置培養(yǎng)對(duì)E.coliJY26/pKAF131的生長(zhǎng)起著重要作用。除此以外,連續(xù)5 d靜置培養(yǎng)E.coliJY26/pKAF131,E.coliJY26/pKAF131的運(yùn)動(dòng)性發(fā)生變化,并且隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加運(yùn)動(dòng)性增強(qiáng),泳動(dòng)性與E.coliJY26/pKAF131的運(yùn)動(dòng)有關(guān),泳動(dòng)性增大,說(shuō)明E.coliJY26/pKAF131確實(shí)在連續(xù)5 d的靜置培養(yǎng)中運(yùn)動(dòng)性增強(qiáng)。結(jié)果表明連續(xù)5 d靜置培養(yǎng)可能參與調(diào)控E.coliJY26/pKAF131的生長(zhǎng)和運(yùn)動(dòng)基因的表達(dá),這一發(fā)現(xiàn)對(duì)更深入地了解腸道有關(guān)的細(xì)菌在體內(nèi)的運(yùn)動(dòng)以及抗細(xì)菌藥物的研發(fā)具有一定的指導(dǎo)作用。