低魚(yú)粉條件下添加磷脂酸、膽固醇及其復(fù)合物對(duì)雜交鱧生長(zhǎng)性能和腸道消化酶活性的影響

■贠 彪 張含樂(lè) 涂永芹 張凱凱 朱 選 錢(qián)雪橋

（廣東海大集團(tuán)股份有限公司，廣東廣州 511400）

雜交鱧屬肉食性魚(yú)類(lèi)，肉質(zhì)鮮美，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，在兩廣地區(qū)被廣泛養(yǎng)殖。雜交鱧作為肉食性魚(yú)類(lèi)，營(yíng)養(yǎng)級(jí)較高，具有較高的蛋白質(zhì)需求[1]，其配合飼料中魚(yú)粉占比高，一般在30%以上。由于全球的魚(yú)粉供應(yīng)緊張，造成飼料成本高漲[2]，因而替代其飼料中的魚(yú)粉對(duì)于降低養(yǎng)殖成本、保障行業(yè)可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。眾多學(xué)者已在魚(yú)粉替代相關(guān)領(lǐng)域進(jìn)行了大量研究[3-9]，發(fā)現(xiàn)魚(yú)粉被動(dòng)植物蛋白源替代往往會(huì)存在適口性差、生長(zhǎng)性能降低、抗氧化能力減弱等一系列負(fù)面問(wèn)題[9-12]。近年一些功能性營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)對(duì)代謝的調(diào)節(jié)作用被發(fā)現(xiàn)，可以作為低魚(yú)粉條件下的調(diào)控營(yíng)養(yǎng)素。

磷脂酸作為一種二?；视土字侵匾纳镄盘?hào)分子，其功能主要與雷帕霉素復(fù)合物信號(hào)通路（mTOR）靶點(diǎn)的激活有關(guān)[13]，雷帕霉素復(fù)合物可以通過(guò)感知細(xì)胞內(nèi)營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)和代謝[14]。有研究表明，mTOR 的激活可以提高養(yǎng)殖動(dòng)物的生長(zhǎng)性能，增強(qiáng)免疫力，提高抗逆性，改善肌肉質(zhì)地等[15]。

膽固醇是細(xì)胞膜的重要成分，也是包括膽汁酸、類(lèi)固醇激素和維生素D 在內(nèi)的許多物質(zhì)合成的前體物質(zhì)，其在水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)代謝過(guò)程中具有不可替代的作用[16-20]。關(guān)于磷脂酸和膽固醇在魚(yú)類(lèi)配合飼料中的應(yīng)用已有很多學(xué)者進(jìn)行了具體的研究，但關(guān)于這些功能性原料在雜交鱧配合飼料中的應(yīng)用卻鮮見(jiàn)報(bào)道。因此本試驗(yàn)探究了磷脂酸、膽固醇以及復(fù)合物對(duì)雜交鱧生長(zhǎng)性能、飼料利用和腸道消化酶的具體影響，以期為雜交鱧配合飼料的配制和升級(jí)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與日糧配方

試驗(yàn)以魚(yú)粉、小麥粉、發(fā)酵豆粕、玉米蛋白粉、小麥蛋白粉、花生粕和啤酒酵母為主要蛋白源，以魚(yú)油、豆油和磷脂油為脂肪源，根據(jù)雜交鱧的營(yíng)養(yǎng)需求配制蛋白質(zhì)含量為50%、脂肪含量為10%的低魚(yú)粉基礎(chǔ)飼料（D1組），魚(yú)粉添加量為15%，通過(guò)多種蛋白源的搭配以及補(bǔ)充晶體氨基酸來(lái)盡量保證試驗(yàn)飼料氨基酸的平衡。通過(guò)在基礎(chǔ)飼料中分別添加0.5%磷脂酸、1.0%膽固醇和兩種物質(zhì)復(fù)合物配制飼料，分別為D2、D3組和D4組。功能性成分的添加量是依據(jù)烏鱧、斑鱧以及其他營(yíng)養(yǎng)級(jí)相近的肉食性魚(yú)類(lèi)適宜添加量而定的，試驗(yàn)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)日糧配方與營(yíng)養(yǎng)水平(%)

1.2 試驗(yàn)用魚(yú)和養(yǎng)殖管理

試驗(yàn)在廣州市海鷗島實(shí)驗(yàn)基地進(jìn)行。試驗(yàn)用魚(yú)購(gòu)于珠海海龍水產(chǎn)養(yǎng)殖基地，暫養(yǎng)15 d 后將規(guī)格均勻[（30.58±1.55）g]、健康的雜交鱧隨機(jī)分為4組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)組80尾，分別投喂D1、D2、D3和D4四種飼料。試驗(yàn)在網(wǎng)箱（1 m×1 m×1.5 m）中進(jìn)行，浮排網(wǎng)箱放置在魚(yú)塘中（長(zhǎng)85 m，寬40 m，水深2.5 m），增氧機(jī)24 h持續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)。每天7：00和17：00表觀(guān)飽食投喂2次。試驗(yàn)周期8周，試驗(yàn)期間水溫控制在（25.0±2.0）℃、pH為（7.0±0.3）、溶解氧大于7 mg/L、氨氮小于0.5 mg/L。

1.3 樣品采集與指標(biāo)測(cè)定

養(yǎng)殖8 周后，用丁香酚將魚(yú)麻醉，清點(diǎn)每個(gè)網(wǎng)箱魚(yú)的數(shù)量，對(duì)每個(gè)網(wǎng)箱的魚(yú)稱(chēng)總重并計(jì)數(shù)。每個(gè)網(wǎng)箱隨機(jī)取6尾魚(yú)，3尾用于稱(chēng)重并測(cè)量體長(zhǎng)，然后解剖稱(chēng)量肝臟重和內(nèi)臟重，用于計(jì)算形體指標(biāo)，如肥滿(mǎn)度（CF）、肝體比（HSI）和臟體比（VSI），另3 尾尾椎靜脈取血，制備血清，測(cè)定血清總蛋白含量，隨后解剖取腸道組織樣品，用于測(cè)定淀粉酶、胰蛋白酶、脂肪酶等消化酶活性。另外，隨機(jī)取5尾魚(yú)分析全魚(yú)粗成分。按照美國(guó)分析化學(xué)家協(xié)會(huì)（AOAC，1997）的方法，對(duì)試驗(yàn)飼料和全魚(yú)營(yíng)養(yǎng)組成進(jìn)行分析。粗蛋白含量通過(guò)凱氏定氮法測(cè)定；粗脂肪含量通過(guò)索氏抽提法測(cè)定；水分含量用烘干法（105 ℃）測(cè)定；灰分含量采用馬弗爐（550 ℃）灼燒法測(cè)定。血清總蛋白含量、腸道淀粉酶、胰蛋白酶活性以及脂肪酶活性均使用試劑盒測(cè)定，試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所有限公司，具體方法參照說(shuō)明書(shū)。

存活率（SR，%）=結(jié)束時(shí)試驗(yàn)魚(yú)尾數(shù)/開(kāi)始時(shí)試驗(yàn)魚(yú)尾數(shù)×100

增重率（WG，%）=（末均重-初均重）/初均重×100

飼料系數(shù)（FCR）=飼料消耗量/（末重-初重）

特定生長(zhǎng)率（SGR，%/d）=100×（ln末均重-ln初均重）/試驗(yàn)天數(shù)×100

臟體比（VSI，%）=內(nèi)臟濕重/魚(yú)體重×100

肝體比（HSI，%）=肝臟濕重/魚(yú)體重×100

肥滿(mǎn)度（CF，g/cm3）=魚(yú)體重/魚(yú)體長(zhǎng)3×100

蛋白質(zhì)沉積率（PPV，%）=魚(yú)體蛋白質(zhì)沉積量/總飼料蛋白質(zhì)攝入量×100

蛋白質(zhì)效率（PER）=（末均重-初均重）/總飼料蛋白質(zhì)攝入量

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

所有數(shù)據(jù)均使用SPSS 16.0 進(jìn)行單因素方差分析，符合方差齊性檢驗(yàn)后，用Tukey’s檢驗(yàn)進(jìn)行多重比較，計(jì)算結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”的形式表示。P＜0.05時(shí)認(rèn)為有顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 低魚(yú)粉飼料添加磷脂酸、膽固醇及其復(fù)合物對(duì)雜交鱧生長(zhǎng)性能的影響

試驗(yàn)結(jié)束后，各處理組試驗(yàn)魚(yú)生長(zhǎng)表現(xiàn)及飼料利用情況見(jiàn)表2。各組在終末體重、飼料系數(shù)、增重率、特定生長(zhǎng)率等方面均存在顯著差異（P＜0.05）。D4 組終末體重、增重率以及特定生長(zhǎng)率均顯著高于D1、D2組和D3組（P＜0.05），D2組和D3組之間無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。D1組飼料系數(shù)顯著高于D4組（P＞0.05）。

表2 低魚(yú)粉飼料添加磷脂酸、膽固醇及其復(fù)合物對(duì)雜交鱧生長(zhǎng)性能的影響

2.2 低魚(yú)粉飼料中添加磷脂酸、膽固醇及其復(fù)合物對(duì)雜交鱧形體指標(biāo)的影響

試驗(yàn)魚(yú)形體指標(biāo)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。由表3 可知，各處理組的肝體比、臟體比均不存在顯著性差異（P＞0.05），但功能性成分的添加顯著影響了雜交鱧的肥滿(mǎn)度，D2、D3、D4組顯著高D1組（P＜0.05）。

表3 低魚(yú)粉飼料添加磷脂酸、膽固醇及其復(fù)合物對(duì)雜交鱧形體指標(biāo)的影響

2.3 低魚(yú)粉飼料中添加磷脂酸、膽固醇及其復(fù)合物對(duì)雜交鱧全魚(yú)營(yíng)養(yǎng)組成的影響

試驗(yàn)結(jié)束后，各處理組全魚(yú)營(yíng)養(yǎng)組成見(jiàn)表4，可知各組在水分和灰分含量上無(wú)顯著性差異（P＞0.05），D1組魚(yú)體粗蛋白含量最低，為15.04%，顯著低于其他組（P＜0.05）；D1組和D2組粗脂肪含量顯著高于D3組和D4組（P＜0.05）。

表4 低魚(yú)粉飼料添加磷脂酸、膽固醇及其復(fù)合物對(duì)雜交鱧魚(yú)體營(yíng)養(yǎng)組成的影響（濕重，%）

2.4 低魚(yú)粉飼料中添加磷脂酸、膽固醇及其復(fù)合物對(duì)雜交鱧腸道消化酶活性的影響

雜交鱧腸道消化酶活性測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5，可知功能性添加劑的使用并未影響腸道淀粉酶的活性，但顯著影響了胰蛋白酶和脂肪酶的活性（P＜0.05）。D2組和D4組胰蛋白酶活性顯著高于D1組和D3組（P＜0.05），D3組和D4組脂肪酶活性顯著高于D1組和D2組（P＜0.05）。

表5 飼料中添加磷脂酸、膽固醇及其復(fù)合物對(duì)雜交鱧腸道消化酶活性的影響

2.5 低魚(yú)粉飼料中添加磷脂酸、膽固醇及其復(fù)合物對(duì)雜交鱧蛋白質(zhì)代謝指標(biāo)的影響

雜交鱧蛋白質(zhì)代謝指標(biāo)見(jiàn)表6，飼料中添加磷脂酸、膽固醇以及二者復(fù)合物對(duì)蛋白質(zhì)效率、蛋白質(zhì)沉積率和血清中總蛋白含量產(chǎn)生了顯著影響。其中D1組蛋白質(zhì)效率和蛋白質(zhì)沉積率顯著低于其他組（P＜0.05），D1 組血清總蛋白含量顯著低于D2 組和D4 組（P＜0.05），其他組之間無(wú)顯著相差異（P＞0.05）。

表6 飼料中添加磷脂酸、膽固醇及其復(fù)合物對(duì)雜交鱧蛋白質(zhì)代謝指標(biāo)的影響

3 討論與結(jié)論

在本試驗(yàn)中，評(píng)估了在雜交鱧基礎(chǔ)飼料中分別添加0.5%磷脂酸、1.0%膽固醇、0.5%磷脂酸+1.0%膽固醇對(duì)雜交鱧生長(zhǎng)性能和腸道消化酶活性的影響。與對(duì)照組相比，飼料中添加磷脂酸、膽固醇以及二者復(fù)合物均顯著提高了雜交鱧的生長(zhǎng)性能、蛋白質(zhì)效率和魚(yú)體蛋白質(zhì)沉積率，降低了飼料系數(shù)，這可能與添加磷脂酸、膽固醇促進(jìn)了飼料利用有關(guān)[21-22]。魚(yú)類(lèi)血液指標(biāo)常被用來(lái)評(píng)價(jià)魚(yú)體的健康程度和營(yíng)養(yǎng)吸收代謝情況，其中血清中總蛋白含量是評(píng)價(jià)魚(yú)體蛋白質(zhì)代謝的重要指標(biāo)[23]。在本試驗(yàn)中，添加磷脂酸以及磷脂酸和膽固醇二者復(fù)合物均顯著增加了雜交鱧血清中總蛋白的含量。之前的研究表明，蛋白質(zhì)合成代謝過(guò)程是在TOR 通路的控制下進(jìn)行的，并且也證實(shí)了TOR信號(hào)通路的激活可以顯著增強(qiáng)魚(yú)體蛋白質(zhì)合成代謝，促進(jìn)魚(yú)類(lèi)的生長(zhǎng)[24]。有關(guān)大菱鲆（Scophthalmus maximus）[25]的研究表明，飼料中補(bǔ)充磷脂酸可通過(guò)激活大菱鲆肌肉細(xì)胞中的TORC1 信號(hào)通路，顯著增強(qiáng)細(xì)胞增殖和合成代謝，這表明磷脂酸可以通過(guò)激活TOR信號(hào)來(lái)促進(jìn)體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成。這與本研究中添加磷脂酸后雜交鱧魚(yú)體蛋白含量顯著增加以及腸道中胰蛋白酶活性顯著增強(qiáng)的結(jié)果相符。

關(guān)于膽固醇對(duì)魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)方面的作用，不同的研究結(jié)果有些差異。在一些魚(yú)類(lèi)上，添加適量膽固醇可顯著促進(jìn)生長(zhǎng)[16，19，26]，有的卻并未觀(guān)察到明顯的促生長(zhǎng)效果[20，27]，主要原因可能是蛋白源差異較大，效果表達(dá)受到影響[17]。在本試驗(yàn)中，飼料中添加1.0%的膽固醇，顯著提高了雜交鱧腸道脂肪酶的活性和生長(zhǎng)性能，降低了魚(yú)體脂肪含量。外源性膽固醇的作用機(jī)制可能是增強(qiáng)了魚(yú)體內(nèi)膽汁酸的生成，從而促進(jìn)了脂肪的氧化分解和利用。因?yàn)橛醒芯勘砻?，飼料中添加膽固醇顯著增加了大西洋鮭（Salmo salar）[18]體內(nèi)膽汁中膽汁酸的含量，而膽汁酸具有乳化脂肪和促進(jìn)脂肪酸氧化供能的重要作用[28-29]。

綜上所述，在低魚(yú)粉飼料中添加磷脂酸、膽固醇以及二者復(fù)合物可以顯著提高雜交鱧的生長(zhǎng)表現(xiàn)和飼料利用，且二者具有協(xié)同促生長(zhǎng)的作用。在本試驗(yàn)條件下添加0.5%磷脂酸+1.0%膽固醇可以大幅降低飼料系數(shù)，與對(duì)照組相比，飼料系數(shù)降低比例達(dá)16%。結(jié)合魚(yú)體營(yíng)養(yǎng)組成以及腸道消化酶活性結(jié)果來(lái)看，磷脂酸可能與蛋白質(zhì)合成代謝過(guò)程有關(guān)，而膽固醇可能與脂肪代謝過(guò)程密切相關(guān)，具體機(jī)制有待詳細(xì)探究。