恙蟲(chóng)病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)規(guī)范專家共識(shí)

中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會(huì)生物診斷技術(shù)分會(huì)

中國(guó)微生物學(xué)會(huì)人獸共患病病原學(xué)專業(yè)委員會(huì)

編者按

恙蟲(chóng)病，又名叢林斑疹傷寒，是主要經(jīng)恙螨幼蟲(chóng)叮咬傳播，由恙蟲(chóng)病東方體（Orientia tsutsugamushi）感染引起的，并以發(fā)熱、焦痂或潰瘍、淋巴結(jié)腫大及皮疹為主要臨床特征的一種自然疫源性疾病，主要流行于東亞和東南亞地區(qū)。恙蟲(chóng)病的臨床癥狀不典型，很容易被誤診和漏診。中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會(huì)生物診斷技術(shù)分會(huì)和中國(guó)微生物學(xué)會(huì)人獸共患病病原學(xué)專業(yè)委員會(huì)的專家學(xué)者參考國(guó)際相關(guān)指南，梳理國(guó)內(nèi)外恙蟲(chóng)病精確、快速實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)相關(guān)進(jìn)展，總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，形成了本共識(shí)。旨在明確實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)在恙蟲(chóng)病確診方面的作用，為恙蟲(chóng)病的早期精準(zhǔn)和快速實(shí)驗(yàn)室診斷提供支持，從而為臨床醫(yī)生及時(shí)使用有效抗生素干預(yù)治療和預(yù)防并發(fā)癥提供有益幫助。

1 前言

恙蟲(chóng)病，又名叢林斑疹傷寒（scrub typhus 或 tsutsugamushi disease），是一種由恙蟲(chóng)病東方體（Orientia tsutsugamushi）感染引起、經(jīng)恙螨幼蟲(chóng)叮咬傳播的自然疫源性疾病。恙蟲(chóng)病的潛伏期通常為 6 ～ 21 d，以高熱、皮疹、特征性焦痂、淋巴結(jié)腫大為典型臨床特征；非特異性癥狀包括頭痛、肌痛、出汗和嘔吐等[1]。恙蟲(chóng)病可引起多種并發(fā)癥，如肝脾腫大、局灶性或彌漫性心肌炎、間質(zhì)性肺炎、急性呼吸窘迫綜合征、腦膜腦炎、急性腎衰竭、彌散性血管內(nèi)凝血[2-3]等。二戰(zhàn)期間中緬邊境抗日聯(lián)軍部隊(duì)恙蟲(chóng)病的死亡率達(dá)到 8.9%～ 35.3%[4]。在 2014年前后，印度等東南亞國(guó)家的恙蟲(chóng)病住院率仍約為 9%；因治療不當(dāng)或多器官衰竭造成的死亡率達(dá) 24%[3]。在我國(guó)，恙蟲(chóng)病目前不是法定傳染病，監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)不詳，但根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，其造成的危害依然相當(dāng)嚴(yán)重。

恙螨是恙蟲(chóng)病東方體的主要傳播媒介，也是恙蟲(chóng)病東方體的儲(chǔ)存宿主，病原體可經(jīng)卵在恙螨中垂直傳播。恙螨一般在灌木叢中以螨島的形式聚集生活，當(dāng)人到達(dá)其活動(dòng)區(qū)域，接觸后如被帶菌幼蟲(chóng)叮咬，恙螨唾液腺中的恙蟲(chóng)病東方體就會(huì)釋放，而進(jìn)入被叮咬部位組織中，先感染內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞等，然后遷移至周邊淋巴結(jié)，繼而感染全身多個(gè)器官，導(dǎo)致系統(tǒng)性感染[5]。

恙蟲(chóng)病主要流行于亞太地區(qū)，涵蓋東起日本，西至阿富汗，東南至澳大利亞北部，東北至俄羅斯遠(yuǎn)東沿海地區(qū)，被稱為“恙蟲(chóng)病三角區(qū)”[4]。因此，生活在亞太地區(qū)的數(shù)十億人群存在恙蟲(chóng)病感染的風(fēng)險(xiǎn)。在緬甸、老撾、斯里蘭卡等（亞）熱帶特定區(qū)域，恙蟲(chóng)病甚至占到急性不明發(fā)熱病因的 20%[6]。值得注意的是，近些年新的流行區(qū)不斷出現(xiàn)，例如，中東、非洲和南美均已發(fā)現(xiàn)本土恙蟲(chóng)病患者，保守估計(jì)，全球每年至少有一百萬(wàn)病例發(fā)生[7-8]。在我國(guó)，恙蟲(chóng)病是一個(gè)古老的疾病，在公元 3 世紀(jì)就有記載。當(dāng)前我國(guó)也是恙蟲(chóng)病重點(diǎn)疫區(qū)之一，在 1986年以后疫源地陸續(xù)北擴(kuò)，目前病例幾乎波及全國(guó)。2016年恙蟲(chóng)病病例數(shù)（21562 例）較 2006年（1254 例）增加了 16.2 倍[9]。隨著生態(tài)環(huán)境的保護(hù)，恙蟲(chóng)病賴以生存的媒介和媒介寄生的宿主種群分布也趨向更加廣泛，恙蟲(chóng)病疫區(qū)仍在不斷演變和擴(kuò)展，不僅對(duì)當(dāng)?shù)氐墓残l(wèi)生構(gòu)成嚴(yán)重威脅，也已成為威脅各地旅游者及野外作業(yè)人員健康的重要危險(xiǎn)因素。

臨床上，恙蟲(chóng)感染的實(shí)驗(yàn)室診斷仍面臨很多問(wèn)題。在很多恙蟲(chóng)病流行地區(qū)，還不具備快速、敏感的檢測(cè)條件和診斷試劑，臨床醫(yī)生會(huì)依據(jù)發(fā)熱、焦痂和皮疹等臨床表現(xiàn)和診斷性治療來(lái)診斷。由于發(fā)病早期臨床表現(xiàn)不典型，癥狀類似于其他急性發(fā)熱性疾病，臨床醫(yī)生對(duì)該病的認(rèn)識(shí)不足，往往會(huì)導(dǎo)致誤診和漏診。而一旦漏診誤診導(dǎo)致發(fā)生并發(fā)癥，很可能造成患者多臟器衰竭，甚至死亡。近年來(lái)，我國(guó)二級(jí)醫(yī)院和縣級(jí)疾病預(yù)防控制部門的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力都有了顯著的提升，很多基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)的檢測(cè)硬件和軟件都有了很大的改善。因此，基于新時(shí)期條件下，開(kāi)展恙蟲(chóng)病的早期精準(zhǔn)和快速的實(shí)驗(yàn)室診斷，對(duì)于早期干預(yù)治療、指導(dǎo)臨床醫(yī)生及時(shí)使用有效抗生素治療和預(yù)防并發(fā)癥具有非常重要的意義。

2 病原學(xué)

2.1 分類學(xué)地位

恙蟲(chóng)病病原體為專性胞內(nèi)寄生的革蘭氏陰性菌，原稱恙蟲(chóng)病立克次體（Rickettsia tsutsugamushi），歸屬于立克次體屬。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)該病原體的細(xì)胞壁組成、化學(xué)結(jié)構(gòu)和 16S rRNA 序列等與立克次體屬其他成員，如斑疹傷寒群和斑點(diǎn)熱群立克次體均存在較大差異。1995年將其從立克次體屬中劃分出來(lái)，命名為恙蟲(chóng)病東方體[10]。其分類學(xué)地位為：立克次體科（Rickettsiae），東方體屬（Orientia），目前屬內(nèi)主要的致病種為恙蟲(chóng)病東方體（Orientia tsutsugamushi）。此外，目前還包括Orientia chuto和CandidatusOrientia chiloensis。

2.2 基因組特征

恙蟲(chóng)病東方體基因組大小為 1.9 ～ 2.5 Mb，Genbank 中已陸續(xù)發(fā)布來(lái)源于韓國(guó)、日本、巴布亞新幾內(nèi)亞、緬甸和我國(guó)患者分離菌株的全基因組序列和注釋。該基因組重組事件發(fā)生頻率高、基因重排嚴(yán)重、重復(fù)序列多。這些重復(fù)序列可占基因組的 40%，可作為分子檢測(cè)恙蟲(chóng)病的靶標(biāo)，從而實(shí)現(xiàn)檢測(cè)靈敏度的大幅提升[11]。

2.3 基因分型特征

恙蟲(chóng)病東方體菌株最早依據(jù)抗原變異（血清型）分型，但通用方案未被確定。使用臨床和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清發(fā)現(xiàn)恙蟲(chóng)病東方體優(yōu)勢(shì)抗原主要有 4 種，分別為 56、47、21 和 110 kD 蛋白，其中 56 kD 蛋白最為重要，為型特異性抗原（type specific antigen，TSA）。56 kD TSA 在恙蟲(chóng)病東方體的入侵宿主細(xì)胞和宿主免疫識(shí)別方面起著重要作用[12]，其氨基酸序列中包含保守區(qū)和 4 個(gè)高度變異的可變區(qū)，這 4 個(gè)可變區(qū)擁有優(yōu)勢(shì)抗原表位，可被同型別感染的臨床血清所識(shí)別[13]。依據(jù)編碼 56 kD TSA 基因的高度多樣性，將恙蟲(chóng)病東方體菌株劃分成以下基因型或亞型：Gilliam、JG（日本 Gilliam）、Karp、JP-1（日本 Karp 1 型）、JP-2（日本 Karp 2 型）、Kato、Kawasaki、Kuroki、Shimokoshi 和其他未定型[14]。56 kD TSA 基因分型系統(tǒng)已廣泛用于流行病學(xué)研究中[15]。

2.4 毒力特征

各型別恙蟲(chóng)病東方體代表株的 50% 鼠半數(shù)致死劑量研究表明：JG 亞型 Ikeda 株、Kato、JG、Gilliam和 Karp 菌株表現(xiàn)出對(duì)鼠的高度毒力，JP-2 是中度毒力，JP-1、Kawasaki、Kuroki 和 Shimokoshi 是低度毒力?；诙辔稽c(diǎn)序列分析發(fā)現(xiàn)：對(duì)小鼠低毒力的菌株聚集在同一支系，而高毒力的菌株聚集在另一支系，表明存在一個(gè)對(duì)小鼠有高毒力的世系[16]。

3 流行病學(xué)特點(diǎn)

3.1 宿主動(dòng)物

作為一種自然疫源性疾病，恙蟲(chóng)病的主要宿主動(dòng)物是嚙齒類動(dòng)物。在我國(guó)，黑線姬鼠（Apodemus agrarius）、黃毛鼠（Rattus losea）、黃胸鼠（R. flavipectus）等為主要儲(chǔ)存宿主。其次為食蟲(chóng)目動(dòng)物，如大麝鼩（Crocidura lasiura）和臭鼩鼱（Suncus murinus）等。此外，兔、豬、貓和禽類也能感染。

3.2 傳播途徑及傳播媒介

恙蟲(chóng)病的主要傳播媒介是恙螨。恙螨一生經(jīng)歷卵、次卵、幼蟲(chóng)、若蛹、若蟲(chóng)、成蛹和成蟲(chóng) 7 個(gè)時(shí)期，僅幼蟲(chóng)吸食宿主動(dòng)物血液，跨種傳播疾病。我國(guó)恙蟲(chóng)病的主要傳播媒介包括：地理纖恙螨（Leptotrombidium deliense）、小盾纖恙螨（L. scutellare）、微紅纖恙螨（L. eubellum）、高湖纖恙螨（L. gaohuense）、海島纖恙螨（L. insularae）和吉首纖恙螨（L. jishoum）。恙螨幼蟲(chóng)活動(dòng)范圍很小，一般不超過(guò) 1 ～ 2 m，垂直距離10 ～ 20 cm，常聚集在一起呈點(diǎn)狀分布，稱為螨島。恙蟲(chóng)病通過(guò)攜帶恙蟲(chóng)病東方體的恙螨幼蟲(chóng)叮咬傳播。恙螨幼蟲(chóng)孵出后，在地面草叢中活動(dòng)，遇到宿主動(dòng)物或人時(shí)即附著其體表叮咬，3 ～ 5 d 吸飽后落于地面。常寄生在人的腰、腋窩、腹股溝、陰部等處，經(jīng)常會(huì)被經(jīng)驗(yàn)不足的臨床醫(yī)生忽略。人對(duì)恙蟲(chóng)病東方體普遍易感，流行地區(qū)居民多經(jīng)感染而獲得免疫，通常表現(xiàn)為散發(fā)。田間山野勞作的農(nóng)民、野外作業(yè)人員、訓(xùn)練部隊(duì)以及旅行者等受恙螨侵襲機(jī)會(huì)較多，容易發(fā)生感染。

3.3 流行特征

恙蟲(chóng)病一年四季均可發(fā)病，南方疫源地主要流行于夏季，北緯 25° 以南的廣東地區(qū)全年均有流行。北方疫源地主要流行于秋冬季，流行季節(jié)與當(dāng)?shù)貎?yōu)勢(shì)種群恙螨的最適活動(dòng)時(shí)間密切相關(guān)。過(guò)渡型疫源地主要流行于秋季，發(fā)病時(shí)間具有較為典型的“10月高發(fā)”現(xiàn)象。流行型別長(zhǎng)江以北以 Kawasaki 型為主，同時(shí)存在 Karp、Gilliam 和 Ikeda 型；長(zhǎng)江以南主要有 Karp、Gilliam 和 Kawasaki 型。新疆地區(qū)人群及動(dòng)物感染恙蟲(chóng)病東方體基因型以 Karp 為主，可能存在與 Karp 近源的另一個(gè)新型別 Saitama 型。

4 恙蟲(chóng)病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

恙蟲(chóng)病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)主要包括血清學(xué)檢測(cè)、分子生物學(xué)檢測(cè)、病原體分離培養(yǎng)和宏基因組測(cè)序等方面。

4.1 病史與樣本采集保存

4.1.1 病史信息記錄

詳細(xì)記錄患者個(gè)人流行病學(xué)暴露史（恙螨叮咬史、疫源地接觸史）、發(fā)病時(shí)間、臨床信息（發(fā)熱、焦痂、皮疹、淋巴結(jié)情況等）、并發(fā)癥（脾腫大、肺炎、肝功能異常、急性腎衰竭、心肌損傷）以及抗生素治療使用情況等信息，這些信息有利于實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法的選擇。

4.1.2 標(biāo)本采集和保存

抗凝血：5 ml 枸櫞酸鈉或 EDTA 抗凝，采集對(duì)象：急性期（發(fā)熱初期，一般發(fā)病1 周內(nèi)），尚未使用有效抗生素（如四環(huán)素類、喹諾酮類、阿奇霉素、利福平）患者，分裝 2 管，盡快送檢（盡可能不超過(guò) 24 h），否則應(yīng) -40 ～ -80 ℃ 保存。

非抗凝血：2 ml 分離血清，采集對(duì)象：所有急性期病人，尤其是病程超過(guò) 1 周或使用有效抗生素已經(jīng)退熱的急性期患者；恢復(fù)期（盡可能間隔 2 ～ 3 周）患者。及時(shí)進(jìn)行血清分離，置于 -20 ℃ 以下冰箱備檢。標(biāo)本采集應(yīng)符合無(wú)菌操作要求。

其他體液：包括腦脊液、胸腹水、肺泡灌洗液、痰液等。上述標(biāo)本的運(yùn)送須防污染、防振蕩、冷鏈快速運(yùn)送；標(biāo)本如不能及時(shí)檢測(cè)，應(yīng)保存于低于 -70 ℃ 冰箱或液氮。

焦痂：疑似病人入院時(shí)觀察是否有焦痂，建議征得患者同意，考慮采用無(wú)菌鑷剪取焦痂，可大大提高陽(yáng)性檢出率。

4.2 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法

4.2.1 血清學(xué)抗體檢測(cè)

4.2.1.1 外斐氏實(shí)驗(yàn) 利用與恙蟲(chóng)病東方體具有共同抗原的變形桿菌 OXK 作為抗原所進(jìn)行的凝集試驗(yàn)稱外斐氏實(shí)驗(yàn)。該實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)單，易操作，但因檢測(cè)靈敏度和特異性較低而應(yīng)用受限[17]。

4.2.1.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA） ELISA 最初使用裂解的恙蟲(chóng)病東方體菌體或重組表達(dá)的 56 kD TSA 蛋白作為包被抗原，檢測(cè)血清 IgM 和 IgG 抗體滴度。因其同樣存在因恙蟲(chóng)病東方體多血清型別造成漏檢的弊病，近年來(lái)為擴(kuò)大抗原譜，使用源于多型恙蟲(chóng)病東方體的 56 kD TSA 蛋白作為混合抗原或嵌合抗原，獲得很好的檢測(cè)敏感性和特異性。雖然 ELISA 簡(jiǎn)單、易用、結(jié)果客觀，但由于各流行區(qū)域的血清抗體的本底不同，各區(qū)域的檢測(cè)閾值不易設(shè)定。

4.2.1.4 膠體金免疫層析試驗(yàn)（gold immunochromatography assay，GICA） GICA 提供一種快速、簡(jiǎn)單的血清學(xué)檢測(cè)恙蟲(chóng)病東方體感染的方法。多型別恙蟲(chóng)病東方體 56 kD TSA 作為混合抗原或嵌合抗原用于檢測(cè)臨床血清中抗恙蟲(chóng)病東方體 IgM 和 IgG，為增加檢測(cè)靈敏度，21 kD 也用作檢測(cè)抗原[21]。

4.2.2 分子生物學(xué)檢測(cè) 分子生物學(xué)檢測(cè)方法以其靈敏、特異、快速、簡(jiǎn)便的優(yōu)勢(shì)已被廣泛用于恙蟲(chóng)病東方體的鑒定和分型研究中。其可以在患者抗體產(chǎn)生前確診恙蟲(chóng)病，然而受限于樣本中病原體含量，只能用于輔助診斷。檢測(cè)可使用全血、血漿、焦痂樣本，其中焦痂樣本最易檢測(cè)，甚至在患者使用抗生素?cái)?shù)天后仍能在焦痂中檢測(cè)到陽(yáng)性結(jié)果[22]。目前常用的分子生物學(xué)方法（表1）包括：普通聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）、巢式 PCR[23]、實(shí)時(shí)定量 PCR[24]、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）[25]和重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)（recombinase polymerase amplification，RPA）等[26]。巢式 PCR、實(shí)時(shí)定量 PCR可以顯著提高普通 PCR 擴(kuò)增的特異度和靈敏度；而 LAMP 和 RPA 技術(shù)在保證靈敏度的同時(shí)，僅需簡(jiǎn)單的恒溫控制設(shè)備并在半小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)，更加方便、經(jīng)濟(jì)和快捷。靶標(biāo)基因的選擇，臨床早期診斷和恙蟲(chóng)病東方體感染確認(rèn)為目的 PCR，引物設(shè)計(jì)建議選擇熱休克蛋白基因（groEL、groES）；分型鑒定 PCR，靶基因建議選擇高度多樣化的 56 kD 型特異性抗原基因（tsa）。迄今為止，基于 56 kD tsa 完整基因序列已經(jīng)鑒定出 20 多種恙蟲(chóng)病東方體基因型和亞型。目前常用的靶基因還有 47 kD 蛋白基因、16S rRNA 基因和多拷貝接合轉(zhuǎn)移蛋白 traD 基因。尤其是全血中恙蟲(chóng)病東方體載量低，使用多拷貝的 traD 基因能夠提供更高的檢測(cè)靈敏度[11]。另外值得注意的是恙蟲(chóng)病東方體 DNA 不同于一般細(xì)菌 DNA，非常容易降解，所以樣本采集、運(yùn)輸、DNA 提取過(guò)程必須快速、低溫。

表1 常用分子生物學(xué)檢測(cè)靶基因、引物和參考文獻(xiàn)

4.2.3 分離培養(yǎng) 病原體分離是恙蟲(chóng)病感染確認(rèn)最可靠的實(shí)驗(yàn)室診斷方法。病原培養(yǎng)方法包括：細(xì)胞分離培養(yǎng)、動(dòng)物接種及雞胚培養(yǎng)。常用的敏感細(xì)胞系有 L929、DH82、BHK 細(xì)胞、Vero 和 HeLa 細(xì)胞等。接種時(shí)將細(xì)胞培養(yǎng)形成單層，接種無(wú)菌樣本，32 ～ 37 ℃ 培養(yǎng)，每日觀察細(xì)胞病變情況。實(shí)驗(yàn)用豚鼠和小白鼠是恙蟲(chóng)病東方體分離較常用的敏感動(dòng)物，采用床邊腹腔接種。接種后（弱毒株需注射環(huán)磷酰胺）觀察小鼠生理變化，在小鼠病重期解剖取其脾、腎等臟器。雞胚分離時(shí)，將無(wú)菌樣本接種至 7 ～ 9日齡雞胚的卵黃囊中培養(yǎng)，3 d 后取死胚進(jìn)行病原體分離。接種動(dòng)物臟器、細(xì)胞和雞胚卵黃囊膜冰凍切片或涂片，利用姬姆薩染色、IFA 等方法進(jìn)行檢測(cè)，在熒光顯微鏡下觀察組織中的恙蟲(chóng)病東方體顆粒；或通過(guò)透射電鏡觀察宿主細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的呈圓形、橢圓形、啞鈴狀等形態(tài)多樣、大小不一、電子密度迥異的恙蟲(chóng)病東方體，亦可觀察到恙蟲(chóng)病東方體的自我吞噬現(xiàn)象，且單核細(xì)胞的細(xì)胞核及胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞器發(fā)生多種病理改變[30]。

4.2.4 宏基因組高通量測(cè)序（metagenomic next-generation sequencing，mNGS） mNGS 是基于高通量測(cè)序技術(shù)以及生物信息學(xué)分析對(duì)病原體進(jìn)行基因測(cè)序的臨床實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)。截至目前，該技術(shù)是臨床應(yīng)用最廣泛的病原體高通量測(cè)序技術(shù)，對(duì)臨床患者感染病原體的早發(fā)現(xiàn)和精準(zhǔn)治療有著極其重要的作用。由于mNGS 是新型的病原體檢測(cè)技術(shù)，對(duì)恙蟲(chóng)病的檢測(cè)使用尚不廣泛。但目前小樣本的研究顯示，mNGS 檢測(cè)對(duì)于恙蟲(chóng)病的敏感性為 100%，且使用患者體液（腦脊液、胸腹水）及進(jìn)行檢測(cè)的拷貝數(shù)要高于使用血液標(biāo)本，在發(fā)病早期（2 周以內(nèi)）無(wú)典型焦痂樣潰瘍患者的診斷價(jià)值遠(yuǎn)高于外斐氏實(shí)驗(yàn)和各類血清抗體的方法。除此以外，mNGS 可以用于恙蟲(chóng)病東方體與其他病原體感染的迅速鑒別，對(duì)于恙蟲(chóng)病合并和（或）繼發(fā)其他感染的診斷具有重要價(jià)值[31]。

5 結(jié)語(yǔ)

由于恙蟲(chóng)病臨床癥狀不典型，與其他立克次體、螺旋體等引起的感染難以鑒別，并存在多重感染，因此，建議臨床診斷務(wù)必結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，同時(shí)采用多重檢測(cè)方法，檢測(cè)恙蟲(chóng)病和其他臨床癥狀相似的傳染病及多重感染。目前，在多重核酸檢測(cè)方面，針對(duì)恙蟲(chóng)病東方體、斑疹傷寒立克次體、斑點(diǎn)熱立克次體和鉤端螺旋體的多重 PCR 方法已初步建立[32-33]，但靈敏性和特異性有待提高，標(biāo)準(zhǔn)化及商業(yè)化均急需推進(jìn)?；谘鍖W(xué)的多重檢測(cè)方法目前尚未建立，今后可使用恙蟲(chóng)病東方體及其他病原特異性抗原，通過(guò)斑點(diǎn)印跡、蛋白芯片和免疫層流等技術(shù)建立多重抗體檢測(cè)技術(shù)以區(qū)分恙蟲(chóng)病和其他臨床癥狀相似的傳染病。這些新技術(shù)的運(yùn)用勢(shì)必進(jìn)一步提升恙蟲(chóng)病感染的臨床診斷能力。

執(zhí)筆

作為在教研工作中有著豐富經(jīng)驗(yàn)的教師，王文娟不僅主動(dòng)將山西的優(yōu)秀經(jīng)驗(yàn)引入到團(tuán)場(chǎng)學(xué)校的教研工作中去，同時(shí)還十分注重傳幫帶工作。在教研工作期間，她引入小組合作教學(xué)、探究式教學(xué)模式在學(xué)校進(jìn)行推廣，還把山西長(zhǎng)治市清華中學(xué)實(shí)施的“數(shù)學(xué)周周練、英語(yǔ)周周清”教學(xué)活動(dòng)和初中的老師進(jìn)行交流和傳授，加強(qiáng)教學(xué)過(guò)程中的效果檢查和落實(shí)，在教學(xué)成果上取得不錯(cuò)成績(jī)。除了重點(diǎn)科目課程教研工作，王文娟老師還引入山西學(xué)校較為重視的新生入學(xué)教育、七年級(jí)轉(zhuǎn)折教育、中考前的心理疏導(dǎo)教育課程，自己首先示范，并逐步帶出一支由班主任組成的心理疏導(dǎo)隊(duì)伍。

熊小路 軍事醫(yī)學(xué)研究院微生物流行病研究所

陸英群 浙江省疾病預(yù)防控制中心

操 敏 東部戰(zhàn)區(qū)疾病預(yù)防控制中心

柳 燕 安徽醫(yī)科大學(xué)

楊麗萍 山東大學(xué)

齊 永 東部戰(zhàn)區(qū)疾病預(yù)防控制中心

杜春紅 云南省地方病防治所

于昌軍 安徽阜陽(yáng)人民醫(yī)院

蘇慧勇 云南大理州人民醫(yī)院

王 磊 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院

江佳富 軍事醫(yī)學(xué)研究院微生物流行病研究所（通信作者）

辛德莉 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院/北京熱帶醫(yī)學(xué)研究所（通信作者）

審校專家

萬(wàn)康林 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心

溫博海 軍事醫(yī)學(xué)研究院微生物流行病研究所

顧 碩 海南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院