康復(fù)訓(xùn)練通過(guò)DCC/APPL-1/AKT通路對(duì)缺血性腦卒中大鼠功能恢復(fù)和神經(jīng)細(xì)胞凋亡影響

郭娜，張勃

1 天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院腦病康復(fù)科，天津300193；2 國(guó)家中醫(yī)針灸臨床醫(yī)學(xué)研究中心；3 天津中醫(yī)藥大學(xué)體育健康學(xué)院

缺血性腦卒中是由于多種原因限制腦部血液供應(yīng)，導(dǎo)致局部腦組織缺氧和缺血性壞死以及相應(yīng)神經(jīng)功能缺失的一類臨床綜合征。該病具有高病死率、高復(fù)發(fā)率和高致殘率的特點(diǎn)［1］。幸存者中約有一半以上的患者伴有不同程度的后遺癥，包括吞咽障礙、半身不遂、言語(yǔ)不清等［2］。缺血性腦卒中神經(jīng)損傷的機(jī)制較多，病因不同，發(fā)病機(jī)制、發(fā)病時(shí)間和臨床類型等不同，主要實(shí)施個(gè)體化治療［3］。隨著神經(jīng)可塑性理論的發(fā)展和“治療時(shí)間窗”的提出，缺血性腦卒中的早期治療備受關(guān)注［4］。目前，溶栓治療是缺血性腦卒中最有效的治療措施，但溶栓時(shí)間窗只有3～4 h，很多患者無(wú)法滿足此條件，所以，盡可能減少后遺癥成為缺血性腦卒中治療的首要任務(wù)［5］?？祻?fù)醫(yī)學(xué)主要治療因疾病或者外傷遺留的功能障礙、生活和工作能力暫時(shí)性減弱或喪失，使其功能盡可能地最大限度恢復(fù)［6-7］。研究表明，腦卒中的康復(fù)治療可有效幫助患者恢復(fù)大腦和肢體功能，重返社會(huì)［8］。2021 年8 月—2022 年 3 月，我們探討了康復(fù)訓(xùn)練對(duì)腦卒中大鼠功能恢復(fù)和神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物和試劑 健康成年Sprague-Dawley （SD）大鼠100 只，體質(zhì)量250～280 g，購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，清潔級(jí)，標(biāo)準(zhǔn)的飼料與純凈水喂養(yǎng)，溫度在21～25 ℃，濕度為40%～60%，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SYXK（京）2021-0019。MK2206 試劑（AKT抑制劑）購(gòu)自美國(guó)Sigma-Aldrich 公司；LY294002 購(gòu)自英國(guó)Abcam 公司；DCC、APPL-1、P-AKT 和AKT 一抗購(gòu)自碧云天生物技術(shù)有限公司。

1.2 動(dòng)物建模 隨機(jī)抽取80 只大鼠建立大腦中動(dòng)脈閉塞（MCAO）模型，10%水合氯醛將大鼠麻醉，左心室局部注射LY294002 5 μL，30 min后采用縫合法進(jìn)行MCAO 建模，用2%戊巴比妥鈉腹腔麻醉大鼠。頸部皮膚乙醇消毒后行正中切開(kāi)，然后鈍性剝離皮下組織，分離右側(cè)鎖骨與胸骨舌肌之間的右側(cè)頸總動(dòng)脈（CCA）、頸外動(dòng)脈（ECA）和頸內(nèi)動(dòng)脈（ICA）。在頸內(nèi)外動(dòng)脈分叉處結(jié)扎頸外動(dòng)脈，并結(jié)扎近心端的頸總動(dòng)脈。在近端ECA 結(jié)扎區(qū)切一個(gè)0.25 mm 的孔，距ICA 和ECA 分叉約5 mm 處縫合，從ECA 和分叉18～20 mm 處進(jìn)入ICA，阻止大腦中動(dòng)脈（MCA）的進(jìn)入并結(jié)扎ECA 近端部分。2 h 后從ECA 中抽出縫線再灌注。將未行造模的20只大鼠作為假手術(shù)組，假手術(shù)組大鼠進(jìn)行類似手術(shù)，但線栓不入顱，不阻斷MCA 的血流。在全手術(shù)過(guò)程，采用加熱墊將大鼠體溫保持在37 ℃左右，待大鼠清醒后放回籠中，同時(shí)自由進(jìn)食和飲水。

1.3 分組和康復(fù)訓(xùn)練 80 只造模大鼠隨機(jī)分為自然恢復(fù)組、自然恢復(fù)+MK2206 組、康復(fù)訓(xùn)練組、康復(fù)訓(xùn)練+MK2206 組，每組20 只。造模48 h，康復(fù)訓(xùn)練組和康復(fù)訓(xùn)練+MK2206 組開(kāi)始進(jìn)行康復(fù)訓(xùn)練。自然恢復(fù)+MK2206 組和康復(fù)訓(xùn)練+MK2206 組中的大鼠側(cè)腦室注射MK2206 試劑?？祻?fù)訓(xùn)練步驟：①平衡木訓(xùn)練：將大鼠置于長(zhǎng)1.7 m、寬2 cm 的方棒上爬行，方棒水平放置在支架上，距地面7 cm，該訓(xùn)練主要評(píng)估大鼠的協(xié)調(diào)性、行走能力和平衡能力。②旋轉(zhuǎn)棒訓(xùn)練：將大鼠置于長(zhǎng)1.5 m、直徑4.5 cm 的圓棒上爬行，圓棒以3 r/min（半徑2.25 cm），順時(shí)針和逆時(shí)針?lè)较蚪惶嫘D(zhuǎn)，該訓(xùn)練主要評(píng)價(jià)大鼠模型的動(dòng)態(tài)平衡能力；③滾筒訓(xùn)練：將大鼠置于長(zhǎng)65 cm、直徑60 cm 的訓(xùn)練模擬器中，中間可分為4 個(gè)正方形。訓(xùn)練裝置兩側(cè)固定，一側(cè)裝有手搖曲柄，轉(zhuǎn)速為5 r/min（半徑30 cm），該訓(xùn)練主要評(píng)價(jià)大鼠模型的抓握、旋轉(zhuǎn)等運(yùn)動(dòng)能力。該訓(xùn)練方案7 d/周，2次/d，每次10 min，訓(xùn)練的前3 d可控制訓(xùn)練強(qiáng)度。自然恢復(fù)組、自然恢復(fù)+MK2206 組的大鼠自由飲水和進(jìn)食，自由活動(dòng)，均在普通籠中飼養(yǎng)。造模過(guò)程中自然恢復(fù)+MK2206組死亡2只，剔除實(shí)驗(yàn)。

1.4 大鼠神經(jīng)功能和運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分 分別于術(shù)后2、7、14、21 d進(jìn)行神經(jīng)功能和運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分，神經(jīng)功能評(píng)分參照Bederson 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，無(wú)神經(jīng)功能障礙大鼠為0分；左側(cè)前肢屈曲，提起時(shí)左前肢不能上抬為1分；行走時(shí)左側(cè)旋轉(zhuǎn)為2分；行走時(shí)向左側(cè)傾倒為3分；不能獨(dú)立行走或者昏迷為4 分。運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分依據(jù)平衡木實(shí)驗(yàn)，將大鼠置于30 cm×1.3 cm 的棒上，保持平衡。大鼠站在平衡木上保持平衡為1分；一側(cè)爪子握住木條或者在木條上搖晃為2 分；一或者兩個(gè)肢體滑下木條為3 分；三個(gè)肢體均滑下木條為4分；在平衡木上力爭(zhēng)保持平衡，但滑下為5分；在平衡木平衡失敗，然后跌落為6分；從平衡木上直接跌落為7分。

1.5 大鼠海馬組織DCC、APPL-1、AKT、P-AKT蛋白表達(dá)檢測(cè) 采用Western blotting法。術(shù)后14 d，每組取5只大鼠進(jìn)行海馬組織提取，采用3%戊巴比妥麻醉大鼠，直接斷頭取腦，并分離海馬組織。采用生理鹽水沖洗海馬組織，液氮研磨，轉(zhuǎn)移到離心管中，加入RIPA裂解緩沖液進(jìn)行完全裂解，BCA蛋白檢測(cè)試劑盒蛋白濃度。用10%聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，轉(zhuǎn)膜。采用5%胎牛血清封閉1 h，加入DCC（1∶1 000稀釋）、APPL-1（1∶1 000 稀釋）、AKT（1∶5 000 稀釋）、P-AKT（1∶5 000稀釋）一抗，4 ℃過(guò)夜。然后添加相應(yīng)的山羊抗兔二抗，室溫下孵育1 h，清洗3次，以β-actin為內(nèi)參，采用ECL發(fā)光，暗室內(nèi)顯影、曝光，凝膠成像儀拍照，采用Image J軟件進(jìn)行灰度值分析。

1.6 大鼠海馬組織中DCC、APPL-1、AKT 陽(yáng)性表達(dá)檢測(cè) 采用免疫組化法。石蠟切片，烘烤，采用二甲苯脫蠟，依次用100%、95%、75%、50%乙醇依次水化，采用PBS 洗滌。同時(shí)加入1 滴過(guò)氧化氫，室溫孵育10 min，PBS 洗滌，加入檸檬酸鹽，烘干后，PBS 再次沖洗，加入山羊血清，室溫孵育5 min，脫去血清，加入1∶75稀釋的DCC，1∶100稀釋的APPL-1、1∶100稀釋的AKT一抗，室溫過(guò)夜，PBS沖洗3次。取石蠟切片加入生物素標(biāo)記的山羊抗兔二抗，室溫孵育15 min，PBS沖洗3次，再將石蠟切片加入過(guò)氧化物酶標(biāo)記的卵白蛋白溶液中，室溫孵育15 min，加入新鮮二氨基聯(lián)苯胺，普通顯微鏡下觀察，蘇木精重新染色，二甲苯脫水，用中性樹脂膠固定，在光學(xué)顯微鏡下拍照。隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量，取平均值。

1.7 大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡檢測(cè) 將各組海馬組織剪成1 mm3左右的碎塊，加入0.25%胰蛋白酶，在37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中消化，用20%胎牛血清的DMEM/F12 終止消化，懸浮、離心、過(guò)濾，收集細(xì)胞。選擇各組神經(jīng)細(xì)胞，以每孔2×104個(gè)細(xì)胞接種在24孔板中。隔夜孵育后，按照制造商說(shuō)明書，用Annexin V-FITC-PI 凋亡試劑盒染色，在流式細(xì)胞儀上進(jìn)行分析，所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.8 大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞周期檢測(cè) 取出各組細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS 沖洗，0.25%胰蛋白酶溶液消化，始收縮變圓時(shí)，取出消化液后與血清混合，停止消化。離心處理，1 000 r/min 離心5 min，去上清液，PBS 清洗，用70%乙醇固定細(xì)胞30 min，離心后收集，再次用PBS 洗滌，用1% PI 染色。PBS 洗滌，采用PBS 緩沖液將細(xì)胞體積調(diào)整至1 mL，上流式細(xì)胞儀中檢測(cè)細(xì)胞周期情況，每組3個(gè)細(xì)胞樣本，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用GraphPad Prism9統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料符合正態(tài)分布以± s 表示，不同時(shí)點(diǎn)均數(shù)比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用Dunnett-t 檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 康復(fù)訓(xùn)練對(duì)缺血性腦卒中大鼠神經(jīng)功能和運(yùn)動(dòng)功能的影響 術(shù)后第2 天，其他各組的神經(jīng)功能評(píng)分和運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分高于假手術(shù)組（P 均＜0.05）；術(shù)后7、14 和21 d，神經(jīng)功能和運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分較術(shù)后第2 天均出現(xiàn)不同程度的改善，與康復(fù)訓(xùn)練組相比，自然恢復(fù)組、自然恢復(fù)+MK2206 組和康復(fù)訓(xùn)練+MK2206組的神經(jīng)功能和運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分較高（P均＜0.05），自然恢復(fù)+MK2206 組的神經(jīng)功能和運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分高于自然恢復(fù)組（P 均＜0.05），康復(fù)訓(xùn)練+MK2206 組神經(jīng)功能和運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分高于康復(fù)訓(xùn)練組（P均＜0.05），康復(fù)訓(xùn)練+MK2206組神經(jīng)功能和運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分低于自然恢復(fù)+MK2206 組（P 均＜0.05）。見(jiàn)表1、2。

表1 各組大鼠神經(jīng)功能情況比較（分 ± s）

表1 各組大鼠神經(jīng)功能情況比較（分 ± s）

注：與假手術(shù)組相比，aP＜0.05；與自然恢復(fù)組相比，bP＜0.05；與康復(fù)訓(xùn)練組相比，cP＜0.05。

images/BZ_49_235_402_2243_520.png

2.2 康復(fù)訓(xùn)練對(duì)大鼠海馬組織中DCC/APPL-1/AKT通路的影響 與康復(fù)訓(xùn)練組相比，自然恢復(fù)組、自然恢復(fù)+MK2206 組和康復(fù)訓(xùn)練+MK2206 組的海馬組織中DCC、APPL-1、AKT蛋白較低（P均＜0.05），自然恢復(fù)+MK2206組中的DCC、APPL-1和P-AKT蛋白表達(dá)低于自然恢復(fù)組（P 均＜0.05），康復(fù)訓(xùn)練+MK2206 組中的DCC、APPL-1 和P-AKT蛋白表達(dá)低于康復(fù)訓(xùn)練組（P 均＜0.05），康復(fù)訓(xùn)練+MK2206組中的DCC、APPL-1 和P-AKT 蛋白表達(dá)高于自然恢復(fù)+MK2206組（P均＜0.05）；各組AKT對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=1.312，P＞0.05）。見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠海馬組織中DCC、APPL-1、AKT蛋白表達(dá)比較± s）

表3 各組大鼠海馬組織中DCC、APPL-1、AKT蛋白表達(dá)比較± s）

注：與假手術(shù)組相比，aP＜0.05；與自然恢復(fù)組相比，bP＜0.05；與康復(fù)訓(xùn)練組相比，cP＜0.05。

images/BZ_49_235_1738_2243_1797.png

2.3 康復(fù)訓(xùn)練對(duì)大鼠海馬組織中DCC、APPL-1、AKT 陽(yáng)性表達(dá)的影響 與康復(fù)訓(xùn)練組相比，自然恢復(fù)組、自然恢復(fù)+MK2206 組和康復(fù)訓(xùn)練+MK2206 組海馬組織中DCC、APPL-1、AKT 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率較高（P均＜0.05），自然恢復(fù)+MK2206組中的DCC、APPL-1 和P-AKT 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率低于自然恢復(fù)組（P均＜0.05），康復(fù)訓(xùn)練+MK2206 組中的DCC、APPL-1 和P-AKT 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率低于康復(fù)訓(xùn)練組（P均＜0.05），康復(fù)訓(xùn)練+MK2206 組中的DCC、APPL-1 和P-AKT 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于自然恢復(fù)+MK2206 組（P均＜0.05）。見(jiàn)表4。

表2 各組大鼠運(yùn)動(dòng)功能情況比較（分， ± s）

表2 各組大鼠運(yùn)動(dòng)功能情況比較（分， ± s）

注：與假手術(shù)組相比，aP＜0.05；與自然恢復(fù)組相比，bP＜0.05；與康復(fù)訓(xùn)練組相比，cP＜0.05。

images/BZ_49_235_1071_2243_1189.png

表4 各組大鼠海馬組織中DCC、APPL-1、AKT陽(yáng)性率比較（%± s）

表4 各組大鼠海馬組織中DCC、APPL-1、AKT陽(yáng)性率比較（%± s）

注：與假手術(shù)組相比，aP＜0.05；與自然恢復(fù)組相比，bP＜0.05；與康復(fù)訓(xùn)練組相比，cP＜0.05。

images/BZ_49_235_2616_2243_2675.png

2.4 康復(fù)訓(xùn)練對(duì)大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響 假手術(shù)組、自然恢復(fù)組、自然恢復(fù)+MK2206 組、康復(fù)訓(xùn)練組、康復(fù)訓(xùn)練+MK2206 組神經(jīng)細(xì)胞凋亡率分別為（6.13 ± 1.32）% 、（20.57 ± 4.26）% 、（32.41 ± 6.17）%、（16.83 ± 3.56）%、（21.34 ± 4.31）%，與康復(fù)訓(xùn)練組相比，自然恢復(fù)組、自然恢復(fù)+MK2206 組和康復(fù)訓(xùn)練+MK2206 組的神經(jīng)細(xì)胞凋亡率較高（P均＜0.05），自然恢復(fù)+MK2206 組的神經(jīng)細(xì)胞凋亡率高于自然恢復(fù)組（P＜0.05），康復(fù)訓(xùn)練+MK2206 組的神經(jīng)細(xì)胞凋亡率高于康復(fù)訓(xùn)練組（P＜0.05），康復(fù)訓(xùn)練+MK2206 組的細(xì)胞凋亡率低于自然恢復(fù)+MK2206組（P＜0.05）。

2.5 康復(fù)訓(xùn)練對(duì)大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞周期的影響 與康復(fù)訓(xùn)練組相比，自然恢復(fù)組、自然恢復(fù)+MK2206組和康復(fù)訓(xùn)練+MK2206 組的G0～G1期細(xì)胞比例較高（P均＜0.05），自然恢復(fù)+MK2206組的G0～G1期細(xì)胞比例高于自然恢復(fù)組（P＜0.05），康復(fù)訓(xùn)練+MK2206組的G0～G1期高于康復(fù)訓(xùn)練組（P＜0.05），康復(fù)訓(xùn)練+MK2206 組的G0～G1期細(xì)胞比例低于自然恢復(fù)+MK2206 組（P＜0.05）；與康復(fù)訓(xùn)練組相比，自然恢復(fù)組、自然恢復(fù)+MK2206 組和康復(fù)訓(xùn)練+MK2206 組的S 期 細(xì) 胞 比 例 較 低（P均＜0.05），自 然 恢 復(fù)+MK2206 組的S 期細(xì)胞比例低于自然恢復(fù)組（P＜0.05），康復(fù)訓(xùn)練+MK2206組的S期細(xì)胞比例低于康復(fù)訓(xùn)練組（P＜0.001），康復(fù)訓(xùn)練+MK2206 組的S 期細(xì)胞比例高于自然恢復(fù)+MK2206 組（P＜0.05）；各組G2～M 期細(xì)胞比例對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。見(jiàn)表5。

表5 各組大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞周期變化情況比較（% ± s）

表5 各組大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞周期變化情況比較（% ± s）

注：與假手術(shù)組相比，aP＜0.05；與自然恢復(fù)組相比，bP＜0.05；與康復(fù)訓(xùn)練組相比，cP＜0.05。

3 討論

腦卒中是一種由腦血管局灶性破裂或堵塞所引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能缺陷，是導(dǎo)致患者術(shù)后殘疾的主要原因之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)，70%以上缺血性腦卒中患者會(huì)遺留不同程度和類型的功能障礙，包括認(rèn)知、運(yùn)動(dòng)和感覺(jué)等功能障礙，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量、日常生活能力和社會(huì)回歸能力［9］。在卒中后期，神經(jīng)可塑性和再生尤為重要［10］。相關(guān)研究證實(shí)，腦卒中患者進(jìn)行一段時(shí)間的康復(fù)訓(xùn)練后，腦梗死區(qū)域的相關(guān)蛋白表達(dá)明顯增加，此可刺激神經(jīng)細(xì)胞的分化、增殖和軸索的再生等，進(jìn)而促進(jìn)神經(jīng)功能的恢復(fù)［11］?？祻?fù)訓(xùn)練能刺激梗死灶周圍結(jié)構(gòu)的重組和功能改變，使腦組織恢復(fù)應(yīng)有的適應(yīng)性和敏感性。經(jīng)常進(jìn)行康復(fù)訓(xùn)練可幫助患者恢復(fù)肢體運(yùn)動(dòng)能力，從而逐漸參與日?；顒?dòng)［12］。既往研究表明，康復(fù)訓(xùn)練對(duì)卒中后患者的運(yùn)動(dòng)功能影響較大，尤其是能力失衡患者［13］。本研究旨在探討康復(fù)訓(xùn)練是否通過(guò)激活DCC/APPL-1/AKT 信號(hào)通路抑制缺血性卒中大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡，促進(jìn)其神經(jīng)和運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)。

本研究結(jié)果顯示，康復(fù)訓(xùn)練組的神經(jīng)功能和運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分較自然恢復(fù)組、自然恢復(fù)+MK2206 組和康復(fù)訓(xùn)練+MK2206 組較低，說(shuō)明康復(fù)訓(xùn)練有助于神經(jīng)功能和運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)?；A(chǔ)研究表明，腦組織損傷后，腦細(xì)胞可通過(guò)康復(fù)訓(xùn)練增加感覺(jué)運(yùn)動(dòng)輸入而激活，康復(fù)訓(xùn)練能促使腦細(xì)胞分泌多種營(yíng)養(yǎng)因子，起到保護(hù)神經(jīng)和促進(jìn)神經(jīng)損傷修復(fù)的作用［14］。定期康復(fù)訓(xùn)練已被證明可減少全身炎癥反應(yīng)，保護(hù)健康細(xì)胞免于凋亡，誘發(fā)大腦神經(jīng)重塑。研究顯示，早期康復(fù)訓(xùn)練可有效改善急性腦卒中患者的日?；顒?dòng)和肢體運(yùn)動(dòng)功能，提高生活質(zhì)量，降低殘疾的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)［15］。

APPL-1 是一種多功能內(nèi)體結(jié)合蛋白，通過(guò)與結(jié)直腸癌缺失基因（DCC）、表皮生長(zhǎng)因子（EGF）、脂聯(lián)素等跨膜受體結(jié)合。APPL-1作為關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，已被證明可以調(diào)節(jié)AKT 的活性［16］。本研究檢測(cè)DCC、APPL-1、AKT 蛋白表達(dá)目的是證實(shí)康復(fù)訓(xùn)練可激活DCC/APPL-1/AKT 信號(hào)通路。本研究結(jié)果表明，與康復(fù)訓(xùn)練組相比，自然恢復(fù)組、自然恢復(fù)+MK2206組和康復(fù)訓(xùn)練+MK2206 組海馬組織中DCC、APPL-1、AKT 蛋白表達(dá)較低，且康復(fù)訓(xùn)練+MK2206 組中的DCC、APPL-1 和P-AKT 蛋白表達(dá)明顯低于康復(fù)訓(xùn)練組。與康復(fù)訓(xùn)練組相比，自然恢復(fù)組、自然恢復(fù)+MK2206 組和康復(fù)訓(xùn)練+MK2206 組海馬組織中DCC、APPL-1、AKT 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率較低，且康復(fù)訓(xùn)練+MK2206組中的DCC、APPL-1和P-AKT蛋白表達(dá)陽(yáng)性率低于康復(fù)訓(xùn)練組。本研究發(fā)現(xiàn)，抑制DCC/APPL-1/AKT 信號(hào)通路，可以促進(jìn)海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡和阻滯細(xì)胞周期變化，說(shuō)明DCC/APPL-1/AKT 信號(hào)通路在腦缺血后大鼠神經(jīng)功能和運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)中發(fā)揮重要作用，同時(shí)在神經(jīng)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期中有一定調(diào)控作用。

綜上所述，缺血性腦卒中大鼠康復(fù)訓(xùn)練可通過(guò)DCC/APPL-1/AKT 信號(hào)通路，抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡，有助于神經(jīng)和運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)。